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Jayme Nunes de Souza Filho Amplificação e Clonagem: Novidades na Rotina da Molecular

Amplificação e Clonagem: NovidadesnaRotinadaMolecular curso_mol/PCR_Clonagem.pdf · Thermus aquaticus Taq DNA Polymerase - Enzima termoestável (94 kDa). - Replica DNA à 74°C

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Jayme Nunes de Souza Filho

Amplificação e Clonagem:Novidades na Rotina da Molecular

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Desenho e Síntese de Primers

• Escala de síntese de 25 nmol ( 3 ODs): R$ 2,10 / base• Oligos purificados por PAGE ou HPLC• Oligos antisense (S-oligos)• Oligos fluorescentes marcados na 5’, 3’ ou biotinilados• Sondas duplamente marcadas (fluoróforo e quencher)• Moléculas de RNA (RNAi)

• Todos os oligos são certificados por espectrometria de massa

www.idtdna.com

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Thermus aquaticusTaq DNA Polymerase

- Enzima termoestável (94 kDa). - Replica DNA à 74°C e exibe uma meia vida de 40 min à 95°C.

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PCR Master Mix

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GoTaq DNA Polymerase

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GoTaq DNA Polymerase

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GoTaq® Green Master Mix

• GoTaq Green Master Mix (2X) contains: – GoTaq– dNTPs– MgCl2

• Nuclease-Free Water

The performance of GoTaq DNA Polymerase in a Master Mix format.

Added convenience for Direct-To-Gel Applications.

GoTaqGreenMaster

Mix

Primers,Template,& Water

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Purificação de Produtos de PCR

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Enzimas e Sistemas para RT-PCR

AMV Reverse Transcriptase M-MLV Reverse Transcriptase

ImProm II Reverse Transcriptase

Access RT-PCR - One-Step AccessQuick RT-PCR - One-Step

Rnasin Ribonuclease Inhibitor

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ImProm II Reverse Transcriptase

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Enzimas e Sistemas para RT-PCR

AMV Reverse Transcriptase M-MLV Reverse Transcriptase

ImProm II Reverse Transcriptase

Access RT-PCR - One-Step AccessQuick RT-PCR - One-Step

Rnasin Ribonuclease Inhibitor

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Marcadores Moleculares de DNA

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Clonagem de Produtos de PCR (T-Vectors)

pGEM-T

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Plexor™ System for Quantitative Amplification - qPCR

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How does Plexor™ Work ? Use of IsoG & IsoC in Real-Time

• Oligo primer tagged at the 5’ end with novel base (iso-dC + Fluorophore as 6-FAM, JOE, HEX, ROX or other choice)

• Amplification master mix contains standard dNTPs and a dabcyl-labeled complementary iso-dGTP

• Dabcyl-iso-dGTP incorporated opposite iso-dC and quenches fluorescence

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Real Time PCR

• Existing methods– gain of fluorescence

Threshold

Fluor

esce

nce

Cycle

Threshold

Fluor

esce

nce

Cycle

Threshold

Fluor

esce

nce

Cycle

Threshold

Fluor

esce

nce

Cycle

• Plexor™ Method– quenching of fluorescence

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Wizard SV total RNA Isolation

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PolyAtracT mRNA Isolation

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www.promega.com www.idtdna.comwww.prodimol.com.br

TeleVendas: [email protected]@prodimol.com.brBioEstoque