Diagnóstico en GenéticaDiagnóstico en Genética

¿Qué es lo que se puede diagnosticar?

• Mutaciones – Cromosómicas– Genéticas o puntuales– Dinámicas– Del ADN mitocondrial– Microdelecciones o duplicaciones en tándem

Orientación al diagnóstico de:

• Cromosomopatías:– Hipocrecimiento– Retardo del desarrollo /

RM– Dismorfias /

malformaciones

• Mutaciones puntuales:– Ej.: Acondroplasia

• Enfermedades mitocondriales:– Encefalomiopatías

mutación Gly380Arg en FGFR3 (4p16)

• Consecuencias de las mutaciones – A nivel molecular

• alteraciones de la expresión génica (ej. Enfermedad de Friedreich)

• alteraciones proteicas (ej. Anemia Falciforme)

– A nivel de fenotipos intermedios• alteraciones funcionales (ej. Sd. QT largo

congénito, Test del sudor para FQ) • alteraciones del metabolismo (ej. EIM) • alteraciones histológicas (ej. Miocardiopatías

Hipertróficas, Distrofias Musculares)

– A nivel clínico• Sds. clínicos característicos (ej. Sd. de Down)

Alelo normal Alelo Mutante

HbA HbS

Anemia Falciforme

TÉCNICAS DIAGNÓSTICAS EN

GENÉTICA • Genética Clínica, Historia Familiar y Genealogía

– Sindromes genéticos– Modo de herencia– “Sindrome completo” a nivel familiar.– Genética de Poblaciones (ej. FMF, Tay-Sachs, HbS)

• Exámenes complementarios habituales – Hemograma y

extendido de sangre periférica (Enfs. de atesoramiento)

– RX (displasias óseas) – Ecocardiograma y

ECG (Miocardiopatías, canalopatías)

– Estudios funcionales (Conducción nerviosa en neuropatías primarias)

• Citogenética – Técnica estándar.– Técnicas de bandeo – Bandeo de alta

resolución

• Técnicas bioquímicas y determinaciones cuantitativas – EIM (PQ cualitativas, cromatografías semicuantitativas,

dosificación de metabolitos, actividades enzimáticas).– dosificación de FP sérica materna (Defectos del tubo neural).– dosificación de Estriol y HCG en sangre materna (Sd. de Down).– Electroforesis de proteínas (HbS).

• Biología Molecular – detección directa de mutaciones

• necesidad de conocer secuencia del gen.• diversas mutaciones en distintas familias o poblaciones.• no existencia de correlaciones genotipo-fenotipo

– detección de marcadores ligados (diagnóstico indirecto)• posible error por recombinación

• Conjunción de técnicas – FISH

Electroforesis de Hb

Distrofias MuscularesDistrofias Musculares

• Diagnóstico a nivel:– histopatológico:

– proteico:

Resistencia Proteína C activada

• Factor V de Leiden

• Bioquímica de la coagulación

• Trombofilia

Detection of 3 bp deletions (CF DF508 and DI507) on a Spreadex EL 300 gel. Lanes: 1 - M3 Marker (Elchrom); 2 - CF patient heterozygous for the DI507 mutation (DI507/N); 3 - CF patient with no 3 bp deletion (N/N); 4 - CF patient heterozygous for DF508 mutation; 5 - CF patient homozygous for DF508 (DF508/DF508).

Receptor de Andrógenos

Diagnóstico molecular directo

(CTG)n

3’ UTRGen DMPK

(CTG)n >1000, fenotipo congénito

100< (CTG)n <1000, fenotipo clásico

50< (CTG)n <100, fenotipo leve

Cromosoma 195’ 3’

Distrofia Miotónica tipo ICaracterización molecular

Distrofia Miotónica tipo IDiagnóstico molecular

Diagnóstico por Southern blot:

Permite detectar grandes amplificaciones

N- paciente no afectado

A- paciente afectado

PCR/ Southern blot:

Permite detectar alelos con expansiones cortas

¿Cómo diagnosticar qué gen está mutado en una Distrofia Muscular?

Ligamiento al X

5 Cm entre marcador y locus de la enfermedad

Diagnóstico molecular indirecto

Fluorescent in situ hybridization

FISH se usa actualmente ante la sospecha de varios síndromes de microdelección, incluyendo:

• 22q deletion syndrome • Williams syndrome• Prader-Willi syndrome • Angelman syndrome • Smith-Magenis syndrome • Miller-Dieker syndrome • Cri-du-chat syndrome • Wolf-Hirschhorn syndrome • Retinoblastoma • Kallmann

VARIOS TIPOS DE SITUACIONES DIAGNÓSTICAS

• Diagnóstico preimplantacional• Diagnóstico prenatal

– Ecografía – Técnicas genéticas– Amniocentesis– Biopsia de Vellosidades Coriales

• Screening poblacional – De Recién nacidos

• Hipotiroidismo congénito (TSH).• PKU.• Galactosemia.• EOJA

– De heterocigotos• Enfs. AR frecuentes en algunas poblaciones (ej.Tay Sachs en judíos, FQ en

poblaciones europeas).• Enfs. XR (mujeres posibles portadoras).• Enfs. AD en etapa presintomática (ej. EH, DM).

Screening de PKUScreening de PKU

• Diagnóstico nosológico de enfermedades monogénicas– Hemocromatosis hereditaria– LDLR – Hipercolesterolemia Familiar– Fibrosis Quística – Déficit de alfa 1 antitripsina– Sd. de X-frágil– Distrofias musculares– Hiperplasia suprarrenal congénita

• Diagnóstico de marcadores de susceptibilidad y pronóstico en enfermedades multifactoriales – LDLR– ApoE– MTHFR– Factor V de Leiden– Protrombina– ACE I/D– BRCA 1 y 2

Diagnóstico Genética Somática

Genética PredictivaGenética Predictiva

Ej.: Enfermedad de HuntingtonEj.: Enfermedad de Huntington

• Diagnóstico de paternidad

• Aplicaciones forenses