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porJacinto Rolha Castanho

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Mikhail Semenovich Tswett, 1872-1919

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AA cromatografiacromatografiacompreende o grupo de compreende o grupo de técnicas que são usadas técnicas que são usadas para separar componentes para separar componentes por atracção relativa de por atracção relativa de cada componente a uma cada componente a uma fase estacionária, enquanto fase estacionária, enquanto uma fase móvel passa sobre uma fase móvel passa sobre ou através dessa fase ou através dessa fase estacionária.estacionária.

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Classificação dos sistemas cromatográficos

Cromatografia

Cromatografiagasosa

Cromatografialiquída

líquida

sólida

Partição

Adsorção

Coluna

Coluna

GLC

GSC

líquida

líquidoligado

sólida

Partição

Partição

Adsorção

Coluna

Planar

HPLC

HPTLC

Trocaiónica

Exclusãomolecular

Coluna

Planar

LSC

HPLC

TLC

HPTLC

PC

Coluna

Coluna

IEC

SEC ouGPC

Fasemóvel

Faseestacionária

Mecanismode separação Técnica Método

cromatográfico

Cromatografiade fluidos

supercríticosSFC

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MacromoléculasCompostos farmacêuticosCompostos bioquímicosEspécies iónicas

Termicamente instáveisMuito polaresInvoláteisiónicos

HPLC

Gases permanentesCompostos orgânicos

_ Apolares_ media polaridade_ massa ~< 400

VoláteisTermicamente estáveis(apenas ~ 20% dos compostos orgânicos podem ser cromatografados por GC sem modificação química)

GC

aplicaçõesAnalitos

Cromatografia gasosa versus cromatografia líquida

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Parâmetros fundamentais de um cromatograma

Tempo

Res

post

a do

det

ecto

r

t’ra = tra – tm t’rb = trb – tm

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Resolução e factor de capacidade

)(5,0 21

12

wwttR RR

S+−

= 21

)1

)(1(25,0 NkkRS+

−=

αα

α- factor de separação 01

02

tttt

R

R

−−

=α

k - factor de capacidade médio g

l

g

l

m

r

VV

CC

ttk .'' 1

1 ==

N – Número de pratos teóricos da coluna

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Eficiência da coluna

teóricoPrato

2

21

)(54,5wtR

=2)(16wtN R

= NLHETP =

duplicar L ⇒ duplicar N

duplicar N ⇒ duplicar RS

21

)1

)(1(25,0 NkkRS+

−=

αα

Equação de Van Deemter

HETP = A + B/u + C.uConstante que reflecte o

efeito do caminho percorrido

Constante relacionada com fenómenos de difusão longitudinal

Constante relacionada com a resistência à transferência de massa entre as duas fases

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Representação da equação de Van Deemter

óptim

o

DetectorTem a função de converter em sinal eléctrico a concentração do componente eluído da coluna

R=f(C)

A=∫R.dt= ∫ f(C). dtt2

t2

t1 t1

C=f(altura)

Análise quantitativa

Métodos de quantificação:

* Método da normalização

* Método dos factores de resposta

* Método do padrão externo

* Método do padrão interno

* Método da adição padrão

C=f(Área)

AplicaçõesA cromatografia em fase gasosa tem a mais variadas aplicações, desde que osanalitos sejam moléculas orgânicas ou gases.

Exemplos:* Determinação de ontioxidantes, nutrientes ou contaminantes em

alimentos* Determinação de resíduos de pesticidas em produtos alimentares, águas

ou esgotos* Determinação de metabolitos de microrganismos* Determinação de gases, solventes orgânicos, PAH’s ou PCB’s na

atmosfera, solos, rios ou produtos alimentares.* Doseamento de princípios activos ou contaminantes de medicamentos* Análise forense: Drogas, produtos tóxicos, anti-doping, ...* . . .* . . .

Amostradores automáticos

_ Aumentam areprodutibilidade

_ Aumentam a produtividade

_ Libertam o operador

_ Disponíveis para todas as técnicas de injecção

Técnicas hifenadas

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Principais componentes do HPLC