Bab 3 Px Vibrio Sholera

BAB III

METODE PENELITIAN

3.1 Waktu dan Tempat

Praktikum “Pemeriksaan Vibrio Cholera” dilaksanakan secara bertahap.

Adapun waktu dan tempat pelaksanaan praktikum dilakukan sebagai berikut :

3.1.1 Pembuatan Media TSI, TCBS, SIM, dan SCA

Hari, tanggal : Rabu, 5 Juni 2013

Waktu : Pukul 09.00 – 12.20 WITA

Tempat : Laboratorium Bakteriologi Jurusan Analis

Kesehatan Poltekkes Denpasar

3.1.2 Pengambilan Sampel Rektal Swab dan Penanaman ke Media TCBS

Hari, tanggal : Rabu, 12 Juni 2013




3.1.3 Pengamatan Secara Makroskopis

Hari, tanggal : -




3.2 Alat dan Bahan

3.2.1 Alat

1. Neraca analitik

2. Spatel

3. Gelas beker

4. Erlenmeyer

5. Batang pengaduk

6. Gelas ukur

7. Api bunsen

8. Plate

9. Kapas berlemak

10. Pinset

11. Inkubator

12. Lidi kapas

13. Ose dissposible

3.2.2 Bahan

1. Sampel Rektal Swab

2. Aquadest steril

3.2.3 Reagen/Media

1. Media TCBS

2. TCBS

3. SIM

4. SCA

3.3 Langkah Kerja

A. Pembuatan Media TCBS

1. Alat dan bahan disiapkan

2. Ditimbang bubuk media TCBS sebanyak 17,6 g dengan

menggunakan neraca analitik

3. Dilarutkan dengan aquadest steril sebanyak 200 ml di dalam

erlenmeyer sambil diaduk hingga homogen.

4. Ditutup dengan kapas berlemak lalu dipanaskan dengan kompor

listrik hingga media larut sempurna.

5. Didinginkan media hingga suhu ± 40 o C.

6. Dituangkan media ke dalam plate.

7. Media siap digunakan.

8. Jika tidak segera digunakan, dibungkus dengan kertas, kemudian

disimpan dalam lenari es.

B. Pembuatan Media TSI

1. Alat dan bahan yang diperlukan disiapkan

2. Ditimbang bubuk TSI sebanyak 3,9 gram dengan menggunakan

neraca analitik

3. Dilarutkan dengan aquadest sebanyak 60 ml di dalam erlenmeyer

sambil diaduk

4. Ditutup erlenmeyer dengan kapas berlemak lalu dipanaskan pada

kompor listrik sampai media larut sempurna

5. Disiapkan 10 tabung dan masing – masing tabung dimasukkan

sebanyak 5 ml menggunakan pipet ukur

6. Media disterilisasi dengan autoclave pada suhu 1210C selama 15

menit

7. Media diletakkan pada posisi slant, dibiarkan hingga memadat

8. Media siap digunakan

C. Pembuatan Media SIM


2. Ditimbang bubuk SIM sebanyak 1,8 gram dengan menggunakan

neraca analitik


sambil diaduk



5. Disiapkan 10 tabung reaksi dan masing – masing tabung

dimasukkan sebanyak 5 ml menggunakan pipet ukur


menit


D. Pembuatan Media SCA


2. Ditimbang bubuk SCA sebanyak 1,8 gram dengan menggunakan

neraca analitik


sambil diaduk



5. Disiapkan 10 tabung reaksi dan masing – masing tabung

dimasukkan sebanyak 5 ml menggunakan pipet ukur


menit


E. Pengambilan Sampel

Orang yang hendak diambil swabnya disuruh bersimpuh dan

menungging di atas tempat tidur. Tangan kiri petugas pengambil swab

membuka lubang anus dan tangan kanan memasukkan lidi kapas steril

ke dalam lubang anus dengan cara memutar sampai ± 2-3 cm. Setelah

itu lidi kapas ke luar sambil tetap diputar searah jarum jam.

Selanjutnya lidi kapas tadi dimasukkan dalam media carry and blair

sampai terbenam ke dalam media. Apabila lidi atau tangkainya terlalu

panjang, kita potong sehingga botol bisa ditutup rapat. Setelah diberi

label, spesimen kita bawa ke laboratorium untuk diperiksa.

F. Cara Penanaman sampel

1. Disiapkan media TCBS dengan diberi label sesuai dengan label pada

sampel yang akan diperiksa.

2. Sampel (lidi kapas) pada media carry and blair diambil dengan

pinset secar aseptis dan dioleskan satu titik pada media TCBS agar

3. Kemudian dari satu titik tersebut dibuat goresan 4 kuadrant

menggunakan ose dissposible

4. Pengerjaan dilakukan di dekat api bunsen.

5. Media TCBS yang telah digores tadi diinkubasi pada suhu 370C

selama 2x24 jam

G. Pembacaan Hasil

Setelah diinkubasi selama 2x24 jam pada media TCBS tidak

ditumbuhi oleh koloni,hal ini menunjukkan hasil yang negative pada

ketiga sampel

Documents

Bab 3 Px Vibrio Sholera