LOGO

Spektrofotometri uv & visSpektrofotometri uv & visFauzan Zein M., M.Si., Apt.

Spektrum cahaya tampak

Spektrum cahaya tampak

INSTRUMEN

Diagram instrumen Spektrofotometer uv-vis

MONOKROMATOR

1. Prisma

MONOKROMATOR

2. Kisi

DETEKTOR

KUVET

Aplikasi Metode SpektrofotometriUV/VIS:

Analisis Senyawa ObatSenyawa TunggalDan Multikomponen

Daerah UV-VIS

Daerah UV Dekat : 200-400 nm Daerah UV-Vakuum : 100-200 nm Daerah Visibel: 400-700 nm

Uji Identitas dan kemurnian: digunakandalam monografi farmakope

Penentuan kadar (kegunaan utama):(1) One-point method: baku eksternal,penambahan baku(2) multi-point method, kurva kalibrasi: baku eksternal, penambahan baku(3) Senyawa tunggal, multi komponen

Sebagai detektor: HPLC, CE

Uji Identitas dan Kemurnian

Pengukuran spektrum UV/VIS suatuzat,pembandingan dengan spektrumbaku pembanding atau denganspektrum dari literatur

Panjang gelombang maksimum Penentuan Absorptivitas pada panjang

gelombang maksimum

Penentuan Kadar Senyawa Obat

Metode relatif: perlu baku pembanding Pembuatan larutan larutan baku (perhatikan

keberlakuan Hukum Lambert-Beer, konsentrasi sekitar10 ug/ml)

Untuk one-point method: cukup 1 larutanbaku,konsentrasi harus dekat dengan konsentrasisampel

Untuk multi-point method (kurva kalibrasi): dibuatlarutan dengan pengenceran bertingkat, pembuatankurva kalibrasi/regresi linier konsentrasi vs absorbansi

Untuk multi-point method (standard adisi): penambahan larutan baku secara bertingkat, sampeltetap, regresi linier konsentrasi baku yang ditambahkanvs absorban

One Point Method

Cs = ( As / Ab) x Cb

Cs = Konsentrasi SampelAs = Absorbansi SampelAb = Absorbansi BakuCb = Konsentrasi Baku

MULTIPOINT METHOD

Kalibrasi eksternal

MULTIPOINT METHOD

Standar adisi

Hk. Lambert-Beer

A = Absorban() = Absorptivitas molarC = Konsentrasi [ mol / l]c = Konsentrasi [g/ 100 ml]b = Tebal sel(kuvet [cm]A1%, 1 cm = Absorptivitas jenis() adalah absorban A suatu larutan zat (C= 1

mol/ l) bila tebal sel 1 cm (b= 1) dan panjanggelombang .

Daerah Keberlakuan Hk.Lambert-Beer

0,2 - 0,8 satuan absorban (A)1 mg/ 100 ml setara dengan 0,2 - 0,8

satuan absorban(A)A > 0,8 : gangguanA < 0,2 : presisi dan akurasi burukKesalahan fotometrik terkecil bila A

= 0,434

Penentuan Simultan: Kasus I

Bila panjang gelombang masing-masingsenyawa terletak berjauhan dapatditentukan masing-masing sepertipadapenentuan tunggal masing-masingsenyawa

Penentuan Simultan: Kasus 2

Spektrum absorpsi kedua senyawabertumpang tindih. Tentukan absorpsitotal kedua senyawa. Denganpengubahan pH atau pelarut serapanmaksimum dapat dipisahkan

Penentuan Simultan: Kasus 3

Penentuan UV ganda (prosedurperhitungan): perhitungan konsentrasic1 dan c2 dari dua persamaan dengandua variabel

Penentuan Simultan: Kasus 3

Penentuan Simultan: Kasus 3

Percobaan dan Perhitungan Buat larutan baku masing-masing senyawa 1

dan 2 Ukur absorban larutan baku senyawa 1 pada

1 dan 2,tentukan a1(1) dan a1(2) Ukur absorban larutan baku senyawa 2 pada

1 dan 2,tentukan a2(1) dan a2(2) Ukur absorban larutan sampel (campuran

senyawa 1 dan 2) pada 1 (A1) dan 2 (A2) Berlaku persamaan berikut ini:

A1 = a1(1) c1 + a2(1) c2A2 = a1(2) c1 + a2(2) c2

Dari kedua persamaan tersebut c1 dan c2 dapat ditentukan

Pergeseran

Efek batokromik: pergeseran merah Efek hipsokromik: pergeseran biru Efek hiperkromik: penguatan signal Efek hipokromik: pelemahan signal Penyebab: auksokrom = gugus fungsi

dengan n-orbital yang langsung terikatdengan sistem kromofor

Tipikal: -OH, -OR, -SH, -SR, Halogen, dan Amino

Pengaruh pH Terhadap Spektrum

Titik Isosbestik

Contoh Aplikasi Klinis

Kalibrasi Spektrofotometer

Perlu dilakukan untuk mencegah kesalahanpembacaan panjang gelombang dan absorban

Kalibrasi skala panjang gelombang: larutan holmium dioksid dalam asamperklorat. Perbedaan penunjukkan skalapanjang gelombang pada alat dengan panjanggelombang seharusnya digunakan untukmengoreksi pembacaan alat.

Kalibrasi skala fotometrik: larutan kaliumbikromat dalam asam sulfat. Berhubungandengan intensitas sumber radiasi (life time sumber radiasi)

Kalibrasi skala panjang gelombang

Kalibrasi skala fotometrik

LOGO

Fauzan Zein M., M.Si., Apt.

Spektrofotometri uv & visSpektrum cahaya tampakSpektrum cahaya tampakINSTRUMENMONOKROMATORMONOKROMATORDETEKTORKUVETAplikasi Metode Spektrofotometri UV/VIS:Daerah UV-VISUji Identitas dan KemurnianPenentuan Kadar Senyawa ObatOne Point MethodMULTIPOINT METHODMULTIPOINT METHODHk. Lambert-BeerDaerah Keberlakuan Hk.Lambert-BeerPenentuan Simultan: Kasus IPenentuan Simultan: Kasus 2Penentuan Simultan: Kasus 3Penentuan Simultan: Kasus 3Penentuan Simultan: Kasus 3PergeseranPengaruh pH Terhadap SpektrumTitik IsosbestikContoh Aplikasi KlinisKalibrasi SpektrofotometerKalibrasi skala panjang gelombangKalibrasi skala fotometrik