AKIM SİTOMETRİK PANEL AKIM SİTOMETRİK PANEL REAKTİF ANTİKOR TAYİNİ

Dr. Emel Ekşioğlu-Demiralp, 2010

Marmara Üniversitesi Tıp Fakültesi, Hematoloji-İmmünoloji Bölümü

PRA Saptama

1. Herhangi bir antikor var mı?� Duyarlılığı?

2. Varolan antikor klinik olarak öneme sahip mi?

Böbrek Nakli Öncesi

2. Varolan antikor klinik olarak öneme sahip mi?� Özgüllüğü

HLA vs. Non-HLAHangi HLA Sınıfı, antijeni, alleli?Antikor tipi – IgG, IgM

Kantitatif Değerlendirme

Transplantasyonlarda Reaksiyona Neden Olan Antikorlar

Antikor T - Hücre B – Hücre Kötü Sonuç

HLA-Sınıf I +++ +++ Evet

HLA Sınıf II - +++ Evet

Anti-Fosfolipid -/+ -/+ Evet

Endothelial hücre - + Evet

Soğuk Agglutininler - - Evet

Diğer + ++ Hayır

Akım Sitometrik PRA Tarama Testi Neden Önemlidir?

� Antikor Tarama testlerinde kullanılan yöntem final ‘cross match’ testiyle eşit duyarlılıkta olmalıdır.

� Daha az duyarlı bir yöntemin kullanılması, final ‘cross match’ testlerinde beklenmeyen artışa neden olur.

(zaman/madde kaybı ve bekleme listesindeki hasta için hayal kırıklığı)

Akım Sitometrik PRA – IgG Sınıfı HLA antikorlarını Saptar.

� Prospektif olarak transplant alıcılarında anti HLA reaktivitesini belirler.

HLA antikorları fluktuasyonlar gösterdiği için İdeal Ölçümler, hastanınhistorik en reaktif serum örneği ve transplant öncesi veya en son serumhistorik en reaktif serum örneği ve transplant öncesi veya en son serumörneğinin eş zamanlı test edilmesi ile sağlanır. Ölçümlerin 2 ayda birtekrarı önerilir. Amaç, donör organın en uygun alıcıya takılmasıdır.

� Pre transplant IgG HLA antikor varlığının bilinmesi, klinisyenin tedavi davranışını belirler (desensitizasyon veya farklı immünsüpresif rejimlerin seçimi )

Örnek Hazırlama

αααα-HLA’lar

Alıcı serumuFITC

FITC

FITC

FITC

FITC

αααα-İnsan IgG(Fc)-FITC

αααα-HLA’lar

Sınıf I MHC kaplı boncuklar Sınıf II MHC kaplı boncuklar

FITCFITC

FITCFITC

PRA Sınıf I ve II Tarama -Tüpler

1-Sınıf I-Negatif Kontrol2- Sınıf I-Pozitif Kontrol3-Sınıf II-Negatif Kontrol3-Sınıf II-Negatif Kontrol4-Sınıf II-Pozitif Kontrol5-Sınıf-I -Hasta6-Sınıf II-Hasta

negatif.001

R1

negatif.001 pozitif.001

PRA Tarama - Sınıf I

100 101 102 103 104

FSC-Height100 101 102 103 104

PRA SINIF I negatif

M1

CLASS I PRA= % 3.00

100 101 102 103 104

PRA SINIF I POZITIF KONTROL

M1

CLASS I (pozitif)=% 98.51

PRA Tarama - Sınıf I

R1

100 101 102 103 104

M1

100 101 102 103 104

M1

Negatif kontrol Pozitif kontrol

100 101 102 103 104

FSC-Height

100 101 102 103 104

PRA SINIF I negatif

100 101 102 103 104

PRA SINIF I POZITIF KONTROL

100 101 102 103 104

PRA SINIF I-

M1

100 101 102 103 104

PRA SINIF I-

M1

Hasta 1 (-) Hasta 2 (+)

R2

pozitif.002

PRA Tarama - Sınıf II

100 101 102 103 104

FL2-H100 101 102 103 104

PRA SINIF II POZITIF KONTROL

M1

100 101 102 103 104

PRA SINIF II-

M1

PRA Tarama - Sınıf II

R2

M1M1

Negatif kontrol Pozitif kontrol

100 101 102 103 104

FSC-Height

R2

100 101 102 103 104

PRA SINIF II-

M1

100 101 102 103 104

PRA SINIF II POZITIF KONTROL100 101 102 103 104

PRA Sinif II Negatif

100 101 102 103 104

PRA SINIF II-

M1

Hasta 1 (-) Hasta 2 (+)

PRA Sınıf I ve II DeğerlendirmeKolmogorov-Simirnov İstatistiği

Ayse.001 Ayse.003

FL1-H FL1-H

G1 G1

Kolmogorov-Smirnov Statistics

File:

Parameter:

Gate:

Sample ID:

M1

NEGATIF SINIF I POZITIF SINIF I

PRA PRA

19-Jul-07 19-Jul-07

0 0

Marker = No Marker

Channels = 0 - 1023

D/s(n) = 58.75

D = 0.84

Channel = 94

Log Data Units = Channel Values

Sample ID:

Patient ID:

Patient Name:

Case Number:

Tube:

Panel:

Acquisition Date:

Smooths:

p <= 0.001

0 200 400 600 800 1000Channels

0 200 400 600 800 1000PRA SINIF I negatif

PRA Sınıf I ve II DeğerlendirmeKolmogorov-Simirnov İstatistiği

M1

Ayse.002 Ayse.004

FL1-H FL1-H

G2 G2

NEGATIF SINIF II POZITIF SINIF II

PRA PRA

19-Jul-07 19-Jul-07

0 0

Marker = No Marker

Channels = 0 - 1023

D/s(n) = 53.22

D = 0.78

Channel = 364

Log Data Units = Channel Values

Kolmogorov-Smirnov Statistics

File:

Parameter:

Gate:

Sample ID:

Patient ID:

Patient Name:

Case Number:

Tube:

Panel:

Acquisition Date:

Smooths:

p <= 0.001

0 200 400 600 800 1000Channels

0 200 400 600 800 1000PRA Sinif II Negatif

kontroller.004

M2

kontroller.002

M1

M2

PRA Sınıf I ve II DeğerlendirmeMean-Median-’Peak Channel’ Kullanımı

0 200 400 600 800 1000PRA SINIF II POZITIF KONTROL

M1

Marker Events % Gated Mean Median Peak Ch

All 9900 100.00 324.97 346.00 0

M1 7184 72.57 380.94 376.00 340

M2 9490 95.86 338.46 350.00 340

File: kontroller.004 Acquisition Date: 12-Apr-10

Gated Events: 9900 Total Events: 12339

0 200 400 600 800 1000PRA Sinif II Negatif

M1

Marker Events % Gated Mean Median Peak Ch

All 7986 100.00 100.38 67.00 0

M1 349 4.37 373.39 319.00 296

M2 4709 58.97 166.37 162.00 150

File: kontroller.002 Acquisition Date: 12-Apr-10

Gated Events: 7986 Total Events: 14220

PRA Sınıf I ve IIRaporlama

HASTANE ANTETİ

Ad Soyad : Xxx Yyyy Örnek No: 180*** Protokol No: 499*** Örnek Gönderme Tarihi:16.02.2010 10:18 Doğum Tarihi:27.01.19** Cins: Erkek

Servis:Transplantasyon Doktor: A**** B**** Rapor Tarihi:18.02.2010 08:44 Onay Tarihi:18.02.2010 08:44

TESTLER SONUÇ UNIT REF.INTERVAL PRA SINIF I TARAMA *25,59% <10%-<15%

Negatif: <10%

Sınırda Pozitif: 10%<T<15% Sınırda Pozitif: 10%<T<15%

Pozitif : >15%

Akım Sitometrik yöntemle çalışılmıştır.

PRA SINIF II TARAMA *10,28% <10%-<15%

Negatif: <10%

Sınırda Pozitif: 10%<T<15%

Pozitif : >15%

Akım Sitometrik yöntemle çalışılmıştır.

Dr. X**** Y…..

A*** Hastanesi

Doku Tipleme ve İmmünoloji

Laboratuvarı Sorumlusu

Dip No:

Ruhsat No:

Antikor Tarama Algoritmi

Class I Boncuklar Class II Boncuklar CDC/AHG

NEG POS NEG POS POSNEG

DUR Spesifik BoncuklarDUR

Spesifik Boncuklar

Flow cellPRA

Çalışmalar

Sensitizasyon Hikayesi (-)

DTT /dilüsyon

Yorumlanamaz ise- dilüsyon yapTek antijen boncukları ile test etVeya ELİZA

Tx

FC-XM

NEG

Sensitize Böbrek Transplant Adaylarında Algoritmalar

Flow PRA Sınıf I & Sınıf II

Tek AntijenLuminex

+

Prospektif CDCFC-XM

++

Spesifik Tedavi ProtokolleriPP, IVIg, Rituximab

+

-

Spesifik PRA Örnek Hazırlama

200

R3

αααα-İnsan IgG(Fc)-FITC

FITCFITC

Set I Set

II Set III

Set IV

Spesifik PRA Sınıf I

Set I

SetII

Set IV

Set III

Spesifik PRA Sınıf II

200FSC-Height

100 101 102 103 104

PRA SINIF II SET2

Sinif II Negatif.002

R4

PRA Sınıf I ve II Spesifik -Tüpler

1-Sınıf I- Set I Negatif Kontrol2- Sınıf I- Set I Pozitif Kontrol3-Sınıf I- Set II Negatif Kontrol4- Sınıf I- Set II Pozitif Kontrol5-Sınıf I- Set III Negatif Kontrol6- Sınıf I- Set III Pozitif Kontrol

9-Sınıf II- Set I Negatif Kontrol10- Sınıf II- Set I Pozitif Kontrol11-Sınıf II- Set II Negatif Kontrol12- Sınıf II- Set II Pozitif Kontrol13-Sınıf II- Set III Negatif Kontrol14- Sınıf II- Set III Pozitif Kontrol15-Sınıf II- Set IV Negatif Kontrol7-Sınıf I- Set IV Negatif Kontrol

8- Sınıf I- Set IV Pozitif Kontrol

17-Sınıf-I – Set I- Hasta18-Sınıf-I – Set II- Hasta19-Sınıf-I – Set III- Hasta20-Sınıf-I – Set IV- Hasta

15-Sınıf II- Set IV Negatif Kontrol16- Sınıf II- Set IV Pozitif Kontrol

21-Sınıf-II – Set I- Hasta22-Sınıf-II– Set II- Hasta23-Sınıf-II – Set III- Hasta24-Sınıf-II – Set IV- Hasta

Spesifik PRA

200

R3

100 101 102 103 104

Sinif II Negatif.002

R4

100 101 102 103 104

R2

123456789

200FSC-Height 100 101 102 103 104

PRA SINIF II SET2

100 101 102 103 104

PRA SINIF II SET2

R4

100 101 102 103 104

PRA SINIFII SET3

R6

100 101 102 103 104

PRA SINIF II SET4

R8

100 101 102 103 104

PRA SINIF II SET1

860

HASTANE ANTETİ

Ad Soyad : Xxx Yyyy Örnek No: 180*** Protokol No: 499*** Örnek Gönderme Tarihi:16.02.2010 10:18 Doğum Tarihi:27.01.19** Cins: Erkek

Servis:Transplantasyon Doktor: A**** B**** Rapor Tarihi:18.02.2010 08:44 Onay Tarihi:18.02.2010 08:44

TESTLER SONUÇ UNIT REF.INTERVAL

Spesifik PRA Sınıf I ve II içinRaporlama

PRA SINIF I Spesifik * Cw12,Cw17,B35 NEGATİF

B44, B49,A69

DSA, B35 için pozitif

PRA SINIF II Spesifik * DRB1*07. DP13,DP14, DP27 NEGATİF

DSA , HLA-DR için negatif

DP bilinmiyor.

Akım Sitometrik yöntemle çalışılmıştır.

Dr. X**** Y…..

A*** Hastanesi Doku Tipleme ve İmmünoloji

Laboratuvarı Sorumlusu

Dip No:

Ruhsat No:

emel, 2005