XVIII Jornada de Iniciação Científica PIBIC CNPq/FAPEAM/INPA Manaus - 2009

ESTUDO QUÍMICO DE MANILKARA SP. VISANDO SUBSTÂNCIASCOM ATIVIDADE ANTIOXIDANTE

Francislani Nascimento dos SANTOS1; Maria do Socorro NEGREIROS2; Pierre Alexandre dosSANTOS3;Cecilia Veronica NUNEZ4.

'Bolststa PIBIC/CNPQ; 2Bolsista /Projeto temático PPBio/INPA; 3Co-orientador e bolsistaDCR/FAPEAM;"Orientadcra CPPN/INPA.

1. IntroduçãoDentre as plantas que compõem a rica flora brasileira, destacam-se as "madeiras de lei" quepossuem grande utilidade, devido a sua resistência física. Entre as madeiras de lei podem-se citarespécies do gênero Manílkara, pertencentes à família Sapotaceae (Gomes, 2006) que se destacampela importância econômica. A madeira, de excelente qualidade e beleza, é utilizada para movelariade luxo e construção civil. Popularmente conhecida como maçaranduba é intensamente exploradapelo setor madeireiro, cujas árvores podem atingir até 50 m de altura. Ocorre na Amazôniabrasileira, do Pará ao Amazonas, nas matas de terra firme e de várzea pouco inundáveis (Azevedoet aI., 2003). Um estudo prévio realizado do extrato bruto do cerne da espécie Manilkara huberi(Ducke) A. Chev. coletada no Pará, apresentou atividade antimicrobiana frente a Staphylococcusaureus, Bacillus subtilis, Mycobacterium smegmatis, Candida albicans e Enterococcus faecalis(Gomes, 2006). A abordagem fitoquímica revelou a presença de saponinas, flavonóides, esteróidese terpenóides (Gomes, 2006).No presente trabalho, foi estudado o extrato metanólico das cascas da Manilkara sp. coletada emAltamira (PA) com o objetivo de isolar substâncias antioxidantes presentes no extrato metanólicodas cascas da Manilkara sp. (Maçaranduba) que se mostrou ativo quando submetido ao teste desupressão de radicais livres com DPPH.

2. Material e métodosO material vegetal foi seco à temperatura ambiente, moído e extraído com diclorometano (DCM),metanol (MeOH) e água (H20), em banho de ultrassom por 20 minutos, para cada extração. Apósfiltração, os extratos foram concentrados utilizando-se rota-evaporador e/ou liofilizador. Os extratosDCM, MeOH e aquoso das cascas foram então analisados para quantificar a atividade antioxidanteusando a metodologia padronizada DPPH (Novaes, 2008) em espectrofotômetro a 517 nm. Osresultados foram comparados através da equivalência com o ácido ascórbico. Observou -se intensaatividade antioxidante para o extrato MeOH e aquoso e baixa para o extrato DCM das cascas(Tabela 1). Os extratos MeOH e aquoso forneceram os melhores resultados quanto às médias deequivalência em ácido ascórbico, mostrando elevada atividade antioxidante, visto que, intervalos de1-2 fornecem alta taxa de atividade antioxidante. O extrato MeOH das cascas foi analisadoqualitativamente em CCDC utilizando como revelador DPPH0,2% em MeOH.

Tbl1Dt - d t . I t' ld t o método DPPHa e a . e ermlnaçao o ~o encra an 10XI an e nExtrato l::" ABSI5171 AA* IEquil Equi**

Casca DCM 0,011 0,118 42,330

Casca MeOH 1,018 4,002 1,248

Casca Agua 1,014 3,988 1,254

" , .* Absorbância do ácido ascórbíco,** Equivalência da absorbância do extrato com ácido ascórbico.

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3. Resultados e discussão

Espécie vegetal - MaçarandubaMaterial vegetal - Casca Solventeusado na extração - MEOH

FRAÇÕES OBTIDAS15

REUNIÃODAS

FRAÇÕES8 e 11

CC) Sílica gelfiltranteDCM/acetona - MeOH

CC Silica gelAcOEt- MeOH

UNIÃO DASFRAÇÕES

4-7MCM2

CC Silica gelDCM/MeOHr---~I MCM 8 II 0,2107mg

CC FlorisilDCM/AcOEt -MeOH

REUNIÃODAS

FRAÇÕES17-11\

FRAÇÕESOBTIDAS

52

FRAÇÕESOBTIDAS

85

UNIÃO DASFRAÇÕES

9-11

CC Silica gelDCM/acetona-acetona/MeOH

CC Sílica gelAcOEtlMeOH

FRAÇÕES OBTIDAS40

CC AluminaDCM/MeOH - MeOH

UNIÃO DASFRAÇÕES

32-33

FRAÇÕES OBTIDAS44

CC FlorisilDCM/AcOEt, AcOEtlMeOH - MeOH

FRAÇÕES OBTIDAS50

UNIÃO DASFRAÇÕES

28-30

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Fluxograma 1. Sistema cromatográfico do fracionamento do extrato metanólico das cascas deManilkara sp., para obtenção epurificação de substancias antioxidantes.

o extrato metanólico das cascas foi fracionado visando o isolamento de substâncias antioxidantes.Esse extrato foi fracionado em coluna cromatográfica (CC) filtrante, utilizando-se sílica gel comoadsorvente e como fase móvel gradiente DCM/acetona, acetona/MeOH até MeOH puro. Dessefracionamento foram obtidas 15 frações, as quais foram reunidas após análise em cromatografiaem camada delgada comparativa (CCDC) e reveladas com DPPH e Ce(S04h. As frações 8 a 11foram reunidas por serem semelhantes e apresentarem elevada atividade antioxidante. Foirealizado fracionamento em coluna cromatográfica de sílica gel com gradiente de AcOEt/MeOH eobtiveram-se 68 frações. Estas foram analisadas por CCDe. A frações 17 e 18 foram reunidas paraum novo fracionamento em coluna cromatográfica de sílica gel com gradientes DCM/acetona eacetona/r-teo+t, obtiveram-se 56 frações e todas reveladas com Ce(S04h- Por possuíremsimilaridades algumas foram reunidas e reveladas com DPPH. A reunião das frações 32 e 33apresentou elevada atividade antioxidante e foi submetida a uma nova CC tendo como faseestacionária Florisil, com gradiente DCM/AcOEt, AcOEt/MeOH e MeOH/água e desta obtiveram-se50 frações. Após análise por CCDC, foram reunidas as frações 28 a 30 por serem similares e afração resultante submetida a fracionamento em CC utilizando como fase estacionária a lumina ecomo fase móvel gradientes de DCM/MeOH e MeOH/água, obtiveram-se 40 frações, todas foramreveladas com Ce(S04h e DPPH, sendo que não apresentaram atividade antioxidante. Da fração 6da 2° coluna foi realizado um novo fracionamento, tendo como fase estacionaria sílica gel e foramutilizados os gradientes de DCM/MeOH, obtendo 52 frações que foram testadas em CCDC,reuniram-se as frações 9 a 11 para dar início a novo fracionamento tendo como fase estacionáriasílica gel e como fase móvel gradiente de AcOEt e AcOEt/MeOH, sendo que nenhuma das 46 fraçõesapresentou a atividade antioxidante esperada. Da 20 coluna cromatográfica foram reunidas asfrações 4 a 7 e fracionadas em CC usando Florisil como fase estacíonária e como fase móvelgradiente de DCM/AcOEt, AcOEt/MeOH até MeOH puro, obtiveram-se 85 frações, reveladas comanisaldeído e DPPH, foram reunidas as frações 1-2, 3-4, 5-7, 8-9, 10-11, 12-14, 15-20, 21-25, 26-29, 35-37, 39-40, 41-42, 45-46, 47-48, 51-52, porém sem resultados interessantes de atividadeantioxidante.

4. ConclusãoNão houve isolamento de substâncias com atividade antioxidante, o que pode ser devido àdegradação do material pelos sistemas cromatográficos escolhidos durante o fracionamento.

s. ReferênciasAZEVEDO, V.e.R.; VINSON, c.c.. SILVA, V.P.; CIAMPI, A.Y. 2003. Desenvolvimento e Aplicação deMarcadores Microssatélites em Maçaranduba (Manilkara huberi). CIRCULAR TÉCNICA, 25.BRASILIA, DF, 23p.

Gomes, P.B. 2006. Química e Atividade Antimicrobiana de Manilkara huberi (Ducke) A. Chev.(Maçaranduba). Dissertação de Mestrado, Universidade Federal de Pernambuco/Departamento DeAntibióticos, Recife, Pernambuco. 129p.

NOVAES, J.A.P. 2007. Desenvolvimento e validação de método para quantificação da capacidaderedutora de extratos vegetais secos. Dissertação de Mestrado. Uea. Manaus, Amazonas. 108p.

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