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UNIVERSIDAD DE BUENOS AIRES. FACULTAD DE MEDICINA
II CÁTEDRA DE MICROBIOLOGÍA, PARASITOLOGÍA E INMUNOLOGÍA
MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA I
CLASE TEÓRICA 4
EL DNA RECOMBINANTE: ESTRATEGIAS BÁSICAS DE CLONACIÓN Y EXPRESIÓN DE GENES.
APLICACIONES EN MICROBIOLOGÍA
Profesor Regular Titular: Dr. Norberto Sanjuan
Doctor en Medicina (UBA)
+
GAATTC GGATCCCTTAAG CCTAGG
EcoRI BamHI
ENDONUCLEASAS DE RESTRICCIÓN
EcoRI BamHI
EcoRI BamHI
CORTE, MEZCLA Y LIGACIÓN
DNA RECOMBINANTE
DNA «A»
DNA «B»
7. CORTAR UN PLÁSMIDO (VECTOR) CON LAS MISMAS ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
LUEGO, LIGAR EL INSERTO DE DNA VIRAL SALVAJE CON EL DNA DEL PLÁSMIDO. ESTO SE REALIZA TANTO CON EL FRAGMENTO SOBRE EL
QUE SE HARÁ LA MUTACIÓN COMO CON EL RESTO DEL GENOMA VIRAL
RESTRICCIÓN EcoRI / BamHI
6. SEPARAR LOS FRAGMENTOS POR ELECTROFORESIS
FUENTE DE PODERBANDAS DE DNA VISTAS CON UV
LUEGO, CORTAR LAS BANDAS DESEADAS Y RECUPERAR EL DNA DEL VIRUS SALVAJE
7. CORTAR UN PLÁSMIDO (VECTOR) CON LAS MISMAS ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
LUEGO, LIGAR EL INSERTO DE DNA VIRAL SALVAJE CON EL DNA DEL PLÁSMIDO. ESTO SE REALIZA TANTO CON EL FRAGMENTO SOBRE EL
QUE SE HARÁ LA MUTACIÓN COMO CON EL RESTO DEL GENOMA VIRAL
8. TRANSFORMAR BACTERIAS(MÉTODO DEL CLORURO DE CALCIO)
Escherichia coli
9. SELECCIONAR LAS COLONIAS QUE CONTIENEN EL PLÁSMIDO CON EL INSERTO
COLONIAS BLANCAS Y AZULES. SÓLO LAS BLANCAS CONTIENEN EL DNA DESEADO.
13. PICAR UNA COLONIA BLANCA Y CULTIVARLA EN UN VOLUMEN GRANDE DE CALDO
LUEGO, OBTENER EL DNA PLASMÍDICO CON EL INSERTO DE DNA VIRAL DESTRUYENDO LAS PROTEINAS. MAXIPREP.