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Diagnóstico molecular de enfermedades en cítricos
Lic. Bioq. M. Sc. Andrés ÁvalosCoordinador
Laboratorio de Diagnóstico FitosanitarioDirección de Sanidad Vegetal
VISAR-MAGA
Objetivo
• Dar a conocer cómo el Ministerio de Agricultura, Ganadería y Alimentación (MAGA) puede apoyar a los citricultores del país mediante el diagnóstico certero de varias enfermedades que afectan a cítricos.
Estructura
• Introducción• Diagnóstico fitosanitario y MIP
– Interacción
• Diagnóstico fitosanitario en MAGA – Cómo lo hace el MAGA
• Diagnóstico molecular fitosanitario en MAGA– Cómo lo hace el MAGA
• Diagnóstico de enfermedades que afectan a cítricos– Cuáles se pueden detectar en MAGA
INTRODUCCIÓN• Laboratorio de
Diagnóstico Fitosanitario – LDF – (DSV-VISAR-MAGA)
• Realiza el diagnóstico de plagas y enfermedades de importancia económica y cuarentenaria
• Brinda certeza técnica para la aplicación de medidas de manejo y control fitosanitarias
• Guatemala, Quetzaltenango y Petén
Diagnóstico fitosanitario y MIP
• La NIMF 27 requiere a la ONPFhacerse responsable de “llevar a cabo” o bien de “autorizar” los servicios de identificación de plagas en apoyo al programa nacional de vigilancia y a las inspecciones.
• “El MIP permite a los agricultores vigilar y controlar las plagas en sus campos, reduciendo al mínimo absoluto la utilización de plaguicidas químicos costosos y potencialmente dañinos y peligrosos.”
• Tomar decisiones informadas• No desperdiciar recursos • Proteger
– Salud humana– Cultivos – Medio ambiente
Diagnóstico fitosanitario en el Ministerio de Agricultura
• El LDF s un ente clave para detectar oportunamente plagas y enfermedades cuarentenarias, así como las endémicas.
• Programas internos:– Vigilancia epidemiológica y
análisis de riesgo
– Protección y sanidad vegetal
– PIPAA
– HLB
– MOSCAFRUT
Coordinación
Recepción/
Custodio
Entomología
Fitopatología
Molecular
Diagnóstico fitosanitario en el Ministerio de Agricultura
• Diagnostica organismos de importancia económica y cuarentenaria, utilizando técnicas modernas que permiten la certeza y confiabilidad de los mismos.
• Brinda apoyo a los componentes de Programas del MAGA con el objeto de prevenir y controlar plagas y enfermedades, a través de la ejecución de planes de manejo, control y erradicación.
Diagnóstico fitosanitario en el Ministerio de Agricultura
• Coordinar con laboratorios dentro y fuera del MAGA, redes de laboratorios de diagnóstico fitosanitario, para la armonización de protocolos de diagnóstico fitosanitario.
• Participa con instituciones académicas y centros de investigación, con el objeto de mantener actualizada la información vinculada a metodologías, protocolos y ensayos de laboratorio y resultados de estudios, relacionados con el diagnóstico fitosanitario.
Taller FOCR4T @CNRF, Tecámac, Edo. México, Mayo 2017
Diagnóstico molecular fitosanitario en el Ministerio de Agricultura
• El área del LDF encargada de la puesta a punto de los protocolos de diagnóstico basados en las características genéticas de los patógenos. Surge por iniciativa del Ph.D. Ting-Hsuan Hung, con el apoyo del M.Sc. Kuo-Lin Huangen el marco del programa HLB-Taiwan ICDF liderado en Guatemala por el Ing. M.A. Guillermo Ortiz y el Ing. M.A. Anibal Pérez.
Diagnóstico molecular fitosanitario en el Ministerio de Agricultura
• 2015: HLB + Xf
• 2016: HLB + 8 enfermedades que afectan a cítricos
• 2017: HLB + 42 ensayos específicos utilizando PCR convencional + FOCR4T
Diagnóstico de enfermedades que afectan a cítricos
• Bacterias y hongos– Pseudomonassyringae
– Phytophtora spp.
• Ácaros– Brevipalpus spp.– Eryophues sheldoni– Panonychus citri– Stenotarsonemuslatus
• Insectos
– Aleurothrixusfloccosus
– Aonidiella aurantii
– Aonidiella citrina
– Icerya purchasi
– Lepidosaphes beckii
Muestreo para el diagnóstico de enfermedades comunes en cítricos
A cargo de personal experimentado
– Insectos y ácaros
• Especímenes almacenados en etanol
• Trampas adhesivas
• Hojas con daño o síntoma (ácaros)
– Hongos y bacterias
• Tejido sintomático (hojas) o planta entera
Diagnóstico de enfermedades comunes
• CAMPO: – Observación de síntomas
• LABORATORIO– Insectos y ácaros
• Observación al estereomicroscopio y microscopio
– Hongos• Cámara húmeda y observación al
estereomicroscopio y microscopio
– Bacterias• Macerado, dilución, medio selectivo y observación
al estereomicroscopio y microscopio
– Extracción de ADN y PCR convencional
Procesamiento: diagnóstico molecular
= NO DETECTADO = DETECTADO
Enfermedades que se evaluarán para la certificaciónEnfermedad
Tipo de
patógeno
Nombre del
patógenoAcrónimo
Cancrosis BacteriaXanthomonas
axonopodis pv. citriCBC
HuanglongbingBacteria
fastidiosa
Candidatus
liberibacterHLB
Clorosis VariegadaBacteria
fastidiosaXylella fastidiosa CVC
Exocortis Viroide Citrus exocortis viroid CEVd
Cachexia (Xyloporosis) Viroide Citrus cachexia viroid CCaVd
Psorosis Virus Citrus psorosis virus CPsV
Leprosis Virus Citrus leprosis virus CiLV
Tristeza Virus Citrus tristeza virus CTV
Hoja rasgada Virus Citrus tatter leaf virus CiTLV
Requerimientos de la muestra
EnfermedadTipo de
patógenoAcrónimo
RAMA +
HOJAS
HOJAS +
PECIOLOFRUTO CORTEZA VECTOR OTRO
Cancrosis Bacteria CBC 10
HuanglongbingBacteria
fastidiosaHLB 10 10
Clorosis VariegadaBacteria
fastidiosaCVC 10
Exocortis Viroide CEVd3 brotes
tiernos (1)(2) 10 tiernas
De patrón y
de injerto 10 yemas
Cachexia (Xyloporosis) Viroide CCaVd3 brotes
tiernos (1)(2) 10 tiernas 10 yemas
Psorosis Virus CPsV3 brotes
tiernos (5)
Leprosis Virus CiLV3 ramas
(4)
(20 cm)10 2
3 manchas
circulares
Tristeza Virus CTV3 brotes
tiernos (4) 10 tiernas
5 brotes
tiernos
Hoja rasgada Virus CiTLV 10
EL FIN: PLANTA SANA
Gracias por su atenció[email protected]