EFEKTIVITAS VAKSIN BIVALEN Aeromonas hydrophila DAN ...Perlakuan vaksinasi pada ikan gurami dilakukan selama empat minggu ... Jurnal Riset Akuakultur Volume 10 Nomor 4, 2015 569

Jurnal Riset Akuakultur Volume 10 Nomor 4, 2015

567

# Korespondensi: Balai Penelitian dan PengembanganPerikanan Budidaya Air Tawar. Jl. Raya Sempur No. 1, Bogor16154, Indonesia. Tel.: + (0251) 8313200E-mail: [email protected]

EFEKTIVITAS VAKSIN BIVALEN Aeromonas hydrophila DAN Mycobacterium fortuitumUNTUK PENCEGAHAN INFEKSI PENYAKIT PADA IKAN GURAMI (Osphronemus goramy)

Desy Sugiani#, Yani Aryati, Tatik Mufidah, dan Uni Purwaningsih

Balai Penelitian dan Pengembangan Budidaya Air Tawar

(Naskah diterima: 18 Mei 2014; Revisi final: 11 Oktober 2015; Disetujui publikasi: 9 November 2015)

ABSTRAK

Vaksinasi merupakan salah satu cara terbaik untuk pencegahan terhadap penyakit ikan. Aplikasi pemberianvaksin untuk skala massal oleh pembudidaya ikan masih menjadi kendala. Tujuan dari penelitian ini adalahuntuk menguji efektivitas dan respons peningkatan kekebalan tubuh ikan terhadap penggunaan vaksinbivalen anti A. hydrophila dan M. fortuitum pada penanggulangan kejadian ko-infeksi A. hydrophila dan M.fortuitum pada ikan gurami. Perlakuan vaksinasi pada ikan gurami dilakukan selama empat minggupemeliharan menggunakan tiga metode yang berbeda yaitu melalui injeksi, perendaman, dan oral, setiapperlakuan diulang sebanyak tiga kali dan diuji tantang selama empat minggu dengan ko-infeksi dari A.hydrophila dan M. fortuitum. Nilai RPS (relative percent survival) terbaik setelah uji tantang untuk penggunaanvaksin bivalen melalui perendaman pada benih ikan gurami adalah sebesar 26,4% lebih rendah dibandingkandengan metode injeksi (56,33%). Vaksin bivalen kurang efektif jika diberikan melalui oral dengan nilai RPS13,6%. Dosis vaksin bivalen terbaik untuk perlakuan vaksinasi melalui injeksi, perendaman, dan oral adalahcampuran antara bakteri A. hydrophila 1010 cfu dan M. fortuitum 109 cfu dengan perbandingan 1:1 v/v.

KATA KUNCI: vaksin bivalen, injeksi, perendaman, oral, RPS

ABSTRACT: Application of vaccines bivalent Aeromonas hydrophila and Mycobacterium fortuitum for infectiousdisease prevention in giant gouramy (Osphronemus goramy). By: Desy Sugiani, Yani Aryati, TatikMufidah, and Uni Purwaningsih

Vaccination is one of the best ways for the prevention of fish diseases. Application of vaccines for mass scale by fishfarmers still becomes an obstacle. The aim of this study was to examine the effectiveness and the optimal immuneresponse of fish to the bivalent vaccine anti A. hydrophila and M. fortuitum used to control the incidence of co-infection of A. hydrophila and M. fortuitum in giant gouramy. Treatment of vaccination in giant gouramy was carriedout for four weeks used three different methods, by injection, immersion, and oral, where each treatment was repeatedthree times and tested during the four weeks challenge with the co-infection of A. hydrophila and M. fortuitum. Thebest RPS value after challenge test for the application of the bivalent vaccine in giant gouramy was obtained byinjection method (56.33%) higher than the immersion (26.4%). Bivalent vaccine were less effective when given orallywas only obtained 13.6% RPS. The optimum doses of bivalent vaccine for treatment of vaccination by injection,immersion, and oral were a mixture of bacteria A. hydrophila 1010 cfu and M. fortuitum 109 cfu with a ratio of 1:1v/v.

KEYWORDS: bivalent vaccine, injection, immersion, oral, RPS

PENDAHULUAN

Vaksinasi ikan untuk melawan berbagai infeksibakteri patogen secara serempak dapat dilakukandengan menggunakan vaksin bivalen (vaksin yangmengandung dua jenis patogen) atau polivalen (vaksinyang mengandung beberapa jenis patogen). Strategi

vaksinasi yang ideal perlu memenuhi beberapa kriteriaberikut ini, penyakit spesifik yang akan dipapar, jenisvaksin, metode vaksinasi, pemilihan waktu vaksinasi,dan perlakuan vaksinasi ulang (booster). Vaksin polivalenharus mampu melindungi dari semua serotipe daritiap patogen penyebab penyakit tertentu. Namun,kemungkinan adanya kompetisi antigen spesifik yangmungkin terjadi terutama ketika vaksin diaplikasikanmelalui injeksi perlu diperhatikan (Toranzo et al.,2009).

568

Efektivitas vaksin bivalen Aeromonas hydrophila dan Mycobacterium fortuitum ..... (Desy Sugiani)

Teknologi vaksinasi masih sangat dibatasi olehpengetahuan mengenai sistem respons imun ikan atauinang terhadap penyakit tersebut. Kandidat vaksinterbaik dapat diujikan secara langsung pada ikandengan menghitung jumlah ikan yang mati dan hidup(Sommerset et al., 2005).

Terdapat batasan usia minimal untuk melakukanvaksinasi, yaitu pada saat imunokompeten (beberapawaktu setelah kantung kuning telur habis diserap).Pemberian vaksin juga dibatasi oleh ukuran ikan,karena hanya ukuran besar yang mungkin dilakukanvaksinasi melalui injeksi, untuk penggunaan pada benihikan yang ukuran lebih kecil biasanya diberikan denganmetode perendaman atau melalui oral (dicampurdengan pakan) (Evensen, 2009; Osman et al., 2009;Suanyuk & Itsaro, 2011). Ketiga cara ini memilikikeuntungan dan kerugian yang akan memengaruhi levelproteksi, efek samping yang ditimbulkan, carapemberian, dan jumlah biaya yang diperlukan untukkegiatan vaksinasi. Pemberian vaksinasi melalui injeksitelah banyak digunakan dalam skala riset dilaboratorium hingga skala industri dengan hasil yangbaik dengan alur mekanisme pembentukan responsimunitas juga telah diketahui, akan tetapi pemberianvaksin melalui oral dan perendaman masih belumbanyak diketahui alur penyerapan antigen danpresentasi antigen setelah diserap (Gudmundsdottiret al., 2009). Sehingga, tujuan dari penelitian ini adalahuntuk menguji efektivitas dan respons peningkatankekebalan tubuh ikan terhadap penggunaan vaksinbivalen anti A. hydrophila dan M. fortuitum untukmenanggulangi kejadian ko-infeksi A. hydrophila danM. fortuitum pada ikan gurami.

BAHAN DAN METODE

Ikan Uji

Ikan gurami (O. goramy) berukuran 25 ± 2 g/ekorberasal dari daerah Parung, Bogor. Aklimatisasi ikanuji dilakukan selama 28 hari untuk mengantisipasimunculnya gejala klinis infeksi M. fortutitum dan A.hydrophila. Sampel ikan diambil untuk konfirmasibahwa ikan uji tersebut adalah bebas dari infeksi M.fortutitum dan A. hydrophila. Isolasi bakteri dilakukansecara individual terhadap organ ginjal, otak, danmata, selanjutnya dikarakterisasi secara biokimiamenggunakan API System.

Pakan ikan

Selama pemeliharaan ikan digunakan pakankomersial dengan kandungan protein 33%, sedangkanpakan diberikan dengan jumlah 2%-3%/hari dari beratbiomassa ikan.

Vaksin Bakterin Inaktif

Vaksin sel utuh A. hydrophila dibuat dengan metodetanam kering di media TSA, menggunakan isolat koleksiBPPBAT Bogor dengan kode A. hydrophila AHL0905.Vaksin sel utuh M. fortuitum dibuat dengan metodetanam kering di media Shouten agar, menggunakanisolat koleksi BPPBAT Bogor dengan kode M. fortuitum31. Bakteri diinokulasi dalam media agar (TSA untuk A.hydrophila dan Shouten agar untuk M. fortuitum),inokulan ditanam secara merata di seluruh permukaanmedia agar, kemudian diinkubasi dalam inkubator (A.hydrophila selama ± 24 jam dan M. fortuitum selama ±72 jam, pada suhu 30°C). Pemanenan bakteri dilakukanmenggunakan ose, dipanen sampai semua koloniterambil, kemudian dimasukkan ke dalam saline water(NaCl 0,845%), hasil pemanenan ini digunakan sebagailarutan stok. Stok bakteri tersebut dihitungkepekatannya dengan metode platting untukmendapatkan kepadatan koloni (cfu). Suspensi bakteridalam saline water diinaktivasi dengan menambahkanNBF (neutral buffer formalin) 3% (v/v). Khusus untukvaksin bakterin M. fortuitum tahapan pembuatan vaksindilanjutkan disonikator dengan power 150 W selama± 5 menit dalam kondisi on-ice (dingin) dengan inter-val satu menit dan diulang empat kali. Suspensi bakteriyang sudah inaktif disimpan pada suhu 4°C. Tahapanterakhir, larutan stok dari bakterin in-aktif tersebutkemudian diencerkan menggunakan saline water untukmendapatkan kepadatan koloni yang diinginkan.

Vaksin Bivalen

Vaksin bivalen dibuat menggunakan komposisiterbaik dengan mencampurkan masing-masing sediaanvaksin bakteri inaktif A. hydrophila 1011 cfu dan M.fortuitum 1010 cfu dengan perbandingan 1:1 (v/v) (Sugianiet al., 2013; Purwaningsih et al., 2014).

Perlakuan Vaksinasi

Aklimatisasi hewan uji dilakukan selama 28 hari untukmengantisipasi munculnya gejala klinis Micobacteriosisdan MAS. Penelitian dilakukan secara eksperimental dilaboratorium dengan menggunakan tiga perlakuan vaksinbivalen dan satu kontrol, dengan tiga kali ulangan.Perlakuan pertama adalah vaksinasi melalui injeksi (in-traperitoneal), perlakuan kedua adalah vaksinasi melaluiperendaman, dan perlakuan ketiga adalah vaksinasimelalui oral (pakan). Masing-masing perlakuanmenggunakan tiga dosis vaksin yang berbeda yaitu dosispengenceran ke-1 (A. hydrophila 1010 cfu dan M. fortuitum109 cfu, rasio 1:1 v/v), dosis pengenceran ke-2 (A.hydrophila 109 cfu dan M. fortuitum 108 cfu, rasio 1:1 v/v ),dan dosis pengenceran ke-3 (A. hydrophila 108 cfu danM. fortuitum 107 cfu, rasio 1:1 v/v).


569

Ikan dipelihara selama 28 hari pascavaksinasi dandilakukan uji tantang mono-infeksi dan ko-infeksibakteri A. hydrophila dan M. fortuitum menggunakandosis infeksi ko-infeksi A. hydrophila 108 cfu dan M.fortuitum 107 cfu (LD-50) hasil koch-postulat ke-2 kali.Uji tantang dilakukan melalui injeksi intraperitoneal0,1 mL/ekor ikan, ikan dipelihara kembali selama 28hari untuk melihat kematian dan gejala klinis yangmuncul.

Protokol pelaksanaan vaksinasi harus diikutidengan seksama. Penggunaan vaksinasi melalui oral(pakan) disesuaikan dengan ukuran ikan, penyimpananvaksin harus pada suhu dingin (2°C-8°C), ikandipuasakan 48-72 jam sebelum vaksinasi, semuaperalatan vaksinasi harus dalam keadaan steril(didesinfeksi), dilakukan penimbangan ikan danmerekam minimum-maksimum dan rata-rata bobotikan untuk menghitung dosis vaksin apabiladiberikan dengan dicampur pakan. Penggunaanvaksinasi melalui injeksi dilakukan secaraintreperitoneal dengan panjang jarum yang digunakan1-2 mm agar dapat penetrasi ke dalam rongga perut,setiap ikan disuntik pada 1-1,5 cm setelah anteriorsampai ke pangkal sirip perut, metode vaksinasiharus diatur secara benar untuk meminimalkanpenanganan stres pada ikan. Penggunaan vaksinasimelalui perendaman dilakukan pada media air 30 li-ter diisi dengan 80 ekor ikan (rata-rata bobot ikan35,5 ± 6 g; dengan panjang rata-rata 12,7 ± 3 cm)direndam selama satu jam menggunakan volumevaksin dari dosis hasil injeksi terbaik yaitu campuranantara bakteri A. hydrophila 1011 cfu dan M. fortutium1010 cfu proporsi 1:1 (50%:50%, v/v). Uji tantangdilakukan dengan tiga kali ulangan di mana setiapbak pemeliharaan dengan perlakuan vaksiansi diisidengan 25 ekor ikan, sedangkan pada perlakuankontrol diisi 20 ekor ikan. Jumlah ikan pada bakperlakuan vaksinasi lebih banyak karena padakelompok ini diperlukan sampel darah ikan lebihbanyak untuk beberapa parameter uji hematologi.

Pengumpulan data dilakukan dengan pencatatansecara langsung terhadap gejala klinis yang teramatidan kematian ikan. Gambaran hematologi untukmelihat respons imun ikan dilakukan setiap satuminggu selama masa pemeliharaan proses induksivaksin dan setiap minggu selama pemeliharaan setelahuji tantang. Gejala klinis diamati dengan melihattingkah laku makan, berenang, respons terhadapkejutan, dan perubahan morfologi bagian luar tubuhikan maupun anatomi organ dalam ikan. Gambaransistem imun dilakukan dengan mengamati sampeldarah yang diambil dari ikan perlakuan kemudian diukurantibodi spesifik menggunakan metode directaglutination. Relative percent survival (RPS) diamati untuk

melihat efektivitas vaksinasi dengan menggunakanrumus Ellis (1988):

HASIL DAN BAHASAN

Vaksin A. hydrophila dan M. fortuitum memilikipotensi untuk dibuat dalam bentuk bivalen (vaksindengan kandungan dua antigen bakteri) (Sugiani et al.,2013). Pemberian vaksin harus memenuhi beberapakaidah vaksinasi. Sebelum dilakukan vaksinasikesehatan ikan harus terjamin dengan melihat polaperilaku ikan, nafsu makan, dan tingkat sintasan.

Penggunaan Vaksin Bivalen A. hydrophila dan M.fortuitum Melalui Injeksi

Vaksinasi melalui injeksi akan selalu membawabeberapa risiko, meskipun sangat kecil persentaseikan mati setelah perlakuan tersebut, tergantung padakemampuan toleransi individu ikan terhadap stres danketerampilan dari operator serta biosekuriti umumselama proses vaksinasi.

Hasil penelitian yang telah dihasilkan (Sugiani etal., 2013) menunjukkan bahwa vaksin bivalen campuranterbaik adalah antara bakteri A. hydrophila 1011 cfu danM. fortutium 1010 cfu proporsi 1:1 (50%:50%, v/v)diperoleh rata-rata RPS sebesar 52% dengan perincian46% jika diuji tantang dengan A. hydrophila, 57% jikadiuji tantang dengan M. fortuitum, dan 53% jika diujitantang dengan ko-infeksi A. hydrophila dan M.fortuitum. Vaksin yang ideal harus terbuat dari sediaanvaksin dengan dosis yang tepat, untuk mendapatkanvaksin dengan efektivitas yang tinggi maka dilakukanpengenceran terhadap dosis sediaan vaksin yang sudahada dan dilakukan juga uji pemberian vaksin untukmelihat efikasi melalui injeksi yaitu 50 AH : 50 MFpengenceran ke-1 (campuran antara bakteri A.hydrophila 1010 cfu dan M. fortutium 109 cfu), 50 AH :50 MF pengenceran ke-2 (campuran antara bakteri A.hydrophila 109 cfu dan M. fortutium 108 cfu), dan 50 AH: 50 MF pengenceran ke-3 (campuran antara bakteriA. hydrophila 108 cfu dan M. fortutium 107 cfu).

Nilai rata-rata RPS berturut-turut dari perlakuandosis terbaik melalui injeksi adalah sediaan vaksin A.hydrophila 1010 cfu dan M. fortuitum 109 cfu, rasio 1:1v/v (56,33%); sediaan vaksin A. hydrophila 109 cfu danM. fortuitum 108 cfu, rasio 1:1 v/v (20,67%), dan sediaanvaksin A. hydrophila 108 cfu dan M. fortuitum 107 cfu,rasio 1:1 v/v (19%). Dari hasil tersebut diperoleh dosisvaksin yang paling efektif untuk vaksin bivalen A.hydrophila dan M. fortuitum yaitu vaksin campuranantara bakteri A. hydrophila 1010 cfu dan M. fortutium109 cfu dengan rasio 1:1 v/v (Tabel 1).

100 x mortality controlcent permortality vaccinatecent per

1RPS

−=

570


Perlakuan uji tantang Challenge test

RPS (%)

Σ Ikan hidup Survival fish

Σ Ikan mati Mortality

SintasanSurvival rate

(%)

AH 1010 cfu dan MF 109 cfu rasio 1:1 v/v, diuji tantang AHAH 10 10 cfu and MF 10 9 cfu ratio 1:1 v/v, challenged with AH

50 10 5 66.67

AH 1010 cfu dan MF 109 cfu rasio 1:1 v/v, diuji tantang MFAH 10 10 cfu and MF 10 9 cfu ratio 1:1 v/v, challenged with MF

86 14 1 93.33

AH 1010 cfu dan MF 109 cfu rasio 1:1 v/v, diuji tantang ko-infeksi AH 10 10 cfu and MF 10 9 cfu ratio 1:1 v/v, challenged with co-infection

33 7 8 46.67

AH 109 cfu dan MF 108 cfu rasio 1:1 v/v, diuji tantang AH AH 10 9 cfu and MF 10 8 cfu ratio 1:1 v/v, challenged with AH

20 7 8 46.67

AH 109 cfu dan MF 108 cfu rasio 1:1 v/v, diuji tantang MFAH 10 9 cfu and MF 10 8 cfu ratio 1:1 v/v, challenged with MF

42 11 4 73.33

AH 109 cfu dan MF 108 cfu rasio 1:1 v/v, diuji tantang ko-infeksi AH 109 cfu and MF 108 cfu ratio 1:1 v/v, challenged with co-infection

0 0 15 0

AH 108 cfu dan MF 107 cfu rasio 1:1 v/v, diuji tantang AH AH 10 8 cfu and MF 10 7 cfu ratio 1:1 v/v, challenged with AH

0 4 11 26.67

AH 108 cfu dan MF 107 cfu rasio 1:1 v/v, diuji tantang MF AH 108 cfu and MF 107 cfu ratio 1:1 v/v, challenged with MF

57 12 3 80

AH 108 cfu dan MF 107 cfu rasio 1:1 v/v, diuji tantang ko-infeksi AH 108 cfu and MF 107 cfu ratio 1:1 v/v, challenged with co-infection

0 0 15 0

Kontrol diuji tantang AHControls challenged with AH

5 10 33.33

Kontrol diuji tantang MF Controls challenged with MF

8 7 53.33

Kontrol diuji tantang ko-infeksi Controls challenged with co-infection

3 12 20

Hasil analisis beberapa data hematologi pada ikangurami setelah vaksinasi dan uji tantang denganbakteri homolog maupun heterolog menunjukkanadanya perubahan dalam titer antibodi. Pemberianvaksin bivalen dapat memengaruhi respons imun,diduga dengan adanya antibodi akan menginisiasi aksiberantai komplemen sehingga lisozim serum dapatmasuk ke dalam lapisan peptidoglikan bakteri danmenyebabkan kematian sel. Aktivasi komplemenmelalui penggabungan dengan antibodi dan bakterijuga menghasilkan anfilaktoksin C3a dan C5a yangberujung pada transudasi luas dari komponen serum,termasuk antibodi yang lebih banyak, dan juga faktorkemotaktik terhadap neutrofil untuk membantufagositosis (Skinner, 2009).

Titer antibodi ikan gurami dengan perlakuan vaksinbivalen menunjukkan perbedaan yang nyata dibandingdengan kontrol (P


571

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

Hari ke-7(Day 7)

Hari ke-14(Day 14)

Hari ke-21(Day 21)

Hari ke-7(Day 7)

Hari ke-14(Day 14)

Hari ke-21(Day 21)

Pasca uji tantang terhadap M. fortuitumPost-challenge test against M. fortuitum

Pasca uji tantang terhadap A. hydrophilaPost-challenge test against A. hydrophila

Tite

r ant

ibod

i (lo

g 2)

Antib

ody

titer

(log

2)

A1 A2

A3 B1

B2 B3

C1 C2

C3 K1

K2 K3

masa induksi optimal minggu ke-3 sampai minggu ke-4 (fase stasioner), dan menurun setelah minggu ke-4(fase turun). Vaksinasi dapat menstimulasi sistem imununtuk memproduksi antibodi yang akan membantudalam perlindungan terhadap antigen. Kemampuanpeningkatan respons imun ikan setelah vaksinasi dapatdijadikan acuan keberhasilan peningkatan tanggapkebal.

Titer antibodi mencerminkan kemampuan tubuhikan terhadap infeksi bakteri melalui respons imunspesifik. Semakin tinggi nilai titer maka diharapkankemampuan perlindungan terhadap infeksi jugamenjadi tinggi. Antibodi yang beredar dalam sirkulasiakan menetralisasi molekul antifagositik daneksotoksin lainnya yang diproduksi bakteri.Mekanisme netralisasi antibodi terhadap bakteriterjadi melalui dua cara. Pertama, melalui kombinasiantibodi di dekat lokasi biologi aktif infeksi yaitusecara langsung menghambat reaksi toksin dengansel target. Kedua, melalui kombinasi antibodi yangterletak jauh dari lokasi biologi aktif infeksi yaitudengan mengubah konformasi alosterik toksin agar

tidak dapat bereaksi dengan sel target. Ikatankompleks bersama antibodi membuat toksin tidakdapat berdifusi sehingga rawan terhadap fagositosis,terutama bila ukuran kompleks membesar karenadeposisi komplemen pada permukaan bakteri akansemakin bertambah (Skinner, 2009).

Setelah 21 hari, ikan yang divaksinasi melaluiinjeksi intraperitoneal menunjukkan nilai tertinggipada total protein dan immunoglobulin, titer aglutinasidan aktivitas antimikroba. Konsentrasi lisozim dalamserum lebih tinggi pada ikan yang divaksinasi melaluiperendaman dibandingkan ikan yang tidak divaksinasi.Vaksinasi intraperitoneal menghasilkan respons imuntertinggi dan dapat digunakan untuk meningkatkanketahanan ikan terhadap Motil Aeromonas (Da Silvaet al., 2013). Ikan Rainbow trout yang diuji tantangminggu ke-3 pasca vaksinasi pada kelompok ikankontrol terjadi kematian 76%, kelompok vaksinasiperendaman satu kali terjadi kematian 37%, divaksinasiperendaman dua kali terjadi kematian 4%, kelompokikan yang divaksinasi injeksi satu kali menunjukkankematian 2%, dan ikan yang divaksinasi melalui

Gambar 1. Pola titer antibodi ikan gurami yang divaksinasi bivalen A. hydrophila dan M. fortuitum melaluiinjeksi. A = A. hydrophila 1010 cfu dan M. fortuitum 109 cfu rasio 1:1 v/v, B = A. hydrophila 109 cfudan M. fortuitum 108 cfu rasio 1:1 v/v, C = A. hydrophila 108 cfu dan M. fortuitum 107 cfu rasio 1:1v/v, K = kontrol (tidak di vaksin)

Figure 1. Pattern of antibody titer of the vaccinated giant gouramy with bivalent vaccine A. hydrophila and M.fortuitum by injection. A = A. hydrophila 1010 cfu and M. fortuitum 109 cfu ratio 1:1 v/v, B = A.hydrophila 109 cfu and M. fortuitum 108 cfu ratio 1:1 v/v, C = A. hydrophila 108 cfu and M.fortuitum 107 cfu ratio 1:1 v/v, C = control (unvaccinated)

572


Perlakuan uji tantang ko-infeksi Challenge test co-infection

UlanganRepetition

RPS (%)



Sintasan Survival rate (%)

1 23.2 9 16 36.00

2 18.4 8 17 32.00

3 37.6 12 13 48.00

1 13.6 7 18 28.00

2 28.0 10 15 40.00

3 18.4 8 17 32.00

1 23.2 9 16 36.00

2 13.6 7 18 28.00

3 23.2 9 16 36.00

Kontrol (Control )l

1 5 15 33.33

2 3 17 20.00

3 2 18 13.33

AH 1010 cfu dan MF 109 cfu rasio 1:1 v/vAH 10 10 cfu and MF 10 9 cfu ratio 1:1 v/v



perendaman ditambah booster melalui injeksi tidakmenunjukkan angka kematian sama sekali. Levelproteksi menurun pada bulan ke-5, dan tidak protektiflagi pada bulan ke-7 (Chettri et al., 2013).

Penggunaan Vaksin Bivalen A. hydrophila danM. fortuitum Melalui Perendaman

Metode pemberian vaksin melalui perendamanbertujuan untuk mengekspose permukaan luar tubuhikan secara langsung terhadap larutan vaksin(perendaman langsung) mengandalkan daya serapterutama oleh insang yang memiliki kemampuanimbibisi (peristiwa penyerapan air oleh permukaanzat-zat yang hidrofilik) (Ellis, 1988).

Setelah pemeliharaan masa induksi vaksin selama28 hari rata-rata bobot ikan meningkat menjadi 71,4± 8 g dengan panjang rata-rata 13,87 ± 3,5 cm; akantetapi setelah dilakukan uji tantang selama 28 haribobot rata-rata ikan mengalami penurunan yaitumenjadi 64,25 ± 11 g dengan panjang rata-rata 15,84± 3 cm.

Kemampuan proteksi ikan gurami terhadap ujitantang dengan ko-infeksi A. hydrophila dan M.fortuitum setelah divaksinasi bivalen yang diaplikasikanmelalui perendaman tidak terlalu bagus, walaupun jikadilihat dari titer antibodi yang terukur cukup tinggiternyata tidak mampu melindungi ikan dari kematianpascainfeksi (Gambar 2). Hal ini dapat dilihat dari nilaiRPS tertinggi yaitu hanya sekitar 37,6% dari perlakuanvaksinasi bivalen dengan dosis perendamanpengenceran ke-1 campuran antara bakteri A.

hydrophila 1010 cfu dan M. fortutium 109 cfu (Tabel 2).Hasil tersebut sejalan dengan hasil dari beberapapenelitian terdahulu yang menunjukkan bahwa denganmetode injeksi dosis vaksin yang diberikan ke dalamtubuh ikan dapat masuk dan diserap lebih maksimaljika dibandingkan dengan metode perendaman.

Gudmundsdottir et al. (2009) melakukan penelitianuntuk mempelajari tingkat antibodi spesifik pada ikanCod sebelum dan setelah divaksinasi terhadap Vibrioanguillarum dengan pemberian vaksin melaluiperendaman, injeksi, dan kombinasi keduanya.Tanggapan antibodi terhadap antigen V. anguillarumdalam kelompok ikan yang divaksinasi melaluiperendaman dan injeksi sama-sama menunjukkanrespons antibodi yang signifikan lebih tinggi jikadibanding dengan kontrol. Akan tetapi ketika diujitantang, beberapa kelompok ikan yang divaksin melaluiperendaman menunjukkan mortalitas yang tinggi dantidak berbeda nyata jika dibandingkan dengankelompok ikan kontrol. Melihat hasil ini, disimpulkanbahwa pengukuran titer antibodi tidak dapat dijadikansatu-satunya cara untuk menilai efektivitas dari vaksin.

Perbedaan rute pemberian vaksin berpengaruhterhadap antibodi yang dihasilkan, hal ini berkaitandengan dosis antigen yang masuk ke dalam tubuh yangkemudian mencetuskan respons imun. Menurut Caron& Penn (1992), tempat dan cara masuknya antigen kedalam tubuh turut menentukan jenis respons yangdihasilkan, dan hal ini bergantung pula pada APC (anti-gen presenting cells) yang menangkap dan memprosesantigen bersangkutan. Berbagai jenis APC memproses

Tabel 2. Efikasi vaksinasi bivalen A. hydrophila dan M. fortuitum melalui perendamanTable 2. Efficacy of a bivalent vaccine A. hydrophila and M. fortuitum by immersion

Keterangan (Remarks): AH : Aeromonas hydrophila, MF : Mycobacterium fortuitum


573

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

Minggu ke-1(Week 1)

Minggu ke-2(Week 2)

Minggu ke-3(Week 3)

Minggu ke-4(Week 4)

Minggu ke-8(Week 8)

Minggu ke-1(Week 1)

Minggu ke-2(Week 2)

Minggu ke-3(Week 3)

Minggu ke-4(Week 4)

Minggu ke-8(Week 8)

Masa induksi vaksin terhadap M. fortuitumInduction period of a vaccine against M. fortuitum

Pasca ujitantang

terhadap ko-infeksi

Post-challenge

test againstco-infection

Masa induksi vaksin terhadap A. hydrophilaInduction period of a vaccine against A. hydrophila

Pasca ujitantang

terhadap ko-infeksi

Post-challenge


Tite

r ant

ibod

i (lo

g 2)

Antib

ody

titer

(log

2)

P1 P2 P3 K1 K2

antigen dengan cara yang berbeda-beda, misalnyamakrofag akan menangkap antigen dengan carafagositosis dan merombaknya dalam fagolisososom,sedangkan sel dendritik tidak dapat melakukanfagositosis meskipun jenis APC yang potensial. Selainitu, respons imun juga ditentukan oleh sel-sel manayang diinduksi untuk mengekspresikan molekul MHCdan bagaimana sel itu berinteraksi dengan sel T. Disamping itu, sifat sel APC juga menentukan apakahterjadi respons atau toleransi imunologik. Misalnyabila antigen dipresentasikan oleh sel dendritik ataumakrofag teraktivasi yang mengekspresikan MHCkelas II dalam jumlah banyak disertai ekspresi molekulko-stimulasi, yang terjadi adalah aktivasi sel T yangsangat efektif. Selain pengolahan dan resentasi anti-gen seperti yang telah tersebut di atas, maka hal lainyang memengaruhi aktivitas respons imun dalammengeliminasi antigen adalah rekombinasi gen VDJyang diatur oleh enzim RAG 1 dan RAG 2, rekombinasiini akan menentukan sepsefisitas dan aviditas fragmenFab pada molekul antibodi yang bertugas mengenaliepitop antigen (Abbas et al., 2012). Hingga saat inijenis antibodi pada ikan diketahui hanya IgM,meskipun dilaporkan pada penelitian terbaru yang

dilaporkan oleh Zhu et al. (2013) menyatakan bahwaikan juga menghasilkan antibodi yang mirip denganIgG seperti IgZ, IgZ-2, IgT, dan chimeric IgM-IgZ yangmerefleksikan kompleksitas sistem imun adaptif padaikan, di samping juga berhasil diidentifikasi beberapasitokin yang terlibat dalam Th1 dan Th2 dan Treg-likecell.

Vaksinasi melalui perendaman adalah praktek yangumum dalam budidaya, karena kemudahan untukvaksinasi massal dengan perlindungan yang memadai.Namun, mekanisme penyerapan dan presentasi anti-gen untuk menghasilkan respons imun yang protektifdan peran sistem kekebalan tubuh bawaannya sebagianbesar belum diketahui. Dampak vaksinasi melaluiperendaman pada fisiologi ikan, respons imun bawaandan respons imun spesifik dapat dikarakterisasidengan bantuan penanda menggunakan partikulat fluo-rescent dan model antigen terlarut. Seperti yangdilakukan oleh Huising et al. (2003) denganmemvaksinasi ikan mas melalui perendaman langsung(direct immersion/DI) dan perendaman hiper osmotik(hyperosmotic immersion/HI; perendaman langsungnamun diawali dengan perendaman singkat dalam

Gambar 2. Pola titer antibodi ikan gurami yang divaksinasi bivalen A. hydrophila dan M. fortuitum melaluiperendaman (P). P = A. hydrophila 1010 cfu dan M. fortuitum 109 cfu rasio 1:1 v/v, K = kontrol(tidak divaksin)

Figure 2. Pattern of antibody titer of the vaccinated giant gouramy with bivalent vaccine A. hydrophila and M.fortuitum by immersion (P). P = A. hydrophila 1010 cfu and M. fortuitum 109 cfu ratio 1:1 v/v, C =control (unvaccinated)

574


Perlakuan uji tantang ko-infeksiChallenge test co-infection

UlanganRepetition

RPS (%)



SintasanSurvival rate (%)

1 18.4 8 17 32

2 8.8 6 19 24

3 13.6 7 18 28

1 8.8 6 19 24

2 0 0 25 0

3 8.8 6 19 24

1 8.8 6 19 24

2 8.8 6 19 24

3 18.4 8 17 32

1 5 15 33.33

2 3 17 20

3 2 18 13.3

Kontrol Control




larutan hipertonik), kedua metode tersebut dapatmeningkatkan penyerapan partikel terlarut melaluiinfiltrasi lewat lapisan epitel dari insang dan kulit.Proses penyerapan ini tidak menyebabkan kerusakanringan dan tidak menambah stres atas tindakanperlakuan selama penanganan dalam proses vaksinasimelalui perendaman. Metode perendaman hiperosmotik lebih baik dalam mengaktifkan sistemkekebalan tubuh bawaan dari ikan, dan lebih efektifdalam meningkatkan penyerapan vaksin untukmeningkatkan efektivitas di mana komponen vaksindiproses dan disajikan oleh sistem kekebalan tubuhbawaan, serta dapat meningkatkan respons imunmukosa.

Penggunaan Vaksin Bivalen A. hydrophila danM. fortuitum Melalui Oral (Pakan)

Vaksin bivalen yang dibuat merupakan vaksin dalambentuk cair (water based vaccines), maka carapencampuran dapat menggunakan metode semprotsecara langsung pada permukaan pakan (pelet), denganbeberapa catatan bahwa teknik semprotan harus dapatmeminimalisir risiko terbentuk aerosol denganpartikel lain, serta penyimpanan pakan yangmengandung vaksin harus pada suhu 2°C-8°C.

Kemampuan proteksi ikan gurami terhadap ujitantang dengan ko-infeksi A. hydrophila dan M.fortuitum setelah divaksinasi bivalen yang diaplikasikanmelalui pencampuran dengan pakan sangat rendah.RPS tertinggi hanya sekitar 18,4% dari perlakuanvaksinasi bivalen dengan dosis perendaman

pengenceran ke-1 campuran antara bakteri A.hydrophila 1010 cfu dan M. fortutium 109 cfu dan hasilperlakuan yang lainnya juga terlihat tidak konsisten(Tabel 3), begitu juga dengan titer antibodi yangfluktuatif (Gambar 3) menunjukkan bahwa setiapindividu ikan memberikan respons yang berbedaterhadap perlakuan vaksinasi. Hal ini diduga karenaadanya kerusakan antigen dari vaksin pada saatmelewati saluran pencernaan, dan kesempatan setiapikan memakan pakan yang mangandung vaksin tidaksama jumlahnya. Terdapat beberapa pendekatan yangdapat diambil dari kasus ini adalah denganmenggunakan bantuan liposom atau alginat untukmelindungi antigen dari tingkat keasaman saluranpencernaan, metode ini lebih dikenal dengan vaksinbiofilm (Azad et al., 2000; Ire et al., 2005).

National Office of Animal Health [NOAH] (2006)mengemukakan bahwa obat dalam pakan adalah ruteyang paling umum untuk penggunaan melalui oral.Namun, ada beberapa masalah yang terkait denganrute ini, beberapa anti-bakterial memiliki masalahpeletabilitas, adanya pola persaingan ikan berukuranbesar dan lebih kuat akan memangsa lebih banyakpakan yang mengandung obat, dan nafsu makan setiapikan berbeda.

Teknologi vaksin oral telah dikembangkan selamabertahun-tahun sebagai salah satu metode idealpemberian vaksin untuk ikan. Beberapa faktor yangmulai diteliti adalah presentasi vaksin dalam bentukyang sesuai, memastikan pemerataan bentuk sediaanuntuk seluruh populasi ikan yang akan divaksinasi,

Tabel 3. Efikasi vaksinasi bivalen A. hydrophila dan M. fortuitum melalui oralTable 3. Efficacy of a bivalent vaccine A. hydrophila and M. fortuitum by oral

Keterangan (Remarks): AH : Aeromonas hydrophila, MF : Mycobacterium fortuitum


575

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

Minggu ke-1(Week 1)

Minggu ke-2(Week 2)

Minggu ke-3(Week 3)

Minggu ke-4(Week 4)

Minggu ke-5(Week 5)

Minggu ke-6(Week 6)

Minggu ke-7(Week 7)

Minggu ke-8(Week 8)

Minggu ke-9(Week 9)

Minggu ke-10(Week 10)

Masa induksi vaksin terhadap M. fortuitumInduction period of a vaccine against

M. fortuitum

Sebelum ujitantang

terhadapko-infeksiBefore thechallenge


Masa uji tantang terhadap ko-infeksiA. hydrophila dan M. fortuitum

Challenged test against co-infection ofA. hydrophila and M. fortuitum

Pasca ujitantang

terhadapko-infeksi

Post-challenge


Tite

r ant

ibod

i (lo

g 2)

Antib

ody

titer

(log

2)

O1 O2 O3 K1 K2

durasi imunitas, dan penyajian kisaran yang tepat dariantigen. Saluran usus ikan bagian depan sangat asam,hal ini dapat menjadikan masalah dipresentasi anti-gen dalam vaksinasi oral (Hart et al., 1989). Vaksinharus dilindungi dengan beberapa cara untukmemastikan perjalanan vaksin agar sampai ke ususbesar (hindgut) di mana antigen yang memiliki sifatimunopropilaksis dapat diproses oleh sel-selkekebalan tubuh, teknologi enkapsulasi, akan menjaditantangan tersendiri dalam penggunaannya.

Durasi kekebalan adalah masalah lain yang dapatmembuat ketidakpastian hasil divaksinasi oral. Belumada zat pembantu yang dapat digunakan divaksin oraluntuk memperpanjang presentasi antigen, padahalkemampuan tanggap kebal hampir sepenuhnyatergantung pada sel-sel memori sehingga kesempatanrespons imun yang terbentuk relatif sangat singkat.

Oleh karena itu, vaksinasi melalui oral biasanyadisarankan untuk penggunaan vaksinasi booster.

Vaksinasi secara oral dapat menggunakan denganbantuan media lain sebagai pembawa atau dapatberbentuk vaksin yang terenkapsulasi (Kambalapallyet al., 2013). Lin et al. (2007) telah mencobamenggunakan vaksin NNV (Nervous necrosis virus) yangdibuat dari Artemia-terenkapsulasi bakteri Escherichiacoli rekombinan yang membawa protein kapsid genNNV. Artemia yang mengandung NNV VP digunakanuntuk memvaksinasi larva ikan kerapu secara oral.Analisis immuno-histokimia menunjukkan tujuh harisetelah vaksinasi antigen terserap di usus besar danmembentuk anti-NNV VP antibodi spesifik pada ikankerapu. Larva yang divaksinasi menunjukkan tingkatperlindungan relatif sebesar 64,2% dan 69,5% setelahditantang dengan NNV virulen. Disimpulkan bahwa,

Gambar 3. Pola titer antibodi ikan gurami yang divaksinasi bivalen A. hydrophila dan M. fortuitum melalui oral(O). O = A. hydrophila 1010 cfu dan M. fortuitum 109 cfu rasio 1:1 v/v, K = kontrol (tidak divaksin)

Figure 3. Pattern of antibody titer of the vaccinated giant gouramy with bivalent vaccine A. hydrophila and M.fortuitum by oral (O). O = A. hydrophila 1010 cfu and M. fortuitum 109 cfu ratio 1:1 v/v, K = control(unvaccinated)

576


vaksinasi NNV melalui oral efektif bisa mengimunisasilarva kerapu dan metode ini dapat diperluas untukpengembangan vaksin oral lain dan untuk digunakandalam spesies ikan lainnya. Metode tersebut juga telahdicoba untuk penggunaan KHV (Koiherpes virus) olehNuryati et al. (2013) dan memperoleh hasil bahwaArtemia dapat dijadikan sebagai vektor pembawavaksin plasmid GP-11 untuk larva ikan Cyprinus carpio.

Salah satu tantangan dasar lainnya dengan vaksinasioral adalah untuk memastikan bahwa setiap ikanmenerima jumlah yang cukup dari antigen. Karena ikandiberi makan dalam kelompok besar, dengan pola-polaperilaku dalam kelompok yang berbeda memilikipengaruh pada serapan pakan, sangat sulit untukmemastikan bahwa semua ikan target menerimavaksin yang cukup. Juga dari sudut pandang komersial,volume antigen yang dibutuhkan untuk metode inijauh lebih besar dari yang dibutuhkan untuk vaksinasiinjeksi individu, terutama jika vaksin ini ditargetkanpada ikan dengan bobot badan besar seperti indukgurami.

Vaksin polivalen merupakan vaksin kombinasi yangterdiri atas dua atau lebih imunogen terpisah yangdisatukan dalam produk tunggal, pemberian vaksinseperti ini memiliki kelebihan dalam hal mengurangijumlah dan risiko trauma akibat injeksi jika diberikansecara suntik sehingga memudahkan pembudidayadalam aplikasinya, menghemat waktu dan biaya, sertapenyimpanan yang lebih mudah. Akan tetapi jika dilihatdari sisi lain penggunaan vaksin polivalen jugamemiliki kekurangan misalnya daya imunogenisitasantigen berkurang, reaktogenisitas, dan kesulitan bilaterjadi efek samping (Baratawidjaja & Rengganis,2012).

KESIMPULAN

Dosis vaksin terbaik untuk perlakuan vaksin bivalenpada benih ikan gurami melalui injeksi, perendaman,dan oral adalah campuran antara bakteri A. hydrophila1010 cfu dan M. fortuitum 109 cfu dengan perbandingan1:1 v/v. Rata-rata tingkat RPS setelah uji tantang denganko-infeksi A. hydrophila dan M. fortuitum untukpenggunaan vaksin bivalen melalui injeksi adalah56,33%; sedangkan melalui perendaman sebesar 26,4%;dan penggunaan melalui oral menghasilkan rata-ratalevel proteksi 13,6%.

UCAPAN TERIMA KASIH

Penelitian telah terlaksana dengan sumber danadari DIPA BPPBAT Tahu Anggaran 2014, KementerianKelautan dan Perikanan. Penulis mengucapkan terimakasih kepada Kepala Balai Penelitian danPengembangan Budidaya Air Tawar, Bogor; seluruhPeneliti dan staff lainnya, serta teknisi (Sdr. Setiadi,

Edy Farid, Ahmad Wahyudi, dan Johan Affandi) sehinggapenelitian ini terlaksana dengan lancar.

DAFTAR PUSTAKA

Abbas, A.K., Lichtman, A.H., & Pillai, S. (2012). Cellu-lar and molecular immunology. Elsevier Saunders.

Azad, I.S., Shankar, K.M., Mohan, C.V., & Kalita, B.(2000). Uptake and processing of biofilm and free-cell vaccines of Aeromonas hydrophila in indianmajor carps and common carp following oral vac-cination-antigen localization by monoclonalantobody. Dis. Aqua. Organ., 43, 103-108.

Baratawidjaja, G.K., & Rengganis, I. (2012). Imunologidasar. Ed. 10. Badan Penerbit Fakultas Kedokteran,Universitas Indonesia. Jakarta, 568 hlm.

Caron, J., & Penn, G.M. (1992). Electrophoretic andimmnochemical characterization of immunoglo-bulins. In Rose, N.R., deMacario, E.C., Fahey, J.L.,Friedman, H., & Penn, G.M. (Eds.). Manual of clini-cal labolatory immunology, 4th ed. Washington D.C.,Am. Soc. Microbiol., p. 84-95.

Chettri, J.K., Deshmukh, S., Holten-Andersen, L.,Jafaar, R.M., Dalsgaard, I., & Buchmann, K. (2013).Comparative evaluation of administration meth-ods for a vaccine protecting rainbow troutagainst Yersinia ruckeri O1 biotype 2 infections.Vet. Immunol. Immunopathol. 15, 154(1-2), 42-7.Retrieved November 28, 2014, from http://www.ncbi.nlm.nih.gov/

Da Silva, B.C., Jatoba, A., Vieira, F.N., Mourino, J.L.P.,Bolívar, N., Walter Quadros Seiffert, W.Q., & Mar-tins, M.L. (2013). Immunization of hybrid surubim(Pseudoplatystoma corruscans x P. fasciatum) againstMotile Aeromonas hydrophila septicemia. Braz.arch. biol. technol. 56(1). Retrieved November 28,2014, from http://www.scielo.br/scielo.php

Ellis, A.E. (1988). General principles of fish vaccina-tion. In Ellis, A-E (Ed.). Fish vaccination. AcademicPress. London, p. 1-19.

Evensen, O. (2009). Development in fish vaccinologywith focus on delivery methodologies, adjuvants,and formulations. In Rogers, C. & Basurco, B. (Ed.).The use of veterinary drugs and vaccines in Mediter-ranean aquaculture. Zaragoza: CIHEAM, 2009. p.177-186 (Options Méditerranéennes: Série A.Séminaires Méditerranéens: n. 86).

Gudmundsdottir, S., Magnadottir, B., Bjornsdottir, B.,Madottir H.A., & Gudmundsdotti, B.K. (2009).Specific and natural antibody response of cod ju-veniles vaccinated against Vibrio anguillarum. FishShellfish Immunology, 26, 619-624.

Hart, S., Wrathmell, A.B., Harris, J.E., & Grays, T.H.(1989). Gut immunology in fish: a review. Dev.Comp. Immunpl., 13, 93-100.


577

Huising, M.O., Guichelaar, T., Hoek, C., Kemenade,B.M.L.V., Flik, G., Savelkoul, H.F.J., & Rombout,J.H.W.M. (2003). Increased efficacy of immersionvaccination in fish with hyperosmotic pretreat-ment. Vaccine, 21, 4178-4193.

Ire, T., Watarai, S., Iwasaki, T., & Kodama, H. (2005).Protection againts experimental Aeromonassalmonicida infection in carp by oral immunisationwith bacterial antigen entrapped in liposomes.Fish Shellfish Immunology, 18, 235-242.

Kambalapally, S., Harel, M., & Tobar, J.A. (2013). Oralvaccine delivery proves effective in reducingdisesases in Salmon. Global Aquaculture Advocate,Februari 2013. p. 70-71.

Lin, C., Lin, J.H., Chen, M., & Yang, H. (2007). An oralnervous necrosis virus vaccine that induces pro-tective immunity in larvae of grouper (Epinepheluscoioides). Aquaculture, 268, 265-273.

National Office of Animal Health [NOAH]. (2006). Re-sponsible use of vaccines and vaccination in fishproduction. p. 24. Retrieved November 24, 2014,from www.ruma.org.uk

Nuryati, S., Hadiwibowo, S.S., & Alimuddin. (2013).The potential of Artemia sp. as a DNA vaccine vec-tor for common carp Cyprinus carpio larvae. JurnalAkuakultur Indonesia, 12(1), 59-67.

Osman, K.M., Mohamed, L.A., Rahman, E.H.A., &Soliman, W.S. (2009). Trials for vaccination of Ti-lapia fish against Aeromonas and Pseudomonas in-fections using monovalent, bivalent, and polyva-lent vaccines. World Journal of Fish and Marine Sci-ences, 1(4), 297-304.

Purwaningsih, U., Indrawati, A., & Lusiastuti, A.M.(2014). Proteksi vaksin monovalen dan koktail sel

utuh terhadap ko-infeksi Mycobacterium fortuitumdan Aeromonas hydrophila pada ikan gurami,Osphronemus goramy. J. Ris. Akuakultur, 9(2), 283-294.

Skinner, L.A. (2009). The Physiological and Immuno-logical effects of vaccination on fish health, wel-fare, and performance. The University of BritishColumbia, 139 pp.

Sommerset, I., Krossoy, B., Biering, E., & Frost, P.(2005). Vaccines for fish in aquaculture. Expert Rev.Vaccines, 4(1), 89-101.

Suanyuk, N., & Itsaro, A. (2011). Efficacy of inacti-vated Streptococcus iniae vaccine and protectiveeffect of â-(1,3/1,6)-glucan on the effectivenessof vaccine in red tilapia Oreochromis niloticus x O.mossambicus. Songklanakarin Journal Science Tech-nology, 33(2), 143-149.

Sugiani, D., Lusiastuti, A.M., & Taukhid. (2013).Laporan teknis Pengembangan vaksin bivalenuntuk pencegahan penyakit Mycobacteriosis danMotile Aeromonas Septicemia. Balai Penelitian danPengembangan Budidaya Air Tawar, Bogor, Indo-nesia, 51 hlm.

Toranzo, A.E., Romalde, J.L., Magarinos, B., & Barja,J.L. (2009). Present and future of aquaculture vac-cines against fish bacterial diseases. The use ofveterinary drugs and vaccines in Mediterraneanaquaculture. Options Mediterraneennes, A., 86, 155-176.

Zhu, Lv-y., Li, N., Zhu, G., Xiang, L., & Shao, J.Z. (2013).Advances in research of ûsh immune-relevantgenes: A comparative overview of innate and adap-tive immunity in teleosts. Developmental and Com-parative Immunology, 39, 39-62.

578


Documents

EFEKTIVITAS VAKSIN BIVALEN Aeromonas hydrophila DAN ...Perlakuan vaksinasi pada ikan gurami dilakukan selama empat minggu ... Jurnal Riset Akuakultur Volume 10 Nomor 4, 2015 569