DRAFT LAPORAN KULTUR JARINGAN
DISUSUN OLEH: MIA WAHYUNINGSARI K4308009
PENDIDIKAN BIOLOGI FAKULTAS KEGURUAN DAN ILMU PENDIDIKAN
UNIVERSITAS SEBELAS MARET SURAKARTA 2011
ACARA I STERILISASI ALAT DAN PEMBUATAN MEDIA KULTUR
Tujuan dari praktikum acara I ini adalah untuk mengetahui
prosedur pembuatan larutan stock, mengetahui langkah-langkah dalam
pembuatan media kultur jaringan, serta mengetahui prosedur
sterilisasi alat dan media kultur.
A. Media Kultur Jaringan Media merupakan faktor utama dalam
perbanyakan dengan kultur jaringan. Keberhasilan perbanyakan dan
perkembangbiakan tanaman dengan metode kultur jaringan secara umum
sangat tergantung pada jenis media. Media tumbuh pada kultur
jaringan sangat besar pengaruhnya terhadap pertumbuhan dan
perkembangan eksplan serta bibit yang dihasilkannya. Oleh karena
itu, macam-macam media kultur jaringan telah ditemukan sehingga
jumlahnya cukup banyak. Nama-nama media tumbuh untuk eksplan ini
biasanya sesuai dengan nama penemunya. Media tumbuh untuk eksplan
berisi kualitatif komponen bahan kimia yang hampir sama, hanya agak
berbeda dalam besarnya kadar untuk tiap-tiap persenyawaan. Media
dasar yang sering digunakan dalam kultur jaringan Anthurium sendiri
adalah media MS dan modifikasinya ( Pierik et al.,1974; Pierik dan
Steegmans, 1976;Kunisaki, 1980; Kuenhle et al., 1992; Chen et al;
Hamidah et al., 1997; Teng, 1997;2 ; Rachmawati, 2005), media
Nitsch dan modifikasinya (Geir, 1986, 1987, 1988).
B. Komposisi Media Kultur jaringan Pada umumnya komposisi utama
media tanam kultur jaringan, terdiri dari hormon (zat pengatur
tumbuh) dan sejumlah unsur yang biasanya terdapat di dalam tanah
yang dikelompokkan ke dalam unsur makro, unsur mikro. Hasil yang
lebih baik akan dapat kita peroleh bila, kedalam media tersebut,
ditambahkan vitamin, asam amino, dan hormon, bahan pemadat media
(agar), glukosa dalam bentuk gula maupun sukrosa, air destilata
(akuades), dan bahan organik tambahan (Gunawan, 1992). Zat pengatur
tumbuh adalah persenyawaan organik selain dari nutrient yang dalam
jumlah yang sedikit (1mM) dapat merangsang, menghambat, atau
mengubah pola pertumbuhan dan perkembangan tanaman (Moore, 1979
dalam Gunawan, 1992). Zat pengatur tumbuh (ZPT) dalam kultur
jaringan diperlukan untuk mengendalikan dan mengatur pertumbuhan
kultur tanaman. Zat ini mempengaruhi pertumbuhan dan
morfogenesis dalam kultur sel, jaringan, dan organ. Jenis dan
konsentrasi ZPT tergantung pada tujuan dan tahap pengkulturan.
Secara umum, zat pengatur tumbuh yang digunakan dalam kultur
jaringan ada tiga kelompok besar, yaitu auksin, sitokinin, dan
giberelin. Auksin digunakan secara luas dalam kultur jaringan untuk
merangsang pertumbuhan kalus, akar, suspensi sel dan organ
(Gunawan, 1992) Contoh hormon kelompok auksin adalah 2,4 Dikloro
Fenoksiasetat (2,4-D), Indol Acetid Acid (IAA), Naftalen Acetid
Acid (NAA), atau Indol Buterik Asetat (IBA). Golongan sitokinin
berperan untuk menstimulus pembelahan sel dan merangsang
pertumbuhan tunas pucuk. Menurut Gunawan (1992), golongan ini
sangat penting dalam pengaturan pembelahan sel dan morfogenesis.
Sitokinin yang biasa digunakan dalam kultur jaringan adalah
kinetin, ziatin, benzilaminopurine (BAP). Dan giberelin untuk
diferensiasi atau perbanyakan fungsi sel, terutama pembentukan
kalus. Hormon kelompok giberelin adalah GA3, GA2, dan GA1.
Penggunaan hormon tersebut harus tepat dalam perhitungan dosis
pemakaian, karena jika terlalu banyak maupun terlalu sedikit dari
dosis yang diperlukan justru akan menghambat bahkan berdampak
negatif terhadap tanaman kultur. Karena interaksi antar hormon
dalam suatu media sangat berpengaruh dalam diferensiasi sel.
Kebutuhan nutrisi mineral untuk tanaman yang dikulturkan secara
in-vitro pada dasarnya sama dengan kebutuhan hara tanaman yang
ditumbuhakan di tanah. Unsurunsur hara yang dibutuhkan tanaman di
lapangan merupakan kebutuhan pokok yang harus tersedia dalam media
kultur jaringan. Antara lain adalah unsur hara makro dan unsur hara
mikro. Unsur-unsur hara tersebut diberikan dalam bentuk garam-garam
mineral. Komposisi media dan perkembangannya didasarkan pada
pendekatan masingmasing peneliti (Gunawan, 1992). Unsur hara makro
adalah hara yang dibutuhkan tanaman dalam jumlah yang banyak. Hara
makro tersebut meliputi, Nitrogen (N), Fosfor (P), Kalium (K),
Kalsium (Ca), Sulfur (S), Magnesium (Mg), dan Besi (Fe). Kegunaan
unsur hara makro tersebut dalam kultur jaringan menurut Qosim, 2006
dalam Sukarasa, 2007 adalah sebagai berikut: 1) Nitrogen (N)
diberikan dalam bentuk NH4NO3, NH2PO4, NH2SO4. Berfungsi untuk
membentuk protein, lemak, dan berbagai senyawa organik lain,
morfogenesis (pertumbuhan akar dan tunas), pertumbuhan dan
pembentukan embrio, pembentukan embrio zigotik dan pertumbuhan
vegetatif.
2)
Fosfor
(P),
diberikan
dalam
bentuk
KH2PO4
Berfungsi untuk metabolisme energi, sebagai stabilitor membran
sel, pengaturan metabolisme tanaman, pengaturan produksi
pati/amilum, pembentukan karbohidrat, sangat penting dalam transfer
energi, protein, dan sintesis asam amino serta konstribusi terhadap
struktur dan asam nukleat. 3) Kalium (K), diberikan dalam bentuk
CaCl2.2H2O
Berfungsi untuk pemanjangan sel tanaman, memperkuat tubuh
tanaman, memperlancar metabolisme dan penyerapan makanan, ion
kalsium ditransfer secara cepat menyebrangi membran sel dan
mengatur pH dan tekanan osmotik di antara sel. 4) Kalsium (Ca),
diberikan dalam bentuk CaCl2.2H2O
Berfungsi untuk merangsang bulu-bulu akar, penggandaan atau
perbanyakan sel dan akar, pembentukan tabung polen, dinding dan
membran sel lebih kuat, tahan terhadap serangan patogen,
mengeraskan batang, memproduksi cadangan makanan. 5) Sulfur (S),
merupakan unsur yang penting untuk pembentukan beberapa jenis
protein, seperti asam amino dan vitamin B1. Unsur S juga berperan
penting dalam pembentukan bitil-bintil akar. 6) Magnesium (Mg),
diberikan dalam bentuk MgSO4.7H2O.
Berfungsi untuk meningkatkan kandungan fosfat, pembentukan
protein. 7) Besi (Fe), diberikan dalam bentuk
Fe2(SO4)3;FeSO4.7H2O
Berfungsi sebagai penyangga (chelatin agent) yang sangat penting
untuk menyangga kestabilan pH media selama digunakan untuk
menumbuhkan jaringan tanaman.Pada tanaman, Fe berfungsi untuk
pernapasan dan pembentukan hijau daun.
Unsur hara mikro adalah hara yang dibutuhkan dalam jumlah yang
sedikit. Unsur hara mikro ini merupakan komponen sel tanaman yang
penting dalam proses metabolisme dan proses fisioligi lainnya
(Gunawan, 1992). Unsur hara mikro tersebut diantaranya adalah : 1.
Klor (Cl), diberikan dalam bentu KI. 2. Mangan (Mn), diberikan
dalam bentuk MnSO4.4H2O. 3. Tembaga (Cu), diberikan dalam bentuk
CuSO4.5H2O. 4. Kobal (CO), diberikan dalam bentuk CoCl2.6H2O.
5. Molibdenun (Mo), diberikan dalam bentuk NaMoO4.2H2O. 6. Seng
(Zn), diberikan dalam bentuk ZnSO4.4H2O. 7. Boron (B), diberikan
dalam bentuk H3BO3.
Vitamin yang paling sering digunakan dalam media kultur jaringan
tanaman adalah thiamine (vitamin B1), nicotinic acid (niacin),
pyridoxine (vitamin B6). Thiamine merupakan vitamin yang esensial
dalam kultur jaringan tanaman karena thiamine mempengaruhi
pertumbuhan dan perkembangan sel. Vitamin C, seperti asam sitrat
dan asam askorbat, kadang-kadang digunakan sebagai antioksidan
untuk mencegah atau mengurangi pencoklatan atau penghitaman
eksplan. Mio-Inositol atau meso-insitol sering digunakan sebagai
salah satu komponen media yang penting, karena terbukti bersinergis
dengan zat pengaturtumbuh merangsang pertumbuhan jaringan yang
dikulturkan (Yusnita, 2004). Dalam media kultur jaringan, asam
amino merupakan sumber nitrogen organik. Namun sumber N organik ini
jarang ditambahkan dalam media kultur jaringan, karena sumber
sumber nitrogen utamanya sudah tersedia dari NO3- dan NH4+. Asam
amino yang sering digunakan adalah glisin, lysin dan threonine.
Penambahan glisin dalam media dengan konsentrasi tertentu dapat
melengkapi vitamin sebagai sumber bahan organik (Yusnita, 2004).
Gula digunakan sebagai sumber energi dalam media kultur, karena
umumnya bagian tanaman atau eksplan yang dikulturkan tidak autotrof
dan mempunyai laju fotosintesis yang rendah. Oleh sebab itu tanaman
kultur jaringan membutuhkan karbohidart yang cukup sebagai sumber
energi. Menurut Gautheret dalam Gunawan (1992), sukrosa adalah
sumber karbohidrat penghasil energi yang terbaik melebihi glukosa,
maltosa, rafinosa. Namun jika tidak terdapat sukrosa, sumber
karbohidrat tersebut dapat digantikan dengan gula pasir. Gula pasir
cukup memenuhi syarat untuk mendukung pertumbuhan kultur. Selain
sebagai sumber energi, gula juga berfungsi sebagai tekanan osmotik
media. Eksplan yang dikulturkan harus selalu bersinggungan atau
terkena dengan medianya. Bahan pemadat media yang paling banyak
digunakan adalah agar-agar. Agaragar adalah campuran polisakarida
yang diperoleh dari beberapa spesies algae. Dalam analisa unsur,
diperoleh data bahwa agar-agar mengandung sedikit unsur Ca, Mg, K,
dan Na (Debergh, 1982 dalam Gunawan, 1992). Keuntungan dari
pemakaian agar-agar adalah:
1. Agar-agar membeku pada suhu 45 C dan mencair pada suhu 100
sehingga dalam kisaran suhu kultur, agar-agar akan berada dalam
keadaan beku yang stabil. 2. Tidak dicerna oleh enzim tanaman. 3.
Tidak bereaksi dengan persenyawaan-persenyawaa penyusun media.
Selain agar-agar, bahan pemadat media yang semakin banyak disukai
adalah Gelrite TM (buatan Kelco). Gelrite adalah gellam gum, suatu
hetero-polisakarida yang dihasilkan bakteri Pseudomonas elodea,
terdiri dari molekul-molekul K-glukuronat, rhamnosa, dan selobiosa.
Sebagai bahan pemadat media gelrite memiliki sifat-sifat yang
menguntungkan sebagai berikut : 1) Gelnya lebih jernih. 2) Untuk
memadatkan media dibutuhkan lebih sedikit daripada agar, sekitar
1,5 -3 g/l. 3) Lebih murni dan konsisten dalam kualitas. 4) Untuk
mencapai kekerasan gel tertentu, pemakaian gelrite lebih rendah
dari agar-agar, pada umumnya 2gr/l media. Namun kekerasan gel dari
gelrite sangat dipengaruhi oleh kehadiran garam-garam seperti NaCl,
KCl, MgCl2.6H2O dan CaCl2. Garam NaCl dan KCl menurunkan kekerasan
gel, tetapi MgCl2 dan CaCl2 meningkatkan kekerasan gel (Gunawan,
1992; 57 ). Salah satu kelemahan Gelrite adalah cenderung menaikkan
kelembaban nisbi (RH) dalam kultur, sehingga sering menyebabkan
terjadinya verifikasi. Gelrite jarang digunakan untuk produksi
planlet secara komersial terutama di Indonesia karena harganya
mahal (Yusnita, 2003). Kultur yang kurang berhasil, kadang-kadang
disebabkan oleh pemakaian air yang kurang murni (Wetherel, 1976).
Tidak boleh sembarang air dapat digunakan untuk membuat media
kultur. Contohnya air sumur atau air ledeng, dalam air tersebut
mengandung banyak kontaminan, bahan inorganik, organik, atau
mikroorganisme. Air yang digunakan untuk membuat media harus
benar-benar berkualitas tinggi, karena air maliputi lebih adari 95%
komponen media. Terhambatnya pertumbuhan tanaman yang dikulturkan
dapat disebabkan oleh rendahnya kualitas air yang digunakan. Untuk
menghindari hal tersebut, maka sebaiknya digunakan air yang telah
dimurnikan atau yang sering kita sebut air destilata (akuades) atau
air destilata ganda (akuabides). Dengan alasan ini, sebaiknya
sebuah laboratorium kultur jaringan layaknya mempunyai alat
penyulingan air (water destilator) atau setidaknya alat pembuat air
bebas ion (deionizer). Cara kerja destilator dalam menghasilkan air
destilata adalah dengan cara mengubah air
menjadi uap air, kemudian mengkondensasikan uap air tersebut.
Maka, jadilah air destilata yang tidak lagi berisi mineral atau
senyawa organik (Yusnita, 2004). Keasaman (pH) adalah nilai yang
menyatakan derajat keasaman atau kebasaan larutan dalam air.
Sel-sel tanaman yang dikembangkan dengan teknik kultur jaringan
mempunyai toleransi pH yang relatif sempit dengan titik optimal
antara pH 5,0 6,0 (Daisy, 1994). Faktor pH dalam media juga perlu
mendapat perhatian khusus. pH tesebut harus diatur sedemikian rupa
sehingga tidak mengganggu fungsi membran sel dan pH dari
sitoplasma. Pengaturan pH selain memperhatikan kepentingan beberapa
fisiologi sel, juga harus mempertimbangkan faktor-faktor: 1)
Kelarutan dari garam-garam penyusun media. 2) Pengambilan (uptake)
dari zat pengatur tumbuh dan garam garam lain. 3) Efisiensi
pembekuan agar-agar. Menurut Gamborg dan Shyluk, 1981 dalam
Gunawan, 1992, sel-sel tanaman membutuhkan pH yang sedikit asam
berkisar antara 5,55,8. Pengaturan pH, biasa dilakukan dengan
dengan menggunakan NaOH (atau kadang-kadang KOH) atau HCL pada
waktu semua komponen sudah dicampurkan (Gunawan, 1992).
C. Pembuatan Media dan Sterilisasi a. Membuat larutan stok 1).
Larutan stok media Menimbang bahan-bahan kimia yang telah dikalikan
menjadi beberapa kali konsentrasi, misalnya untuk unsur hara makro
dikalikan 20 dan unsur hara mikro dikalikan 100 kali konsentrasi
Melarutkan bahan-bahan kimia tersebut ke dalam aquadest dengan
volume tertentu, misalnya 500 ml Memasukkan masing-masing larutan
ke dalanm botol dan menyimpannnya ke dalam refrigerator. 2).
Larutan stok zat pengatur tumbuh Menghitung kebutuhan BAP 100 ppm
sebanyak 300 ml adalah sebagai berikut 100ppm = 100mg/l = 30 mg/0.3
l = 30 mg/300 ml Menghitung kebutuhan IBA 100 ppm sebanyak 100 ml
adalah sebagai berikut
100 ppm = 100 mg/l = 10 mg/ 0.1 l12 = 10 mg/ 100 ml Melarutkan
bahan dengan alkohol atau NaOH 1 N kemudian ditambah dengan
aquadest sampai 300 ml untuk BAP dan 100 ml untuk IBA Memasukkan
masing-masing larutan tersebut ke dalam botol dan menyimpannya ke
dalam refrigerator. b. Membuat media kultur Mengambil larutan stok
yang berisi NaEDTA, hara makro, hara mikro, vitamin dan ZPT
Memasukkan larutan stok ke dalam labu takar dan tambahkan aquadest
sebanyak 1000ml/ sampai tanda Memasukkan ke dalam bekerglass
Memasukkan gula sebanyak 30 gr/ tunggu sampai larut Mengukur pH dan
mengkondisikannya menjadi 5,8 6,2 dengan menambahkan HCl atau NaOH
Memasukkan agar sebanyak 8 gr/l Mendidihkan larutan tersebut
Memasukkan larutan yang sudah jadi ke dalam botol kultur Menutup
botol kultur dengan plastik pp dan mengikatnya dengan karet gelang
Memasukkan botol kultur tersebut ke dalam autoklaf untuk
disterilkan
c. Melakukan sterilisasi Alat dan Media Kultur Sterilissasi alat
dan media kultur jaringan dilakukan secara bersama-sama menggunakan
autoklaf Membungkus alat-alat kultir seperti petridish, pisau
scalpel dan pinset dengan kertas koran. Memasukkan botol-botol
berisi media dan alat-alat kultur yang telah dibungkus kertas koran
ke dalam autoklaf untuk proses sterilisasi pada suhu 121 C, tekanan
1,5 kg/cm2 selama 45 menit. Menyimpan alat-alat kultur dalam oven
Menyimpan media pada rak penyimpanan media yang bertujuan untuk
mengantisipasi ada tidaknya kontaminasi pada media sehingga dapat
dicegah penggunaan media yang telah terkontaminasi pada saat
penanaman.
D. Hasil Pengamatan
Hasil yang diperoleh pada praktikum sterilisasi alat dan
pembuatan media kultur ini adalah, didapatkan media agar yang
bersih, dengan tekstur yang tidak terlalu cair, dan tidak terlalu
padat (solid). Hal ini dipengaruhi oleh berbagai faktor,
diantaranya yaitu komposisi bahan yang tepat dan juga prosedur
kerja yang tepat.
TINJAUAN PUSTAKA
http://kultur-jaringan.blogspot.com/2009/08/media-kultur-jaringan.html.
Diakses tanggal 21 November 2011 Gunawan, L.W. 1992. Teknik Kultur
Jaringan Tumbuhan. Bogor: Institut Pertanian Bogor. Hendaryono,
D.P.S dan A. Wijayani. 1994. Teknik Kultur Jaringan. Yogyakarta:
Kanisius Wetherell, D.F. 1982. Pengantar Propagasi Tanaman Secara
In Vitro. Wayne, New Jersey: Avery Publishing Group INC. Yusnita.
2004. Kultur Jaringan Cara Memperbanyak Tanaman Secara Efisien.
Jakarta: Agromedia Pustaka.
ACARA II KULTUR JARINGAN MAWAR (Rosa sp.)
Tujuan dari praktikum acara II ini adalah untuk mengetahui
teknik kultur jaringan mawar serta mengetahui pengaruh BAP dan IBA
terhadap pertumbuhan dan perkembangan eksplan mawar
A. Hasil Pengamatan 1) Foto Pengamatan
(a)
(b)
(c)
(d)
Keterangan: foto (a) dan (b): ekplan berusia 1 minggu, foto (c):
eksplan berusia 2 minggu, foto(d): eksplan berusia 3 minggu
2) Tabel PengamatanTanggal Pengamatan 17 Okt 2011 19 Okt 2011 21
Okt 2011 24 Okt 2011 26 Okt 2011 28 Okt 2011 31 Okt 2011 2 Nov 2011
Saat Muncul Akar Tunas Daun Akar Jumlah Tunas Daun Keterangan Belum
ada kontaminasi Belum ada kontaminasi Belum ada kontaminasi
Ditemukan jamur warna putih di bagian bawah eksplan yang dari
kehari melebar, ekplan menjadi berwarna kehitaman %
Keberhasilan
5%
B. Pembahasan Bahan yang digunakan dalam kultur jaringan ini
adalah ruas batang mawar dari jaringan yang masih muda agar mampu
beregenerasi lebih cepat. Dalam kultur batang mawar ini tingkat
keberhasilan yang didapat adalah 0%. Eksplan yang dikulturkan tidak
ada yang hidup. Eksplan yang ditanam menjadi kehitaman karena
browning dan sebagian lagi mengalami kontaminasi oleh berbagai
macam jamur. Kontaminasi oleh berbagai macam jamur disebabkan oleh
sterilisasi yang kurang sempurna sehingga mikroba-mikroba yang ada
di dalam maupun disekitar eksplan berkembang biak di dalam media.
Sterilisasi yang kurang sempurna kemungkinan besar terjadi pada
saat eksplan akan ditanam di dalam botol kultur. Pada saat eksplan
akan ditanam, dilakukan sterilisasi bahan tanam dengan menggunakan
alkohol 96% dan larutan Clorox 5,25%. Apabila perendaman dalam
larutan terlalu cepat maka mikroba yang ada kemungkinan masih
terbawa di sekitar permukaan eksplan sehingga peristiwa kontaminasi
tidak dapat dihindarkan. Eksplan mawar tekontaminasi oleh jamur dan
bakteri, pada kontaminasi jamur terlihat hifa putih hingga hitam
(jenis yang berbeda) muncul pada media ataupun pada bahan tanam.
Sedangkan kontaminasi oleh bakteri terlihat cairan kental di
sekitar bahan tanam maupun media yang merupakan kumpulan massa
bakteri. Kontaminasi yang terjadi disebabakan oleh faktor media
ataupun bahan tanam yang sterilisasinya kurang sempurna.
Sterilisasi yang kurang sempurna ini mengakibatkan tumbuhnya
mikroba dalam media yang sangat kaya akan nutrisi. Sebagian dari
eksplan mawar terkontaminasi oleh bakteri dan jamur sedangkan
sebagian yang lain mengalami browning yaitu matinya eksplan karena
terlalu lama mengalami sterilisasi. Fungsi dari sterilisasi
adalah
membunuh mikroba akan tetapi apabila sterilisasi yang dilakukan
terlalu lama maka jaringan tanaman juga akan ikut mati atau terjadi
browning. Apabila dibandingkan dengan bahan lain yang digunakan
untuk kultur jaringan, bahan tanam mawar memiliki prosentase
keberhasilan 0%. Hal ini dikarenakan eksplan yang digunakan berupa
batang yang mempunyai permukaan yang cukup sulit untuk ditembus
oleh media, sehingga media agak sulit untuk masuk ke dalam jaringan
eksplan dan menyebabkan eksplan menjadi coklat kekuningan karena
tidak mendapatkan nutrisi yang cukup. Pengaruh dari BAP dan IBA
terhadap eksplan mawar ini belum bisa diamati karena seluruh
eksplan mati karena terkontaminasi maupun karena sterilisasi bahan
tanam yang terlalu lama. Fungsi dari BAP adalah sebagai pemacu
tunas sedangkan IBA digunakan sebagai pemacu akar.
TINJAUAN PUSTAKA Anonim. 2008. Perbanyakan Mawar secara Stenting
(Stek dan grafting). http://hortikultura.litbang.deptan.go.id.
Diakses pada tanggal 22 Desember 2008. Ibrahim,M.S.D., N. Nova K.,
Nurliani B. 2004. Studi Pendahuluan : Induksi Kalus Embriogenik
Dari Eksplan Daun Echinaceae purpurea.Buletin TRO Vol. XV No. 2,
2004 Nia. 2008. Hormon Pertumbuhan Pada Tumbuhan.
http://.anthuriumonline.wordpress.com. Diakses pada tanggal 22
Desember 2008. Rahardja, P.E. 1988. Kultur Jaringan Teknik
Perbanyakan Tanaman Secara Modern. Panebar Swadaya. Jakarta Sofia,
D. 2007. Pengaruh Berbagai Konsentrasi Benzyl Amino Purine Dan
Cycocel Terhadap Pertumbuhan Embrio Kedelai (Glysine max L. Marr.).
USU Reposytor.
ACARA III KULTUR JARINGAN NANAS (Ananas comusus)
Tujuan dari praktikum acara II ini adalah untuk mengetahui
teknik kultur jaringan nanas serta mengetahui pengaruh BAP dan IBA
terhadap pertumbuhan dan perkembangan eksplan nanas.
A. Hasil Pengamatan 1) Foto Pengamatan
(a)
(b)
(c)
(d)
Keterangan: foto (a) dan (b): ekplan berusia 1 minggu, foto (c):
eksplan berusia 2 minggu, foto(d): eksplan berusia 3 minggu
2) Tabel PengamatanTanggal Pengamatan 17 Okt 2011 19 Okt 2011 21
Okt 2011 24 Okt 2011 26 Okt 2011 28 Okt 2011 31 Okt 2011 2 Nov 2011
Saat Muncul Akar Tunas Daun Akar Jumlah Tunas Daun Keterangan Media
bersih Media mulai terkontaminasi Ada jamur berwarna kuning Jamur
menyebar di media Eksplan membusuk, kehitaman Jamur semakin banyak
menutupi media Media mulai pucat warnanya Media menjadi putih,
jamur semakin banyak % Keberhasilan
0%
B. Pembahasan Bahan eksplan yang digunakan berupa daging bonggol
dari mahkota nanas. Bahan yang digunakan dari tanaman ini mempunyai
karakteristik jaringan tebal dan berair. Pada bahan tanam sebelum
dilakukan penanaman terlebih dahulu dilakukan sterilisasi.
Sterilisasi eksplan dilakukan menggunakan clorox (sunclin) dengan
melakukan perendaman selama 3 menit pada bahan dan membilas bahan
dengan aquadest. Sterilisasi bahan harus dilakukan dengan tepat,
apabila perendaman clorox terlalu lama maka jaringan dari bahan
tanam akan mengalami kematian (browning) sehingga tidak mampu
membentuk individu baru, apabila sterilisasi terlalu singkat maka
bahan tanam yang digunakan akan membawa bibit bibit kontaminasi.
Kontaminasi dari eksplanlah yang paling sulit diatasi, walaupun
sterilisasi telah dilakukan dengan berbagai cara, namun
kadang-kadang kontaminasi tetap saja terjadi. Dalam hal ini
dikarenakan pada eksplan telah terjadi kontaminasi internal. Cara
penggulangannya dilakukan treatment pada tanaman yang akan
dijadikan sebagai sumber eksplan dengan mencuci eksplan pada
larutan fungisida dan bakterisida. Untuk menanggulangi kontamiknasi
setelah ekspaln dikulturkan maka dilakukan pemeliharaan secara
dengan melakukan penyemprotan spirtus ataupun alkohol pada
permukaan botol kultur dua hari sekali. Eksplan yang lain mengalami
browning dan kontaminasi dikarenakan media MS merupakan media yang
kaya akan nutrisi sehingga mikroba di sekeliling tanaman atau udara
sekitar eksplan juga tumbuh dan berkompetisi dengan eksplan.
Prosentase keberhasilan dari kultur nanas adalah 0%. Pengaruh
dari BAP dan IBA terhadap eksplan nanas ini belum bisa diamati
karena seluruh eksplan mati karena terkontaminasi maupun karena
sterilisasi bahan tanam yang terlalu lama. Fungsi dari BAP adalah
sebagai pemacu tunas sedangkan IBA digunakan sebagai pemacu
akar.
TINJAUAN PUSTAKA Anonim. 2003. Ananas comosus.
http://www.proseanet.org . Diakses pada tanggal 22 Desember 2008.
Husen, M. 2008. Kontaminasi Dalam Kultur Jaringan.
http://eshaflora.com. Diakses pada tanggal 18 Desember 2008.
Irwanto. 2001. Pengaruh Hormon IBA (Indole Butyric Acid) Terhadap
Persen Jadi Stek Pucuk Meranti Putih (Shorea montigena).
http://www.irwantoshut.com Diakses pada tanggal 22 Desember 2008.
Purnamaningsih, R. 2006. Induksi Kalus dan Optimasi Regenerasi
Empat Varietas Padi melalui Kultur In Vitro. Jurnal AgroBiogen
2(2):74-80. Wetherel, D.F. 2008. Propagasi Tanaman Secara In Vitro.
Avery Publishing Group Inc. New Jersey.
ACARA IV KULTUR JARINGAN PISANG (Musa Paradisiaca)
Tujuan dari praktikum acara II ini adalah untuk mengetahui
teknik kultur jaringan pisang serta mengetahui pengaruh BAP dan IBA
terhadap pertumbuhan dan perkembangan eksplan pisang
A. Hasil Pengamatan 1) Foto Pengamatan
(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
Keterangan: foto (a) dan (b): ekplan berusia 1 minggu, foto (c):
eksplan berusia 2 minggu, foto(d dan (e): eksplan berusia 3
minggu
2) Tabel PengamatanTanggal Pengamatan 17 Okt 2011 19 Okt 2011 21
Okt 2011 24 Okt 2011 26 Okt 2011 28 Okt 2011 31 Okt 2011 2 Nov 2011
Saat Muncul Akar Tunas Daun Akar Jumlah Tunas Daun Keterangan Media
masih bersih Media masih bersih Mulai terdapat jamur di media
Eksplan dan media berjamur Jamur semakin banyak Warna media memucat
Eksplan membusuk, jamur banyak Media menjadi putih %
Keberhasilan
0%
B. Pembahasan Pada acara empat, eksplan yang dipilih adalah
bagian dari bonggol pisang Musa paradisiacal yang dibawa oleh
masing-masing praktikan. Pemilihan ini disesuaikan dengan konsep
dasar kultur jaringan yaitu organ yang digunakan dalam kultur
jaringan harus mempunyai sifat totipotensi. Selain itu, pemilihan
bonggol pisang ini dikarenakan pada bagian tersebut masih bersifat
meristematik yang artinya memiliki kemampuan untuk aktif membelah.
Dari bonggol tersebut, dibelah menjadi beberapa bagian dan
dijadikan eksplan. Syarat eksplan harus memiliki bagian
meristematis yang berada di tengah bonggol agar nantinya memiliki
kemampuan untuk tumbuh. Jika eksplan ditanam di media yang sesuai
maka organ tersebut akan berdeferensiasi menjadi kalus, yaitu
sekumpulan sel yang aktif membelah dan mempunyai kemungkinan
menjadi zigot. Pada bahan tanam sebelum dilakukan penanaman
terlebih dahulu dilakukan sterilisasi. Sterilisasi eksplan
dilakukan menggunakan clorox (sunclin) dengan melakukan perendaman
selama 3 menit pada bahan dan membilas bahan dengan aquadest.
Sterilisasi bahan harus dilakukan dengan tepat, apabila perendaman
clorox terlalu lama maka jaringan dari bahan tanam akan mengalami
kematian (browning) sehingga tidak mampu membentuk individu baru,
apabila sterilisasi terlalu singkat maka bahan tanam yang digunakan
akan membawa bibit bibit kontaminasi.
Kontaminasi dari eksplanlah yang paling sulit diatasi, walaupun
sterilisasi telah dilakukan dengan berbagai cara, namun
kadang-kadang kontaminasi tetap saja terjadi. Dalam hal ini
dikarenakan pada eksplan telah terjadi kontaminasi internal. Cara
penggulangannya dilakukan treatment pada tanaman yang akan
dijadikan sebagai sumber eksplan dengan mencuci eksplan pada
larutan fungisida dan bakterisida. Untuk menanggulangi kontamiknasi
setelah ekspaln dikulturkan maka dilakukan pemeliharaan secara
dengan melakukan penyemprotan spirtus ataupun alkohol pada
permukaan botol kultur dua hari sekali. Eksplan yang lain mengalami
browning dan kontaminasi dikarenakan media MS merupakan media yang
kaya akan nutrisi sehingga mikroba di sekeliling tanaman atau udara
sekitar eksplan juga tumbuh dan berkompetisi dengan eksplan.
Prosentase keberhasilan dari kultur nanas adalah 0%. Pengaruh dari
BAP dan IBA terhadap eksplan pisang ini belum bisa diamati karena
seluruh eksplan mati karena terkontaminasi maupun karena
sterilisasi bahan tanam yang terlalu lama. Fungsi dari BAP adalah
sebagai pemacu tunas sedangkan IBA digunakan sebagai pemacu
akar.
TINJAUAN PUSTAKA
Anonim. 2008. Pengaruh Komposisi Media Dasar, Penambahan BAP dan
Pikloram terhadap Induksi Tunas Bawang Merah.
http://hortikultura.litbang.deptan.go.id. Diakses pada tanggal 23
Desember 2008. Irwanto. 2001. Pengaruh Hormon IBA (Indole Butyric
Acid) Terhadap Persen Jadi Stek Pucuk Meranti Putih (Shorea
montigena). http://www.irwantoshut.com Diakses pada tanggal 22
Desember 2008. Purnamaningsih, R. 2006. Induksi Kalus dan Optimasi
Regenerasi Empat VarietasPadi melalui Kultur In Vitro. Jurnal
AgroBiogen 2(2):74-80. Wetherel, D.F. 2008. Propagasi Tanaman
Secara In Vitro. Avery Publishing Group Inc. New Jersey. Chatimatun
Nisa dan Rodina, 2005. Kultur Jaringan Beberapa Kultivar Buah
Pisang (Musa paradisiacal L.) dengan pemberian Campuran NAA dan
Kinetin. Jurnal Pertanian Bioscientiae Volume 2, Nomor 2, Juli
2005, Halaman 23-36. Kalimantan Selatan: Fakultas Pertanian
Universitas Lambung Mangkura
ACARA V KULTUR JARINGAN ANGGREK (Dendrobium sp)
A. Hasil Pengamatan 1) Foto Pengamatan
(a)
(b)
(c) Keterangan: foto (a) dan (b): ekplan berusia 1 minggu, foto
(c): eksplan berusia 2 minggu
2) Tabel PengamatanTanggal Pengamatan 24 Okt 2011 26 Okt 2011 28
Okt 2011 3 Nov 2011 Saat Muncul Akar Tunas Daun Akar Jumlah Tunas
Daun Keterangan Planlet masih utuh, belum ada kontaminasi Belum ada
kontaminasi Belum ada kontaminasi Belum ada kontaminasi, eksplan
mulai menguning % Keberhasilan 30 %
B. Pembahasan Pada praktikum kali ini dilakukan subkultur
anggrek, yang dilakukan dengan memperbanyak Dendrobium sp, dimana
subkultur adalah proses penanaman ulang dengan atau tidak adanya
proses perbanyakan eksplan ke dalam media yang baru. Faktor
sterilitas ruangan juga sangat menentukan terhadap kontaminasi.
Ruangan yang sudah steril dapat saja berubah menjadi tidak steril
pada saat musim hujan, sehingga dapat membawa masuknya bakteri dan
jamur dari luar, serta dapat meningkatkan kelembaban yang akan
mempercepat perkembangan mikroorganisme. Pengambilan meristem
sebagai eksplan harus dilakukan dalam ruang steril (aseptik) agar
tidak terkontaminasi (Sunarjono, 2002). Pada eksplan hasil
percobaan, tidak didapatkan kontaminasi pada media. Persentase
keberhasilan adalah 30% hingga di minggu pertama. Hal ini
dimungkinkan
karena proses kesterilan dapat lebih dijaga sehingga kontaminasi
dapat diminimalisir. Namun belum terdapat dari subkultur yang
membentuk akar, karena mungkin waktu yang kurang, walaupun telah
diberikan zat pengatur tumbuh. Pembentukan akar merupakan salah
satu tahap yang penting dalam pembiakan mikro. Proses pembentukan
akar belum sepenuhnya dimengerti. Faktor-faktor yang berpengaruh
terhadap pembentukan akar pada stek telah diketahui mempunyai
pengaruh yang hampir sama pada stek mikro, diantaranya pengaruh
genetik, umur ontogenik, dan ZPT terutama auksin(Yusnita,2003).
Namun, di akhir percobaan terlihat keseluruhan eksplan yang ditanam
menguning, sebagai salah satu tanda-tanda kematian jaringan. Hal
ini dapat terjadi, diperkirakan karena proses penanaman yang tidak
tepat sehingga menyebabkan kematian jaringan.
TINJAUAN PUSTAKA Gunawan, L.Winata.1992.Tekhnik Kultur Jaringan
Tumbuhan. Dept.Pendidikan dan kebudayaan Direktorat Jendral
Pendidikan Tinggi Pusat Antar Universitas Bioteknologi IPB
Marlina,Nina dan Dedi Rusnandi.2007.Teknik Aklimatisasi Planlet
Anthurium Pada Beberapa Media Tanam. Buletin Teknik Pertanian Vol.
12 No. 1, 2007. Teknisi Litkayasa Pelaksana dan Teknisi Litkayasa
Nonkelas pada Balai Penelitian Tanaman Hias. Http:
[email protected]. Nisa, Chatimatun dan Rodinah.2005. Kultur
Jaringan Beberapa Kultivar Buah Pisang (Musa Paradisiaca L.).
Fakultas Pertanian Universitas Lambung Mangkurat. Jurnal
bioscientiae. Volume 2, Nomor 2, Juli 2005, Halaman 23-36.
Yusnita.2003.Kultur Jaringan: Cara Memperbanyak Tanaman Secara
Efisien. Jakarta:Agromedia Pustaka
