Anexo INFORME INTERLABOS 1ªpartebibliotecagbs.com/archivos/anexo_fotografico_mayo2005.pdfENSAYO DE SEDIMENTABILIDAD EN PROBETA (11/V/05) ENSAYO DE SEDIMENTABILIDAD EN PROBETA INSTANTES

ANEXO FOTOGRÁFICO

EJERCICIO INTERLABORATORIO (Mayo 2005): Anexo fotográfico

1

CARACTERÍSTICAS MACRO- Y MICROSCÓPICAS DEL FANGO ACTIVO

LÁMINA 1

■ ENSAYO DE SEDIMENTABILIDAD EN PROBETA (11/V/05)

■ ENSAYO DE SEDIMENTABILIDAD EN PROBETA INSTANTES DESPUÉS DE LA TOMA DE MUESTRAS (10/V/05)

t = 15 min t = 30 min t = 30 minA, B y C: Ensayo de sedimentabilidad en probeta (11/V/05). (A) Ensayo de sedimentabilidad enprobeta a los 10 min (230 mL/L). (B) Ensayo de sedimentabilidad a los 20 min (180 mL/L). (C)Ensayo de sedimentabilidad a los 30 min sobre la muestra de fango activo (180 mL/L).

A, B y C: Ensayo de sedimentabilidad en probeta (10/V/05). (A) Ensayo de sedimentabilidad en probetaa los 10 min (280 mL/L). (B) Ensayo de sedimentabilidad a los 20 min (220 mL/L). (C) Ensayo desedimentabilidad a los 30 min sobre la muestra de fango activo (170 mL/L).


2

LÁMINA 2

■ ENSAYO DE SEDIMENTABILIDAD EN PROBETA A LAS 48 H DE LA TOMA DE MUESTRAS (12/V/05)

Inversión de la manta de fangos a las 48 h de latoma de muestras (12/V/05).


3

ESTRUCTURA FLOCULAR LÁMINA 3

B A

microflóculos

Estructura del fango activo. A y B: Aspecto general del flóculo de fango activo, en el que se observa que no existe unnúcleo bien mineralizado. 100x, contraste de fases.C: Filamentos desprendidos del flóculo. 100x, contraste de fases. D:Microflóculos en disolución. 100x, contraste de fases. E: Flóculo de fango activo de estructura "media" y tamaño "medio",en el que se observan filamentos sobresaliendo de su estructura (5-20 filamentos). 100x, contraste de fases. F: Flóculo defango activo en el que se observa un núcleo más mineralizado (→). 100x, contraste de fases.

C D

E F

GBS GBS

GBS GBS

ZORNOZA ZORNOZA


4

PROTOZOOS Y METAZOOS LÁMINA 4

■ FLAGELADOS

B

Coanoflagelados. A: Coanoflagelados en tinción Gram. 1000x, campo claro. B: Coanoflagelados en preparación en vivo. 4000x, contraste de fases. C: Coanoflagelados. Campo claro.

GBS

C

GBS A


5

LÁMINA 5

■ FLAGELADOS

Pequeños flagelados. A: Pequeño flagelado. Campo claro, 400x. B: Bodo sp. Contraste de fases, 400x.

Carlos Ferrer

A

ZORNOZA

B


6

LÁMINA 6

■ AMEBAS TESTÁCEAS (II)

Amebas testáceas. A y B: Arcella sp. en vista de perfil. Campo claro. C y D: Arcella sp. en vista oral. 200x y 400x (respectivamente), contraste de fases. Mientras que en C se observa una ameba de colorpardo oscuro, probablemente inactiva, en D puede advertirse el interior de la teca, es decir, el citoplasma.

GBSC

BA

ZORNOZA

D


7

LÁMINA 7

■ AMEBAS DESNUDAS

A y B. Amebas desnudas. (A) Contraste de fases, 100x. (B) Contraste de fases, 400x. En A se observa la presencia de pseudópodos.

GBS A

GBS B


8

LÁMINA 8

■ CILIADOS BACTERÍVOROS NADADORES*

* Dadas las observaciones realizadas por algunos participantes y nuestra propia experiencia, hemos incluido a Acineria uncinata en el grupo de los nadadores en este anexo fotográfico. No obstante, el cálculo del SBI, siguiendo las indicaciones del Prof. Madoni, ha de realizarse incluyendo a este ciliado en el grupo de los reptantes.

■ CILIADOS REPTANTES BACTERÍVOROS (I)

Ciliados nadadores. (A) Acineria uncinata. en las proximidades de unflóculo de fango activo. 400x, campo claro.

A

B

C

Aspidisca lynceus de perfil. 400x, contraste de fases. Obsérvese la superficie lisade esta especie, distinta a la superficie abombada y con costillas de Aspidiscacostata.

ZORNOZA


9

LÁMINA 9

■ CILIADOS REPTANTES BACTERÍVOROS (I)

Ciliados reptantes. (A) Euplotes sp. 400x, contraste de fases. (B) Euplotes patella400x, contraste de fases. La longitud de este organismo es de 90-120 µm, es decir,superior a la de E. affinis y E. moebiusi. No obstante, su identificación de forma precisarequiere de técnicas de impregnación argéntica.

GBS A

ZORNOZA

B


10

LÁMINA 10

■ CILIADOS SÉSILES BACTERÍVOROS (I)

B GBS

GBS A

Ciliados sésiles. A: Vorticella sp. 400x, contraste de fases. B: Vorticella sp. engemación. 400x, contraste de fases. C: Vorticella sp. en conjugación (se resalta en lafotografía el microconjugante).

GBS C


11

LÁMINA 11

■ CILIADOS SÉSILES BACTERÍVOROS (II)

GBS

ZORNOZA

Ciliados sésiles solitarios. Diversos individuos del Complejo Vorticella convallaria enuna agrupación similar a una colonia (pseudocolonia). 100x, contraste de fases. B:Individuo del complejo Vorticella convallaria. 400x, contraste de fases.

A

B


12

LÁMINA 12

■ CILIADOS SÉSILES BACTERÍVOROS (III)

Ciliados sésiles coloniales. A: Epistylis sp. 400x, campo claro. B: Opercularia microdiscum. 400x,contraste de fases. Obsérvese en esta especie el tamaño tan reducido del disco peristomial (1/5 anchocelular). En estas imágenes se observan claramente las diferencias entre los géneros Opercularia y Epistylisen cuanto a la región peristomial.

A

B

ZORNOZA

B


13

LÁMINA 13

■ CILIADOS SÉSILES BACTERÍVOROS (III)

A

Ciliados sésiles coloniales. A: Opercularia articulata. 100x, contraste de fases. B: Operculariaarticulata. 400x, campo claro. Destaca en este organismo su grueso pedúnculo (10 µm ancho) y eltamaño de sus zooides (90-120 µm longitud).

GBS

GBS B


14

LÁMINA 14

■ CILIADOS SÉSILES BACTERÍVOROS (IV)

Ciliados sésiles coloniales: A Epistylis chrysemydis. 100x, contraste de fases. Esta especie se caracteriza por presentar zooides de gran tamaño (140-220 µm), doble reborde peristomial y pedúnculo hueco. B: Epistylis plicatilis. 100x, contraste de fases. Esta especie se caracteriza por presentar pedúnculo compacto estriado transversalmente y zooides de 90-160 µm de longitud. El disco peristomial se presenta en un solo disco.

GBS A

GBS B


15

LÁMINA 15

■ CILIADOS SÉSILES CARNÍVOROS

■ METAZOOS

Suctores. Probablemente, Acineta sp. 400x, campo claro.

Metazoos. A: Nematodo. 100x, contraste de fases. B: Rotífero. 100x, contraste de fases.

A B GBS GBS


16

LÁMINA 16

■ OTRAS OBSERVACIONES

Otros restos en el fango activo. A: Ácaro. 100x, contraste de fases. B: Algas.100x, contraste de fases.

Algas

GBS A

GBS B


17

ORGANISMOS FILAMENTOSOS ORGANISMOS FILAMENTOSOS DE OBSERVACIÓN FRECUENTE (I)

LÁMINA 17

Microthrix parvicella en tinción. A: Microthrix parvicella en tinción Gram.Obsérvese que se trata de una reacción Gram + "fuerte", similar a la de Nocardia sp.1000x, campo claro. B: Microthrix parvicella en tinción Neisser. Se trata de unareacción negativa, aunque gránulo positiva. 1000x, campo claro.

A

B

GBS

ZORNOZA


18

ORGANISMOS FILAMENTOSOS DE OBSERVACIÓN FRECUENTE (II)

LÁMINA 18

Tipo 0041. A: Tipo 0041 en tinción Gram (reacción negativa). El crecimiento epifítico impide la distinción clara de los filamentos. La similitud morfológica y en cuanto a reactiva a tinciones hacenimprescindible la realización de mediciones para distinguir este morfotipo del 0675. 1000x, campoclaro. B: Tipo 0041 en vivo. Detalle del crecimiento epifítico de este filamento. 400x, contraste defases.

A

C

Microthrix parvicella, Gram + Tipo 0041, Gram -

A

Tipo 0041

B

GBS

GBS


19

ORGANISMOS FILAMENTOSOS DE OBSERVACIÓN FRECUENTE (III)

LÁMINA 19

Organismos de observación frecuente. A: Tipo 0675 en preparación "in vivo". 1000x, contraste defases. B: Tipo 0041 en tinción Gram. 1000x, campo claro. Pese a que los reactivos de tinción alteranlas dimensiones "normales" de los microorganismos, obsérvense las diferencias en cuanto a tamaño deestos dos morfotipos (A y B). C: Tipo 021N en tinción Gram (reacción negativa). 1000x, campo claro.

A

B

C GBS

A

ZORNOZA

B

ZORNOZA


20

ORGANISMOS FILAMENTOSOS DE OBSERVACIÓN POCO FRECUENTE (II)

LÁMINA 20

GBS

Organismos de observación poco frecuente. A: Nocardia sp. en tinción Gram. 1000x,campo claro. B: Microthrix parvicella y Nocardia sp. en tinción Gram. Campo claro.Entendemos que el color poco convencional de esta foto se debe al equipo de microfotografía(videocámara), en la que el ajuste de los colores puede realizarse de forma manual.

B

A


21

ORGANISMOS FILAMENTOSOS DE OBSERVACIÓN MUY POCO FRECUENTE (II)

LÁMINA 21

Organismos de observación muy poco frecuente. A: Hyphomicrobium sp. sobresaliendo de laestructura flocular. 1000x, campo claro. B: Tipo 0092 en tinción Neisser (reacción positiva) junto aMicrothrix parvicella. 1000x, campo claro.

AA

ZORNOZA

A

ZORNOZA

B

Laura Isac, Eva Rodríguez, Natividad Fernández y Mª Dolores Salas.

INFORME "EJERCICIO INTERLABORATORIOS DE Mayo 2005"

2

RESUMEN DE DATOS MÁS IMPORTANTES

FANGO DE EDAR INDUSTRIAL

MUESTREOPARTICIPANTE 3 8 9 11

Filam. dominante No identificado Tipo 021N/ Thiothrix Tipo 021N Tipo 021N, Tipo 1702 (probablemente)Categoría asociada 5 5 a 6 6 4

Filam. secundario Tipo 0675 Thiothrix Tipo 1701 (probablemente)Categoría asociada 3 3 3

Otros filamentos observados Nostocoida limicola II, Tipo 0092 1702/1701 Thiothrix II (proba blemente)

Filamentos en disolución ---

Uronema nigricans Cyclidium glaucoma Cyclidium sp. Uronema sp., Coleps sp., Cyclidium sp.Microfauna Tetrahymena pyriformis y abundantes quistes

El filamento dominante tiene una categoría Fango muy deteriorado, con alta Fango no floculado, Sistema en claro estado de deterioro,de 5, se encuentra en todas partes, es largo y concentración de filamentos, deteriorado. tanto por el estado de los filamentos

enrrollado, Gram - pero teñido muy débilmente, muchos de ellos inactivos. (abundantes vainas vacías, cto epifítico),Neisser - y con gránulos de PHB +. Abundantes restos de vaina del como por la nula estructuración del fló-

Está formado por células más o menos redondea Tipo 0675. culo, que se presenta como un conglome-das y algunas se tiñen más fuerte con Gram. Ausencia, prácticamente, de fló rado de formas bacilares, sin núcleo y

OBSERVACIONES Existen también bacterias helicoidales y una culo. La disgregación es total. desdibujado.gran cantidad de células bacilares, que se encuen El único protozoo que sobrevive Actividad biológica inexistente, en pro de

tran aisladas o en grupo. se alimenta de crecimiento disper- organismos como Thiothrix con metabo-so y probablemente aguante la lismos más propios de las condiciones

deficiencia casi total de oxígeno. de anoxia reinantes y de septicidad.Mucho metabolismo endógeno. Pequeños nadadores libres que confir-

Probablemente, el bulking original man el mal estado estructural del fango.era del Tipo 0675, para ser despla-

zado por bacterias con metabolismodel S.

FANGO DE EDAR INDUSTRIAL

MUESTREOPARTICIPANTE 13 15

Filam. dominante Restos de filamentos Microthrix parvicellaCategoría asociada 5

Filam. secundario Restos de filamentos Tipo 021N, categoría 2Categoría asociada Haliscomenobacter h., categoría 1

Otros filamentos observados Quizás Tipo 0675 y 1702 No

Filamentos en disolución Aparecen restos en disolución PresenciaCyclidium glaucoma como dominante, Tetrahymena pyriformis, Glaucoma sp.

Microfauna abundantes quistes de ciliados. Coleps sp., Uronema sp.

Licor mezcla en situación de abandono Alteración en los filamentos, que apa-(sin oxígeno disuelto), como si la EDAR recen vacíos de células, mostrandohubiera sufrido una parada larga en el sólo posibles gránulos de reserva.tiempo. En consecuencia, abundan los Pensamos en la presencia de algún

filamentos "vacíos", apareciendo peque- tóxico que afecta a la población de fila-ños ciliados de gran movimiento. mentos, bien porque el fango se haya

OBSERVACIONES clorado como control de los MOF, bien porque el influente lo contenga

de forma puntual.Todas las tinciones:

Neisser (-) en tricoma y (+) en gránulosPHB (+)Vaina (-)Gránulos de S (-)

Inicialmente dudamos entre Microthrix, Nostocoida l. (I) y Thiothrix, pero el

resultado de las tinciones, nos hizo decantarnos por la primera.


3

SITUACIÓN REAL:

Se trata de una muestra puntual de una industria láctea con un grave problema de bulking filamentoso. Como medida de control, se traslada parte del fango activado a otra línea y ésta queda abandonada.

La muestra analizada es el fango activado abandonado, en cuba sin oxigenación ni agitación. En consecuencia, nos encontramos con una microfauna escasa, formada exclusivamente por ciliados nadadores de reducido tamaño, propios de la situación de pésima estructuración del fango observada (lámina 1).

En cuanto a la identificación de la microfauna, han sido varias las especies identificadas por los participantes: Cyclidium glaucoma, Uronema sp., Uronema nigricans, Glaucoma sp., Tetrahymena pyriformis y Coleps sp.

Frecuentemente, una observación recogida en los partes de resultados ha sido la presencia de estructuras de resistencia o quistes de paredes muy delgadas, atribuidos en la mayoría de los casos a la presencia de protozoos ciliados (lámina 3).

Es cierto que algunos protozoos pueden segregar una cubierta resistente para formar un quiste. En la pared de algunos quistes se ha detectado celulosa y en las de otros quitina. Los quistes se forman en los protozoos de vida libre para superar fases de desecación del medio o en los parásitos para sobrevivir durante la transferencia de un huésped a otro a través del medio. Entre estos últimos se hallan las amebas, los ciliados y algunos flagelados, como Giardia, que son liberados con las heces desde el tubo digestivo; a pesar de la inactividad relativa del quiste, el núcleo puede dividirse produciéndose una rápida multiplicación tras la exquistación.

Ante esta observación, nos pusimos en contacto con dos expertas en la materia: las doctoras Pérez-Uz (Universidad Complutense de Madrid, área de Microbiología) y Serrano (Universidad de Sevilla, área de Ecología). Pese a la opinión generalizada de los participantes, estas especialistas nos advirtieron que el origen de estos quistes o estructuras de resistencia estaba en la población de metazoos y no en la de protistas. Sin embargo, el grupo que produjo estas estructuras (rotíferos, nematodos, etc.), no pudo ser identificado por dichas expertas, quienes hubieran necesitado un estudio más extenso de la muestra, objetivo que no había sido planteado para con la presente muestra.

Además de las anteriores, entre las estructuras de resistencia, se observaron huevos de helminto, algunos de los cuales están recogidos como imágenes en la lámina 2.

En cuanto a la identificación de bacterias filamentosas, podemos afirmar que los morfotipos más comúnmente observados han sido: Tipo 021N, Tipo 0675 y Tipo 1702 (lámina 2). En cualquier caso, es necesario recoger aquí la incertidumbre adoptada por la mayoría de analistas ante el gran deterioro de la muestra, quienes expusieron cierta reserva ante las identificaciones realizadas.


4

RECOPILACIÓN DE MICROFOTOGRAFÍAS

LÁMINA 1

→ ESTRUCTURA FLOCULAR Y OTRAS OBSERVACIONES

E GBS F GBS

D GBSC GBS

A GBS B GBS

Estructura flocular. A: Estructura flocular prácticamente ausente y estructura de resistencia (→). 200x, contraste de fases. B: Cúmulo de algas que confirma el estado de "parada" del sistema. 400x, contrastede fases. C: Estructura flocular difusa y estructura de resistencia. 200x, contraste de fases. D: Abundantes estructuras de resistencia en los espacios interfloculares (→). 100x, contraste de fases. E: Fibra orgánica. 400x, contraste de fases. F: Estructura flocular y filamentos en disolución (→). 200, contraste de fases.


5

→ ORGANISMOS FILAMENTOSOS Y OTRAS OBSERVACIONES LÁMINA 2

GBSBGBSA

C GBS D GBS

Organismos filamentosos y otras estructuras. A: Filamento Tipo 021N (probablemente), en vivo. 1000x, contraste de fases. B: Tipo 021N en tinción Gram. Obsérvese el abundante crecimiento disperso. 1000x, campo claro. C: Probablemente, filamentos del Tipo 1702 en tinción Gram. 1000x, campo claro. D: Probablemente, filamentos del Tipo 1702 en tinción PHB. 1000x, campo claro. E: Filamentos en tinción Neisser (reacción positiva), sin identificar. 1000x, campo claro. F y G: Huevo de Ascaris sp. 200x, contraste de fases.

F GBS

G GBS

E GBS


6

→ MICROFAUNA Y OTRAS OBSERVACIONES LÁMINA 3

A GBS B GBS

C

ZORNOZA

D

ZORNOZA

Microfauna. A: Cyclidium glaucoma en vivo. 400x, contraste de fases. B: Cyclidium glaucoma en frotis fijo(tinción Gram). 1000x, campo claro. C: Cyclidium glaucoma en vivo. 1000x, contraste de fases. D: Estructura deresistencia, probablemente correspondiente a algún metazoo (sin identificar).

Notas sobre Cyclidium sp.:

Células de pequeño tamaño (15-60 micrómetros), ovoides, con un polo anterior plano sinciliación. Presenta pocos cilios somáticos y menor ciliación en el tercio posterior de lacélula. Cilio caudal claro. Área oral amplia desde la parte anterior celular al tercio posteriorde la célula o debajo del ecuador celular con una membrana ondulante clara que extiende enforma de velo cuando se alimenta. Vacuola contráctil posterior. Filtrador bacterívoro.

Documents

Anexo INFORME INTERLABOS 1ªpartebibliotecagbs.com/archivos/anexo_fotografico_mayo2005.pdfENSAYO DE SEDIMENTABILIDAD EN PROBETA (11/V/05) ENSAYO DE SEDIMENTABILIDAD EN PROBETA INSTANTES