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[ 13 ]
【実験】
抗てんかん薬の血中濃度測定とその解析
血中濃度をモニターしながら薬物を安全かつ有効に投与する TDM の概念は,ジギタリス製剤,免疫抑制
薬,抗てんかん薬を中心として広く医療に定着している.薬を処方するうえで匙加減は欠かせないが,その
科学的根拠を与える検査値として血中薬物濃度の重要性がある.本実習では TDM の基本を理解することを
目的として,抗てんかん薬の血中濃度測定を HPLC 法を用いて行い,得られた血中濃度及び与えられた患者
情報から投与量の妥当性及び投与計画の立案を行う.
○分析対象医薬品:
フェノバルビタール
カルバマゼピン
○使用機器及び測定条件:
ポンプ,Waters Alliance 2695 separations module;
検出器,Waters 2996 photodiode array detector;
データ処理ソフト:Empower ™ 2 Chromatograph
分離カラム,Wakopack Handy ODS (150× 4.6 mm, i.d.);
溶離液,7 mM Acetate buffer (pH 7)/CH3CN (=78:22, v/v%);
流速,1.5 ml/min;
測定波長,240 nm; 試料注入量,20 µl.
○血液試料の前処理:
1)エッペンチューブに血漿 100 µl 及び内標準物質溶液 200 µl を加える.
2)これにアセトニトリルを 800 µl 加えて 30秒間撹拌する.
3)3000 rpm, 10 分間,遠心分離を行う.
4)上清を採り,ろ過する.
5)ろ液を専用のバイアルに入れ HPLC にセットする.
○血中濃度の算出:
1)HPLC 分析により得られたフェノバルビタールあるいはカルバマゼピンのピーク面積と内標準物質のピ
ーク面積との比を求める.
2)それぞれのシステムの検量線から,得られたピーク面積比を基に血中薬物濃度を算出する.
[ 14 ]
血中テオフィリン濃度の測定
○分析対象医薬品:
テオフィリン
7-(2-ヒドロキシエチル)テオフィリン(内部標準)
○使用機器及び測定条件:
ポンプ,Shimadzu LC-10 AT VP;
検出器,Shimadzu SPD-10A VP;
分離カラム,Wakopak Handy ODS (150× 4.6 mm, i.d.);
溶離液,H2O/MeOH (=80:20, v/v);
流速,1.0 ml/min;
測定波長,273 nm; 試料注入量,20 µl.
○血液試料の前処理:
1)エッペンチューブに血漿 50 µl を採り,これに 0.1 M リン酸緩衝液 (pH 6.6) を 50 l
及び内標準物質のクロロホルム溶液 1 ml を加える.
2)これを 1 分間撹拌後,3500 rpm, 10 分間で遠心分離を行う.
3)有機層 800 µlを採り,窒素気流下減圧乾固させる.
4)残渣に溶離液 100 l を加え HPLC 分析に供する.
○血中濃度の算出:
1)HPLC 分析により得られたテオフィリンのピーク高さと内標準物質のピーク高さとの
比を求める.
2)検量線から,得られたピーク高さ比を基に血中薬物濃度を算出する