Presentacin de PowerPoint
CentrifugadorasLos experimentos de centrifugacin requieren
aparatos que funcionan a velocidades conocidas con pequeas
variaciones y pequeas fluctuaciones Baja velocidad-Centrifugan
hasta 6L-Mantienen la muestra fra -Utilizados para separar clulas
-Separan organelos as como ncleo y cloroplastos Alta velocidad -Con
velocidades de 1800-2500 rpm-Pueden generar cerca de 60 000 g -Son
baratas -Tiene un sistema de refrigeracin algunas tienen un sistema
de vaco para controlar la temperatura
Ultracentrifugadas La fuerza generada es > 60000 ( separacin
de protenas) ANALITICAS: Cuenta con un sistema ptico por lo que la
muestra es visualizada en tiempo real durante la sedimentacin
permite la determinacin exacta de los parmetros hidrodinmicos y
termodinmicos La ultracentrifugadora analtica Beckman se compone de
un motor, de un rotor de centrifugacin que esta en una cmara
blindada protectora y un sistema fotogrfico para registrar la
distribucin de las concentracionesUna ultracentrfuga analtica es
una ultracentrfuga preparativa complementada con un sistema
dedeteccin ptico que es capaz de medir directamente la concentracin
de la muestra durante la sedimentacin.El modelo XL-A utiliza un
sistema ptico de absorbancia basado en una lmpara de xenn, un
rastreador monocromtico que permite la medicin de la concentracin
de la muestra en un rango de longitud de onda de 200 a 800
nanmetrosEl sistema ptico de interferencia Rayleigh fue adicionado
al modelo XLAEl sistema ptico de interferencia Rayleigh mide la
concentracin de la muestra basado en cambios en el ndice de
refraccin.El sistema ptico de interferencia Rayleigh es utilizado
para el anlisis de macromolculas que carecen de cromforos intensos
(ejemplo polisacridos) y muestras que contienen molculas que
absorbenfuertemente (ejemplo ATP, GTP, DTTOXIDADO).SISTEMA
SCHLIEREN, en el cual la luz que atraviesa las regiones de
concentracin uniforme prosigue su camino sin desviarse, mientras
que la que atraviesa regiones de concentracin cambiante se desva
debido al cambio del ndice de refraccin que vara con la
concentracin.Su valor reside en su gran capacidad para examinar el
perfil del frente de sedimentacin y para detectar la presencia de
heterogeneidades en s. Se ha utilizado muy ampliamente, sobre todo
para la determinacin del coeficiente de sedimentacin de las
protenasCromoforo: Parte o conjunto de tomos de una molcula
responsable de su color r.p.m: Revolucin por minuto (unidad de
frecuencia )GTP: Guanosn trifosfatoDTT:Ditiotreitol, capaz de
reducir los enlaces disulfuro de las protenas (-S-S-) a grupos
sulfhidrilo (-SH)Centrfuga TubularConsiste tubo vertical esbelto
que gira a altas velocidades por la accin de un motor elctrico, o
una turbina de aire o vapor
Capaz de separar partculas hasta de 0.1 mm. Las CT pueden contar
con un sistema de enfriamiento por lo que son empleadas en el
manejo de caldos con enzimas o protenasUn modelo tpico de
laboratorio consta de un tubo de 4.5 cm de dimetro por 25 cm de
longitud, el cual puede girar a una velocidad de hasta 50 000
r.p.m., desarrollando campos de hasta 62 000 g, con unacapacidad de
hasta 100 l/h.Centrifugas de Cmara MltipleFueron creadas para
incrementar la capacidad de manejo de slidos de las centrfugas
tubularesConsisten en una serie de tazones concntricos con
deflectores que provocan un flujo en serie de la suspensin. Su
operacin permite la clasificacin de las partculas conforme pasan de
una cmara a otra.El dimetro de los equipos de cmara mltiple vara de
335 a 615 mm, con velocidades de rotacin entre 5 000 y 8 400
r.p.m., produciendo campos entre 5 000 y 9 000 g, respectivamente.
La capacidad de manejo de slidos vara entre 2.5 y 60 litros
dependiendo del material y del nmero de
cmaras.CentrfugasDecantadoras o de TornilloSe caracterizan por un
tazn horizontal con una seccin cilndrica y unaseccin cnica, con una
relacin de longitud a dimetro entre 1.5 - 3.5.Las velocidades de
rotacin son de 1 600 a 6 000 r.p.m. por lo quelos campos centrfugos
son menores que los de los otros equiposLos dimetros de los tazones
varan de 15 a 140 cm. Para los modelos piloto e industriales. La
descarga de los slidos vara de 30 Kg/h hasta 60 Ton/h, con
alimentaciones entre 308 y 1890 l/min,Centrfuga de DiscosConsta de
un eje vertical sobre el cual se montan un conjunto de discos
enforma de conos truncados, uno sobre otro. El rotor de la
centrifuga provoca el giro tanto de los discos como del tazn de la
centrifuga.Debido a la fuerza centrfuga, los slidos se depositan en
la cara internade los discos, resbalando hacia la cmara colectora
debido al ngulo de los discos. La siguiente imagen muestra una
centrfuga de discos.Tipos de rotores Rotores de ColumpioLa muestra
est en una cubeta individual el cual se mueve de forma
perpendicular al eje de rotacin del rotorLa fuerza centrfuga es
ejercida a lolargo del eje del tubo, y a pesar de que la fuerza
centrfuga es axial, algunas partculas son sedimentadas sobre la
pared del tuboEstos rotores llevan de 3 a 6 tubos fijados a un
soporte de metal que esta suspendido, la suspensin libre sirve para
fijar la posicin de inicio del tubo con la muestra, cuando el rotor
comienza a girar, el bucket se pone de forma horizontal. 1.-
Rotores de alta velocidad con tubos de 4.4 y 5 ml. Estos rotores
son convenientes para centrifugacin zonal y al equilibrio donde no
es necesaria una fina resolucin.2.- Rotores de velocidad moderada
para tubos de 13.2 a 17 ml de capacidad, son convenientes para la
separacin de partculas de masa similar por medio de centrifugacin
zonal en gradientes de densidad desacarosa. 3.- Rotores para tubos
largos y de baja velocidad de rotacin. Incluye rotores del tipo SW
25.1 quecontiene tres tubos de 34 ml, el tipo SW 25.2 (3x 60 ml) y
SW 28 con seis tubos de 38.5 ml.
Rotores de ngulo FijoTienen un ngulo fijo y cuando el rotor gira
la solucin se reorienta en el tubo. El ngulo del tubo en el rotor
puede variar de 140 a 400Los rotores con bajo ngulo son ms
eficientes para sedimentacin porque el trayecto de las partculas
que sedimentan es corto.Los rotores de ngulo fijo estn diseados
para soportar altas fuerzas centrfugas, por arriba de 600 000 g
Rotores VerticalesSe utilizan en centrfugas de alta velocidad y
ultracentrfugas. En estosrotores, los tubos estn en posicin
vertical y se podra considerar que es una forma extrema de un rotor
dengulo fijoLa caracterstica importante de los rotores verticales
es la corta trayectoria de sedimentacin de laspartculas (que
equivale al dimetro del tubo). El diseo de los rotores verticales
permite muy altas fuerzascentrfugas.
Los rotores verticales no son convenientes para sedimentacin
pero pueden ser utilizados para centrifugacin isopcnica
Centrifugacin isopcnica : separa las partculas en un gradiente
de densidades en funcin de la densidad de las mismas. Las partculas
se mueven en el gradiente hasta que llegan a un punto donde la
densidad de stas i la del gradiente son idnticasRotores ZonalSus
procesos son similares a los que ocurren en los rotores de bucket,
sin embargo, en lugar de tubos hay 4 sectores en el cuerpo del
rotor zonalformados por la insercin de una cilindro de cuatro
sectores que esta hecha de Noryl, un qumico inerte ysuave. El
ensamble del aspa asegura la rotacin del liquido junto con el rotor
y consecuentemente la formacin de una fuerza centrfuga. La direccin
de la sedimentacin es hacia la periferia del rotorSe han
desarrollado diferentes diseos de este tipo de rotores a los que se
las ha agrupado en diferentes series, de tal manera que hay de la
serie A, B, C, D, F, K y J. Cada serie agrupa a rotores que
comparten caractersticas en cuanto a su velocidad.
-Frecuentemente el tiempo de corrida que se utiliza es el que se
encuentra en la literatura, o bien, es determinado arbitrariamente
hasta que se completa la separacin. -El utilizar los factores k y k
podra ahorrar tiempo en la centrifugacin. -Estos factores pueden
ser utilizados para convertir un tiempo de corrida de un tipo de
rotor a otro. Por ejemplo si el rotor tipo 40 tiene una mxima
velocidad de 40 000 r.p.m. se lleva 4 horas en realizar la
separacin, el tiempo de corrida que se lleva un rotor tipo 60 Ti a
60 000 r.p.m.puede ser determinado por la siguiente relacin:
t1 = k1 x t2 / k2
Donde t1 es el tiempo de corrida de el rotor tipo 60 Ti, k1 es
el factor k del rotor 60 Ti, t2 es el tiempo observado en el rotor
tipo 40 y k2 es el factor k para el rotor tipo 40. Para el ejemplo
anterior el tiempo de corrida para el rotor 60 Ti es
aproximadamente de dos horas
