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CENTRO DE LABORATORIOS VICERRECTORÍA DE DOCENCIA
INSTITUTO TECNOLÓGICO METROPOLITANO – ITM
MANUAL DE SEGURIDAD Y BIOSEGURIDAD PARA LOS
LABORATORIOS DE INGENIERÍA BIOMÉDICA DEL ITM
GENERALIDADES DE BIOSEGURIDAD EN UN LABORATORIO DE
BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR NIVEL II
AÑO 2012
ELABORÓ APROBÓ Versión 01
Johanna Carolina Arroyave Ospina Fabian Mauricio Cortés Mancera Maria Teresa De Ossa Jiménez Sara Isabel Duque Vallejo Sara María López Álvarez
Sara María López Álvarez
Firma: Documento MGL 007
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CONTENIDO
1. INTRODUCCIÓN .................................................................................... 6
1.1 PRINCIPIOS GENERALES ............................................................. 6
2. BIOPROTECCION EN EL LABORATORIO ......................................... 10
2.1 Ropas y Equipos de Protección Personal ...................................... 10
2.2 Comportamientos adecuados del laboratorio ................................ 12
2.3 Inmunización del Personal ............................................................. 13
3 CLASIFICACIÓN DE RIESGOS ........................................................... 14
3.1 Riesgos Biológicos ......................................................................... 14
3.2 Riesgos Químicos .......................................................................... 17
3.3 Riesgos Físicos .............................................................................. 27
4 LABORATORIOS DE BIOLOGÍA MOLECULAR: NIVEL
BIOSEGURIDAD II...................................................................................... 31
4.1 Código de Prácticas ....................................................................... 31
4.2 Diseño e instalaciones del laboratorio ............................................... 33
5. CÁMARAS DE SEGURIDAD BIOLOGICA (CSB) ................................ 36
6. MANEJO DE RESIDUOS ..................................................................... 38
6.1 Generalidades en la disposición de residuos ................................. 38
7. DESINFECCIÓN Y ESTERILIZACIÓN ................................................. 42
7.1 Definiciones ................................................................................... 42
7.2 Descontaminación de espacios y superficies ................................ 42
7.3 Descontaminación de Cámaras de Seguridad Biológica ............... 43
7.4 Lavado y Descontaminación de manos ......................................... 44
7.5 Desinfectantes utilizados ............................................................... 44
8. PRIMEROS AUXILIOS ......................................................................... 47
8.1 Botiquín de Primeros Auxilios ............................................................ 47
BIBLIOGRAFÍA ........................................................................................... 49
ANEXOS ................................................................................................................................. 50
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LISTA DE TABLAS
Tabla 1. Clasificación de Agentes patógenos por grupos de riesgo. ............ 6
Tabla 2. Requisitos Generales por Nivel de Bioseguridad. ........................... 8
Tabla 3. Vía de Entrada de los Agentes Patógenos ................................... 15
Tabla 4. Principales Agentes Biológicos ..................................................... 15
Tabla 5. Vías de Exposición a las Sustancias Químicas............................. 18
Tabla 6. Código de Colores Identificación de Sustancias Químicas. .......... 21
Tabla 7. Niveles de Peligrosidad, Rombo de Seguridad en Sustancias
Químicas. .................................................................................................... 23
Tabla 8. Características Cámaras de Seguridad Biológica. ........................ 36
Tabla 9. Soluciones utilizadas para el lavado de lesiones leves ................. 47
Tabla 10. Material de curación .................................................................... 47
Tabla 11. Instrumental y elementos de primeros auxilios ........................... 48
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LISTA DE FIGURAS
Figura 1. Símbolo Riesgo Biológico. ........................................................... 14
Figura 2. Símbolo Sustancia Explosiva. ...................................................... 18
Figura 3. Símbolo Gas Inflamable y Gas no Inflamable. ............................. 19
Figura 4. Símbolo Líquido Inflamable.......................................................... 19
Figura 5. Símbolos de Sólidos con peligro de incendio............................... 19
Figura 6. Símbolos Oxidantes y Peróxidos Orgánicos. ............................... 20
Figura 7. Símbolo Sustancias Tóxicas. ....................................................... 20
Figura 8. Símbolo Sustancias Radioactivas. ............................................... 20
Figura 9. Símbolo Sustancias Corrosivas. .................................................. 21
Figura 10.Símbolo Sustancias y Artículos Peligrosos Misceláneos. ........... 21
Figura 11. Rombo de Seguridad NFPA. ...................................................... 22
Figura 12. Etiqueta para el laboratorio con Riesgo Biológico. ..................... 31
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LISTA DE ANEXOS
ANEXO 1. PLANO Y DISTRIBUCIÓN ........................................................ 50
ANEXO 2. TIPOS DE RESIDUOS GENERADOS Y MANIPULADOS ........ 51
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1. INTRODUCCIÓN
1.1 PRINCIPIOS GENERALES
El presente manual, corresponde a un consenso de los requerimientos necesarios para el trabajo en laboratorios de biología celular y molecular con un nivel II de Bioseguridad. Para esto, se tendrán en cuenta los estándares planteados por la OMS, los cuales están consignados en el Manual de Bioseguridad en el Laboratorio OMS, tercera edición 2005.
Es necesario, tener en cuenta que en el laboratorio de biología molecular, se manejan muestras biológicas, las cuales pueden contener diferentes tipos de patógenos, los cuales se clasifican según el riesgo individual y poblacional que causan. Esta clasificación se explica en la tabla 1.
Tabla 1. Clasificación de Agentes patógenos por grupos de riesgo.
GRUPO DE RIESGO TIPO DE RIESGO DESCRIPCIÓN
1 Riesgo individual y
poblacional escaso o nulo.
Agentes tienen baja probabilidad de producir enfermedad.
2 Riesgo individual moderado, riesgo poblacional bajo.
Agentes que producen enfermedades que no
constituyen un riesgo grave. Existen medidas preventivas y
terapéuticas y eficaces.
3 Riesgo individual elevado, riesgo
poblacional bajo.
Agentes que producen enfermedades graves, en las que la propagación de un individuo a otro es escasa. Existen medidas
preventivas y terapéuticas eficaces.
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Riesgo
Individual y poblacional elevado.
Agentes que producen enfermedades graves, de alta
transmisibilidad directa o indirecta. No existen medidas preventivas ni terapéuticas
eficaces.
La clasificación general de los laboratorios, está basada en diferentes criterios que incluyen características de diseño, construcción, medios de contención, equipo, prácticas y procedimientos de operación necesarios para trabajar con patógenos de los distintos grupos de riesgo. Actualmente la clasificación es la siguiente:
1.1.1 Laboratorio Básico, Nivel de bioseguridad I:
Laboratorios designados para la enseñanza básica y la investigación, en los cuales no se requieren equipos de seguridad. Se trabaja con patógenos del grupo 1, en mesas de laboratorio al descubierto.
1.1.2 Laboratorio Básico, Nivel de bioseguridad II:
Laboratorios designados para los servicios de atención primaria, diagnóstico e investigación. Se trabaja con patógenos del grupo 2, en mesa de trabajo al descubierto o Cámara de bioseguridad, si los procedimientos generan aerosoles. Se requiere del uso de ropa protectora, elementos de bioprotección personal y contención para riesgo biológico.
1.1.3 Laboratorio de Contención, Nivel de bioseguridad III:
Laboratorios destinados para diagnósticos especializados e investigación. Se trabaja con patógenos del grupo 3 en cámaras de bioseguridad, para lo cual es necesario el uso de ropa especial, elementos de bioprotección personal. Además debe tener acceso controlado y flujo direccional del aire.
1.1.4 Laboratorio de Máxima Contención, Nivel de bioseguridad IV:
Corresponden a las Unidades de Patógenos peligrosos. Se trabaja con patógenos del grupo 4, en cámaras de bioseguridad tipo III. Se requiere de una salida con ducha, aire filtrado y eliminación especial de residuos. Es importante la implementación de prácticas especializadas, más cámaras con cierre hermético y autoclaves con doble puerta a través de la pared.
Para cada uno de los niveles mencionados, existen requisitos establecidos. A continuación se resumen los requisitos generales para los niveles de
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bioseguridad.
Tabla 2. Requisitos Generales por Nivel de Bioseguridad.
Nivel de Bioseguridad
1 2 3 4
Aislamiento del laboratorio
No No Si Si
Sala que pueda
precintarse para ser
descontaminada.
No No Si Si
Flujo de aire hacia el interior
No Sia Si Si
Sistema de Ventilación controlada
No Sia Si Si
Salida de aire con HEPA
No No Si/Nob Si
Entrada con doble puerta
No No Si Si
Cámara de cierre
hermético No No No Si
Cámara de cierre
hermético con ducha
No No No Si
Antesala No No Si ----
Antesala con ducha
No No Si/Noc No
Tratamiento con efluentes
No No Si/Noc Si
Autoclave en el local
No Sia Si Si
Autoclave en el área de
trabajo No No Sia Si
Autoclave de doble puerta
No No Sia Si
Cámara de Seguridad Biológica
No Sia Si Si
Capacidad de Vigilancia de la Seguridad del personal
No No Sia Si
a Conveniente, dependiendo de los procesos específicos realizados en el laboratorio.
b Según la localización de la salida del aire
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c Según los empleados en el la laboratorio.
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2. BIOPROTECCION EN EL LABORATORIO
2.1 ROPAS Y EQUIPOS DE PROTECCIÓN PERSONAL
El equipo de protección personal, actúa como barrera, minimizando el riesgo de exposición a aerosoles químicos o biológicos, salpicaduras, inoculación accidental, entre otros, generados en los procedimientos de laboratorio. Además del equipo de protección, el personal debe tener en cuenta algunos aspectos adicionales que confieren mayor protección, tales como:
Calzado de puntera cerrado, cómodo
Cabello Recogido o uso de gorro (Mujeres)
Uso de pantalón, no faldas (Mujeres)
Dependiendo del nivel de bioseguridad del laboratorio, es decir, del nivel de riesgo al que se está expuesto, se decide entonces que vestimenta y equipos son necesarios para la protección del personal. Es importante tener en cuenta, que el uso tanto de prendas como de equipos o dispositivos de protección, debe ser exclusivo para las áreas de trabajo en el laboratorio, y estas deben quitarse antes de abandonar el laboratorio.
En el caso de los laboratorios de biología celular y molecular, en los cuales las áreas de trabajo deben estar bien definidas. El equipo de protección personal no debe compartirse entre áreas, con el fin de evitar contaminaciones en los procedimientos.
A continuación se describen los elementos de protección personal utilizados en los laboratorios de biología celular y molecular, con un nivel de bioseguridad II:
2.1.1 Batas y delantales de laboratorio.
Las batas de laboratorio idealmente de color blanco y tela semipermeable, deben cubrir hasta el cuello (botones o cierre hasta arriba), manga larga y con un largo aproximado hasta la rodilla. Estas protegen de derrames y salpicaduras de sustancias químicas o biológicas. Si se requiere mayor protección, dependiendo de las sustancias manejadas (por ej: sustancias corrosivas), se puede utilizar el delantal encima de la bata, el cual generalmente está hecho de materiales impermeables.
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2.1.2 Gafas de Seguridad y Viseras.
Las gafas deben ser elaboradas en un material irrompible, con un diseño que cubra toda la zona orbital (desde las cejas hasta más de la mitad de la nariz). Se deben utilizar, siempre que se trabaje con sustancias químicas o biológicas, para evitar salpicaduras u otros impactos a nivel de los ojos principalmente. Si las actividades del laboratorio, son de mayor riesgo, se debe utilizar una visera que es de material similar a las gafas, pero que cubre todo el rostro ya que se sujetan desde la cabeza.
2.1.3 Mascarillas respiratorias.
El uso de mascarillas es importante en procedimientos que generen aerosoles o vapores, como limpiar un derrame de una sustancia química o de un material biológico infeccioso.
El tipo de mascarilla varía dependiendo del tipo de riesgo, desde el tapabocas común (que debe cubrir el área completa de la nariz al mentón) hasta mascarillas especializadas con filtros HEPA (por ej.: muestras para el diagnóstico de Tuberculosis).
En el caso del laboratorio de biología molecular, es importante hacer uso del tapabocas en procedimientos como extracción de ácidos nucléicos, que utilicen químicos como fenol, cloroformo o TRIzol, los cuales generan vapores tóxicos.
2.1.4 Guantes.
Los guantes son imprescindibles en cualquier procedimiento de laboratorio. Las manos pueden contaminarse fácilmente en el laboratorio, siendo fuente de contaminación no solo para el personal de laboratorio sino también para las personas con quien se tenga contacto. Adicionalmente si hay micro-heridas (alergias, uñeros, etc.) estas facilitan la entrada de agentes patógenos. Una vez usados, estos deben ser descartados dependiendo de lo que se haya manipulado (sustancias químicas o biológicas) en los recipientes correspondientes.
Los guantes pueden ser de diferentes materiales, siendo los más comunes para el trabajo en el laboratorio los guantes de látex con talco. Otros utilizados, son los guantes de nitrilo o los guantes quirúrgicos. En el caso del laboratorio de biología molecular, es importante tener en cuenta que los guantes ideales, no deben tener talco ya que esto interfiere en algunos de los procedimientos realizados.
Adicionalmente se debe tener en cuenta, que algunas personas presentan alergias o dermatitis después de usar guantes de látex.
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2.2 COMPORTAMIENTOS ADECUADOS DEL LABORATORIO
Al realizar actividades dentro del laboratorio se deben tener en cuenta los
siguientes aspectos:
Al laboratorio solo pueden ingresar la personas que estén autorizadas para hacerlo
Utilizar bata de manga larga.
Mantener las batas abrochadas.
Estudiar cada experiencia antes de llevarla a cabo.
Apagar los celulares para evitar interferencias en el desarrollo de los experimentos.
No utilizar nunca un equipo o aparato sin conocer perfectamente su funcionamiento.
Antes de iniciar un experimento asegúrese de que los montajes y los aparatos estén en perfectas condiciones de uso.
No utilice material de vidrio en mal estado (aumenta el riesgo de accidentes).
Al finalizar cada sesión de trabajo, el material y los aparatos empleados tienen que dejarse siempre limpios y en perfecto estado de uso.
No comer, beber o fumar en el laboratorio de prácticas.
El comportamiento en el laboratorio debe estar basado en el uso del sentido común y el buen juicio.
No debe hacer bromas, correr, jugar, empujar, gritar, etc. En el laboratorio
El área de trabajo debe mantenerse siempre limpia y ordenada, sin libros, abrigos, bolsas o equipos innecesarios.
Todos los productos químicos derramados tienen que ser limpiados inmediatamente.
Para limpiar el material de vidrio existen unas escobillas adecuadas colocadas junto a las pocetas,
No debe hacer nunca un experimento no autorizado por el responsable del laboratorio.
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2.3 INMUNIZACIÓN DEL PERSONAL
El manejo de muestras biológicas pone en riesgo al personal de laboratorio para múltiples agentes patógenos. Por esto, la vacunación constituye una práctica de bioseguridad importante, en el caso de las enfermedades inmuno-prevenibles; que aunque no elimina el riesgo en un 100%, disminuye la probabilidad de enfermedad.
El personal de laboratorio, debe tener su carnet de vacunación actualizado, es decir con su esquema de vacunación completo. Dentro de este es importante resaltar el esquema de la vacuna contra el Virus de la Hepatitis B (3 dosis) y el toxoide tetánico (3 dosis hombres, 5 dosis mujeres), independiente de los patógenos que se manejen en el laboratorio.
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3 CLASIFICACIÓN DE RIESGOS
Figura 1. Símbolo Riesgo Biológico.
3.1 RIESGOS BIOLÓGICOS
Se define como riesgo biológico la exposición a cualquier espécimen que pueda contener agentes potencialmente patógenos o sus productos metabólicos tales como las toxinas bacterianas. Los diferentes agentes patógenos se clasifican en cuatro grupos de riesgo, según su capacidad de producir daño. (Tabla 1). Dentro de los efectos en la salud, se encuentran enfermedades tanto agudas como crónicas, reacciones alérgicas, intoxicaciones, entre otras.
En cada laboratorio, se deben conocer las características de los agentes que se manipulan, como también la vía de entrada del mismo; esto con el fin no solo de definir cuáles son los elementos de bioprotección adecuados, sino también de desarrollar estrategias de contención en caso de un accidente que constituya un riesgo biológico.
A continuación se resumen las diferentes vías de entrada de los agentes patógenos, con su respectiva actividad de riesgo.
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Tabla 3. Vía de Entrada de los Agentes Patógenos
Vía de Entrada Mecanismo Actividades de
Riesgo
Respiratoria* Inhalación de
aerosoles
-Centrifugación de muestras
-Agitación de Tubos -Mezcla de muestras-
reactivos -No uso de mascara
de protección
Digestiva Ingestión directa
-Comer-Beber en el laboratorio
-Pipetear en la boca -Inadecuado lavado de
manos -No uso guantes
Piel y mucosas
Salpicaduras, pinchazos: contacto
con mucosa oral, ocular, nasal o piel
-Manejo y procesamiento de
muestras, No uso de elementos de
protección
Sanguínea, Percutánea
Pinchazos -Toma de muestras,
material cortopunzante contaminado
*Es importante tener en cuenta, que el flujo de aire del área de trabajo y la presencia de aire acondicionado, afectan la movilización de aerosoles.
3.1.1 Principales Agentes Biológicos
Dependiendo de las actividades realizadas en cada laboratorio, y del tipo de muestras biológicas que se manejen, dependerán los agentes patógenos a los cuales está expuesto el personal de laboratorio. Dentro de los agentes posibles, se resaltan los que causen mayor riesgo al personal (según grupo de riesgo en el que se clasifican) como los agentes patógenos principales. A continuación se resumen los principales agentes patógenos según las muestras biológicas.
Tabla 4. Principales Agentes Biológicos
Agente Tipo de Agente Muestra Biológica
VIH Virus Sangre, suero, plasma, fluidos
vaginales, semen
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VHB,VHD,VHC Virus Sangre, suero, plasma, fluidos
vaginales, semen
M. tuberculosis Bacteria Secreciones respiratorias*
B. anthracis Bacteria Secreciones respiratorias*
*Esputo, lavado broncoalveolar
VIH: Virus de la Inmunodeficiencia Humana, agente causal del SIDA
VHB: Virus de la Hepatitis B
VHC: Virus de la Hepatitis C
VHD: Virus de la Hepatitis D; su transmisión está asociada al VHB M. tuberculosis: Agente causal de la Tuberculosis
B. anthracis: Agente causal del Antráx
Es importante anotar, que los anteriores agentes producen infecciones crónicas o agudas (en el caso del antráx) graves, las cuales implican un riesgo individual y un riesgo poblacional alto. La mayoría no tienen tratamiento efectivo, ni vacuna (a excepción del VHB).
En los laboratorios de Biología Celular y Molecular, se pueden manejar todo tipo de muestras biológicas, debido a que las técnicas utilizadas constituyen en este momento una perspectiva en el diagnóstico y en la investigación biomédica.
3.1.2 Protocolo ante exposición accidental a muestras biológicas
Accidentes Percutáneos: Constituyen el contacto con material cortopunzante infectado mediante cortaduras o pinchazos.
Retirar el objeto cortopunzante ( aguja, vidrio, bisturí, etc)
Lavar la herida con abundante agua, permitiendo el fluido de la sangre aproximadamente de 2-3 mína
Aplicar en la herida desinfectantes a base de yodo preferiblemente b
Cubrir la herida con un apósito impermeable c
a Inducir el sangrado si es necesario.
b No utilizar alcohol debido a la irritación que produce.
c Gasas, microporo.
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Salpicaduras de sangre o fluidos biológicos: Lavar con abundante agua y jabón. Utilizar un desinfectante si es posible.
3.1.3 Derrame de Sustancias Biológicas
Otra exposición accidental a los agentes patógenos, ocurre cuando se produce un derrame de una sustancia biológica. En caso de ocurrir un derrame de material biológico, se debe seguir el protocolo adecuado.
Protocolo de Actuación en Derrames de Sustancias Biológicas
Utilizar la bioprotección adecuada: Guantes, bata, mascarilla y gafas con el fin de evitar salpicaduras en piel y mucosas.
Cubrir el derrame con papel absorbente o servilletas, para evitar la contaminación de más áreas del laboratorio.
Adicionar un desinfectante a la concentración adecuada sobre el papel y los alrededores del derrame, cubriendo toda el área contaminada. El desinfectante puede ser hipoclorito de sodio a 5000 ppm (Ver Capitulo Desinfección y Limpieza)
Dejar el desinfectante durante 30 minutos (este tiempo aplica para el hipoclorito de sodio, pero puede variar según el desinfectante utilizado), con el fin de inactivar el material infeccioso.
Retirar todos los materiales. Si hay vidrios, o cualquier objeto cortopunzante, utilizar un elemento rígido y recogedor para desecharlo adecuadamente (Ver Protocolo de Desechos Biológicos)
Adicionar desinfectante durante 5 minutos adicionales y limpiar el área del derrame.
Informar al coordinador del laboratorio el derrame (Ver anexo notificación de derrame de sustancias biológicas).
NOTA: Dependiendo de la magnitud del derrame, se pueden repetir los pasos 2-6, con el fin de garantizar una inactivación adecuada del material infeccioso.
3.2 RIESGOS QUÍMICOS
El trabajo en el laboratorio, requiere la manipulación de sustancias químicas importantes en los procedimientos. Es importante conocer las características de cada reactivo, como también los efectos que tiene sobre la salud, las vías de exposición y las consecuencias de su manipulación. Los proveedores, anexan la información de los productos químicos, la cual debe estar disponible para todo el personal que trabaja en el laboratorio.
A continuación se describen las principales vías de exposición a las
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sustancias químicas:
Tabla 5. Vías de Exposición a las Sustancias Químicas
Vía Mecanismo
Respiratoria Inhalación de
aerosoles
Piel y Mucosas Salpicaduras,
Derrames
Digestiva Ingestión Directa
En general, los efectos tóxicos de las sustancias químicas pueden afectar diferentes tejidos y órgano; hígado, riñones, SNC, aparato digestivo y pulmones, son algunos de los más afectados.
Algunas sustancias han sido relacionadas con el desarrollo de mutaciones en el ADN o desarrollo de cáncer, por lo que su efecto se conoce como mutagénico o carcinogénico. Una de estas sustancias es el Bromuro de Etidio. Otro tipo de sustancias, generan efectos sobre la gestación cuando la madre está expuesta, produciendo malformaciones, muerte fetal y otras alteraciones. Estas se denominan teratogénicas.
Es importante anotar, que los efectos pueden ser de tipo agudo, como el caso la exposición a sustancias corrosivas; o de tipo crónico, que es el caso de las sustancias carcinogénicas. Este efecto dependerá de la sustancia, pero también del grado de exposición (exposición prolongada o repetida) que tenga el personal del laboratorio.
3.2.1 Clasificación de las sustancias químicas
La clasificación que propone la ONU, está basada en el tipo de daño que producen dependiendo de sus características y el peligro que implica para el personal que maneja la sustancia.
Explosivos: Pueden ser sustancias sólidas o líquidas, las cuales tienen como característica la capacidad de reaccionar químicamente produciendo gases a elevadas temperaturas. Están clasificadas en seis subclases dependiendo de la forma como la sustancia puede ocasionar la explosión.
Figura 2. Símbolo Sustancia Explosiva.
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Gases: Son sustancias que se encuentran en estado gaseoso a 20°C. Los gases pueden encontrarse en diferentes estados: comprimidos, licuados, criogénicos (bajas temperaturas) o en solución. En cuanto al riesgo, se pueden sub-clasificar en gases inflamables, los cuales pueden incendiarse fácilmente (gas propano, aerosoles), y gases no inflamables, los cuales no son tóxicos, pero pueden ser asfixiantes u oxidantes (Nitrógeno).
Figura 3. Símbolo Gas Inflamable y Gas no Inflamable.
Líquidos Inflamables: Son líquidos o mezclas líquidas, que tienen un punto de inflamación a menos de 35°C. Estas sustancias se transportan a temperaturas menores, o disueltos en agua u otros líquidos (Gasolina, Benceno, Nitroglicerina en alcohol).
Figura 4. Símbolo Líquido Inflamable.
Sólidos con peligro de incendio: Son sustancias sólidas que tienen peligro de incendio. Se sub clasifican en tres categorías: Sólidos inflamables, que pueden producir fuego por fricción o por su transporte (Fósforo); Sólidos espontáneamente inflamables, que se calientan espontáneamente con el aire en condiciones normales (Hidrosultifo de sodio); y Sólidos inflamables al contacto con el agua, los cuales reaccionan violentamente con el agua (Metales alcalinos)
Figura 5. Símbolos de Sólidos con peligro de incendio.
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Oxidantes y peróxidos orgánicos: Los oxidantes son sustancias que contienen altas cantidades de oxígeno, causan o contribuyen a la combustión (Peróxido de Hidrógeno, Nitrato de Potasio). Los peróxidos, son sustancias orgánicas que contienen estructuras inestables (-O-O-), las cuales son altamente reactivas con otras sustancias, por lo tanto favorecen explosión y pueden quemarse rápidamente (Peróxido de benzoílo, Metiletilcetona peróxido).
Figura 6. Símbolos Oxidantes y Peróxidos Orgánicos.
Sustancias tóxicas: Son líquidos o sólidos que pueden ocasionar daños graves en la salud o incluso la muerte al ser ingeridos, inhalados o tener contacto con piel y mucosas (Cianuros, Sales de metales pesados). La clasificación se basa en la DL50 (Dosis letal 50).
Figura 7. Símbolo Sustancias Tóxicas.
Sustancias radiactivas: Son materiales que contienen radionúclidos; su peligrosidad depende de la radiación que generan y de la descomposición atómica que sufren (Uranio, Torio 232, Yodo 125, Carbono 14)
Figura 8. Símbolo Sustancias Radioactivas.
Sustancias corrosivas: Son sustancias que por reacción química, causan daños severos o destrucción tanto en superficies, como en la piel o tejidos. Causan quemaduras graves y fuerte irritación de las mucosas, y pueden ser sólidos, líquidos o gaseosos (Ácidos, Cáusticos)
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Figura 9. Símbolo Sustancias Corrosivas.
Sustancias y artículos peligrosos misceláneos: En esta categoría se clasifican las sustancias o materiales que no se encuentran en las anteriores clasificaciones y que por sus características requieren de un manejo especial. Pueden ocasionar daños en el medio ambiente por bioacumulación o toxicidad (Asbesto, fibra de vidrio, sílice)
Figura 10.Símbolo Sustancias y Artículos Peligrosos Misceláneos.
3.2.2 Almacenamiento de sustancias químicas
Para el almacenamiento de sustancias químicas en el laboratorio, incluye varias etapas, que van desde la identificación del reactivo hasta su disposición final en el laboratorio. En general las sustancias químicas, se almacenan de acuerdo a las propiedades, la peligrosidad y la incompatibilidad química.
En primer lugar, es necesario tener en cuenta las propiedades de cada reactivo, con el fin de su identificación adecuada y posterior almacenamiento. Es importante anotar, que no se deben clasificar las sustancias mediante sus propiedades organolépticas, ni bajo la percepción del personal del laboratorio, sino que deben tenerse en cuenta las especificaciones del fabricante o la normatividad respectiva, si no existe claridad del tipo de sustancia que se va a almacenar. En Colombia, la ley 55 de 1993 y el decreto 1609 de 2002, reglamentan el manejo de sustancias químicas y los riesgos relacionados.
Para la identificación, se ha planteado un código de colores, asignando un color a cada propiedad química. Así se etiquetan los reactivos, y este código de colores debe estar disponible para todo el personal de laboratorio.
Tabla 6. Código de Colores Identificación de Sustancias Químicas.
Color Propiedad Consideraciones
22
Naranja Sin Riesgo Almacenamiento general
Azul Riesgo para la salud Manipular con elementos de protección personal
Rojo Inflamable Almacenar en un lugar
fresco, protegido de cambios de temperatura
Amarillo Reactivo
espontáneamente
Evitar caídas, almacenamiento en
estantes bajos
Blanco Corrosivos Evitar contacto con el
agua
Blanco cebra Incompatible* Almacenar
separadamente
*Incompatible aun con los demás productos de su misma clasificación.
Adicional a la identificación y respectiva rotulación, es necesario identificar en el reactivo el tipo de riesgo al que se relaciona. Para esto, la NFPA (National Fire Protection Association) plantea la utilización del rombo o diamante de seguridad, para identificar el nivel de peligrosidad de la sustancia química manejada. Esta entidad fue creada para promover la protección y prevención contra el fuego, dentro de sus estándares se recomiendan prácticas seguras para el control de incendios.
A continuación se explica la utilización del Rombo de Seguridad en sustancias químicas.
Figura 11. Rombo de Seguridad NFPA.
Donde,
ROJO: Indica el riesgo de inflamabilidad.
AZUL: Indica el riesgo que representa para la salud
AMARILLO: Indica el riesgo de reactividad (inestabilidad).
BLANCO: En este recuadro se realizan las indicaciones especiales del reactivo, tales como: producto oxidante, corrosivo, reactivo con agua o radiactivo.
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OXI Agente oxidante
COR Agente corrosivo
Reacción violenta con el agua
Dentro del recuadro se indican los niveles de peligrosidad para cada riesgo, que definen según la escala de 0 a 4. En la tabla 7, se detalla la escala de los niveles de peligrosidad, por tipo de riesgo.
Tabla 7. Niveles de Peligrosidad, Rombo de Seguridad en Sustancias Químicas.
SALUD INFLAMABILIDAD REACTIVIDAD
0
Exposición en incendio: Peligro de material
combustible ordinario. Ejemplo: Hidrógeno
Materiales que no se queman.
Ejemplo: Ácido Clorhídrico
Materiales estables aun en incendio, no reactivos con agua. Ejemplo: Cloruro de
Bario
1
Exposición: Irritación, daños menores en
ausencia de tto médico. Ejemplo: Glicerina
Materiales que deben
precalentarse antes de la combustión.
Ejemplo: Aceite de Palma
Materiales estables, pero a altas presiones
y temperaturas reactivos con agua, no
forma violenta. Ejemplo: Ácido Nítrico
2
Exposición continua: incapacidad temporal o
daños permanentes, sino hay atención
medica rápida. Ejemplo:
Trietanolamina
Materiales que deben exponerse a temperaturas medias o altas
antes de la combustión.
Ejemplo: orto-cresol.
Materiales inestables, sufren cambios
químicos violentos sin explosión. Reactivos violentamente con
agua. Ejemplo: Ácido Sulfúrico.
3
Exposición baja: Daños temporales o
permanentes aun con atención médica.
Ejemplo: Hidróxido de Potasio.
Líquidos y sólidos que se encienden
a temperatura ambiente.
Ejemplo: Estireno
Materiales inestables, sufren explosión con un fuerte iniciador.
Reactivos con agua Ejemplo: Dinitroanilina
4
Exposición muy corta: Muerte o daño
permanente aun con atención médica
inmediata. Ejemplo: Ácido Fluorhídrico
Materiales que vaporizan rápido a
temperatura y presión ambiental o que se queman
en el aire. Ejemplo:
Acetaldehído
Materiales que por sí mismos sufren
explosión, reacciones explosivas a
temperatura y presión ambiental.
Ejemplo: Nitroglicerina
Una vez el producto esté debidamente etiquetado, en cuanto a sus propiedades químicas y el riesgo que ofrece al personal del laboratorio, antes
24
de almacenar se deben tener en cuenta las incompatibilidades químicas. En general deben tenerse en cuenta las siguientes generalidades de incompatibilidad química:
Explosivos con: ácidos fuertes, oxidantes fuertes, bases fuertes, aminas, material combustible
Oxidantes con: derivados halogenados, compuestos halogenados, reductores, inflamables, ácidos fuertes, metales
Ácidos con: oxidantes, bases fuertes, metales
Bases y sales básicas con: ácidos, derivados halogenados, metales
Metales activos con: agua, ácidos, derivados halogenados
Cada reactivo, tiene la descripción de sustancias químicas con las cuales presenta incompatibilidad. Para ver la descripción en más detalle, ver Anexo 10.3: Tabla de incompatibilidades Químicas.
A cada sustancia se le debe realizar una ficha de seguridad química, para su correcto almacenamiento, con su respectivo registro para el control interno de inventario. Esta ficha debe estar en el lugar de almacenamiento disponible para todo el personal del laboratorio.
3.2.3 Ficha de seguridad química
Contiene:
Identificación de la sustancia, como se llama, quien la fabrica, de donde viene.
Composición sinónimos y componentes peligrosos.
Identificación del peligro símbolos y claves de riesgo y seguridad.
Medidas de primeros auxilios ante inhalación, absorción o ingestión.
Medidas en caso de incendio Sistemas adecuados de extinción de incendios.
Medidas para prevenir accidentes. Procesos de limpieza y absorción de derrames.
Almacenamiento y manejo Tipo de envase, condiciones de almacenamiento y manejo.
Controles de exposición y protección personal Equipo de protección e higiene industrial.
Propiedades físicas y químicas incluyendo límites de exposición, ph y solubilidad.
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Estabilidad y reactividad. Condiciones a evitar e incompatibilidades.
Información toxicología; incluye productos de descomposición.
Información ecológica, degradación biológica y WGK (efecto sobre el agua).
Información sobre desechos incluyendo empaques para descomposición final.
Información sobre transporte por vía aérea, terrestre y marítima.
Información legal incluyendo etiquetado y normas internacionales.
Información adicional.
3.2.4 Derrame de sustancias químicas
Cada sustancia química, generalmente tiene como anexo un gráfico para actuar en caso de derrame, y en algunos casos un estuche con material. La OMS, ha establecido un protocolo general para proceder en caso de derrames de sustancias químicas. El equipo necesario debe estar disponible para todo el personal de laboratorio, al igual que el protocolo y el formato de notificación del accidente.
3.2.5 Equipo Emergencias Químicas
Estuches especiales de material para derrames químicos
Ropa protectora: guantes de goma fuertes, chanclos o botas de agua, mascarillas respiratorias
Escobas y palas para el polvo
Pinzas para recoger los trozos de vidrio
Bayetas, trapos y toallas de papel
Cubos.
Carbonato sódico (Na2CO3) o bicarbonato sódico (NaHCO3) para neutralizar ácidos y sustancias químicas corrosivas
Arena o aserrín para cubrir los derrames de sustancias alcalinas
Detergente no inflamable
Extintor
3.2.6 Protocolo de atención de derrames de sustancias químicas
Cuando se produce un accidente o un derrame de sustancias químicas, es
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necesario utilizar el equipo de protección mencionado en la lista anterior, y seguir el siguiente procedimiento:
Tratar de identificar el derrame, buscando si hay etiquetas del producto, cual es su olor y si hay presencia de espumas o cualquier característica física que provea identificación. Si identifica el producto, tener a la mano la tarjeta de descripción del mismo, con el fin de identificar el tipo de riesgo.
Verificar si hay personal afectado, en caso de que lo haya, trasladar el personal a otro lugar para poder atenderle. Se debe retirar toda ropa que haya entrado en contacto con la sustancia y lavar con abundante agua, si no afecta la seguridad de la persona.
Aislar la zona de derrame, ubicando alguna señalización para evitar que más personal entre en contacto con la sustancia. Se debe evaluar si es necesaria la evacuación del personal.
Preparar los elementos del equipo de emergencias químicas que sean necesarios para controlar la emergencia.
Controlar el derrame, tratando de minimizarlo con recipientes y evitando que el producto se extienda en más áreas del laboratorio con un dique o barrera apropiada para la sustancia.
Limpiar el derrame, utilizando la debida bioprotección y evitando al máximo inhalar vapores o aerosoles del químico. Disponer los desechos en una bolsa roja, debidamente marcada (Ver anexo Protocolo de Desechos Químicos)
Informar al coordinador del laboratorio el accidente (Ver anexo notificación de accidente químico). Es importante anotar que si no es posible contener el accidente, se debe informar inmediatamente al coordinador del laboratorio se identifique el accidente con el fin de conseguir ayuda. Si no es posible informar al coordinador en ese momento seguir el siguiente conducto regular:
Coordinador del laboratorio
Director de Laboratorios
Bienestar Universitario
Brigada de Atención de Desastres
Coordinador de Salud Ocupacional
3.2.7 Accidentes con sustancias químicas
Como se describió anteriormente, las sustancias químicas se clasifican según el efecto que tienen en la salud. Así mismo, existen diversas emergencias químicas dependiendo de la sustancia y en cada laboratorio
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debe existir una estrategia de contención para cada una.
3.2.7.1 Incendio por productos químicos.
Evacuar el laboratorio, por la salida principal o por la salida de emergencia, evitando inhalar vapores o gases.
Si el fuego está localizado y es pequeño, utilizar el extintor para apagarlo o un recipiente para que se agote el oxígeno y se apague. Es preciso retirar los productos químicos inflamables que estén cerca del fuego.
Si el fuego es grande, informar inmediatamente al coordinador del laboratorio o seguir el conducto regular para contener la emergencia.
NOTA: No se debe utilizar agua para extinguir fuegos producidos por sustancias químicas inflamables.
3.2.7.2 Otros Accidentes Químicos.
Otras emergencias químicas, están relacionadas con el contacto que el personal del laboratorio pueda tener de manera accidental con una sustancia química. Este contacto puede ser con piel, mucosa ocular, inhalación de la sustancia o ingestión directa de la misma. En cada una de estas emergencias, es importante conocer las acciones mínimas a realizar para auxiliar al compañero mientras recibe atención médica adecuada. En el laboratorio, debe estar disponible para todo el personal el botiquín de emergencias, con las instrucciones dependiendo el tipo de emergencia. (Ver Capitulo Primeros auxilios)
3.3 RIESGOS FÍSICOS
Está relacionado con todos aquellos factores ambientales que dependen de las características físicas de los cuerpos (carga física, ruido, iluminación, radiación ionizante y no ionizante, temperatura elevada, vibración, etc.), que pueden actuar sobre los tejidos y órganos del cuerpo del individuo produciendo un efecto nocivo, de acuerdo a la intensidad y tiempo de exposición a los mismos.
Para minimizar este tipo de riesgo debemos conocer bien las características de los materiales con los que trabajamos, para determinar las medidas adecuadas de seguridad y asegurando el cumplimiento de las mismas.
El riesgo físico es importante, porque además de incluir situaciones nocivas como las radiaciones, hay otros componentes que pueden afectarnos por
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ellos mismos o por alterar nuestras condiciones de trabajo o de alerta, por ejemplo, el ruido intenso.
3.3.1 Accidentes de tipo mecánico
Cortes o punciones con material de vidrio: las más frecuentes se producen al cortar varillas de vidrio o introducirlas en corchos horadados.
Cuando se produzca, se lavará la herida con abundante agua, se detendrá la hemorragia presionando sobre ella con un paño limpio o gasas estériles y se acudirá al médico.
Quemaduras: se producen al tocar el vidrio caliente. Por ello hay que cerciorarse bien de que se haya enfriado.
Cuando se produzcan, se lavará la herida con agua fría y se colocará una gasa estéril para cubrirla sin aplicar cremas ni pomadas.
Explosiones: pueden producirse por una reacción química inesperada.
Recomendaciones:
Nunca cerrar herméticamente un recipiente en las reacciones en que se producen vapores, pues el aumento de la presión produce explosión.
Nunca mirar por la boca del matraz o tubo de ensayo cuando se efectúe una reacción.
Nunca calentar un recipiente cerrado.
Nunca añadir un reactivo a un recipiente que se está calentando.
Por todo ello es necesario volver a insistir sobre la necesidad de utilizar gafas de seguridad.
Contactos eléctricos: Pueden producirse por contacto con equipos.
Desconectar inmediatamente la corriente eléctrica.
Evitar el contacto piel-piel con el accidentado si se está mojado.
3.3.2 Riesgo eléctrico
Todo aquel asociado a la electricidad y el uso de aparatos eléctricos.
El riesgo más común se presenta cuando un individuo, vinculado a tierra por algún punto de su cuerpo (pies descalzos, pies calzados con zapatos no aislados o húmedos, apoyado en una pared, etc.), toma contacto con el “cable vivo”.
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Entre los factores eléctricos que le pueden causar mal al trabajador están: el no hacer control de calidad a la maquinaria o equipos que funcionan con electricidad, ya que los cables pueden tener peladuras o no se les esté dando un buen manejo lo que conlleva a un riesgo para el trabajador.
También el sitio donde está ubicado el equipo, pues este no debe estar en sitios donde se puedan tropezar con él o donde estén en contacto con agua porque puede haber una explosión o una descarga eléctrica para los que estén cerca.
Para evitar el riesgo eléctrico, se debe aplicar una serie de medidas de protección:
Todos los equipos eléctricos, sea portátiles como instalados en forma permanente, deben estar conectados a tierra.
Recordar que aunque un elemento no esté funcionando, no por eso deja de estar bajo tensión eléctrica es por esto que los aparatos y equipos eléctricos deben desconectarse completamente de la fuente de energía cuando no se trabaje con ellos.
Antes de manipular elementos eléctricos debe asegurarse que las manos estén completamente secas, que se empuñe el equipo por el lugar adecuado y que se esté aislado respecto de tierra.
Antes de utilizar un equipo eléctrico, verificar su correcto funcionamiento.
Asegurarse que el uso que le va a dar al equipo es el correcto.
No realizar reparaciones en circuitos bajo tensión y comprobar que no exista posibilidad de que esto ocurra por error mientras se está reparando.
Evitar el uso de adaptadores en los enchufes.
Minimizar la utilización de extensiones. En caso de necesitar una prolongación, evitar colocarla en zonas donde transita el personal. Evitar las conexiones caseras.
Controlar la integridad de fichas y cables antes de conectarlas.
Debe informarse inmediatamente cualquier chispa, sobrecalentamiento o cualquier otro defecto aparente en los circuitos, conductores o equipos eléctricos.
Si una persona recibe una descarga eléctrica, debe retirárselo inmediatamente (si no lo ha hecho por sí mismo) del equipo o aparato, con las precauciones del caso para evitar sufrir también la descarga en esta acción: cortar la corriente en el sector y emplear elementos no conductores para retirarlo.
Toda persona expuesta a una descarga eléctrica, debe recibir de
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inmediato atención médica, se le debe aplicar respiración artificial si no respira por sus propios medios.
3.3.3 Riesgos con equipos emisores de láser; rayos X; U.V.; infra rojo.
Corresponden a este grupo las emisiones de radiación infrarroja (I.R.); ultravioleta (U.V.); láser; etc.
La luz infrarroja puede dañar la vista; actúa como una fuente puntual de calor y puede aumentar los efectos dañinos de otras radiaciones. Deben emplearse lentes apropiados que filtren la radiación infrarroja.
La luz ultravioleta provoca irritaciones en la piel o quemaduras similares a las producidas por los rayos solares y es muy dañina para la vista. Aún exposiciones cortas pueden generar una ceguera temporal por daño en la córnea. También deberán utilizarse lentes que filtren esta radiación, si bien lo más aconsejable es cubrir totalmente la fuente de emisión.
En ciertos equipos (fundamentalmente espectroscopías U.V.; I.R. y Light Scattering) se emplea radiación láser, deberá evitarse que accidentalmente el láser incida en la vista, extremando las precauciones en el empleo de espejos y otros tipos de accesorios que pudieran desviar el rayo de su trayectoria original.
3.3.4 Riesgo de incendio
Un incendio es una reacción química de oxidación – reducción fuertemente exotérmica, siendo los reactivos el oxidante (comburente) y el reductor (combustible), y su producto el fuego. Este es consecuencia del calor y la luz que se producen durante estas reacciones químicas, normalmente denominadas de combustión. En la mayoría de los fuegos, la reacción de combustión se produce cuando el oxígeno del aire, que actúa como comburente, reacciona con un material inflamable, tal como la madera, la ropa, el papel, el petróleo, o los solventes, los cuales entran en la clasificación química general de compuestos orgánicos. La combinación del material combustible con el oxígeno, el calor y una reacción en cadena suministran los componentes de la reacción de combustión que puede dar origen al fuego.
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4 LABORATORIOS DE BIOLOGÍA MOLECULAR: NIVEL BIOSEGURIDAD II
4.1 CÓDIGO DE PRÁCTICAS
El código de prácticas es el conjunto de prácticas o procedimientos esenciales de laboratorio, los cuales constituyen las técnicas microbiológicas apropiadas. El laboratorio debe contar con un manual de bioseguridad, donde se expliquen los riesgos a los que se está expuesto y las practicas que contribuyen a minimizar estos riesgos. A continuación se exponen los aspectos más importantes, del código de prácticas planteado por la OMS:
4.1.1 Acceso
Debe tener el símbolo de riesgo biológico
Las puertas deben permanecer cerradas
-Ingreso controlado: no ingreso niños, ni personal no autorizado
Figura 12. Etiqueta para el laboratorio con Riesgo Biológico.
4.1.2 Protección Personal
Se usarán en todo momento monos, batas o uniformes especiales para el trabajo en el laboratorio.
Se usarán guantes protectores apropiados para todos los procedimientos que puedan entrañar contacto directo o accidental con
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sangre, líquidos corporales y otros materiales potencialmente infecciosos o animales infectados. Una vez utilizados, los guantes se retirarán de forma aséptica y a continuación se lavarán las manos.
El personal deberá lavarse las manos después de manipular materiales y animales infecciosos, así como antes de abandonar las zonas de trabajo del laboratorio.
Se usarán gafas de seguridad, viseras u otros dispositivos de protección cuando sea necesario proteger los ojos y el rostro de salpicaduras, impactos y fuentes de radiación ultravioleta artificial.
Estará prohibido usar las prendas protectoras fuera del laboratorio, por ejemplo en cantinas, cafeterías, oficinas, bibliotecas, salas para el personal y baños.
No se usará calzado sin puntera.
En las zonas de trabajo estará prohibido comer, beber, fumar, aplicar cosméticos o manipular lentes de contacto.
Estará prohibido almacenar alimentos o bebidas para consumo humano en las zonas de trabajo del laboratorio.
La ropa protectora de laboratorio no se guardará en los mismos armarios o taquillas que la ropa de calle.
4.1.3 Procedimientos
Estará estrictamente prohibido pipetear con la boca.
No se colocará ningún material en la boca ni se pasará la lengua por las etiquetas.
Todos los procedimientos técnicos se practicarán de manera que se reduzca al mínimo la formación de aerosoles y gotas.
Se limitará el uso de jeringuillas y agujas hipodérmicas, que no se utilizarán en lugar de dispositivos de pipeteo ni con ningún fin distinto de las inyecciones por vía parenteral o la aspiración de líquidos.
Todos los derrames, accidentes y exposiciones reales o potenciales a materiales infecciosos se comunicarán al supervisor del laboratorio. Se mantendrá un registro escrito de esos accidentes e incidentes.
Se elaborará y seguirá un procedimiento escrito para la limpieza de todos los derrames.
Los líquidos contaminados deberán descontaminarse (por medios químicos o físicos) antes de eliminarlos por el colector de saneamiento. Puede ser necesario un sistema de tratamiento de efluentes, según lo que indique la evaluación de riesgos del agente con el que se esté
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trabajando.
Los documentos escritos que hayan de salir del laboratorio se protegerán de la contaminación mientras se encuentren en éste.
4.1.4 Zonas de trabajo del laboratorio
El laboratorio se mantendrá ordenado, limpio y libre de materiales no relacionados con el trabajo.
las superficies de trabajo se descontaminarán después de todo derrame de material potencialmente peligroso y al final de cada jornada de trabajo.
Todos los materiales, muestras y cultivos contaminados deberán ser descontaminados antes de eliminarlos o de limpiarlos para volverlos a utilizar.
El embalaje y el transporte de material deberán seguir la reglamentación nacional o internacional aplicable.
4.2 DISEÑO E INSTALACIONES DEL LABORATORIO
Características de Diseño de un laboratorio de Nivel II de Bioseguridad
Se dispondrá de espacio suficiente para realizar el trabajo de laboratorio en condiciones de seguridad y para la limpieza y el mantenimiento.
Las paredes, los techos y los suelos serán lisos, fáciles de limpiar, impermeables a los líquidos y resistentes a los productos químicos y desinfectantes normalmente utilizados en el laboratorio. Los suelos serán antideslizantes.
Las superficies de trabajo serán impermeables y resistentes a desinfectantes, ácidos, álcalis, disolventes orgánicos y calor moderado.
La iluminación será adecuada para todas las actividades.
El mobiliario debe ser robusto y debe quedar espacio entre mesas, armarios y otros muebles, así como debajo de los mismos, a fin de facilitar la limpieza.
Habrá espacio suficiente para guardar los artículos de uso inmediato, evitando así su acumulación desordenada sobre las mesas de trabajo y en los pasillos. También debe preverse espacio para el almacenamiento a largo plazo, convenientemente situado fuera de las zonas de trabajo.
Se preverán espacio e instalaciones para la manipulación y el almacenamiento seguros de disolventes, material radiactivo y gases
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comprimidos y licuados.
Los locales para guardar la ropa de calle y los objetos personales se encontrarán fuera de las zonas de trabajo del laboratorio.
Los locales para comer y beber y para descansar se dispondrán fuera de las zonas de trabajo del laboratorio.
En cada sala del laboratorio habrá lavabos, a ser posible con agua corriente, instalados de preferencia cerca de la salida.
Las puertas irán provistas de mirillas y estarán debidamente protegidas contra el fuego; de preferencia se cerrarán automáticamente.
En el nivel de bioseguridad 2 se dispondrá de una autoclave u otro medio de descontaminación debidamente próximo al laboratorio.
Los sistemas de seguridad deben comprender medios de protección contra incendios y emergencias eléctricas, así como duchas para casos de urgencia y medios para el lavado de los ojos.
Hay que prever locales o salas de primeros auxilios, convenientemente equipados y fácilmente accesibles (véase el anexo 1).
Cuando se planifique una nueva instalación, habrá que prever un sistema mecánico de ventilación que introduzca aire del exterior sin recirculación. Cuando no se disponga de ventilación mecánica, las ventanas deberán poder abrirse y, a ser posible, estarán provistas de mosquiteras.
Es indispensable contar con un suministro regular de agua de buena calidad. No debe haber ninguna conexión entre las conducciones de agua destinada al laboratorio y las del agua de bebida. El sistema de abastecimiento público de agua estará protegido contra el reflujo por un dispositivo adecuado.
Debe disponerse de un suministro de electricidad seguro y de suficiente capacidad, así como de un sistema de iluminación de emergencia que permita salir del laboratorio en condiciones de seguridad. Conviene contar con un grupo electrógeno de reserva para alimentar el equipo esencial (estufas, CSB, congeladores, entre otros), así como para la ventilación de las jaulas de los animales.
Es esencial un suministro fiable y adecuado de gas. La instalación debe ser objeto del debido mantenimiento.
Tanto los laboratorios como los locales destinados a los animales son a veces objeto de actos de vandalismo. Hay que prever sistemas de protección física y contra incendios. Cabe mejorar la seguridad reforzando las puertas, protegiendo las ventanas y limitando el número de llaves en circulación. Se podrán estudiar y aplicar otras medidas, según proceda, para incrementar la seguridad
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5. CÁMARAS DE SEGURIDAD BIOLOGICA (CSB)
Las CSB están diseñadas para proteger al trabajador, la atmósfera del laboratorio y los materiales de trabajo de la exposición a las salpicaduras y los aerosoles infecciosos que pueden generarse al manipular material que contiene agentes infecciosos, como cultivos primarios, soluciones madre y muestras de diagnóstico.
Los aerosoles se producen en cualquier actividad que transmita energía a un material líquido o semilíquido, por ejemplo, al agitarlo, verterlo a otro recipiente, removerlo o verterlo sobre una superficie o sobre otro líquido. Las actividades como la siembra de placas de agar, la inoculación de frascos de cultivo celular con pipeta, el uso de pipetas múltiples para dispensar suspensiones líquidas de agentes infecciosos en placas de microcultivo, la homogeneización y la agitación vertical de material infeccioso, y la centrifugación de líquidos infecciosos o el trabajo con animales pueden generar aerosoles infecciosos. Las partículas de aerosol de menos de 5mm de diámetro y las pequeñas gotas de 5 a 100mm de diámetro no son visibles a simple vista. El trabajador no suele darse cuenta de que se están produciendo esas partículas, que pueden ser inhaladas o provocar la contaminación cruzada de los materiales que se encuentran sobre las superficies de trabajo. Las CSB, cuando se utilizan debidamente, han demostrado ser sumamente eficaces para reducir las infecciones adquiridas en el laboratorio y la contaminación cruzada de cultivos por exposición a aerosoles.
Las CSB contienen filtros HEPA, los cuales retienen el 99,97% de las partículas de 0,3mm de diámetro y el 99,99% de las partículas de tamaño mayor o menor; esto les permite retener eficazmente todos los agentes infecciosos. Las diferentes modificaciones en el diseño de estos filtros, y en los flujos de aire al interior y al exterior de la cámara, han dado lugar a tres tipos de cámaras de seguridad biológica (I. II. III). A continuación se resumen las características de cada una de estas.
Tabla 8. Características Cámaras de Seguridad Biológica.
Tipo Protección Clase de CSB
Protección personal, agentes infecciosos grupo 1-3
I, II, III
Protección personal, agentes infecciosos grupo 4, laboratorio para
trabajar con cámara de guantes III
Protección personal, agentes infecciosos grupo 4, laboratorio para
trabajar con trajes especiales I, II
Protección del producto II, III Flujo laminar
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Protección contra cantidades mínimas de sustancias
químicas/volátiles IIB1, IIA2 Ventilada al exterior
Protección contra de sustancias químicas/volátiles
I, IIB2, III
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6. MANEJO DE RESIDUOS
6.1 GENERALIDADES EN LA DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
Para establecer los procedimientos y actividades relacionados con la gestión integral de residuos, se tendrán en cuenta los lineamientos establecidos en el Manual Guía para el Manejo de Residuos Sólidos en el Valle de Aburrá del Área Metropolitana. Adicionalmente se dará cumplimiento a lo establecido en el Decreto 2676 de Diciembre de 2000, Decreto 1669 de 2002, Decreto 4741 de 2005, Resolución 18-1434 del 2002 del Ministerio de Minas y energías, para el manejo de residuos hospitalarios y similares.
Para la clasificación inicial de los residuos, se debe tener en cuenta la correcta segregación en los diferentes recipientes. Estos recipientes deben tener el código internacional de colores, planteado por la ONU. Para el laboratorio de biología molecular se manejarán tres colores así:
GRIS
Material Reciclable: Plástico, Papel, Desechables, Cartón
VERDE
Basura Común: Papel plastificado, Icopor, barrido del laboratorio,
ROJA
Residuos Biológicos: Plástico, sanitarios, algodones, servilletas, cortopunzantes o cualquier materia contaminado con fluidos biológicos.
Residuos Químicos: Plástico, servilletas, sanitarios contaminados con químicos, recipientes de sustancias químicas.
6.1.1 Características de las bolsas desechables
Lo primero que hay que anotar es que la bolsa desechable debe ser del mismo color del recipiente en el que se utiliza, y esta debe marcarse debidamente antes de ser descartada del laboratorio.
Las bolsas soportan la tensión ejercida por los residuos contenidos y por su manipulación.
El material plástico de las bolsas para residuos infecciosos, es polietileno de alta densidad, el peso individual de la bolsa con los residuos no excede los 8
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Kg., las bolsas para residuos peligrosos tienen un calibre mínimo de 1.4 para bolsas pequeñas y de 1.6 milésimas de pulgada para bolsas grandes, suficiente para evitar el derrame durante el almacenamiento en el lugar de generación, recolección, movimiento interno, almacenamiento central y disposición final.
6.1.2 Recipientes para residuos punzo-cortantes
Se dispone de guardianes de seguridad, los cuales son de paredes rígidas, en polipropileno de alta densidad u otro polímero que no contiene P.V.C., resistentes a ruptura o perforación. Con tapa ajustable o de rosca, de boca angosta, de tal forma que al cerrarse quede completamente hermético. Deben ser livianos y de capacidad de acuerdo a la generación de cada laboratorio, rotulados de acuerdo al tipo de residuo.
Para los residuos cortopunzantes se estipula que las agujas deben introducirse en el recipiente sin reenfundar, llenando solo sus ¾ partes
Todos los guardianes deben rotularse de la siguiente forma:
Grupo de investigación____________________
Fecha de inicio__________________________
Fecha de terminación_____________________
6.1.3 Protocolo de Recolección de Residuos
6.1.3.1 Biológicos.
Los residuos biológicos son recolectados, inactivados por autoclave y dispuestos finalmente a la ruta de basura común de EEVV o al operador especial para que sean incinerados. Cuando se dispone de sangre o derivados, estos deben congelarse en bolsa roja, y después son llevados a incineración.
Estos deben ser entregados en bolsa roja sin mezclarlos e identificados así:
Nombre del laboratorio
Tipo de material
Fecha
NOTA: Si el material Biológico está contaminado con reactivos químicos este residuo se considera un residuo químico y no biológico.
Material contaminado con Biológicos
Biosanitarios: Son todos aquellos elementos como: gasa, apósitos,
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aplicadores, algodones, drenes, vendajes, mechas, guantes, servilletas.
Se deben depositar en bolsa roja identificados, se inactivan por autoclave y se disponen como basura común en bolsa verde y con un rotulo de material biológico inactivado.
Material Plástico: El material que pueda inactivarse con Hipoclorito y luego enjuagarse, se dispone en bolsa gris rotulado como pasta o plástico (reciclaje) El material plástico que por sus condiciones no pueda inactivarse con Hipoclorito se dispondrá en bolsa roja para ser inactivado por autoclave y luego entregado como basura común.
Cortopunzantes: Son objetos tales como limas, lancetas, cuchillas, agujas, restos de ampolleta, pipetas de vidrio, láminas de bisturí o vidrio, y cualquier otro elemento que por sus características punzo-cortantes pueda lesionar y ocasionar un riesgo infeccioso. Deben ser entregados en guardián de seguridad, cerrados herméticamente (no hacer inactivación con hipoclorito). Estos son sometidos a esterilización por autoclave y luego enviados a incineración
Filtros de cámaras de flujo laminar: Antes de retirar el filtro debe formolizarse para que el filtro quede inactivado y no ofrezca ningún riesgo. Estos filtros contienen madera y metal, el cual debe separarse para la disposición final.
6.1.3.2 Químicos.
Deben utilizarse recipientes plásticos en buen estado, bien cerrados que no presenten fugas, para aquellos reactivos químicos que atacan el plástico se recibirán en frasco de vidrio
Los recipientes deben rotularse así:
Nombre del producto o mezcla.
Concentración
Nombre del laboratorio
Responsable
Adicionalmente al momento de entregar la mezcla química, se debe hacer entrega al coordinador del laboratorio de los siguientes datos:
Nombre de cada uno de los componentes
Concentración
Presentación
Cantidad
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Ficha de seguridad
NOTA: Estos datos son necesarios para la empresa incineradora, para poder gestionar su disposición final.
Los residuos químicos, deben ser previamente separados teniendo en cuenta su naturaleza química, de la siguiente forma:
Solventes orgánicos y soluciones de sustancias orgánicas que no contienen halógenos.
Solventes orgánicos y soluciones de sustancias orgánicas que contienen halógenos.
Residuos sólidos orgánicos de productos químicos de laboratorio -Soluciones salinas y soluciones ácidas; deben ajustarse a pH entre 6 8
Residuos inorgánicos tóxicos, así como sales de metales pesados y sus soluciones
Compuestos combustibles tóxicos
Mercurio y residuos de sales inorgánicas de mercurio
Residuos de sales metálicas regenerables, cada metal debe en lo posible recogerse por separado
Residuos inorgánicos sólidos
Recolección separada de restos de vidrio, metal y plástico
Recolección separada de materiales sanitarios como servilletas, algodones, papel filtro, papel etc.
Los residuos que por su naturaleza química no se puedan llevar a incinerar se deben almacenar bien tapados y en un lugar bien ventilado.
6.1.3.3 Residuos con Bromuro de Etidio o SYBR GREEN.
Se disponen en bolsa roja y se identifican como residuos tóxicos, nombre del laboratorio, nombre del responsable y fecha, estos residuos se incineran.
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7. DESINFECCIÓN Y ESTERILIZACIÓN
7.1 DEFINICIONES
Antimicrobiano: Agente que mata los microorganismos o suprime su crecimiento y proliferación.
Antiséptico: Sustancia que inhibe el crecimiento y el desarrollo de microorganismos pero no necesariamente los mata. Los antisépticos suelen aplicarse a las superficies corporales.
Biocida: Término general para cualquier agente que mate organismos.
Descontaminación: Cualquier proceso utilizado para eliminar o matar microorganismos. También se utiliza para referirse a la eliminación o neutralización de sustancias químicas peligrosas y materiales radioactivos.
Desinfección: Medio físico o químico de matar microorganismos, pero no necesariamente esporas.
Desinfectante: Sustancia o mezcla de sustancias químicas utilizada para matar microorganismos, pero no necesariamente esporas. Los desinfectantes suelen aplicarse a superficies u objetos inanimados.
Esporicida: Sustancia o mezcla de sustancias químicas utilizadas para matar microorganismos y esporas.
Esterilización: Proceso que mata o elimina todas las clases de microorganismos y esporas.
Germicida químico: Sustancia o mezcla de sustancias químicas utilizada para matar microorganismos.
Microbicida: Sustancia o mezcla de sustancias químicas que mata microorganismos. Este término se utiliza a menudo en lugar de biocida, germicida químico o antimicrobiano.
7.2 DESCONTAMINACIÓN DE ESPACIOS Y SUPERFICIES
La descontaminación del espacio, el mobiliario y el equipo de laboratorio requiere una combinación de desinfectantes líquidos y gaseosos. Las superficies pueden descontaminarse con una solución de hipoclorito sódico (NaOCl); a concentraciones de 5g/l de cloro libre cuando se trata de
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situaciones de alto riesgo. Para la descontaminación de espacios y superficies, las soluciones de lejía pueden sustituirse por fórmulas que
contengan un 3% de peróxido de hidrógeno (H2O2), o alcohol al 70%.
Las salas y el equipo pueden descontaminarse por fumigación con formaldehido gaseoso, que se obtiene calentando paraformaldehído o hirviendo formol. Este procedimiento es sumamente peligroso y debe ser realizado por personal especialmente adiestrado. Todas las aberturas del local (ventanas, puertas, entre otros) deben cerrarse con cinta adhesiva o un material análogo antes de que se desprenda el gas.
7.3 DESCONTAMINACIÓN DE CÁMARAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA
Para descontaminar las CSB de las clases I y II se dispone de aparatos autónomos que generan, ponen en circulación y neutralizan formaldehído gaseoso de forma independiente.
Si no se dispone de ese equipo, debe colocarse la cantidad apropiada de paraformaldehído (concentración final de 0,8% de paraformaldehído en el aire) en una sartén sobre una placa eléctrica caliente. En una segunda placa caliente, también dentro de la cámara, se coloca otra sartén con bicarbonato amónico en una cantidad un 10% mayor que el paraformaldehído de la primera sartén. Ambas placas deben estar enchufadas fuera de la cámara para que se pueda controlar su funcionamiento desde el exterior. Si la humedad relativa es inferior al 70%, también debe colocarse una sartén con agua caliente en el interior de la cámara antes de sellar los bordes de la ventana frontal con cinta adhesiva fuerte (cinta aislante, por ejemplo). Sobre la abertura frontal y el orificio de evacuación se fija con cinta adhesiva una lámina de plástico grueso, con el fin de asegurar que el gas no pueda filtrarse a la sala. Los orificios de penetración de los cables eléctricos que pasan por la abertura frontal también deben cerrarse con cinta aislante.
Se enciende la placa con la sartén de paraformaldehído y se apaga cuando se haya evaporado totalmente. La cámara se deja en reposo durante al menos 6 horas. Después se enciende la segunda placa y se permite que el bicarbonato amónico se evapore. En ese momento se apaga la placa y se enciende el ventilador de la CSB durante dos intervalos de unos dos segundos para permitir que el gas de bicarbonato amónico circule por el interior. La cámara se dejará en reposo durante 30 min antes de retirar el plástico de la abertura frontal y del orificio de salida de aire. Antes de volver a utilizar la cámara se limpiarán sus superficies con un paño para eliminar los residuos.
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7.4 LAVADO Y DESCONTAMINACIÓN DE MANOS
El personal de laboratorio deberá lavarse las manos siempre que salga del laboratorio, y especialmente después de realizar cualquier procedimiento. Se deben lavar con agua y jabón, frotándose durante un mínimo de 10 segundos; a continuación se aclararán en agua limpia y se secarán con una toalla de papel o un paño limpio. Cuando no se puedan lavar las manos, y solo estén ligeramente sucias pueden frotarse con alcohol al 70% o con gel desinfectante.
7.5 DESINFECTANTES UTILIZADOS
7.5.1 Cloro (hipoclorito sódico)
El cloro, oxidante de acción rápida, es un germicida químico de uso muy extendido y de amplio espectro. Normalmente se vende en forma de lejía, una solución acuosa de hipoclorito sódico (NaOCl) que puede diluirse en agua para conseguir distintas concentraciones de cloro libre.
El cloro, es alcalino y puede ser corrosivo para los metales. Su actividad se ve considerablemente reducida por la materia orgánica (proteínas). Las soluciones madre o de trabajo deben ser almacenadas en recipientes cerrados, para que se mantenga su potencial germicida.
Como solución desinfectante general para toda clase de trabajos de laboratorio se debe utilizar una concentración de 1 g/l de cloro libre. En caso de derrame biológico y en presencia de grandes cantidades de materia orgánica, se recomienda utilizar una solución más concentrada, que contenga 5 g/l de cloro libre. Las soluciones de hipoclorito sódico de uso doméstico, contienen 50 g/l de cloro libre y por tanto deben diluirse a razón de 1 : 50 o 1 : 10 para obtener concentraciones finales de 1 g/l y 5 g/l, respectivamente.
Las soluciones industriales tienen una concentración de hipoclorito sódico cercana a los 120 g/l y deben diluirse en consecuencia para obtener los niveles indicados más arriba.
7.5.2 Formaldehído
El formaldehído (HCHO) es un gas que destruye todos los agentes infecciosos y esporas a temperaturas superiores a los 20°C. Sin embargo, no tiene actividad contra los priones.
Su acción es relativamente lenta y requiere una humedad relativa de alrededor del 70%. Se comercializa en forma de polímero sólido (paraformaldehído), en copos o comprimidos, o como formol, solución del gas
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en agua con aproximadamente 370 g/l (37%) y con metanol (100 ml/l) como estabilizante. Ambas formulaciones se calientan para liberar el gas, que se utiliza en la descontaminación y la desinfección de espacios cerrados como CSB y locales y puede utilizarse como desinfectante líquido (un 5% de formol en agua).
El formaldehído es un gas peligroso de olor acre que puede irritar los ojos y las mucosas, por lo que debe almacenarse y utilizarse con una campana extractora de vapores o en zonas bien ventiladas. Adicionalmente se presume, que tiene efecto cancerígeno.
7.5.3 Alcoholes
El etanol (alcohol etílico, C2H5OH) y el 2-propanol (alcohol isopropílico, (CH3)2CHOH) tienen propiedades desinfectantes similares. Son activos contra las formas vegetativas de las bacterias, los hongos y los virus con envoltura lipídica, pero no contra las esporas. Su acción sobre los virus sin envoltura lipídica es variable. La máxima eficacia, se obtiene utilizando concentraciones acuosas de aproximadamente un 70% (v/v): las concentraciones más altas o más bajas pueden no tener tanto poder germicida.
Las mezclas con otros agentes son más eficaces que el alcohol por sí solo; por ejemplo, el alcohol al 70% (v/v) con 100 g/l de formaldehído, o el alcohol con 2 g/l de cloro libre. Las soluciones acuosas de etanol al 70% (v/v) pueden utilizarse en la piel, las superficies de trabajo de las mesas de laboratorio y las CSB, así como para sumergir pequeñas piezas de instrumental quirúrgico. Los alcoholes son volátiles e inflamables y no deben utilizarse en las proximidades de llamas desnudas. Las soluciones de trabajo deben almacenarse en recipientes apropiados para evitar la evaporación.
7.5.4 Yodo y yodóforos
La acción de estos desinfectantes es análoga a la del cloro, aunque pueden ser ligeramente menos susceptibles a la inhibición por la materia orgánica. El yodo puede manchar los tejidos y las superficies del entorno, y en general no es adecuado como desinfectante. Por otro lado, los yodóforos y las tinturas de yodo son buenos antisépticos.
La povidona yodada es un agente de lavado quirúrgico fiable e inocuo, y sirve como antiséptico cutáneo. El yodo no debe usarse en objetos de aluminio o cobre.
El yodo puede ser tóxico. Los productos orgánicos a base de yodo deben almacenarse a 4–10 °C para evitar la proliferación de bacterias potencialmente peligrosas en ellos.
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7.5.5 Peróxido de hidrógeno y Perácidos
Como el cloro, el peróxido de hidrógeno (H2O2) y los perácidos son oxidantes enérgicos y pueden servir como potentes germicidas de amplio espectro. Son también más inocuos que el cloro para el ser humano y para el medio ambiente. El peróxido de hidrógeno se suministra en forma de solución al 3% lista para usar o como solución acuosa al 30% que debe ser diluida hasta 5–10 veces su volumen en agua esterilizada. Sin embargo, esas soluciones al 3–6% por sí solas son relativamente lentas y limitadas como germicidas. El peróxido de hidrógeno puede utilizarse para descontaminar las superficies de trabajo del laboratorio y de las CSB, y las soluciones más potentes pueden servir para desinfectar el material sensible al calor. El peróxido de hidrógeno y los perácidos pueden ser corrosivos para metales como el aluminio, el cobre, el latón y el zinc, y también pueden descolorar tejidos, cabellos, piel y mucosas. Siempre deben almacenarse alejados del calor y protegidos de la luz.
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8. PRIMEROS AUXILIOS
8.1 BOTIQUÍN DE PRIMEROS AUXILIOS
8.1.1 Antisépticos y soluciones
Los antisépticos son sustancias cuyo objetivo es la prevención de la infección, evitando el crecimiento de gérmenes que comúnmente están presentes en toda lesión causada accidentalmente. Las soluciones son utilizadas para lavado o tratamiento inicial de lesiones leves
Tabla 9. Soluciones utilizadas para el lavado de lesiones leves
Elemento Cantidad Uso
Jabón Yodado 1 frasco 200 ml Limpieza heridas:
Germicida
Jabón liquido 1 frasco 200 ml Limpieza manos e
instrumental
Alcohol 70% 1 botella 350 ml Desinfección manos e
instrumental
8.1.2 Material de curación
Son utilizados para controlar hemorragias, limpiar y cubrir heridas o quemaduras y prevenir la contaminación e infección.
Tabla 10. Material de curación
Elemento Cantidad Uso
Gasas Paquete con
presentación individual. 5 unidades
Limpieza y cubrimiento heridas, quemaduras,
hemorragias
Apósito para ojos 3 unidades Oclusión ojos en
lesiones o proyección partículas
Algodón laminado 1 paquete
Para forrar inmovilizadores, limpieza
de elementos o instrumental.*
Adhesivo tipo microporo 2 unidades Fijar gasas, apósitos o
vendas
Venditas 20 unidades Protección de heridas
simples
Venditas en rollo 10 unidades Protección de heridas,
inmovilizaciones, hemorragias
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Vendas triangulares 10 unidades Inmovilizaciones,
protección de heridas
8.1.3 Instrumental y elementos adicionales
Son utilizados para manipulación de las sustancias y materiales o para proteger al auxiliador.
Tabla 11. Instrumental y elementos de primeros auxilios
Elemento Cantidad Uso
Tijeras 1 Retirar ropa, cortar
gasas o vendas
Baja lenguas 5 unidades Inmovilizar traumas o
lesiones en manos
Guantes látex 2 pares Protección del auxiliador
y del accidentado
Mascarillas desechables con válvula anti-reflujo
2 unidades Protección del auxiliador o respiración boca-boca
Bolsas (verdes, rojas) 2 de cada color Disposición de desechos
Aplicadores 10 unidades Limpieza de heridas,
retirar cuerpos extraños
Gafas de seguridad 1 Protección del auxiliador
Linterna pequeña 1 Revisión de cuerpos
extraños
Solución salina estéril /agua estéril
500cc Lavado de heridas o
quemaduras
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BIBLIOGRAFÍA
Manual de Bioseguridad de la OMS,Tercera edición 2005.
PROBLEMA MEDIOAMBIENTAL EN LABORATORIOS QUÍMICOS: trabajo para su solución. Disponible en:
http://usuarios.lycos.es/ambiental/ea1/labquim.html
Clasificación de productos químicos según la NFPA. Disponible en: http://www.suratep.com/cistema/articulos/142/
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ANEXOS
ANEXO 1. PLANO Y DISTRIBUCIÓN
A continuación, se presenta el plano y la distribución física del Laboratorio de Ciencias Biomédicas H-106, del ITM Campus Robledo. Este laboratorio, por manipular tanto residuos químicos, como biológicos (por el tipo de prácticas realizadas por el Grupo de Investigación SINERGIA), cuenta con áreas de Procedimientos, almacenamiento de Reactivos, Seguridad Industrial y Almacenamiento de Residuos.
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ANEXO 2. TIPOS DE RESIDUOS GENERADOS Y MANIPULADOS Biológicos
Anatomopatológicos: Sangre y Derivados, Cultivos celulares (Primarios y líneas celulares).
Material plástico contaminado con biológicos. Químicos:
Reactivos: TRIzol, Cloroformo, Etanol, Isopropanol, Citrato de Sodio, NaOH, EDTA, TBE 1X, Glicógeno, Syber Green, Bromuro de etidio, Sanitarios, Mezclas de soluciones orgánicas, Soluciones sales.
Material plástico contaminado con químicos.
