En las células procariotas existe una secuencia de genes externos al cromosoma de la bacteria que se llaman plásmidos.Estos típicamente contienen unas pocas docenas de genes y tienen diferentes características. Un vectores de ADN es una molécula transportadora que transfiere y replica partes de ADN que llevan insertados mediante técnicas de ADN recombinante. Para que sirva de vector, una molécula debe ser capaz de replicarse junto con el fragmento de ADN que transporta. También tiene que tener secuencias de reconocimiento que permitan la inserción del fragmento de ADN.
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DIE!O A. OSORIO
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)lásmidos
En las c*l+las procariotas e,iste +na sec+encia de -enes e,ternos
al cromosoma de la bacteria +e se llaman plásmidos.
Estos t/picamente contienen +nas pocas docenas de -enes 0 tienen
di1erentes caracter/sticas.
2
Vectores de ADN recombinante
;
<)or +* +tili8ar plásmidos como 5ectores de ADN
recombinante=
>
<)or +* +tili8ar plásmidos como 5ectores de ADN
recombinante=
El proceso de ADN recombinante con plásmidos se +tili8a en los
si-+ientes campos:
? Re-+lacin de la e,presin -*nica.
? )rod+ccin ind+strial de s/ntesis de prote/nas como la
ins+lina
0 la @ormona del crecimiento.
? Desarrollo de or-anismos trans-*nicos.
Las etapas en la prod+ccin de ADN recombinante son las si-+ientes:
@ormona del crecimiento.
)reparacin de la sec+encia del ADN para s+ clonacin
)reparacin de +n 5ector de clonacin.
ormacin del ADN recombinante.
Introd+ccin del ADN recombinante en +na c*l+la an6triona.
)ropa-acin del c+lti5o.
Deteccin 0 seleccin de clones recombinantes.
)reparacin de la sec+encia del ADN para s+ clonacin
Se lisan las c*l+las 0 se e,trae las mol*c+las de ADN.
El ADN obtenido se concentra 0 se 1ra-menta en los l+-ares
necesarios para s+ +nin por accin de las en8imas de
restriccin.
Se a/sla el ADN +e se desea clonar o e,presar mediante
cromato-ra1/a l/+ida o por centri1+-acin.
Si el ADN debe e,presarse @a0 +e aadir los se-mentos de la e,presin
-*nica.
F
)reparacin de la sec+encia del ADN para s+ clonacin: En8imas de
restriccin Las en8imas de restriccin 1+eron
descritas por primera 5e8 en los aos G. S+ desc+brimiento dio +n
-ran imp+lso al est+dio del ADN.
Estas en8imas pertenecen al -r+po denominador N+cleasas o
os1odi*ster7 0a +e actHan selecti5amente en sitios de
reconocimiento.
Los e,tremos -enerados por el corte p+eden ser romos no tienen
bases desapareadas en los e,tremos B o por el contrario p+eden
tener e,tremos co@esi5os
K
Aislar el plásmido
Identi6car los p+ntos de restriccin donde se tratara con en8imas de
restriccin para +e acepte la sec+encia de ADN.
Re5isar el -en marcador +e identi6+e 0 con el +e p+eda seleccionar
las c*l+las clonadas. Un e9emplo de marcador p+ede ser la
resistencia a +n antibitico.
Re5isar +e el 5ector se repli+e de manera independiente al ADN de
la c*l+la an6triona.
(G
Las etapas del proceso consisten en:
Cortar el 5ector con las en8imas de restriccin7 las mismas en8imas
+e se +tili8aron para cortar el ADN +e se +iere insertar para
obtener e,tremos ad@esi5os co@erentes.
Unir el 5ector 0 el ra-mento de ADN +e se +iere clonar mediante
li-asas.
((
Introd+ccin del ADN recombinante en +na c*l+la an6triona.
)ara la clonacin o replicacin del ADN recombinante7 se necesita de
la ma+inaria cel+lar. )or ello @a0 +e introd+cir el ADN
recombinante en +na c*l+la an6triona. Los m*todos com+nes para este
proceso son:
(. $rans1ormacin
Introd+ccin del ADN recombinante en +na c*l+la an6triona.
Los tipos de c*l+las +sadas como an6trionas son:
• C*l+las bacterianas
(.Le5ad+ras
(3
)ropa-acin del c+lti5o 0 seleccin de los clones
recombinantes.
Se ind+ce la di5isin de cel+lar de las c*l+las an6trionas7 de 1orma
+e tambi*n se prod+cen copias de ADN recombinante 7 debido a la
propiedad de los plásmidos7 0 por ello se da la clonacin.
(;
)ropa-acin del c+lti5o 0 seleccin de los clones recombinantes. Los
m*todos para
detectar 0 seleccionar son:
• %*todo de @ibridacin
• %*todo inm+nol-ico
iblio-ra1/a
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[email protected](2G23(3?adn?
e,tracromosomico.@tml
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