Allergen-Specific IgG

Allergen-Specific IgG

IMMULITE® 2000 Allergen-Specific IgG

2 IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG (PIL2KGG-1, 2005-08-09)

Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Analyzer — for the quantitative measurement of allergen-specific IgG in human serum and plasma (EDTA or heparinized), as an aid in the clinical diagnosis of IgG-mediated allergic disorders. Catalog Numbers: L2KGG2 (200 tests) Test Code: SPG Color: Light Green

Summary and Explanation IgG antibodies against allergens appear to confer protection against hypersensitivity reactions. Immunotherapy patients often demonstrate an increase in specific IgG to the allergen used in treatment. An increase in specific IgG levels during immunotherapy is associated with a decrease in sensitivity to the suspect allergen.1-6,15,18 The degree of the immunological response is dependent on the therapy dosage schedule.17 Although healthy subjects and untreated allergic patients may demonstrate low levels of specific IgG antibody, patients undergoing immunotherapy with inhalant allergens have been reported to have demonstrated up to a 100-fold increase in specific IgG antibody levels after immunotherapy.7-11,16,19 Although an increase in serum levels of IgG occurs after treatment, there is no clear correlation with clinical improvement of the patient except in the case of hyposensitization therapy with bee venom. In patients that have undergone bee venom hyposensitization therapy, there is very good correlation between circulating levels of venom-specific IgG-blocking antibodies and clinical protection.6,12,13,15,18

Principle of the Procedure IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG is a solid-phase, two-step, chemiluminescent immunoassay that exploits liquid phase kinetics in a bead format.23,24 (U.S. Patent No. 4,778,751) It represents a significant advance over conventional methods relying on allergens attached to a solid-phase support, such as a paper disk. The allergens are covalently bound to a soluble polymer/co-polymer matrix, which in turn is labeled with a ligand. The use of

an amino acid co-polymer amplifies the amount of allergen that the matrix can support. Incubation Cycles: 2 × 30 minutes.

Specimen Collection The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the section on Alternate Sample Types for details on tubes that have been tested. Volume Required: 5 µL serum or plasma (EDTA or heparinized). Storage: 6–7 days at 2–8°C, or 6 months at –20°C.20,22 Automatic Predilution Factor: 100.

Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. Reagents: Store at 2–8°C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C.

IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG (PIL2KGG-1, 2005-08-09) 3

Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dL, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water.

Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay.

Allergen-Specific IgG Bead Pack (L2GG12) With barcode. 200 beads, coated with an anti-ligand. Stable at 2–8°C until expiration date. L2KGG2: 1 pack.

Allergen-Specific IgG Reagent Wedge (L2GGA2) With barcode. 11.5 mL alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to monoclonal murine anti-human IgG antibody in buffer. Stable at 2–8°C until expiration date. L2KGG2: 1 wedge. Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid.

Allergen-Specific IgG Adjustors (L2GGJ3, L2GGJ4) Two vials (Low and High), 2.0 mL each, of human IgG in a human serum/buffer matrix. Stable at 2–8°C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at –20°C. L2KGG2: 1 set. Before making an adjustment, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader.

Allergen-Specific IgG Adjustor Antibody (L2GGS1) 2.75 mL of liquid, ready-to-use ligand-labeled monoclonal murine anti-human IgG antibody. Stable at 2–8°C until expiration date. This reagent is placed in the Allergen Holder Wedge when running

the Specific IgG Adjustors. L2KGG2: 1 tube.

Allergen-Specific IgG Kit Controls (L2GGC1, L2GGC2) Two vials, 2 mL each of human IgG in a human serum/buffer matrix. Stable at 2–8°C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at –20°C. L2KGG2: 1 set. Refer to the control insert for concentration levels. Before use, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader.

Allergen-Specific IgG Control Antibody (L2GGS2) 2.75 mL of liquid, ready-to-use ligand-labeled monoclonal murine anti-human IgG antibody. Stable at 2–8°C until expiration date. This reagent is placed in the Allergen Holder Wedge when running the IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG Controls. L2KGG2: 1 tube.

IgG/IgM Sample Diluent ID1 (L2IGZ2) For the on-board dilution of patient samples. Concentrated (ready-to-use) nonhuman protein/buffer matrix, with preservative. Stable at 2–8°C for 30 days after opening, or 6 months (aliquotted) at –20°C. L2KGG2: 1 × 55 mL. Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a 16 × 100 mm test tube, so that the barcodes can be read by the on-board reader. L2IGZ2: 3 labels.

Kit Components Supplied Separately L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) L2AW1-3: Allergen Holder Wedges (barcoded) L2AW1: serially coded 1-33 L2AW2: serially coded 34-66 L2AW3: serially coded 67-99 L2ATC: Allergen Tube Caps L2ATS: Allergen Tube Septa


L2ZT: 250 Sample Diluent Test Tubes (16 x 100 mm) L2ZC: 250 Sample Diluent Tube Caps

Specific Allergens and Mixed Allergen Panels Individual allergens and mixed allergen panels in liquid phase, with preservative are packaged and sold in 40 and 20 test modules. (For catalog numbers, see the IMMULITE 2000 Product Catalog). Store refrigerated: stable at 2–8°C until the expiration date marked on the label. Do not use if signs of microbial contamination such as a cloudy appearance have been observed. Also Required Distilled or deionized water; test tubes.

Assay Procedure The IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG assay must be analyzed only in batch mode. Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Operator's Manual for: preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures.

Allergen Loading 1 Select an open position on the

Reagent Carousel through the software.

2 Replace caps on Allergen Tubes with septa. Do not invert the Allergen Tube once the septum is installed.

3 Place Allergen Tubes containing IMMULITE 2000 specific allergens, specific allergen panels, Specific IgG Adjustor Antibody, and/or Specific IgG Control Antibody in the Allergen Holder Wedge, with the barcodes facing the open side of the wedge.

4 Close the wedge and scan the allergen barcodes with the hand-held imaging scanner.

5 Once scanning is complete, load the Allergen Holder Wedge into the reagent carousel.

6 Repeat this procedure to load subsequent Allergen Holder Wedges.

The Allergen Holder Wedge must be scanned prior to installation into the instrument to ensure correct instrument operation. Removing or replacing any vials within the allergen wedge will require rescanning of the wedge with the barcode scanner to update the allergen information. Recommended Adjustment Interval: 2 weeks. Quality Control Samples: The controls supplied with the kit should be used as quality control material to monitor the assay performance.

Expected Values A total of 198 samples from presumed healthy individuals were tested with 8 specific allergens using the IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG assay. The tabulated results are presented in a graph. (See “Expected Values” graph.)

Limitations A definitive clinical diagnosis should not be made solely on the basis of an in vitro allergen-specific IgG result. Diagnosis should be made by the physician only after all clinical and laboratory findings have been evaluated.21

Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings.

Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed in mg/L. (Unless


otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Reportable Range: 2 – 200 mg/L (WHO 1st IRP 67/86). Analytical Sensitivity: 1 mg/L. Precision: Samples were processed in duplicate over the course of 20 days, two runs per day, for a total of 40 runs and 80 replicates. (See “Precision” table.) Bilirubin: Presence of conjugated and unconjugated bilirubin in concentrations up to 200 mg/L has no effect on results, within the precision of the assay. Hemolysis: Presence of hemoglobin in concentrations up to 522 mg/dL has no effect on results, within the precision of the assay. Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 3,000 mg/dL has no effect on results, within the precision of the assay. Alternate Sample Type: To assess the effect of alternate sample types, blood was collected from 20 volunteers into plastic plain serum, heparinized, EDTA and Becton Dickinson SST® vacutainer tubes. All samples were assayed by the IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG procedure, with the following results. (Heparin Plastic) = 0.99 (Serum Plastic) – 1.30 mg/L r = 0.999

(EDTA Plastic) = 1.00 (Serum Plastic) – 1.60 mg/L r = 0.998

(SST Plastic) = 1.05 (Serum Plastic) – 2.21 mg/L r = 0.998

Means: 55 mg/L (Serum Plastic) 53 mg/L (Heparin Plastic) 54 mg/L (EDTA Plastic) 56 mg/L (SST Plastic)

Method Comparison: Samples collected from two individuals who had undergone immunotherapy with I1 (honey bee) and I3 (yellow jacket), respectively, were assayed using the IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG and Kit A. The results obtained at two different sample occasions are presented in two graphs. (See “Method Comparison” graphs.)

References 1) Lessof MH, Sobotka AB, Lichtenstein LM. Effects of passive antibody venom anaphylaxis. J Hopkins Med 1978;142:1. 2) Hunt KJ, Valentine MD, Sobotka AK, Renton AW, AmodioFJ, Lichtenstein LM. A controlled trial of immunotherapy in insect hypersensitivity. N Engl J Med 1978;299:157. 3) Golden DBK, Valentine MD, Sobotka AK, Lichtenstein LM. Regimens of Hymenoptera venom immunotherapy. Ann Intern Med 1980;92:620. 4) Urbanek R, Krauss U, Ziupa J, Smedegård G. Venom-specific IgE and IgG antibodies as a measure of the degree of protection in insect-sting-sensitive patients. Clin Allergy 1983;13:229. 5) Barrett JT. Textbook of immunology: an introduction to immunochemistry and immunobiology, 4th edition. St. Louis: CV Mosby, 1983: 380-87. 6) Roitt I, Brostoff J, Male D. Immunology, 3rd edition. St. Louis: CV Mosby, 1993. 7) Gleich JG, Zimmermann EM, Henderson LL, Yunginger JW. Effect to immunotherapy on immunoglobulin E and immunoglobulin G antibodies to ragweed antigens: a six-year prospective study. J Allergy Clin Immunol 1982;70:261. 8) Nelson HS. Long-term immunotherapy with aqueous and aluminum precipitated grass extracts. Ann Allergy 1980;45:133. 9) Ohman JL, Marsh DG, Goldman M. Antibody response following immunotherapy with cat. J Allergy Clin Immunol 1982;69:320. 10) Creticos PS, Van Metre TE, Mardiney MR, Rosenberg GL, Norman PS, Adkinson NF. Dose response of IgE and IgG antibodies during ragweed immunotherapy. J Allergy Clin Immunol 1984;73:94. 11) Nakagawa T, Kozeki H, Katagiri J, Fujita Y, Yamashita N, Miyamoto T, Skvaril F. Changes of house dust mite-specific IgE, IgG and IgG subclass antibodies during immunotherapy in patients with perennial rhinitis. Int Archs Allergy Appl Immun 1987;82:95. 12) Ballow M, Medelson L, Donshik PC, Sparks K. IgG specific antibodies to rye grass and ragweed antigens in patients with vernal conjunctivitis. J Allergy Clin Immunol 1982;69(1)Suppl:114. 13) Prahl P, Skov P, Minuva V, Weeke B, Nexø B. Estimation of affinity and quality of human antigen specific serum IgG (blocking antibodies). Allergy 1981;36:555. 14) National Committee for Clinical Laboratory Standards. Procedures for the collection of diagnostic blood specimens by venipuncture; approved standard. 4th ed. NCCLS Document H3-A4, Wayne, PA: NCCLS, 1998. 15) Golden DBK, Valentine MD. Allergen-


specific IgG antibody measurements in the management of immediate hypersensitivity to hymenoptera venoms. J Clin Immunoassay 1983;6(1):172. 16) Patterson R, Grammer LC, Shaughnessy MA. Immunotherapy: parameters of assessment. J Allergy Clin Immunol 1985;76(2):394. 17) Kemeny DM, Urbanek R, Amlot PL, Ciclitira PJ, Richards D, Lessof MH. Sub-class of IgG in allergic disease 1. IgG sub-class antibodies in immediate and non-immediate food allergy. Clin Allergy 1986;16:571. 18) Ferrante A, Mocatta F, Goh DHB. Changes in IgG and IgE antibody levels to bee venom during immunotherapy. Int Archs Allergy Appl Immunol 1986;81:284. 19) Deards MJ, Standring R, Moran DM. Human IgG antibody responses to grass pollen antigens: effects of immunotherapy and comparison of serum and secretory profiles. Int Archs Allergy Appl Immunol 1986;80:253. 20) Tietz NW, editor. Clinical guide to laboratory tests. 3rd ed. Philadelphia: WB Saunders, 1995: 358. 21) Bloch K, Salvaggio J. Use and interpretation of diagnostic immunologic laboratory tests. JAMA 1982;246:2734-58. 22) Hokoma Y, Nakamura RM. Immunology and immunopathology basic concepts. Little, Brown and Company, 1982: 35-45. 23) El Shami AS, Alaba O. Liquid-phase in vitro allergen-specific IgE assay with in situ immobilization. Adv Biosci 1989;74:191–201. 24) Alaba O, El Shami AS. Evaluation of non-specific IgE binding: comparison of two in vitro allergen assays. Adv Biosci 1989;74:203–14.

Technical Assistance Available outside the United States only. For technical assistance, contact your National Distributor. The Quality System of Diagnostic Products Corporation is registered to ISO 13485:2003.

Tables and Graphs

Precision (mg/L)

Within-Run Total

Mean SD CV SD CV

9.4 1.21 12.9% 1.78 18.9% I3

59 3.09 5.2% 5.88 10.0%

9.5 0.88 9.3% 1.46 15.4% M6

21 1.39 6.6% 1.91 9.1%

7.1 0.89 12.5% 1.47 20.7% F14

19.6 1.19 6.1% 2.19 11.2%

10.7 1.25 11.7% 1.52 14.2% D1

16.7 1.12 6.7% 1.96 11.7%

11.0 1.45 13.2% 2.58 23.5% F4

79 5.91 7.5% 8.81 11.2%

12.8 1.08 8.4% 1.62 12.7% D2

22 1.35 6.1% 2.37 10.8%

16.2 1.27 7.8% 1.72 10.6% I1

107 4.36 4.1% 6.85 6.4%

Method Comparison

05

1015202530354045

1 2

occasion number

mg/

L I3-IML2000I3-Kit A

0

10

20

30

40

50

60

70

80

1 2

occasion number

mg/

L I1-IML2000I1-Kit A


Expected Values

0

50

100

150

200

250

mg/

LI1 I3 F76 F77 F78 D1 D2 G6

Specific Allergens

Deutsch

IMMULITE 2000 Allergen-spezifisches IgG Anwendung: Zur in vitro-Diagnostik unter Verwendung des IMMULITE 2000 Systems – zur quantitativen Bestimmung von Allergen-spezifischem IgG in Humanserum und Plasma (EDTA oder Heparin), als Hilfe in der klinischen Diagnosestellung IgG-vermittelter Allergien. Artikelnummer: L2KGG2 (200 Tests) Testcode: SPG Farbe: hellgrün

Klinische Relevanz IgG Antikörper gegen spezifische Allergene scheinen vor Überempfindlichkeitseaktionen zu schützen. Patienten zeigen unter Desensibilisierung einen Anstieg des spez. IgG-Titers gegen das therapierte Allergen. Es besteht ein Zusammenhang zwischen steigendem spez. IgG-Titer während einer Desensibilisierung und einer schwächer werdenden allergischen Reaktion gegen das Allergen.1-6,15,18 Die Stärke der Immunantwort ist abhängig von der Konzentration der Allergengabe während der Therapie. 17 Zwar können bei gesunden und nicht therapierten Allergikern geringe Spiegel an spez. IgG-Antikörpern nachgewiesen werden, jedoch bei immuntherapierten Patienten nach Beednigung der spezifischen Therapie ein bis zu 100-facher Anstieg des spez. IgG-Titers beobachtet werden.7-11,16,19 Obwohl es meist zu einem Anstieg von IgG-

Antikörpern unter Immuntherapie kommt, gibt es keine eindeutige Korrelation zwischen dem IgG-Titer und den verbesserten klinischen Symptomen außer im Falle einer Hyposensibilisierungstherapie gegen Bienengift.6,12,13,15,18

Methodik IMMULITE 2000 Allergen-spezifisches IgG ist ein 2-Schritt-, Chemilumineszenz-Enzymimmunoassay (Flüssigphase-Kinetik) im Kugelformat23,24 (U.S Patent Nr. 4 778 751). Diese Technologie stellt einen großen Fortschritt gegenüber konventionellen Methoden dar, die Allergene an eine Festphase, wie beispielsweise an Papierscheiben gekoppelt, nutzen. Die Allergene sind an eine lösliche polymer/copolymer Matrix kovalent gebunden, die wiederum mit einem Liganden verbunden ist. Mit Hilfe einer Aminosäure Kopolymers können mehrere Allergene molekular an die Matrix gekoppelt werden, was einen Verstärkereffekt hat. Inkubationszyklen: 2 × 30 Minuten.

Probengewinnung Der Einsatz einer Ultrazentrifuge wird zur Klärung von lipämischen Proben empfohlen. Bei hämolysierten Proben besteht die Möglichkeit einer unsachgemäßen Handhabung vor Eintreffen im Labor, daher sind die Ergebnisse zurückhaltend zu interpretieren. Die Zentrifugation der Serumproben vor dem völligen Abschluss der Gerinnung kann zu Fibringerinnseln führen. Um fehlerhaften Analysenergebnissen infolge von Gerinnseln vorzubeugen, ist sicherzustellen, dass die Gerinnung vor der Zentrifugation der Proben vollständig abgeschlossen ist. Insbesondere Proben von Patienten unter Antikoagulantien-therapie können eine verlängerte Gerinnungszeit aufweisen. Blutentnahmeröhrchen von verschiedenen Herstellern können differierende Werte verursachen. Dies hängt von den verwendeten Materialien und Additiven (Gel oder physische Trennbarrieren, Gerinnungsaktivatoren und /oder


Antikoagulantien) ab. Der IMMULITE 2000 Allergen-spezifisches IgG Assay ist nicht mit allen möglichen Röhrchenvariationen ausgetestet worden. Details der getesteten Röhrchenarten sind dem Kapitel "Alternative Probenarten" zu entnehmen. Erforderliches Volumen: 5 µl Serum oder Plasma (mit EDTA oder Heparin). Lagerung: 6–7 Tage bei 2–8°C, oder 6 Monate bei –20°C.20,22

Faktor für automatische Vorverdünnung: 100.

Hinweise und Vorsichtsmaßnahmen Zur In-vitro-Diagnostik. Reagenzien: Bei 2–8°C lagern. Unter Einhaltung der geltenden gesetzlichen Vorschriften entsorgen. Die generell geltenden Vorsichtsmaßnahmen sind einzuhalten und alle Komponenten als potenziell infektiös zu behandeln. Alle aus menschlichem Blut gewonnenen Materialien wurden auf Syphilis, Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2, Hepatitis-B-Oberflächenantigen und Hepatitis-C-Antikörper untersucht und negativ befundet. Bestimmten Komponenten wurde Natriumazid (<0,1 g/dl) hinzugefügt. Um die Bildung von explosiven Metallaziden in Blei- und Kupferrohren zu verhindern, sollten die Reagenzien nur zusammen mit großen Wassermengen in die Kanalisation gespült werden. Chemilumineszenz-Substrat: Kontamination und direkte Sonneneinstrahlung vermeiden (Siehe Packungsbeilage). Wasser: Destilliertes oder deionisiertes Wasser verwenden.

Im Lieferumfang enthalten Die Bestandteile der Testpackung sind aufeinander abgestimmt. Die Barcode-Aufkleber auf der Innenverpackung werden zur Testdurchführung gebraucht.

Allergen-spezifisches IgG Kugel-Container (L2GG12) Der barcodierte Kugel-Container enthält 200 Kugeln, beschichtet mit Anti-Ligand. Bei 2–8°C bis zum Verfallsdatum haltbar. L2KGG2: 1 Container.

Allergen-spezifisches IgG Reagenzbehälter (L2GGA2) Barcodiert. 11,5 ml mit alkalischer Phosphatase des Rindes markierter monoklonaler anti Human-IgG Mausantikörper in Puffer. Bei 2–8°C bis zum Verfallsdatum haltbar. L2KGG2: 1 Behälter. Vor Gebrauch den Aufkleber an der Perforation abreißen, ohne dabei die Barcodierung zu beschädigen. Die Folie von der Oberseite des Containers entfernen. Den Schiebedeckel nach unten in die Führung des Reagenziendeckels einrasten lassen.

Allergen-spezifisches IgG Kalibratoren (L2GGJ3, L2GGJ4) Zwei Fläschchen (niedrig und hoch), à 2 ml, mit humanem IgG in einer humanen Serum/Puffer-Matrix. Nach dem Öffnen 30 Tage bei 2–8°C, sonst 6 Monate (portioniert) bei –20°C haltbar. L2KGG2: 1 Set. Vor der Kalibrierung die entsprechenden Aufkleber (dem Kit beiliegend) auf Röhrchen kleben, so dass die Barcodes vom Barcodereader des Systems gelesen werden können.

Allergen-spezifisches IgG Kalibrator Antikörper (L2GGS1) 2,75 ml mit Ligand markiertem, monoklonalem, anti Human-IgG Mausantikörper (flüssig und gebrauchsfertig). Bei 2–8°C bis zum Verfallsdatum haltbar. Zur Kalibration in einem Allergenhalter zu platzieren. L2KGG2: 1 Röhrchen.

Allergen-spezifische IgG Kit-Kontrollen (L2GGC1, L2GGC2) 2 Fläschchen, à 2 ml, mit humanen IgG-Antikörpern in einer humanen Serum Puffermatrix. 30 Tage nach dem Öffnen bei 2–8°C haltbar, oder für 6 Monate (portioniert) bei –20°C. L2KGG2: 1 Set. Aktuelle Kontrollwerte entnehmen Sie bitte dem Informationsblatt.


Kleben Sie den im Kit enthaltenen vorgedruckten Barcode auf das Röhrchen mit der Kontrolle, so dass er vom Barcodereader im Gerät gelesen werden kann.

Allergen-spezifische IgG Kontroll-Antikörper (L2GGS2) 2,75 ml mit Liganden-markiertem monoklonal, Maus antihumaner-IgG Antikörper (flüssig und gebrauchsfertig). Bei 2–8°C bis zum Verfallsdatum haltbar. Zur Kontrolle in einem Allergenhalter zu platzieren. L2KGG2: 1 Röhrchen.

IgG/IgM– Probenverdünnungsreagenz ID1 (L2IGZ2) Zum automatischen Verdünnen der Patientenproben. Nichthumane Protein/Puffermatrix (konzentriert, gebrauchsfertig) mit Konservierungsmittel. 30 Tage nach dem Öffnen bei 2–8°C oder 6 Monate bei –20°C haltbar. L2KGG2: 1 × 55 ml. Zum Einsatz des Verdünnungsreagenz (Diluents) werden Barcode Etiketten mitgeliefert. Vor Verwendung ein entsprechendes Etikett so auf ein 16 × 100 mm Teströhrchen kleben, dass es vom eingebauten Barcode Reader gelesen werden kann. L2IGZ2: 3 Etiketten.

Separat erhältliche Testsystem-Komponenten L2SUBM: Chemilumineszenz-Substratmodul L2PWSM: Waschmodul L2KPM: Reinigungsmodul LRXT: Einweg-Reaktionsgefäße L2AW1-3: Allergenhalter (barcodiert) L2AW1: Allergenhalter Nr. 1-33 L2AW2: Allergenhalter Nr. 34-66 L2AW3: Allergenhalter Nr. 67-99 L2ATC: Allergen Standardverschluss L2ATS: Allergen Septum (zum pipettieren) L2ZT: 250 Probenverdünnungs-röhrchen L2ZC: 250 Deckel für die Probenverdünnungsröhrchen

Spezifische Einzelallergene und Gruppenallergene (Panelallergene) Flüssigphasen-Einzelallergene und -Allergenmischungen, mit Konservierungsstoffen, werden als 40er

und 20er Testeinheiten verpackt und verkauft. (Katalognummer siehe IMMULITE 2000 Produktkatalog). Gekühlt bei 2–8°C bis zum Verfallsdatum auf der Packung haltbar. Bei Anzeichen von mikrobieller Kontamination (Trübung) nicht mehr verwenden. Ebenfalls benötigt Destilliertes bzw. deionisiertes Wasser; Teströhrchen.

Testdurchführung Der IMMULITE 2000 Allergen-spezifisches IgG Assay kann nur batchweise verwendet werden. Für eine optimale Funktion des Gerätes ist unbedingt zu beachten, dass die Wartungen, wie im IMMULITE 2000-Handbuch beschrieben, regelmäßig durchgeführt werden. Die Angaben zur Vorbereitung, Einrichtung, Kalibration, Test- und Qualitätskontrollverfahren entnehmen Sie bitte dem IMMULITE 2000 Handbuch.

Allergenbeladung 1 Wählen Sie eine freie Position auf

dem Reagenzienkarussell mit Hilfe der Software.

2 Tauschen Sie den Standardverschluss des Allergens gegen das Septum aus. Das Allergen mit dem Septum nicht schwenken.

3 Platzieren Sie die Allergenröhrchen mit: IMMULITE 2000 spez. Allergenen, spez. Allergenpanels, spez. IgG-Adjuster-Allergen und / oder spez. IgG-Kontroll-Allergen im Allergenhalter. Die Barcodes der Röhrchen sollten dabei im Allergenhalter lesbar sein.

4 Schließen Sie den Allergenhalter und scannen Sie die Allergenbarcodes mit Hilfe des Hand-Scanners ein.

5 Nach Beendigung des Scan-Vorgangs setzen Sie den Allergenhalter in das Reagenzienkarussell.

6 Wiederholen Sie diesen Vorgang um weitere Allergenhalter mit Allergenen zu platzieren.

Bitte beachten Sie, dass der Allergenhalter vor dem Einsetzen in das Reagenzienkarussell gescannt werden muss um eine korrekte Abarbeitung zu


garantieren. Das Entfernen oder Ersetzen jeglicher Röhrchen im Allergenhalter erfordert ein erneutes Scannen des Allergenhalters mit dem Barcodescanner, um die aktuelle Platzierung der Allergene zu gewährleisten. Empfohlenes Kalibrationsintervall: 2 Wochen. Proben zur Qualitätskontrolle: Die im Lieferumfang enthaltene(n) Kontrolle(n) dient/dienen zur Qualitätskontrolle für die Überwachung des Testsystems.

Referenzwerte Insgesamt 198 Proben von offensichtlich Gesunden wurden mit 8 spezifischen Allergenen im IMMULITE 2000 Allergen-spezifisches IgG gemessen. Die Ergebnisse sind in einer Grafik dargestellt. (Siehe Grafik „Expected Values“.)

Grenzen der Methode Eine abschließende klinische Diagnose sollte sich nicht ausschließlich auf die Ergebnisse des in-vitro Nachweises allergen-spezifischer IgG-Anikörper stützen, sondern vielmehr alle klinischen Befunde und Laborergebnisse einbeziehen.21 Heterophile Antikörper in Humanseren können mit Immunglobulinen aus den Assaykomponenten reagieren und Interferenzerscheinungen in vitro Immunoassays verursachen. (Clin. Chem. 1988:34:27-33) Proben von Patienten, die häufig mit Tier- bzw. Tierserumprodukten zu tun haben, können die erwähnten Interferenzen verursachen und zu anomalen Resultaten führen. Die verwendeten Reagenzien sind so konzipiert, dass das Risiko einer Interferenz mit den zu messenden Proben minimiert ist. Dennoch können potentiell Interaktionen zwischen seltenen Seren und den Testkomponenten auftreten. Zu diagnostischen Zwecken sollten die mit dem Assay erhaltenen Ergebnisse immer in Kombination mit der klinischen Untersuchung, der Patientenanamnese und anderen Befunden gesehen werden.

Leistungsdaten Siehe Tabellen und Grafiken mit repräsentativen Daten für den Assay. Ergebnisse sind im mg/l dargestellt.

Sofern nicht anders angegeben, wurden hierfür Serumproben in Röhrchen ohne Geltrennung und Gerinnungshilfen eingesetzt. Messbereich: 2 – 200 mg/l (WHO 1st IRP 67/86). Analytische Sensitivität: 1 mg/l. Präzision: Proben wurden innerhalb von 20 Tagen mit jeweils zwei Testansätzen in Doppelbestimmung gemessen (insgesamt 40 Bestimmungen und 80 Einzelmessungen. (Siehe Tabelle „Precision.“) Bilirubin: Unkonjugiertes und konjugiertes Bilirubin hat in Konzentrationen bis zu 200 mg/l keinen Einfluss auf die Ergebnisse, der größer als die Impräzision des Assays selbst ist. Hämolyse: Hämoglobin hat in Konzentrationen bis zu 522 mg/dl keinen Einfluss auf die Ergebnisse, der größer als die Impräzision des Assays selbst ist. Lipämie: Triglyceride hat in Konzentrationen bis zu 3 000 mg/dl keinen Einfluss auf die Ergebnisse, der größer als die Impräzision des Assays selbst ist. Alternativer Probentyp: Um die Auswirkungen von verschiedenen Probenarten zu untersuchen, wurde Blut von 20 Freiwilligen in Plastikröhrchen ohne Zusätze, in Heparin-, EDTA- und Becton Dickinson SST® Vacutainer-Röhrchen gesammelt. Alle Proben wurden mit dem Allergen-spezifisches IgG Verfahren für den IMMULITE 2000 getestet, mit den folgenden Ergebnissen. (Heparin Plastik) = 0,99 (Serum Plastik) – 1,30 mg/l r = 0,999

(EDTA Plastik) = 1,00 (Serum Plastik) – 1,60 mg/l r = 0,998

(SST Plastik) = 1,05 (Serum Plastik) – 2,21 mg/l r = 0,998

Mittelwerte: 55 mg/l (Serum Plastik) 53 mg/l (Heparin Plastik) 54 mg/l (EDTA Plastik) 56 mg/l (SST Plastik)

Methodenvergleich: Proben von 2 Patienten, die einer Immuntherapie mit I1 (Biene) and I3 (Wespe) unterzogen wurden, wurden mit IMMULITE 2000 Allergen-spezifisches IgG und Kit A


gemessen. Die bei zwei Zeitpunkten ermittelten Werte sind in zwei Grafiken dargestellt. (siehe Grafiken „Method comparison“.)

Anwendungsberatung Bei Rückfragen wenden Sie sich bitte an Ihre DPC Niederlassung. Das Qualitätssystem der Diagnostic Products Corporation ist nach ISO 13485:2003 registriert.

Español

IMMULITE 2000 IgG Alérgeno Específica Utilidad del análisis: Para el diagnóstico in vitro con el Analizador IMMULITE 2000 – para la medición cuantitativa de IgG alérgeno específica en plasma (EDTA o heparinizado) o suero humanos, como ayuda en el diagnóstico clínico de trastornos alérgicos mediados por IgG. Número de Catálogo: L2KGG2 (200 tests) Código del Test: SPG Color: Verde claro

Resumén y Explicación del Test Los anticuerpos IgG contra alergenos parecer conferir protección frente a las reacciones de hipersensibilidad. Los pacientes sometidos a inmunoterapia muestran a menudo una elevación en el nivel de IgG específico para el alergeno usado en el tratamiento. Una elevación de los niveles de IgG durante la inmunoterapia está asociado con una disminución de la sensibilidad frente al alergeno sospechoso.1-6,15,18 El grado de respuesta inmunológica depende del programa de dosis de la terapia.17 Si bien individuos sanos y pacientes alérgicos no tratados muestran bajos niveles de anticuerpo IgG específico, los pacientes sometidos a inmunoterapia con alergenos inhalantes han mostrado un aumento de los niveles de IgG específico de hasta 100 veces después de la inmunoterapia. 7-11,16,19 Si bien se produce una elevación de los niveles de IgG en suero después del tratamiento, no existe una relación clara con la mejora clínica del paciente excepto en el caso de la terapia de

hiposensibilización con veneno de abeja. En los pacientes que han sido sometidos a una terapia de hiposensibilización con veneno de abeja, existe una relación importante entre los niveles de anticuerpos bloqueantes IgG específico y la protección clínica.6,12,13,15,18

Principio del Test IMMULITE 2000 IgG Alérgeno Específica es un análisis enzimoinmunométrico quimioluminiscente en fase sólida, en dos pasos, que se basa en cinéticas en fase líquida en formato de bola23,24 (U.S. Patent No. 4 778 751). Representa un avance significativo sobre los métodos convencionales basados en la unión de los alérgenos a un soporte sólido, como los disco de papel. Los alérgenos se unen covalentemente a una matriz polímero/copolímero soluble, la cual a su vez está marcada con un ligando. El uso de un copolímero aminoacídico aumenta la cantidad de alérgeno que puede soportar la matriz. Ciclos de incubación: 2 × 30 minutos.

Recogida de la muestra Se recomienda el uso de una ultracentrífuga para aclarar las muestras lipémicas. Las muestras hemolizadas podrían indicar una mala manipulación de la muestra antes de ser recibida por el laboratorio; en este caso, los resultados deben interpretarse con precaución. La centrifugación de las muestras de suero antes de que se forme completamente el coagulo puede ocasionar la presencia de fibrina. Para evitar resultados erróneos debidos a la presencia de fibrina, asegurarse que se ha formado el coagulo completamente antes de centrifugar las muestras. Algunas muestras, particularmente aquellas de pacientes sometidos a terapia anticoagulante, pueden requerir mayor tiempo de coagulación. Los tubos de extracción de distintos fabricantes pueden generar valores diferentes, dependiendo del material del tubo y de los aditivos, incluyendo barreras de gel o barreras físicas, activadores de la coagulación y/o anticoagulantes. El ensayo IgG alérgeno específica


IMMULITE 2000 no ha sido analizado con todos los distintos tipos de tubos. Para obtener detalles sobre los tipos tubos que se han analizado, consulte la sección de Tipos de Muestras Alternativos. Volumen Requerido: 5 µl de suero o plasma (heparinizado o con EDTA). Conservación: 6–7 días a 2–8°C, o 6 meses a –20°C.20,22

Factor de Predilucion automatico: 100.

Advertencias y Precauciones. Para uso diagnóstico in vitro. Reactivos: Mantener a 2–8°C. Desechar de acuerdo con las normas aplicables. Siga las precauciones universales y manipule todos los componentes como si fueran capaces de transmitir agentes infecciosos. Los materiales derivados de sangre humana han sido analizados y son negativos para sífilis; para anticuerpos frente al HIV 1 y 2; para el antígeno de superficie de hepatitis B y para los anticuerpos de hepatitis C. Se ha usado Azida sodica, en concentraciones menores de 0,1 g/dl, como conservante. Para su eliminacion, lavar con grandes cantidades de agua para evitar la constitucion de residuos de azidas metalicas, potencialmente explosivas, en las cañerías de cobre y plomo. Substrato quimioluminiscente: Evitar la contaminación y exposición a la luz directa del sol. (Ver el prospecto). Agua: Usar agua destilada o desionizada.

Materiales Suministrados Los componentes representan un juego completo. Las etiquetas incluidas en la caja son necesarias para el ensayo.

Cartucho de Bolas de IgG alérgeno específica (L2GG12) Con código de barras. 200 bolas, recubiertas con anti-ligando. Estable a 2–8°C hasta la fecha de caducidad. L2KGG2: 1 cartucho.

Vial de Reactivos de IgG alérgeno específica (L2GGA2) Con código de barras. 11,5 ml de Fosfatasa alcalina (de intestino de

ternera) conjugada con anticuerpo monoclonal murino anti-IgG humana en una solución tampón. Estable a 2–8°C hasta la fecha de caducidad. L2KGG2: 1 vial. Antes de usar, cortar la parte superior de la etiqueta en la perforación, sin dañar el código de barras. Quitar el precinto del orificio del vial; encajar la cubierta deslizante en las rampas de la tapa del reactivo.

Ajustadores de IgG alérgeno específica (L2GGJ3, L2GGJ4) Dos viales (bajo y alto) que contienen 2,0 ml de IgG humana en suero humana matriz en solución tampón, con conservante. Estable a 2–8°C durante 30 días después de su apertura, o durante 6 meses (alicuotados) a –20°C. L2KGG2: 1 juego. Antes de hacer un ajuste, colocar las etiquetas de las alicuotas apropiadas (suministradas con el kit) sobre tubos de ensayo, de tal forma que los códigos de barras puedan ser leídos por el lector.

Anticuerpo Ajustador de IgG alérgeno específica (L2GGS1) 2,75 ml de líquido cada uno de anticuerpo monoclonal murino anti-IgG humana marcado con ligando, listo para su uso. Estable a 2–8°C hasta la fecha de caducidad. Este vial es colocado en la cuña de alergenos cuando se procesan los ajustadores de IgG específica del ensayo. L2KGG2: 1 tubo.

Controles del kit IgG alérgeno específica (L2GGC1, L2GGC2) Dos viales que contienen 2 ml cada uno de IgG humana en una matriz de suero humano en solución tampón. Estable a 2–8°C durante 30 dias después de su apertura, o durante 6 meses (alicuoteados) a –20°C. L2KGG2: 1 juego. Consultar el protocolo del control para ver las concentraciones de referencia de cada nivel. Antes de usar, colocar las etiquetas de las alicuotas apropiadas (suministradas con el kit) sobre tubos de ensayo, de tal forma que los códigos de barras puedan ser leídos por el lector.


Anticuerpo Control IgG alérgeno epecífica (L2GGS2) 2,75 ml de líquido anticuerpo monoclonal murino anti-IgG humana marcado con ligando, listo para su uso. Estable a 2–8°C hasta la fecha de caducidad. Este vial es colocado en la cuña de alergenos cuando se procesan los controles de IMMULITE 2000 Específico de Alérgeno IgG. L2KGG2: 1 tubo

Diluyente de IgG/IgM ID1 (L2IGZ2) Para la dilución de las muestras del paciente que van a analizarse. Matriz proteica no humana en solución tampón concentrado (listo para usarse), con conservante. Estable a 2–8°C durante 30 días después de abrise o estable a –20°C durante 6 meses. L2KGG2: 1 × 55 ml. Se suministran etiquetas con códigos de barras para usarse con este diluyente. Antes de uso, colocar la etiqueta con el código de barras en un tubo de ensayo de 16 × 100 mm, así los códigos de barras pueden ser identificados por el lector del instrumento. L2IGZ2: 3 etiquetas

Compoenentes del kit que se suministran por separado L2SUBM: Substrato Quimoluminiscente L2PWSM: Módulo de Lavado de Sonda L2KPM: Kit de limpieza de sonda LRXT: Tubos de reacción (desechables) L2AW1-3: Cuñas para colocar alergenos (con codigo de barras) L2AW1: codigos 1-33 L2AW2: codigos 34-66 L2AW3: codigos 67-99 L2ATC: Tapones para alergenos. L2ATS: Septum para alergenos L2ZT: 250 Tubos De Prueba Del Diluyente De la Muestra (16 x 100 mm) L2ZC: 250 Casquillos Del Tubo Del Diluyente De la Muestra

Alérgenos Específicos y Paneles de Mezcla de Alérgenos. Alérgenos específicos y paneles de mezclas de alérgenos en fase líquida, con conservante, se envasan y se venden en módulos de 20 y 40 tests. (Para referencias, vea el catálogo de productos de IMMULITE 2000). Almacenar refrigerado: estable a 2–8ºC hasta la fecha de caducidad marcada en la

etiqueta. No utilizar si muestra signos de contaminación bacteriana, tales como turbidez. También necesarios: Agua destilada o desionizada, tubos de ensayo.

Procedimiento de Ensayo El ensayo IMMULITE 2000 IgG alérgeno específica debe ser analizado solo en forma de lotes (modo batch). Aviso: para obtener el funcionamiento óptimo, es importante realizar todos los procedimientos del mantenimiento general según lo definido en el manual del operador de IMMULITE 2000. Consulte el Manual del operador de IMMULITE 2000 para: la preparación, instalación, ajuste, ensayo y procedimientos de control de calidad.

Carga de Alérgenos. 1 Seleccionar una posición libre en el

Carrusel de Reactivos a través del software.

2 Reemplazar los tapones de los tubos de alergenos por los septum. No invertir el tubo de alergeno una vez que el septum ha sido colocado.

3 Colocar los Viales de Alérgenos que contienen alérgenos específicos, panéles de alérgenos específicos, anticuerpo Ajustador IgG Específica, y/o anticuerpo Control IgG Específica, en el Soporte de Viales de Alérgenos, con los códigos de barras orientados hacia el lado abierto del soporte.

4 Cerrar el Soporte de Viales de Alérgenos y escanear los códigos de barras de los alérgenos con el lector de códigos de barras manual.

5 Una vez que la lectura de códigos de barras se ha completado, cargar el Soporte de Viales de Alérgenos en el carrusel de reactivos.

6 Repetir este procedimiento para cargar los siguientes Soportes de Viales de Alérgenos.

El Soporte de Viales de Alérgenos debe ser escaneado antes de colocarlo en el carrusel de reactivos, para asegurar una correcta operación del instrumento. Quitar o sustituir un Vial del Soporte de Viales de Alérgenos requiere volver a escanear el


soporte con el lector de códigos de barras, para actualizar la información de los alérgenos. Intervalo de ajuste recomendado: 2 semanas. Muestras de Control de calidad: El/los control(es) suministrados con el kit deben utilizarse como control de calidad con el objetivo de controlar el funcionamiento del ensayo

Valores esperados Un total de 198 muestras procedentes de individuos aparentemente sanos fueron analizadas con el ensayo IMMULITE 2000 IgG alergeno especifica frente a 8 alregenos específicos. Los resultados tabulados se presentan en un gráfico. (Véase el gráfico "Expected Values".)

Limitaciones Un diagnóstico clínico definitivo no debe hacerse sólo en base a los resultados in vitro de IgG Alérgeno-Específica. El médico debe dar el diagnóstico después de que todas las observaciones clínicas y de laboratorio hayan sido consideradas.21 Los anticuerpos heterofílicos en el suero humano pueden reaccionar con las inmunoglobulinas de los componentes del ensayo provocando interferencias con los inmunoanálisis in vitro. [Ver Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Las muestras de los pacientes que frecuentemente están expuestos a animales o a productos séricos animales pueden presentar este tipo de interferencia que potencialmente ocasione un resultado anómalo. Estos reactivos han sido formulados para minimizar el riesgo de interferencia, no obstante, pueden darse interacciones anómalas entre sueros conflictivos y los componentes del ensayo. Con fines de diagnóstico, los resultados obtenidos con este ensayo siempre deben ser usados en combinación con el examen clínico, la historia médica del paciente y cualquier otro dato clínico relevante.

Características analíticas Consultar las tablas y gráficos de datos representativos de las cualidades del ensayo. Los resultados son expresados

en mg/l. (A menos que se indique lo contrario, los resultados de las muestras fueron generados a partir de muestras de suero recogidas en tubos sin barrera de gel o promotores de la coagulación). Rango Informable: 2 – 200 mg/l (WHO 1° IRP 67/86). Sensibilidad Analítica: 1 mg/l. Precisión: Las muestras fueron procesadas por duplicado durante 20 días, en dos tandas de trabajo por día, para un total de 40 tandas y 80 replicados. (Ver la tabla "Precision".) Bilirubina: La presencia de bilirrubina conjugada y no conjugada, en concentraciones hasta 200 mg/l, no tiene ningún efecto sobre los resultados en términos de precisión. Hemólisis: La presencia de hemoglobina, en concentraciones hasta 522 mg/dl,no tiene ningún efecto sobre los resultados en términos de precisión. Lipemia: La presencia de triglicéridos en concentraciones hasta 3 000 mg/dl no tiene efecto alguno en los resultados, en lo correspondiente a la precisión del ensayo. Tipo de Muestra Alternativa: Para evaluar el efecto del tipo de muestra, se recogió sangre de 20 voluntarios en tubo seco de suero, heparinizados, EDTA y tubos Becton Dickinson SST® vacutainer. Todas las muestras se ensayo de IgG alergeno específica de IMMULITE 2000, obteniendo los siguientes resultados. (Heparina Plástico) = 0,99 (Suero Plástico) – 1,30 mg/l r = 0,999

(EDTA Plástico) = 1,00 (Suero Plástico) – 1,60 mg/l r = 0,998

(SST Plástico) = 1,05 (Suero Plástico) – 2,21 mg/l r = 0,998

Medias: 55 mg/l (Suero Plástico) 53 mg/l (Heparina Plástico) 54 mg/l (EDTA Plástico) 56 mg/l (SST Plástico)

Comparación de los métodos: Las muestras recogidas de dos individuos en los que se había llevado a cabo inmunoterapia con I1 (abeja) y I3 (avispa), respectivamente, fueron analizadas con el ensayo IgG alergeno específica de


IMMULITE 2000 y el kit A. Los resultados obtenidos en dos muestras diferentes se presentan en dos gráficos. (Ver el gráfico “Method Comparison”.)

Asistencia técnica Póngase en contacto con el distribuidor nacional. El Sistema de Calidad de Diagnostic Products Corporation está registrado para la ISO 13485:2003.

Français

IMMULITE 2000 Allergie IgG spécifiques Domaine d'utilisation: Ce test est réservé à un usage diagnostique in vitro avec l'analyseur IMMULITE 2000 pour le dosage quantitatif des IgG spécifiques dans le sérum humain et la plasma (EDTA et hépariné), ce test constitue une aide au diagnostic clinique des désordres allergiques liés aux IgG. Référence catalogue : L2KGG2 (200 tests) Code produit : SPG Code couleur : vert clair

Introduction Les IgG dirigées contre les allergènes semblent conférer une protection contre les réactions d’hypersensibilité. Les patients soignés par immunothérapie connaissent souvent un accroissement des taux d’IgG spécifiques de l’allergène utilisé. Une augmentation des taux d’IgG au cours de l’immunothérapie est associée à une diminution de la sensibilité à l’allergène suspect.1-6,15,18 Le degré de réponse immunitaire est fonction du schéma posologique.17 Bien que des sujets en bonne santé et des sujets allergiques non-traités puissent avoir de faibles taux d’IgG spécifiques, on a rapporté que des patients sous immunothérapie par pneumallergènes connaissaient une augmentation jusqu’à 100 fois des taux d’IgG après immunothérapie.7-11,16,19 Bien qu’une élévation des taux sériques d’IgG soit observée après le traitement, il n’existe aucune corrélation évidente avec

l’amélioration clinique du patient, si ce n’est dans le cas d’un traitement de désensibilisation avec le venin d’abeille. Chez les patients soignés par désensibilisation par le venin d’abeille, on note une très bonne corrélation entre les taux d’IgG neutralisantes spécifiques du venin d’abeille et la protection conférée.6,12,13,15,18.

Principe du test Le test IMMULITE 2000 Allergie IgG spécifiques est un immunodosage chimiluminescent, en phase solide et en deux étapes, qui utilise une cinétique en phase liquide sur un format de bille. 23,24

(Brevet U.S. No. 4 778 751) Cela représente une avance significative par rapport aux méthodes conventionnelles reposant sur des allergènes fixés sur une phase solide, telle qu'un disque de papier. Les allergènes sont fixés par covalence à une matrice polymère/copolymère qui est marquée par un ligand. L'utilisation d'un copolymère d'acides aminés amplifie la densité d'allergènes que la matrice peut porter. Cycles d'incubation : 2 × 30 minutes.

Recueil des échantillons Il est recommandé de clarifier les échantillons hyperlipémiques par ultracentrifugation. Des échantillons hémolysés peuvent être signe d'une souffrance du prélèvement avant son arrivée au laboratoire ; il faudra donc interpréter les résultats avec prudence. La centrifugation des échantillons avant la formation complète du caillot peut entraîner la présence de fibrine. Pour éviter les résultats erronés dûs à la présence de fibrine, s'assurer de la formation complète du caillot avant de centrifuger les échantillons. Certains échantillons, en particulier ceux provenant de patients sous anticoagulants, peuvent nécessiter un temps plus long pour la formation du caillot. Des tubes pour prélèvements sanguins provenant de fabricants différents peuvent donner des résultats différents, selon les matériaux et additifs utilisés, y compris gels ou barrières physiques, activateurs de la coagulation et/ou anticoagulants. Le


coffret IMMULITE 2000 Allergie IgG spécifiques n'a pas été testé sur tous les types de tubes possibles. Veuillez consulter le chapitre intitulé Autres Types d'Échantillons pour plus de renseignements sur les tubes qui ont été évalués. Volume nécessaire : 5 µl de sérum ou de plasma (hépariné ou EDTA). Conservation: 6–7 jours à +2°C/+8°C ou 6 mois à –20°C.20,22

Facteur de prédilution automatique: 100.

Précautions d'emploi Réservé à un usage diagnostique in vitro. Réactifs : conserver les réactifs à +2/ +8 °C. Eliminer les déchets conformément à la réglementation en vigueur. Respecter les précautions d'emploi et manipuler tous les composants du coffret comme des produits potentiellement infectieux. Les réactifs dérivés de produits humains et utilisés dans ce coffret ont subi un test sérologique pour la Syphilis et des tests de dépistage pour les anticorps anti-VIH1 et 2, anti-VHC et pour l'antigène de surface de l'hépatite B, qui se sont tous avérés négatifs. De l'azide de sodium à des concentrations inférieures à 0,1 g/dl a été ajouté comme conservateur ; lors de l'élimination, l'évacuer avec de grandes quantités d'eau pour éviter une accumulation d'azides métalliques explosifs dans les canalisations. Substrat chimiluminescent : éviter toute contamination et l'exposition directe à la lumière solaire (voir la fiche technique). Eau : utiliser de l'eau distillée ou désionisée.

Matériel fourni Les composants de la trousse ne peuvent être utilisés que conjointement. Les étiquettes à l'intérieur du coffret sont nécessaires au dosage.

Cartouche de billes Allergie IgG spécifiques (L2GG12) Avec code-barre. 200 billes revêtues d'un anti-ligand. Stable à +2°C/+8°C jusqu'à la

date d'expiration. L2KGG2: 1 cartouche.

Cartouche réactif Allergie IgG spécifiques (L2GGA2) Avec code-barre. 11,5 ml d'anticorps monoclonal murin anti-IgG humaines marqué à la phosphatase alcaline (intestins de veau) dans un tampon. Stable à +2°C/+8°C jusqu'à la date d'expiration. L2KGG2: 1 cartouche. Avant l'emploi, retirer la partie supérieure de l'étiquette au niveau des perforations en ayant soin de ne pas endommager le code-barres. Retirer le film protecteur situé sur la partie supérieure de la cartouche-réactif ; insérer le couvercle coulissant entre les glissières sur le dessus de la cartouche-réactif.

Ajusteurs Allergie IgG spécifiques (L2GGJ3, L2GGJ4) Deux flacons (bas et haut) contenant chacun 2,0 ml d'IgG humaines dans une matrice de sérum humain/tampon. Stable à +2°C/+8°C pendant 30 jours après ouverture ou 6 mois (aliquoté) à –20°C. L2KGG2: 1 jeu. Avant de réaliser un ajustement, placer l'étiquette correspondante (fournie dans le coffret) sur les tubes de manière à ce que le code-barre puisse être lu par le lecteur code-barre.

Anticorps de l'Ajusteur Allergie IgG spécifiques (L2GGS1) 2,75 ml contenant un liquide prêt à l'emploi composé d'un anticorps monoclonal murin anti-IgG humaine marqué par un ligand. Stable à +2°C/+8°C jusqu'à la date d'expiration. Ce réactif est placé dans une cartouche d'allergènes lors du passage des Ajusteurs IgG spécifiques. L2KGG2: 1 tube.

Coffret de Contrôles Allergie IgG spécifiques (L2GGC1, L2GGC2) Deux flacons contenant chacun 2 ml d'IgG humaines dans une matrice de sérum humain/ tampon. Stable à +2°C/+8°C pendant 30 jours après ouverture ou 6 mois (aliquoté) à –20°C. L2KGG2: 1 jeu.


Pour connaître les valeurs du contrôle actuel, se reporter à la fiche technique du contrôle. Avant de réaliser un contrôle, placer l'étiquette correspondante (fournie dans le coffret) sur les tubes de manière à ce que le code-barre puisse être lu par le lecteur code-barre.

Anticorps du contrôle Allergie IgG spécifiques (L2GGS2) 2,75 ml de liquide prêt à l'emploi contenant un anticorps monoclonal murin anti-IgG humaine marqué par un ligand. Stable à +2°C/+8°C jusqu'à la date d'expiration. Ce réactif est placé dans une cartouche d'allergènes lors du passage des Contrôles IMMULITE 2000 Allergie IgG spécifiques. L2KGG2: 1 tube.

Diluant échantillon ID1 IgG/IgM (L2IGZ2) Pour la dilution par l'appareil des échantillons cliniques. Concentré prêt à l'emploi, matrice tampon/protéines non-humaines avec conservateur. Stable à +2°C/+8°C pendant 30 jours après ouverture ou à –20 °C pendant 6 mois. L2KGG2: 1 × 55 ml. Les étiquettes code-barres sont fournies avec le Diluant. Avant utilisation, placer l'étiquette appropriée sur un tube de 16 × 100 mm de façon que le code-barre puisse être lu par le lecteur de l'appareil. L2IGZ2: 3 étiquettes

Composants du coffret fournis séparément L2SUBM : Substrat chimiluminescent L2PWSM : Solution de lavage L2KPM : Coffret de décontamination de l'aiguille de prélèvement LRXT : Godets réactionnels (jetables) L2AW1-3 : Cartouche d'allergènes (avec code-barre) L2AW1 : numérotée 1–33 L2AW2 : numérotée 34–66 L2AW1 : numérotée 67–99 L2ATC : Bouchons pour tube d'allergène L2ATS : Septum pour tube d'allergène L2ZT: 250 Tubes de Diluant échantillon (16 x 100 mm) L2ZC: 250 Bouchons pour tubes de diluants

Allergènes spécifiques isolés ou Mélanges d'allergènes Les allergènes isolés et les mélanges en phase liquide, avec conservateur, sont vendus conditionnés en coffrets de 20 et 40 tests. (Se reporter au catalogue IMMULITE 2000 pour les références). Conserver réfrigéré : stable à +2°C/+8°C jusqu'à la date d'expiration indiquée sur l'étiquette. Ne pas utiliser si des signes de contamination microbienne, comme un aspect trouble, sont observés. Egalement nécessaire : Eau distillée ou désionisée ; tubes.

Protocole de dosage Le test IMMULITE 2000 Allergie IgG Spécifiques ne doit être analysé qu’en mode série. Noter que pour des performances optimales, il est important de réaliser toutes les procédures de maintenance de routine selon les instructions du Manuel d'Utilisation IMMULITE 2000. Voir le manuel d'utilisation de l'IMMULITE 2000 pour la préparation, le démarrage du système, les ajustements, le dosage et les procédures de contrôle de qualité.

Chargement des allergènes 1 Sélectionner par le logiciel une

position libre sur le Carrousel Réactifs.

2 Remplacer le bouchon des tubes d'allergènes par un septum. Ne pas retourner le tube d'allergène une fois le septum mise en place.

3 Place les tubes d'allergènes contenant les allergènes isolés, les mélanges d'allergènes, l'Anticorps de l'Ajusteur IgG spécifiques et/ou l'Anticorps du Contrôle IMMULITE 2000 AllergieIgG spécifiques dans la Cartouche d'Allergènes, les code-barres tournés vers le côté ouvert de la cartouche.

4 Refermer la Cartouche et lire les code-barres des allergènes avec la douchette code-barre.

5 Une fois la lecture terminée, charger la Cartouche d'Allergènes sur le carrousel réactifs.

6 Reprendre cette procédure pour charger toutes les Cartouches d'Allergènes suivantes.


La Cartouche d'Allergènes doit être lue avant chargement dans l'instrument afin de s'assurer un fonctionnement correct. Retirer ou remplacer tout tube de la Cartouche d'Allergènes nécessitera la relecture de la Cartouche pour mettre à jour les informations concernant les allergènes. Intervalle d'ajustement recommandé : 2 semaines. Contrôles contrôle de qualité : le ou les contrôles fournis avec le coffret devront être utilisés comme contrôle de qualité pour contrôler la performance du dosage.

Valeurs de référence Un total de 198 échantillons provenant de personnes présumées en bonne santé a été testé avec 8 allergènes spécifiques avec le test IMMULITE 2000 Allergie IgG Spécifiques. Les résultats sont représentés dans un graphique. (Voir le graphique « Expected Values ».)

Limites Un diagnostic clinique définitif ne doit pas dépendre uniquement d'un résultat d'IgG spécifiques in vitro. Le diagnostic doit être établi seulement après avoir étudié le contexte clinique du patient, la symptomatologie et d'autres données de laboratoire.21 Les anticorps hétérophiles du sérum humain peuvent réagir avec les immunoglobulines faisant partie des composants du coffret et interférer avec les immunodosages in vitro. [Voir Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Les échantillons provenant de patients fréquemment exposés aux animaux ou aux produits sériques d'origine animale peuvent présenter ce type d'interférence pouvant potentiellement donner un résultat anormal. Ces réactifs ont été mis au point afin de minimiser le risque d'interférence, cependant des interactions potentielles entre des sérums rares et les composants du test peuvent se produire. Dans un but diagnostique, les résultats obtenus avec ce dosage doivent toujours être utilisés en association avec un examen clinique, l'histoire médicale du patient et d'autres résultats.

Performances du test Consulter les tableaux et graphiques pour obtenir les données représentatives des performances de ce test. Les résultats sont exprimés en mg/l. (En l'absence d'indication contraire, tous les résultats ont été obtenus sur des échantillons sériques recueillis sur tubes, sans gel, ni activateur de la coagulation). Domaine de mesure: 2 – 200 mg/l (OMS 1ère IRP 67/86). Sensibilité analytique: 1 mg/l. Précision : les échantillons sont dosés en duplicata sur une période qui s’étend sur 20 jours, avec deux séries par jours, soit 40 séries et 80 replicata au total. (Voir le tableau « Precision ».) Bilirubine : La présence de bilirubine, conjuguée ou non, n'a aucun effet sur les résultats ni sur la précision du dosage si la concentration ne dépasse pas 200 mg/l. Hémolyse: La présence d'hémoglobine ne présente aucun effet sur les résultats ni sur la précision du dosage si la concentration ne dépasse pas 522 mg/dl. Lipémie : La présence de triglycérides jusqu'à une concentration de 3 000 mg/dl n'interfère ni sur la précision du dosage, ni sur les résultats. Autres types d’échantillons: Afin de déterminer l’effet d’autres types d’échantillons, du sang de 20 volontaires été prélevé sur tubes sériques secs en plastique, hépariné, EDTA et sur tubes vacutainers Becton Dickinson SST® . Tous les échantillons ont été ensuite dosés selon le protocole IMMULITE 2000 Allergie IgG Spécifiques, avec les résultats suivants. (Héparine, plastique) = 0,99 (Sérum, plastique) – 1,30 mg/l r = 0,999

(EDTA plastique) = 1,00 (Sérum, plastique) – 1,60 mg/l r = 0,998

(SST plastique) = 1,05 (Sérum, plastique) – 2,21 mg/l r = 0,998

Moyennes : 55 mg/l (Sérum, plastique) 53 mg/l (Héparine, plastique) 54 mg/l (EDTA plastique) 56 mg/l (SST plastique)


Comparaison de méthodes : Des échantillons prélevés sur 2 personnes ayant subit une immunothérapie avec i1 (venin d’abeille) et i3 (venin de guêpe) ont été dosés avec, respectivement, le coffret IMMULITE 2000 Allergie IgG Spécifiques et un Kit A. Les résultats obtenus lors de 2 dosages sont représentés dans deux graphiques. (voir le graphique “ Comparaison de Méthode ”.)

Assistance technique Contacter votre distributeur national. En France distribué par DPC France 90 bd National 92257 La Garenne-Colombes. Le système d'assurance qualité de DPC est certifié ISO 13485 (2003).

Italiano

IMMULITE 2000 Allergene Specifiche IgG Uso: Ad uso diagnostico in vitro con l’analizzatore IMMULITE 2000 – per la misurazione quantitativa di IgG allergene-specifiche nel siero umano e nel plasma (EDTA o eparinizzato), quale ausilio nella diagnosi clinica dei disturbi allergici mediati da IgG. Codice: L2KGG2 (200 test) Codice del Test: SPG Colore: Verde chiaro

Riassunto e Spiegazione del Test Gli anticorpi IgG anti allergeni sembrano fornire una protezione contro reazioni dovute ad ipersensibilità. I pazienti sottoposti ad immunoterapia spesso presentano un aumento nelle IgG allergene specifiche utilizzate nella terapia. Un aumento nei livelli di IgG specifiche durante l’immunoterapia è associato ad una riduzione della sensibilità verso l’allergene sospettato. 1-6,15,18 Il grado di risposta immunologica dipende dalla tempistica di somministrazione delle dosi previste dalla terapia.17 Benchè i soggetti sani ed i pazienti che presentano allergia non trattata possano presentare livelli bassi di anticorpi IgG specifici, è stato riscontrato

che pazienti sottoposti ad immunoterapia con allergeni inalanti hanno presentato un aumento nei livelli di anticorpi IgG fino a 100 volte dopo l’immunoterapia.7-11,16,19 Benchè si verifichi un aumento nei livelli di IgG nel siero dopo la terapia, non esiste una correlazione chiara con il miglioramento clinico del paziente eccetto nel caso di terapia d’ipersensibilizzazione con veleno d’ape. In pazienti sottoposti a terapia d’ipersensibilizzazione con veleno d’ape, esiste una correlazione molto buona tra livelli circolanti di anticorpi IgG-bloccanti specifici al veleno d’ape e la protezione clinica.6,12,13,15,18

Principio del Dosaggio Il dosaggio IMMULITE 2000 IgG Allergene Specifiche è un immunodosaggio in chemiluminescenza in due step in fase solida, che utilizza la cinetica in fase liquida sotto forma di sferetta.23,24 (Brevetto U.S. No. 4 778 751) Questo dosaggio rappresenta un miglioramento significativo rispetto ai metodi convenzionali basati sugli allergeni adesi ad un supporto in fase solida quale un dischetto di carta. Gli allergeni sono adesi in maniera covalente ad una matrice di polimeri copolimeri solubili, a sua volta marcata con un ligando. L'utilizzo di un aminoacido copolimero amplifica la quantità di allergene che la matrice può contenere. Cicli di Incubazione: 2 × 30 minuti.

Prelievo del Campione Si consiglia l'utilizzo di un'ultracentrifuga per schiarire i campioni lipemici. I campioni emolizzati possono indicare il trattamento non idoneo del campione prima dell’arrivo al laboratorio; per questo motivo, i risultati devono essere interpretati con prudenza. La centrifugazione dei campioni di siero prima che la coagulazione sia completa può produrre fibrina. Per evitare risultati errati dovuti alla presenza di fibrina, assicurarsi che la coagulazione sia completa prima di centrifugare i campioni. Alcuni campioni, in modo particolare quelli di pazienti sottoposti a terapia con anticoagulanti, possono richiedere tempi di coagulazione più lunghi.


Provette per il prelievo di sangue di produttori diversi possono dare valori differenti, a seconda dei materiali e degli additivi usati, incluso gel o barriere fisiche, attivatori di coaguli e/o anticoagulanti. L'IMMULITE 2000 IgG Allergene Specifiche non é stato testato con tutte le possibili variazioni di tipi di provette. Per dettagli sulle provette testate consultare la sezione sulla Tipologia dei Campioni Alternativi. Volume Richiesto: 5 µL di siero o plasma (EDTA o eparinizzato). Conservazione: 6–7 giorni a 2–8°C, o 6 mesi a –20°C.20,22

Fattore Automatico di Pre-Diluizione: 100.

Avvertenze e Precauzioni Ad uso diagnostico in vitro. Reagenti: Conservare a 2–8°C. Eliminare secondo le disposizioni di legge vigenti. Seguire le precauzioni generali e manipolare tutti i componenti come se fossero potenzialmente infetti. I materiali derivati da sangue umano sono stati testati con esito negativo per la Sifilide; gli anticorpi anti-HIV 1 e 2; l'Antigene di Superficie dell'Epatite B; e gli anticorpi anti-Epatite C. E' stata aggiunta sodio azide, a concentrazioni inferiori a 0,1 g/dL, come conservante. Al momento dell'eliminazione, irrorare con molta acqua per evitare la formazione di azidi metalliche nelle tubature di piombo e di rame. Substrato Chemiluminescente: Evitare la contaminazione e l'esposizione alla luce solare diretta. (Vedi metodica.) Acqua: Utilizzare acqua distillata o deionizzata.

Materiali Forniti I componenti costituiscono un unico set. Le etichette all'interno della confezione sono necessarie per eseguire i dosaggi.

Contenitore di Sferette IgG Allergene Specifiche (L2GG12) Con codice a barre. 200 sferette coattate con anti-ligando. Stabili a 2–8°C fino alla data di scadenza. L2KGG2: 1 confezione.

Porta Reagente IgG Allergene Specifiche (L2GGA2) Con codice a barre. 11,5 mL di fosfatasi alcalina (intestino di vitello) coniugata con un anticorpo monoclonale IgG murino anti-umano in un tampone. Stabile a 2–8°C fino alla data di scadenza. L2KGG2: 1 porta reagente. Prima dell'utilizzo rimuovere la parte superiore dell'etichetta lungo la perforazione senza danneggiare il codice a barre. Togliere il foglio protettivo dalla parte superiore del flacone. Far scattare nella corretta posizione il coperchio scorrevole lungo le guide del coperchio del reagente.

Calibratori IgG Allergene Specifiche (L2GGJ3, L2GGJ4) Due flaconi (uno Basso e uno Alto), da 2,0 mL ciascuno di IgG umane in una matrice di siero umano/tampone. Stabili a 2–8°C per 30 giorni dopo l'apertura, o per 6 mesi (aliquotati) a –20°C. L2KGG2: 1 set. Prima di ricalibrare collocare le etichette giuste sulle provette delle aliquote (fornite col kit) cosicché i codici a barre possano essere registrati dal lettore.

Anticorpo del Calibratore IgG Allergene Specifiche (L2GGS1) 2,75 mL ciascuna di un anticorpo monoclonale murino anti-umano IgG marcato con ligando, in forma liquida e pronto all'uso. Stabile a 2–8°C fino alla data di scadenza. Questo reagente è collocato nel wedge degli Allergeni quando si eseguono i Calibratori IgG Specifiche. L2KGG2: 1 provetta.

Controlli del Kit IgG- Allergene Specifiche (L2GGC1, L2GGC2) Due flaconi, 2 mL ciascuno di IgG umane in una matrice di siero umano-tampone. Stabili a 2–8°C per 30 giorni dopo l'apertura, o per 6 mesi (aliquotati) a –20°C. L2KGG2: 1 set. Fare riferimento alla metodica dei controlli per i livelli di concentrazione. Prima dell'utilizzo, collocare le etichette giuste sulle provette delle aliquote (fornite col kit) cosicché i codici a barre possano essere registrati dal lettore.


Anticorpo di Controllo IgG Allergene Specifiche (L2GGS2) 2,75 mL di un anticorpo monoclonale IgG murino anti-umano IgG marcato con ligando in forma liquida, pronto all'uso. Stabili a 2–8°C fino alla data di scadenza. Questo reagente viene collocato sul wedge degli Allergeni quando si eseguono i Controlli IgG IMMULITE 2000. L2KGG2: 1 provetta.

Diluente IgG/IgM ID1 (L2IGZ2) Per la diluzione sul luogo dei campioni dei pazienti. Concentrato pronto all'uso, una matrice proteina non umana/tampone con conservanti. Stabile a 2–8°C per 30 giorni dopo l’apertura. o a –20°C per 6 mesi (aliquotato). L2KGG2: 1 × 55 mL. Vengono Fornite Le provette da utilizzarsi con il diluente. Prima dell'utilizzo, collocare un'etichetta appropriata su una provetta 16 × 100 mm cosicchè i codici a barre possano essere letti dal lettore interno. L2IGZ2: 3 etichette

Componenti del kit forniti separatamente L2SUBM: Substrato Chemiluminescente L2PWSM: Soluzione di Lavaggio L2KPM: Kit di Pulizia dell'Ago LRXT: Tubi di Reazione (monouso) L2AW1-3: Wedge di Allergeni (con codice a barre) L2AW1: codificati serialmente 1–33 L2AW2: codificati serialmente 34–66 L2AW3: codificati serialmente 67–99 L2ATC: Tappi per Allergeni L2ATS: Septum per Allergeni L2ZT: 250 Provette (16 x 100 mm) per Diluente del Campione L2ZC: 250 Tappini per Provette per Diluente del Campione

Pannello di Allergeni Specifici e Pannello di Allergeni Misti Pannelli di allergeni singoli e di allergeni misti in fase liquida, con conservanti, sono confezionati e venduti in moduli da 40 e 20 test. (Per i codici, vedi il listino prezzi dei Prodotti IMMULITE 2000). Conservare refrigerati: stabili a 2–8°C fino alla data di scadenza indicata sull'etichetta. Non utilizzare se sono presenti segni di contaminazione microbica quali aspetto torbido.

Materiale Richiesto Acqua distillata o deionizzata; provette.

Procedura del Dosaggio Il dosaggio IMMULITE 2000 IgG Allergene-Specifiche IgG deve essere analizzato solo in modalità lotti. Attenzione: per ottenere prestazioni ottimali, è importante effettuare tutte le procedure di manutenzione di routine cosiccome definite nel Manuale dell'Operatore IMMULITE 2000. Vedi Manuale dell'Operatore IMMULITE 2000 per: preparazione, messa a punto, calibrazione, dosaggio e procedure di controllo di qualità.

Caricamento degli Allergeni 1 Selezionare, attraverso il software una

posizione libera sul Carosello Reagenti.

2 Sostituire i tappini delle Provette Allergeni con i septa. Non invertire il tubo dell'allergene una volta che il setto è installato.

3 Collocare le Provette contenenti gli allergeni specifici IMMULITE 2000, i pannelli Allergene Specifici, l'Anticorpo del Calibratore e/o l'Anticorpo del Controllo nel wedge degli Allergeni, con il codice a barre posto in modo tale che risulti visibile dall'esterno.

4 Chiudere il wedge ed eseguire la scannerizzazione dei codici a barre con l'apposito scanner.

5 Al completamento della scannerizzazione, caricare il wedge degli Allergeni nel carosello reagenti.

6 Ripetere questa procedura per caricare tutti i successivi wedge necessari.

Il wedge degli Allergeni deve essere scannerizzato prima dell'installazione nello strumento per assicurare l'operatività corretta dello strumento. Rimuovere o ricollocare un qualsivoglia flacone all'interno del wedge degli allergeni verrà richiesta la riscannerizzazione del wedge per aggiornare le informazioni relative agli allergeni. Intervallo di Calibrazione Consigliato: 2 settimane.


Campioni per il controllo della qualità: E’ consigliabile utilizzare i controlli forniti con il kit come materiale per il controllo della qualità per controllare le prestazioni del dosaggio.

Valori Attesi Un totale di 198 campioni prelevati da individui in presunto stato di buona salute sono stati testati con 8 allergeni specifici attraverso il dosaggio IMMULITE 2000 IgG Allergene-Specifiche. I risultati tabulati sono presentati in un grafico. (Vedere il grafico “Expected Values”.)

Limiti Una diagnosi clinica definitiva non deve essere effettuata solo sulla base di un risultato IgG Allergene Specifiche in vitro. La diagnosi deve essere effettuata dal medico solo dopo aver valutato tutte le indagini cliniche e di laboratorio.21 Gli anticorpi eterofili presenti nel siero umano possono reagire con le immunoglobuline presenti nelle componenti del dosaggio provocando un'interferenza con i dosaggi in vitro. [Vedi Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Campioni di pazienti routinariamente esposti agli animali o a prodotti derivati da siero di animali possono presentare questo tipo di interferenza causa potenziale di risultati anomali. Questi reagenti sono stati formulati per minimizzare il rischio di interferenze, tuttavia, possono verificarsi interazioni potenziali tra sieri rari e componenti del test. A scopo diagnostico, i risultati ottenuti con questo dosaggio devono sempre essere utilizzati unitamente all'esame clinico, all'anamnesi del paziente e ad altre indagini di laboratorio.

Prestazioni del Dosaggio Vedi tavole e grafici per dati rappresentativi. I risultati sono espressi in mg/L. (Laddove non diversamente specificato, tutti i dati sono stati generati su campioni di siero raccolti in provette senza gel separatore o additivi che favoriscano la formazione di coaguli). Range di Riferimento: da 2 a 200 mg/L (WHO primo IRP 67/86).

Sensibilità Analitica: 1 mg/L. Precisione: I campioni sono stati elaborati in doppio in 20 giorni, due sedute al giorno, per un totale di 40 sedute ed 80 replicati. (Vedi tabella "Precision".) Bilirubina: La presenza di bilirubina coniugata e non coniugata in concentrazioni fino a 200 mg/L non ha nessun effetto sui risultati entro il range di precisione del dosaggio. Emolisi: La presenza di emoglobina in concentrazioni fino a 522 mg/dL non ha nessun effetto sui risultati entro il range di precisione del dosaggio. Lipemia: La presenza di trigliceridi in concentrazioni fino a 3 000 mg/dL non ha nessun effetto sui risultati entro il range di precisione del dosaggio. Tipologia di Campioni Alternativi: Per determinare l’effetto della Tipologia di Campioni Alternativa il sangue di 20 volontari è stato raccolto in provette semplici di plastica, eparinizzate, EDTA e Becton Dickinson SST®. Tutti i campioni sono stati dosati con il dosaggio IMMULITE 2000 IgG Allergene-Specifiche, con i seguenti risultati. (Plastica Eparina) = 0,99 (Plastica per Siero) – 1,30 mg/L r = 0,999

(Plastica per EDTA) = 1,00 (Plastica per Siero) – 1,60 mg/L r = 0,998

(Plastica per SST) = 1,05 (Plastica per Siero) – 2,21 mg/L r = 0,998

Valore medio: 55 mg/L (Plastica per Siero) 53 mg/L (Plastica Eparina) 54 mg/L (Plastica per EDTA) 56 (mg/L Plastica per SST)

Comparazione di Metodi: I campioni prelevati da due soggetti sottoposti, rispettivamente, a immunoterapia con l1 (ape da miele) e l3 (giacca gialla), sono stati dosati con l’IMMULITE 2000 IgG Allergene-Specifiche e il Kit A. I risultati ottenuti in due diverse occasioni sono rappresentati in due grafici. (Vedere I grafici “Method Comparison”.)

Assistenza tecnica All'Estero: Contattare il proprio distributore nazionale.


Il Sistema Qualità della Diagnostic Products Corporation è certificato secondo le norme ISO 13485:2003.

Português

IgG Específica de Alergénios IMMULITE 2000 Utilização: Para uso no diagnóstico in vitro com o Analisador IMMULITE 2000 – para o doseamento quantitativo da IgG Específica de Alergénios em soro humano e plasma (EDTA ou heparinizado), como auxilio no diagnóstico clínico das doenças alérgicas IgG-mediadas. Números de catálogo: L2KGG2 (200 testes) Código do teste: SPG Cor: Verde claro

Sumário e explicação do teste Os anticorpos IgG contra os alergénios aparentam conferir protecção contra as reacções de hipersensibilidade. Os doentes submetidos a imunoterapia frequentemente acusam um aumento de IgG específico face ao alergénio usado no tratamento. Um aumento dos níveis de IgG específica durante a imunoterapia está associado a uma diminuição de sensibilidade ao alergénio suspeito1-6,15,18 O grau da resposta imunológica depende da tabela da dosagem da imunoterapia.17 Contudo indivíduos saudáveis e doentes alérgicos não tratados podem ter baixos níveis de anticorpo IgG específica. Em alguns estudos, demonstrou-se que doentes sujeitos à imunoterapia com alergénios inalantes aumentaram cem vezes os níveis de anticorpo IgG após a imunoterapia.7-11,16,19 Embora um aumento nos níveis de IgG em soro ocorra após o tratamento, não existe nenhuma correlação óbvia entre este aumento e a melhoria de sintomas (excepto no caso de terapia de hiper-sensibilização para veneno de abelha). Em doentes submetidos à terapia de hiper-sensibilização com veneno de abelha, existe uma excelente correlação entre níveis circulantes de anticorpo de bloqueio de IgG4 específica a veneno e a protecção clínica.6,12,13,15,18

Princípio do Procedimento O kit de IgG Específica de Alergénios IMMULITE 2000 é um imunoensaio quimioluminiscente com 2 níveis, basedo numa tecnologia de fase-líquida e em esferas revestidas23,24 (U.S. Patent No. 4 778 751) Esta tecnologia representa um avanço significativo face a outros métodos convencionais, onde os alergénios estão ligados a um suporte sólido, como um disco de papel. Os alergénios ligam-se covalententemente a uma matriz solúvel polimérica/co-polímerica, que por sua vez está marcada com um ligando. A utilização de um amino ácido co-polimerico permite aumentar a quantidade de alergénio que se liga à matriz. Ciclos de incubação: 2 × 30 minutos.

Colheita Recomenda-se o uso de uma ultra centrífuga para clarear amostras lipémicas. Amostras hemolisadas podem indicar tratamento incorrecto das amostras antes do envio para o laboratório; pelo que os resultados devem ser interpretados com cuidado. A centrifugação de amostras de soro antes da formação completa do coágulo pode resultar na presença de fibrina. Para prevenir resultados errados devido à presença de fibrina, certifique-se que a formação do coágulo foi completa antes da centrifugação das amostras. Algumas amostras, em especial as de doentes que recebem terapia anticoagulante podem requerer um maior tempo de formação do coágulo. Os tubos para colheita sanguínea de diferentes fabricantes, podem originar diferentes valores, dependendo dos materiais e aditivos, incluíndo gel ou barreiras fisicas, activadores do coágulo e/ou anti coagulantes. O kit de IgG Específica de Alergénios IMMULITE 2000 não foi ainda testado com todas as possiveis variações originadas pelos tipos de tubos. Consultar a secção Tipos de Amostras Alternativas para obter detalhes sobre os tubos que foram testados. Volume de Amostra: 5 µL de soro ou plasma (EDTA e heparinizado).


Estabilidade: 6–7 dias a 2–8°C, ou por 6 meses a –20°C.20,22

Factor de pré-diluição automática: 100.

Precauções Para uso de diagnóstico in vitro. Reagentes: Manter a 2–8 °C. Elimine de acordo com as leis aplicáveis. Manipule com as devidas precauções todos os materiais capazes de transmitir doenças infecciosas. As matérias primas, obtidas de soro humano, foram testadas, revelando resultados negativos para a sífilis, para os anticorpos do vírus da imunodeficiência humana (HIV) 1 e 2; para o antigénio de superfície da hepatite B (HBsAg) e para os anticorpos do vírus da hepatite C. Azida de sódio foi adicionada como conservante; para evitar acumulações de azidas metálicas explosivas em canalizações de cobre e alumínio, os reagentes devem ser rejeitados no esgoto apenas se estiverem diluídos e forem lavados com grandes volumes de água. Substrato quimioluminescente: Evite contaminação e exposição à luz directa (ver bula do substrato). Água: Use água destilada ou deionizada.

Materiais Fornecidos Os componentes formam um conjunto uno e indivisível. Os códigos de barras no interior das caixas são necessárias para o ensaio.

Embalagem de pérolas de IgG Específica de Alergénios (L2GG12) Com código de barras. 200 pérolas revestidas com anti-ligando. Estável à temperatura 2–8ºC, até expiração de prazo de validade. L2KGG2: 1 embalagem.

Embalagem de Reagente IgG Específica de Alergénios (L2GGA2) Com código de barras. Contém 11,5 mL de fosfatase alcalina (de intestino bovino) marcada com anticorpo monoclonal de murino anti-IgG humana em tamponizada. Estável até a data de validade a 2–8°C. L2KGG2: 1 embalagem. Antes de utilizar, retire a etiqueta de protecção da tampa deslizante; levante a

tampa,remova o remanescente da etiqueta com o cuidado de não danificar o código de barras. Remova o selo de alumínio do topo da embalagem, encaixe a tampa deslizante nas ranhuras e verifique se a tampa desliza.

Ajustes de IgG Específica de Alergénios (L2GGJ3, L2GGJ4) Dois frascos (baixo e alto) com 2,0 mL de IgG humana numa matriz sérica humana tampão. Estável a 2–8°C durante 30 dias após abertura ou por 6 meses (aliquotas) a –20°C. L2KGG2: 1 conjunto. Antes de realizar qualquer ajuste, coloque as etiquetas nas alíquotas apropriadas (fornecidas com o "kit") de forma que os códigos de barras possam ser lidos pelo dispositivo de leitura do aparelho.

Anticorpo Ajuste IgG Específica de Alergénios (L2GGS1) 2,75 mL de ligando marcado com anticorpo monoclonal de murino anti-humana IgG, pronto a usar. Estável até a data de validade a 2–8°C. Este reagente é colocado na embalagem do suporte do alergénio quando ensaiados os ajustes de IgG específica. L2KGG2: 1 tubo.

Controlo de Kit IgG Específica de Alergénios (L2GGC1, L2GGC2) Dois frascos cada com 2 mL de IgG humana numa matriz sérica tamponizada. Estável, após a abertura, durante 30 dias a 2–8°C, ou por 6 meses (aliquotado) a –20°C. L2KGG2: 1 conjunto. Refira-se à literatura inserida para os níveis de concentração. Antes de realizar qualquer ajuste, coloque as etiquetas de alíquota apropriadas (fornecidas com o "kit") em tubos de amostra de forma que os códigos de barras possam ser lidos pelo dispositivo de leitura do aparelho.

Anticorpo Controlo de IgG Específica de Alergénios (L2GGS2) 2,75 mL de ligando marcado com anticorpo monoclonal de murino anti-IgG humana líquida, pronto a usar. Estável até a data de validade a 2–8°C. Este reagente é colocado na embalagem do suporte do alergénio quando ensaiados os controlos


de IgG específica de alergénios IMMULITE 2000. L2KGG2: 1 tubo.

Diluente de amostra para ID1 IgG/IgM (L2IGZ2) Para a diluição no aparelho de amostras de doentes. Concentrado pronto a usar, matriz protéica tamponizada de origem não humana, com conservante. Estável, após a abertura, durante 30 dias a 2–8°C, ou por 6 meses (aliquotado) a –20°C. L2KGG2: 1 × 55 mL. Etiquetas de código de barras são fornecidas para usar com o diluente. Antes de usar, colocar a etiqueta apropriada num tubo de teste (16 × 100 mm) de modo a que o código de barras possa ser lido pelo dispositivo de leitura do aparelho. L2IGZ2: 3 etiquetas

Componentes do kit fornecidos separadamente L2SUBM: Substrato quimioluminescente L2PWSM: Solução de lavagem L2KPM: Kit de limpeza do pipetador LRXT: Tubos de reacção (descartáveis) L2AW1-3: Embalagens para alergénios (barcoded) L2AW1: código de série 1-33 L2AW2: código de série 34-66 L2AW3: código de série 67-99 L2ATC: Tampas de alergénios L2ATS: Septas de alergénios L2ZT: 250 Tubos de diluente da amostra (16 x 100 mm) L2ZC: 250 Tampas para tubos de diluente da amostra

Alergénios específicos e painéis de alergénios Alergénios e mistura de alergénios em fase liquida, com conservante, são embalados e fornecidos em módulos de 20 e 40 testes (ver nº catálogo no Catálogo de Produtos IMMULITE 2000). São estáveis a 2–8°C até à data de expiração inscrita na etiqueta. Não utilizar na presença de indícios de contaminação tais como aparência turva. Também necessário Água destilada ou desionizada; tubos de amostra.

Procedimento de doseamento O kit de IgG Específica de Alergénios IMMULITE 2000, deve ser ensaiado apenas em modo batch. Ter em atenção que para obter um desempenho óptimo, é importante efectuar todos os procedimentos de manutenção de rotina conforme definido no Manual de Operador do IMMULITE 2000. Consulte o Manual do Operador de IMMULITE 2000 para instruções sobre preparação, ajustes, doseamento e procedimentos de controlo de qualidade.

Procedimento 1 Através do software, seleccione uma

posição vazia no carrossel dos reagentes

2 Substitua as cápsulas dos tubos de alergénios pelas septas. Não inverta o tubo de alergénio após colocação da septa.

3 Coloque os alergénios específicos, painéis de alergénios, alergénio de referência, controlo de curva na embalagem dos alergénios com os códigos de barra voltados para fora.

4 Feche a embalagem dos alergénios e fotografe com o leitor de código de barras.

5 Após terminada a leitura, coloque a embalagem de alergénios no carrossel de reagentes.

6 Repita este procedimento para todos os alergénios.

A embalagem de alergénios tem que ser fotografada antes da sua colocação no instrumento, por forma a garantir o funcionamento correcto do mesmo. A remoção ou adição de outros alergénios na mesma embalagem de alergénios implica nova fotografia para actualização da informação. Intervalo entre ajustes aconselhável: 2 semanas. Amostras de Controlo de Qualidade: O(s) controlo(s) fornecido(s) com o kit devem ser utilizados como material de controlo de qualidade para monitorizar o desempenho do doseamento.


Valores de Referência Um total de 198 amostras, de individuos aparentemente saudáveis, foram testadas com 8 alergénios especificos usando o kit de IgG Específica de Alergénios IMMULITE 2000. Os resultados são apresentados num gráfico. (Consulte o gráfico “Expected Values”.)

Limitações Diagnósticos clínicos definitivos não devem ser feitos unicamente com base no resultado de um único teste de rastreio. O diagnóstico deve ser efectuado pelo médico após a avalição de todos os dados clínicos e laboratoriais.21 Os anticorpos heterófilicos no soro humano podem reagir com as imunoglobulinas presentes no ensaio, causando interferência com os imunoensaios in vitro. [Ver Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Amostras de doentes expostas em rotina a produtos ou soros de animais podem demonstrar este tipo de interferência, potencial causador de resultados anómalos. Estes reagentes foram formulados para minimizar o risco de interferência, contudo podem ocorrer potenciais interacções entre soros (raros) e componentes do teste. Para fins de diagnóstico, os resultados obtidos neste ensaio devem ser sempre analisados em combinação com o exame clínico, história de medicação do doente e outros achados que possam correlacionar.

Características do Ensaio Consulte Tabelas e Gráficos para dados representativos do desempenho do doseamento. Os resultados são apresentados em mg/L. (Salvo referência em contrário, todos os dados provêm de amostras de soro colhidas em tubos sem anticoagulantes, barreiras de gel ou aditivos promotores da coagulação.) Zona de trabalho: 2 – 200 mg/L (WHO 1st IRP 67/86). Sensibilidade Analítica: 1 mg/L. Precisão: Amostras foram processadas em duplicado num período de 20 dias, dois ensaios por dia, perfazendo um total de 40 ensaios e 80 réplicas. (Consulte a tabela “Precision”.)

Bilirrubina: A presença de bilirrubina conjugada e não-conjugada em concentrações até 200 mg/L não tem efeito em resultados, dentro da precisão do ensaio. Hemólise: A presença de hemoglobina em concentrações até 522 mg/dL não tem efeito em resultados, dentro da precisão do ensaio. Lipemia: A presença de trigliceridos em concentrações até 3 000 mg/dL não tem efeito nos resultados, dentro da precisão do ensaio. Tipo de amostra alternativa: Para avaliar o efeito dos tipos de amostras alternatives, foi colhido sangue de 20 voluntários em tubos de plástico para soro, heparinizado, com EDTA e tubos vacutainer SST® da Becton Dickinson. Todas as amostras doseadas pelo Procedimento de IgG Específica de Alergénios IMMULITE 2000, com os seguintes resultados. (Heparina Plástico) = 0,99 (Soro Plástico) – 1,30 mg/L r = 0,999

(EDTA Plástico) = 1,00 (Soro Plástico) – 1,60 mg/L r = 0,998

(SST Plástico) = 1,05 (Soro Plástico) – 2,21 mg/L r = 0,998

Médias: 55 mg/L (Soro Plástico) 53 mg/L (Heparina Plástico) 54 mg/L (EDTA Plástico) 56 mg/L (SST Plástico)

Comparação de Métodos: Amostras colhidas de 2 individuos, os quais foram submetidos a imunoterapia com I1 (veneno de abelha) e I3 (veneno de vespa), respectivamente, foram ensaiadas com o kit de IgG Específica de Alergénios IMMULITE 2000 e o Kit A. Os resultados obtidos em duas ocasiões de colheita, estão apresentados em dois gráficos. (Ver gráfico “Method Comparison”.)

Assistência Técnica Por favor contacte o seu Distribuidor Nacional. O Sistema de Qualidade da Diagnostic Products Corporation está registado sob ISO 13485:2003.


Diagnostic Products Corporation Corporate Offices 5210 Pacific Concourse Drive Los Angeles, CA 90045-6900 USA 2005-08-09 PIL2KGG – 1

cc#14269, cc#14326, cc#13577, cc#13423, cc#13282.

Documents

Allergen-Specific IgG