Embed Size (px)
Citation preview
Agosto 2016
Caracterización de Phytophthora infestans
obtenido de jitomate en Michoacán, México
María del Rosario Gregorio-Cipriano1, Gerardo Rodríguez-Alvarado1,
Héctor Lozoya-Saldaña2, Javier Villegas-Moreno1 y Sylvia Patricia
Fernández-Pavía1
1Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo; 2Departamento de Fitotecnia,
Universidad Autónoma Chapingo.
TIZÓN TARDÍO
Cultivo de jitomate con tizón tardío en Tacámbaro, Michoacán, México.
CARACTERIZACION DE
POBLACIONES P. infestans
• MARCADORES FENOTÍPICOS • Tipos de compatibilidad
• Sensibilidad a mefenoxam
• MARCADORES GENÉTICOS • Genotipos isoenzimáticos
• Haplotipos mitocondriales
• Otros • RFLP, AFLPS, microsatélites, inter/microsatélites
P. infestans atacando papa en Michoacán
• Se han detectado 51 genotipos multilocus de
• P. infestans (Fernández-Pavía et al. 2005, Garay-Serrano 2005, Lozoya-Saldaña
2006, Díaz-Celaya 2008).
• Ambos tipos de compatibilidad proporción cercana
al 1:1 (Fernández-Pavía et al. 2005).
• Se ha detectado únicamente el haplotipo I-a
(Fernández-Pavía 2005, Garay-Serrano 2005).
Genotipos multilocus de P. infestans
obtenidos de jitomate en México
Tipos de
Compatibilidad Gpi Pep Localidad Referencias
A1 100/100 92/100 Los Mochis, Sinaloa Goodwin et al. 1992
A2 111/122 100/100 Los Mochis, Sinaloa Legard et al. 1995
A2 100/111 100/100 Valle del Fuerte, Sinaloa Jaime-García et al. 2000
A1/A2 100/111 100/100 Valle del Fuerte, Sinaloa Jaime-García et al. 2000
A1 100/122 100/100 Valle del Fuerte, Sinaloa Jaime-García et al. 2000
A1 111/122 92/100 Valle del Fuerte, Sinaloa Jaime-García et al. 2000
A1 100/100 100/100 Valle del Fuerte, Sinaloa Jaime-García et al. 2000
OBJETIVO
El objetivo de este trabajo fue caracterizar
aislados de P. infestans obtenidos de
cultivos de jitomate en campo e
invernadero, provenientes de cinco
localidades de Michoacán.
MATERIALES Y METODOS
Determinación del tipo de compatibilidad
Incompatibilidad entre aislados de diferente hospedero
Pruebas de patogenicidad (preferencia de hospedero)
Sensibilidad a mefenoxam
Genotipos isoenzimáticos
Haplotipos mitocondriales
OB
TEN
CIÓ
N D
E A
ISLA
DO
S
AISLAMIENTO
Cinco localidades: Copándaro de Galeana (mpio. Copándaro),
Atécuaro, Morelia, Uruapilla (mpio. de Morelia) y Terrero
(mpio. Tacámbaro).
tipos de compatibilidad
? A1
A2 A1 A2
?
Cruza oospora
Incompatibilidad entre aislados
A2
papa
A1
papa
A1
jitomate A2
jitomate
Pruebas de patogenicidad
Aislamiento en
MCA de 17 días
de crecimiento
Suspensión de
esporangios
Sensibilidad a mefenoxam
0 µg/ml
5 µg/ml
10 µg/ml
100 µg/ml
Se determinó de acuerdo con la escala de
Reis et al. 2003.
Genotipos izoenzimáticos
Protocolo de Goodwin. et. al. 1995.
Haplotipos mitocondriales
Extracción de ADN, Protocolo Goodwin 1992.
Técnica PCR-RFLP de Griffith y Shaw 1998:
PCR: amplificación de regiones P2 y P4 del DNA-mt, utilizando los iniciadores F2/P2 y F4/P4 .
Digestión con enzimas Mspl y EcoRI, respectivamente.
Aislados y tipos de compatibilidad
Localidad Tipo de
Cultivo
No. de
aislamientos
Tipos de
compatibilidad
Copándaro Campo 4 A1, A2
Terrero Campo 19 A1/A2
Uruapilla Invernadero 5 A2
Atécuaro Invernadero 3 A2
Morelia Invernadero 2 A2
Cuadro 1. Procedencia y Tipos de Compatibilidad de los aislados de
P. infestans.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Incompatibilidad entre aislados
• No se detectó ningún caso de
incompatibilidad entre los aislados,
como la reportada por Goodwin et
al. 1992, entre aislados de jitomate y
papa.
Pruebas de patogenicidad
Sensibilidad a mefenoxam
Sensibilidad al Mefenoxam de los aislados de
P. infestans.
Tipo de Cultivo No. de
aislamientos
Sensibilidad a
mefenoxam
Campo 23 Sensibles (20)
Tolerantes (3)
Invernadero 10 Tolerantes (6)
Resistentes (4)
Genotipos isoenzimáticos Tipo de cultivo Aislamiento TC PEP GPI
CAMPO
JI04 A1 100/100 100/122
J404 A1 100/100 100/111
J604 A2 100/100 100/111
INVERNADERO
JI07 A2 100/100 111/111
J207 A2 100/100 111/111
J407 A2 100/100 111/111
J507 A2 100/100 111/111
J607 A2 100/100 100/111
J707 A2 100/100 100/111
J807 A2 100/100 100/111
J907 A2 100/100 100/111
TF5 A2 100/100 100/111
TF9 A2 100/100 100/111
Genotipos multilocus de los aislados de P. infestans.
Haplotipos Mitocondriales
1.018 pb
Productos de PCR analizados por electroforesis (A): región P2 (1070pb) y (B):
región P4 (964pb), del ADN mitocondrial.
1.018 pb
A B
Haplotipos mitocondriales
517/506 pb
344 pb
396 pb
220/201 pb
Patrones de bandeo observados con la digestión de P4 con EcoRI.
Se observaron tres
bandas: 394pb,
361pb y 209pb
Sitios de restricción
típicos de los
haplotipos I-a y I-b
Haplotipos mitocondriales
1,018 pb
517/506 pb
344 pb
M
1 KB
Patrones de bandeo observados con la digestión de P2 con MspI.
En 7 aislados se
observaron dos
bandas: 720pb y
350pb
Sitios de restricción
típicos del haplotipo
I-a
CONCLUSIONES
• El tipo de compatibilidad A1 y aislados homotálicos,
únicamente se detectaron en cultivos de jitomate en
campo, mientras que el A2 se presentó tanto en campo
como en invernadero. Esto sugiere la presencia de
reproducción sexual en campo, lo cual coincide con la
mayor diversidad detectada.
•
• Los aislados obtenidos de campo son más susceptibles al
mefenoxam que los obtenidos en invernadero.
•
CONCLUSIONES
• No se detectó preferencia de hospedero de aislados de
P. infestans, ni incompatibilidad entre aislados de
diferente hospedero. Lo cual puede explicar porqué los
genotipos isoenzimáticos presentes en los aislados de
jitomate, han sido previamente reportados en papa en
México.
• Se detectó la presencia del haplotipo I-a., este es el
primer reporte de un haplotipo de aislados de P. infestans
obtenidos de jitomate en México.
GRACIAS
![A Phytophthora infestans Cystatin-Like Protein Targets a · A Phytophthora infestans Cystatin-Like Protein Targets a Novel Tomato Papain-Like Apoplastic Protease1[W][OA] Miaoying](https://img.dokumen.tips/doc/110x75/5e0144a4c3c9354e4912bcaa/a-phytophthora-infestans-cystatin-like-protein-targets-a-a-phytophthora-infestans.jpg)
