5NlsNf 01-6242-2000

Standar Nasional lndonesia

Air mineral alami

tcs 67.160.20 Badan standardisasi Nasio"", IEilll

il

:lrFend*h*llan

Ran*angan st*ndar Nasional Indonesia {RsM) Air miner*l alsmi$*qn seb*gai ,i1un'r** yang siap min*m. Air miner*r arami jerax d*patdibedakan dari air minum biasa karen* cara prod::ksinya yang be*rda.$tand*r iri disusn* eelain untuk melindungi k**sumen *ari kesihatan dankeselamata*. juga untuk :

a. Melindungiprodusenl

b. Me*dukung pcrkembaxg*n agia i*dr"r*ri

c. Menunjang ekspor non migas

d. htenunjang inshuksi Menteri Perindu*triarr No.O4rM-iNSll*ll98g rentangpengawas&n makanan.

standar i*i disusun berdasark*n hasil pembahasan dalarq r*pat-rapatteknis, pra konsensus dan terakhir dirumuskan dalam rapat konsenior puout*aggal ? P*bruari 2000 y*ng dihadiri oteh wakil-wakll prcdusen, korsumerqlembaga ilrnu pengetahuan dan teknal*gi *erta in*tansi penrerintah yangterkait.

$tar*dar ini disusun olah Balai Besar Litbang l*duetri Flasil PsrtenianEogor.

Ilaft;:r iri

Pe*dahuli:an.

D*&ar isi.."...

l{alaman

i

ii

1

I

7

J

4

4

1q

19

I9

l.

2.

J.

.ta

5

il-

'l

a

q

Rnang Lingkrip

Acuan..,... ...,..

ilefir:isi

$yaral ftu{u...... .,......

[)enga nrbi lan r-or]l.oh

Cara uji .Syarat lulus uji ., ,. . .Syarat penendaan

.

Pengenrasan ..., ....,".,

iI

*f

{

Air nrineral al:rmi

1. Ru*ng li*gkup

$tandar ini rn*liputi acuaR. definisi, syarat mutu, pengambila* ccnt*h, cara uji, syarallulus uji" sy*rat penandaan dan pengemasan nntuk air mineral aJami.

?. Aeuan

1) $tand*rd meth*d &r Exarninatic:r of Water and Wastewai:er, l8* editio:r. AmericanFublic H*alth Assoeiation, Washington lg*3

2) Ccdex Standard furNatural Mineral$faters {C*dex Stan 108-Ig8}" (Rev, 199?}3) SNI0f -3553-1996 Air Minum Dala*r Kemasan4) Ferat*raa Menteri Kesehatan Rt No, 416/l\,{ENKES/pERJl}#lgg$5) SHI *e-2467-t991 Metsde Fenguji*n Kadar Bariusr dalam air dengan alat

$pektrafotameter S erapan Atcffi secara I a ngsu ng.6) Atomic Absorption Hydrid* $ystem, operati*n and service Manual.3 Definisi3.1 Air mineral alami adalah air minurn yang dipercleh langsung d*ri *ir sumber alamiat*u di bar dari sumur dalarn" dengan proses terkendali unuk menghindari pencernarataLi pengaruh Iuar terhadap sifat kimia, fisika air min*ral alr*ni. Air mineral alamidicirikan :

a. Kandungan g*ram rnineral tertentu d*ngan prop*rsi yang relatif danelemgnt" ata* eat-zflt l*innya

b. Kompcnennya konstan se*a debit dan suhunya stahil den.gan catatafifluktuasi alami yang kecil

6. Diambil dengan kcndisi sedemikian rupa s*hingga dap*t menjamin keaslian darimikoba dan keaslian serta stabilitas koarpcsisi kimia dari komponen-k*mponenesensiilnya

d. Dikemas di lakasi sumber dengan cara higienise. Tid*k mengalami proses kecuali pemisahan kornponen tak stabil seperti kandungan

besi, mangan, sulfida atau arsen elengan cara daeantasi dan atau penyaringan, jikaperlu dipereepar didahului dengan aerasi.

3.2. Definisi tambahan

3.2. t. Air nrineral alami berkarbanat al*miAir mjneral alami berka.rbonat alami adalah air rnineral alsmi serelah kemungkinan*ie*galami perlaku*n sesuai butir 3.1.e dan dica:npur dengan gas dari samber yangsama dan setelah Feflgemasan dengan mempertimbangkan hsl teknis yang urnu{n.mempunyai kandungan CO2]ang sama pada suhu dan tekanan *ormal.

adanya "tra6e

ad*nya riklus

1.2,?. Air menerai alami tanpa karbrrnatAir mineral alami tanpa karb*nat adalah air rnineral alan yang secara *lamiah dans*teleh kenrungkinan merrg*lainl per-iakLran resuai bLrtir _i.l ,: daii sefelah Fenge,rlasftn:idak n:rengandung Co: bebas dalam jurnlalr yang berl*bitrn ya*g rliperiukai xnruk:-nenjaga kelarufan garan-garftm hidrogen kadreinat.

1.2.3. Air nrinar*l alami dskarh*nariAir mineral alami dekarbonasi aclal*h air rnineral alami ,,*ng setelah ke*ungkinanmeagalami perlakuan sesuai butir 3.1.e dan setelah pengenra:an. rrrenganeluag e0, tealHrend*h dari pada saat air keluar dan tidak rnelgandung gar CO2 yong r***ra spontanterliha: ketuar d*risumbernya pada kondisi suhu dan tekanan rrrrrmai.

3 2 4 &ir mineral alami fortifika*r clerrgar: karbcn di*ksida rlari slrnilrernya adalah airmineral alan:i yang kemllngkinan setelah mengalami perlak.-ran sesuai butir l.l.e danserelah pengemasan mengandung gas {iCI; lebih banyak qlilri sirilt keluar dari sunrbernya.3 2 5. Air nineralalami dikarb*nasiAir mineral alami dikarbanasi arialah air mineral alami 3ang serelal kemungkianxengalami perlakuan sesuai bulir J 1.c clan setslah p{-itlsemasan telah dibuat"efleryeseent" dengan cara penambahan gas col dari sunrber" lniir.4 AuthorisasiAir mineral alanri hanrs diakr"ri oleh pernerintah daerah rlirnana'ternpal sumber air bera4a.

iI

------------l

4 $y*r*t rrl*fuSyarat nlutu air *ineral atanri s*perti rlibarvah irri

Spesifikasi'fabel

asr r*talr r*r ItNc, Kriteri:r *ii $atn:rrl p

7"1 J

I li{itrat firiO3} rgm.:t1

rya&q, 1ltn.ars il tlt t\

1 ?.{ir;r {FAO?}3. FIuo4da {F} rngll

:t:$lrnaks. I,Sr:':*lrc f! fl?4. .Sianid* (CN]

5 Fulfat {S04} * ryEl *aks.20*6. Cemalqn log;rm6.I Antimon {Sb) m$il rrtsl.e f"l {1fl{l) ,/ Arsen {As) rn.c/l ftlltj.'r ll Il\6.3. Bariuni {Ba} nrt/l raks ! ll6.4 B*rate Goi rndl nrxlr+ { fl6.5 Sadnduni_gd) ffi.rgl lrc {1 alfli6"6 Khromiunr (Cri

Tembagq{Cui t'ng3 nraks- 0 *56.7 nl ('rll n:akg. *,5:laks. 0,01s.8. Timbal (Pb)%

Mangarr (Mn) ngrti69m.e/l lliL-e fi flq

6. l0 Raksa {Hg} merll :rnks.0.00l:laks. 0.{J26.1 r Nikel Ni)%

Seleniurn (Se)Cenraran Kinria Are;n ik

n:gll6.12

*rdl !T}AKS. U.U,\l.ysfu q.*g#Jr:r*ic ll fi$i

a1t,t Aldrin d*n dieJelrin ntg'lwE$7.2 j,t dikktr**rhrxt

{!epfack{$rel}{}xide ntg;tt nkr fi {}{}f}}I7.4 Me$'toxr,ght*r. fitg;'l mal.t C,{}1

n*k* CI.85Delergett lltXr'l1A t-t fis agl *rtl+.+ {} fitt{lit_1 Mi*.yrrk mite:.czl \ m.q,:l ihiroo. C*n:ar;rn nrikrob:ro.l T'ntal plate cerult arval kolonilnrl ;ak,. Tiltr-82 I orar ptate count akhir kolonift;rl r:rakt I x 1fl:8.3 Sakteri bentuk coli kal*ni/25* nrl nrrl84 Bakreri E_, ccli

SieptococcLrsk*lonil?j0 ml rc'!85 i\oic\ntlJ)uml ftg rl

8.6 L pe$illgell kolnnilS0 rr:l nr.l87 Ilseydon'icna! a*ru*i *osa k*lonillS0 *rl nci

5. Fengambilan rant*h 'acara pengarnbilaa c*ntoh, sesuai d*ngarr sNI l9-0"129-lgfi* Fetunjuk pengambilane*ntch **,iran dan semi padat.

6, C*ra ltji6.1 Fersiapan contoh.

Hcr*ogenkan eontah dengan csra mengocok , memh*lak-ba,ikkan kemasan ke atas d*nkebawah

6 2 Nirrat

eara uji Nitrat sesuai dengan sNl 01-3-554 *lgq8, Cara xji i*r minum dalam kemasanbutir 86"3 Nitrit

eara uji nitrit sesuai dengan sNl sl-3554 -llqa, cara r.rji air minum dalam kemasanbutir I.6.4 Fla*rida

C'arauji flaurida sesuai dengan SNI 0l-3554 -:gqg" Cara uji air minum dalam kemasanbutir I l.6.5 Sianida

Cara uji sianida sesrai dengan sNI 0l-3554 -l?98, Cara uji air minum dalam kemasanbutir 14

6.6. Sulfat

eara uji sul&t sesuai dengan SM 0t-d554 - 1998. Cara uji ;rir minum dalam kemasanbutir I I j

6.?. Cemaran logam

6.7" l. Cemaran furtimcn

Frinsip

Analisis cemaran logam Antimon dengan spektraphototreter s*rapan atoin berdararkanpada proses penyerapan energi radiasi aleh arnn:-atom ya*g berbeda-bedo pud; riofr.u,tenaga dasar

lPeralatar

a) Fipet 1,2 5, I * rnl yang terkaiibra:ib) Buret 1S ml dengan ketelitian *,01 ml dan terkalibrasic) Labu ukrlr I**ml dan t00* m! terkalibrasid) Spek:raph*iometer serapa* at0me) ErlenreyerFereaksi

a) Asam klorida p ab) Air suling hebas l*gam*) L*rutan baku Antlmon 100* ug/mld) Larutan NaBH4 :3 gram lr^la0il + 3 gracr FJaBHa larutkan dengan air spli*g 500n:le) Larutan standar 10 ug/ml

s)

Fipet I rul }arutan baku A:rtirl*n di alas fnasukkan ke d*i;un tabu ukur 10fi mlditarnbah ?* ml HCI 5 N, repatkan sarnpai tanda garis denga* air suling betras tagamtarutan standar lOilS ug/mlPipet !0 ml larutan Antirnon l0 ug:nrl di atas. mas*kkan ke ,lalam labu uk*r l6*firnl' ditambahkan ?0 rnlHCl 5 N. t*patkan sarnpai tanda garis dengen air suling bebaslogamLanrtan standar 5. ?,5; l0; 12.5: 15, dan Z{} ugllifer. pipet 0,5 rnl. &,75 ml,l?,5 ml,I5 ml larutan $andar Antimon 1000 uEliter masinp*asing tre dalam 5 buah labuukur 100 :nl' Eitarahah 20 ral Hel5 N, tepatkan sarnp*i randi garis dengan air suting

Fersiapan ca*toh

a) Asamkan contoh sampai dan standar dengan HCL pekat sampai mempunyaikonsentrasi asam 2 N, tambahkan KI sampai rrertrpunyai konsentrasi K1 ?00 mg/I.Biarkan s*iama I j*m atau panaskan S0 . C selanra l0 menll"b) Conrah siap diuji

Cara Kerja

Periksa corrtnh pada alar AAS

Ferhitungan

I'litung kadar Antimiln daiilnr cortlch dengan nrenggunakan kr:ry* kalibrasi atar!persamaan garis regresi iinier

Kadar Antir**n {Sl;: Hasil penrbacaan

672 CcrnaranArsen

Cara uji elraran arsen sesuai riengan Sl-Jl CIl-i:5.{ -ls*8, fara u;i air rrri*urn clalarrrkemasan bL:tir tB

5.7.3 f*naran Barium.

Prinsip :Analisis l*gan: Earium rr:*g1I spektrcphoronlerer serapan atcn i:ercj*sarkan pada:::::-

peny*raFan energi raetiasi cfel arcn arnm yang bei.beda.beda tingkal tenaga

Peralalan

a) Labu *kur 95, 5*, !fiCI dan ltl${i ml rerkalibresib) Labu ukr:r I0** mt rerkalibrasic) Buret I0 rnl terkalibrasid) Fipet nkur 5 dan t 0 mt terkalibrssiei S*!as pialal} Pemanas li*rrikg] Spektraphoiometer Serapan At*rr.rPereaksi

a)

b)c)d)e)

Persipan eontoh

{iara Kerja

P*riksa *clnt*h pad:r alat AAS

Larutan Induk Barium i0S0 mglIt:b-lF 1'436 mg *1tu= kering ke dalan rabu r.:kur r000 r::r, Ta*rbahkan 20 mlHfl 1N

"

tambahkan air suling san"rpai tanrla garisHNO3 p.aHCI lhl. Larurkan iG n{ Her p.a menjadi i60 rnrdengan air *uling daram geras ukurAir s*ling bebas logan:Larutan standar Bariura 5, 10, 15, Z*, 25dan j0 crglliterPiper 10 rnl laruian induk Farium t0{ro-'urg,i;;;"tl Coto* labu ukur t00 ml,tarnbahkan air suling bebas lagarn ye,rg mengnnduog HNO3 i-l,5 ml HNG3 p.alliter),k*cok l? kali {10* uglml}Tuangkan larutan l*0 ug/r-nl Barium kedalam buret rnikro t{r n11. Alirkan ke dalam50 nl rnasing-masing ?,5;5; ?,5; i0; 1?,5; dan l*{ ial. tepar};an sampai tancla garis!;XTlair

suling bebas logarn yang mengaldung F[NO; p_[*1'l*r_k masing_n.rasing

a)bi

Asamkan ccntoh sarnpai pH.:? dengan HNC: pekatFipel l0* ml canr*h-ke"daran: piara geras ?j0 r'r, uapkan rria{as penangas ristrrk,sampai volumenya * 5 *.rlPiadahkan eontoh ke dalarrr tabu ukur r0;nr, [:iras pia]a g*r*s c*ngan *ir sirring yangmengandung HNO-:C*ntnh siap rliuji

c)

dl

Ferhitunga* :

F{itr:ng kad*s B*rir:rn dalam *ontoh dengan rnengg**akan k*rvEkslibrasi ataupsrsanlaan regresi lir*er

Hasil pembaca*nKadar Eariu*r {8a} -

t0

6.7,4 .e*maran Scrcnl'

rnnslp : -

Eila santoh yang freilgaldlog Boron dan curcurnin eliaramkan rta:r diuspkan akanlerbenfuk w&m* merah dari rasecvanine,

Peralatan :

ai Spekrr*ph*tofttr dengan Iebar celah I,0 crn pada panjang g*l*mbang 54fi lrrnb) Cawan pcnguap t0* - 1j0 rnt, mempunyai trentuk d; r,ffi;; t;;-;E i-rltr"d*ri kearsa ataa platinaPenangas air yang dilengkapi dengar pengatur suhuPipet nk*raan t, ?" I0 dau 25 ml terkalib,rasiLabu uhrr 35, 5s, 10S dan ls** ml terkelibrasiFipet ukur l0 ml rerkalibrasiGclas ukur i00 mi

c)d)eiss)Pereaksi : Sirnpan seffiua pereaksi dalam botol polieiiler"l.

4 ?*1ry-indr:k Forarl larutkan 5?1,6 mg asam borat anhidrat; H3Fcr keelalam labuuleur 100S ml dar: tarnbahkan *ir suling sampai randa garis1 ml: l*0 ug B*r**.

b) Lar*tan baku Boron" Fipet 10,0* rntr larutan induk Brrcn kedalanr labu ukur I00CI n*tarnbahkan air:uiing sampai tanda gi:ris. I ml = 1,00 ug Boron.

c) Larutan per*aksi k*rkuminLarutkan 4S mg kurku:nin dan 5,0 grar?r asam oksalat kedalam 80 ml etil alkohsl95% didalarn labu uk*r 1000 *ri. Tambahk*n 4.? rnl HC! p.e. Teparkan dengan etilalkoh*l 95s/n sarnpai tanda garis.

Cara Kerja

a) Fipet 0 {*lanko}" ?5- 50, ?5 dar: ll}* ml larutan bak* Bcrron !,00 ug lalu masukleankedalarn iabu ukur 100 ml. tembahkan air suling sanrpai t*nda" garis **hinggadiperaleh kadar Born:: r?rasing-masing 0; 0,? l; *.50:-er,: j da* i ,fi n,g p*, lirer goi*nb) Pipet larutan bak* Br:ron. csntr:h d*n blanka {*ir suting} masing-rnasi*g I rnlkedalan sawfin FeEgueF

e] Tamb*hka* 4'* ml larutan pereaksi kurkumin. uapkan diatas p*al:gas eir pada sulru55 + 2*e selama lebil.r kurang Bfl rn*nit sanrpai harnpir k*ring;, ke*:udian dinginkanpada suhu karnar

d) Tamhahkan l0 n:l etil alkch*l 95?o, aduk. masukkaft kedalara labu ukr:r 25 n:l

eJ Bilas cap':rr dengarr etil .rlkoh*1 g5-*;,s, t,lntbahk;rn ctil alkr:hr_ll ?Soli: sarnpai tanelagarls* P*riksa *er::.ar spektr*pr:r:r*lrielcr pada pa*tang g.-r'*rbang i4* nr*Ferfrit*r:ga*

.

Hltr:ng kaclar *oron dalanT cot.lloh dergan rnengeun;ikan kurva I.;.librasi ara* p*rsarjjanngaris regresi linier.

6.7"5 Kadmir:in

cara uji kadn:iunr sesr:*i der;g:n sN{ 0i-:5i4 'lq{}g,cera uii ai:.irirrxnr dalern kexia*anbutir 17.3

6.7.6, KlrrorrriurrrCara uji khr*nririnr sesuaid*ngan SlJl Ul=-j554-l9ig. 531s gji ail rninrrr:r dalarn kernasanbutir 1?.

6.?.7, Ternbaga

cara uji teinbaga sesr.:ai rl*ngan sl'll e 1-i554 -1998, cara r:ji air minunr daianr kerRasanb*tir 17 ?

5.7.8. Tinrbal

cara uji tinrbal scsrrai rlertgan sl\tl *l-i-554 -l?g8, cara uji air rxinum dala*r ke;nasanbutir 1? I

6 7 9. h4angar.r

{lara uji ffia*qat} sesu*i dengan Sxt 01-i5:4 -l!?g, cara uji air rninur:r dalarn k*masanbutir 16.

6.7.1{} Raksa

cara ujl raksa s*suai eir.ngan Sxl 0l-i-i-i.i -1gc:s. f_iar.a uji :tir *rinur:r rJal*m kenlasanbutir l7 4

6,7 I 1" f**rar*n Seleniunr

Prinsip

Analisis effa!'en logarn Seleniunr dengan spektr*phatorlleter se:,3Fan at*l:r berdasarkanpada pr*ses penyeraFa* errergi radiasi oleh at*n:-:rtorn yartg i:erbeda-bsita pada tingkattenaga dasar

Peialatan

a) Fipet I,? 5, 10 mlyang terkalibrasib) Euret 10 nrl deng*n ketelitian 0,01 *:l dan terk*tibrasic) Labu r"rkur l00ml dan 100f rnl terkalibrasidi Spektr*phctomet*r serapail atome) ErlenmeyerPereaksi

a) Asarn klarida pekatL''i Air suling bebas logam*) Len:tan baku $eleniuni lCIi)0 ug/r.nld) Larutan NaSFL : 3 gr NaCH +3 grarn lriaBi L larxtkan der:garr air sutlng 5gilr:ri.e) tarutan staneiar seleniu*r l0.uglrnl.

Pipet 1 mi laruian baku Selenium cliatas rnas*kkan ke drlarr lab* ukur lflf] mIditambah 20 nrl HCI 5 N. tepatkan sampai fancla garis dengar air s*ling bebas lagarni) Larutan standar seteni$itr 1000 ug/rnlPipet 10 *rl Iarutan Selenii"rnr l0 uglndclialas. rnasukkan kedirlam labu ukur I{]00 rni,ditarr:bahka* 20*rl HCI 5 N, lepatkan sampai tanela gari* :iengan air suling bebaslogam

g] Larutan st6'r.lar seleniun 5;7,5; l0; 12,-5. li, dan 30 uglliter. Fipet CI,-i ml. 0.?5 ml,1?,5 nrl, 15 ntl lamtan standar Seleniulr l0f0 uglliter masing-masi*g ke da!an.:5buah labu uk*r 100 *rl. Ditar:'ibah 20 r:-ll HCI 5 N. tepat.lan sainpai tanda garisdengan air suiing

Fersiapan ecnlclr

aJ

b)

Asarnk*n c*rrtoh dan *lanilar dengnn HCI pckat sarnpai nrernprnyai k*nsrntrasi asa*r5 N panaskanT*n c s*lanrir

-i0 r*cnit. dinginkar.r sar:-,pai surru ksmarCont*h *iap diriji

{-araKrrja

Ileriks* eonlCIh pada alat AAS

Perhltungan

Hitung karlar Seleniu*: dalam fonioh d*ngan r:rengnrrrakar: kun;r kalibra:i ataupersar'tlaaii gari* reqresi linier

Kadar Seleniun'r {Sel --. H:rsil pertrl;acilant)

6.8. Cer::aran Kimia *rga*ik

6.8" l. cemaran Festis;d:r {atdri*, die}drin" diklrrra*, h*ptakl*r, r*e.:hr:ksiklcr, pfB}Llara uji kadar pesrisiela ses*ai d*ngan SNl 06 -250s -ltigl, l"{et*rie p*:igujian kadarpestisida klar:organik clalan: air derrgan alat kr*;.rrat*grapi6.8.?. lleterg*n

Cara uji kaei*r *etergen sesi:ai de:rgan sNl ij6-:4?{:-1991, Ir{e:ode pengujian kadardet*rg*n datam air d*ncan arat *pektrt-rfcrometer secara binr metrl*na6.S-3. h{inyak mi::er*l

cara uji rninyak mi*eral s*srai riensan sl{l {i6-?I0?-t?91, h4etade uji Minyak danIarnak e1alam air sceara gravinr*{ri

6.9 Cenraran mikrcl::r

Persyaraf an Mikr*biclcgi

Selarna pemaseran- air *rineral alarnia)' harus bermutu sedernikian rupa sehingga tidak menimbulkan gf;lnsgua* keeehatarr

terhadap kcnsume:r {bebas dari nrikroarganis:ne pat*gen}b). hanrs aremcnuhi persyararan rnikr*biol*gi sebagai neJt*ut ,

l{anrs tidak terdireiesi pada setiap ccntohBila > 1 at*u pel.rgrijian ke ? diker,jaka*

./1

bila > 2 dirclek

c :- nilai rnaksirnutn vang eiapat cliteri*ra atau j*rtlair eont*lr yang rtiijirkari adabakterinya

nr : j*nrlah rraksirnurn bak:eri tler griirlljl4 r nllai yar:g digunakarr untuk ti*gkat peneri*aan eiirrima at;ru dlr'lak

Fersiauan 0e*amaPergujian pertarnaE. Coli atau calif*r*r iahan panas Ix?50Bakteri bentuk ecli {tatal} tx?-:,0 mlFeeal steftocacci lx?51) mIPsedntrnnas aen:ginosa Ix 350 *rlAnaerab pr*duksi sulfite lx 50 nrl

Pencuiian kc dua

Bakteri bentuk Ccli {taral}Streptecocei feealSulptritc-r*elusi ng a*aer*bPs*udorncnas aeruainr:sa

n :jurnlai, contclr

l()

Ifr

6.!.1 Cara*ji ceffara* mikrsba, TFf. bakteri bentu!q er"rli, E, cr:li, Srrept*coccus, danC. perfringens sesilai cicngan sesuai SNI C' i-28qi- ttg2 cara uji *e:xaranmikr*ba.

6,9.2 Analisis eslifsrs metode pe::yaringan {merribran fitr:eri.

*.?"?.1 Pri*sip

Fe*r.rrnb*han bakteri cslifarm setelah contch diinkubasikan d;ilam perr-r!:enihan vangcccrk seiama ?4-48 jam pada suhu i6 1 l"C

6,9.?.2 Peralatan

*\ Fipet ukur l0 mt atau gelas ukur 100 rnlb) Cawa* petridiam*ter 5fl - 60 rlrmc) Penyaring nrernbrarr 0,45di Finsete) Unit alat penyaringan {filrration ur.:ii}f) Le*ari pengerarn i6 i 1" C6,9.2.3 Pr:mbenihan

Vialer red bile agar

6924 Carakerja

ai Pasang peralatan pe:iyaring :nsrnbr-** yang terdiri da:'i caro*g* nembran penyaringdan pertan:pllng yang telah disterilkan lebih dahuft:, dan ir:.rbr.rngkan dengan vak'rmsistem

bl Masukan 100 ml cuplikan eont*lr atau sejumlalr yang dip*riukan kedalam rorongdari alat penyering dengan n:enggtnakar: pipct atau gelas uliur steril

c) Fergunakan vakum untuk penyaring cuplika* rnelaui n:smbran dan saring crrpiikanselumhnya.

d.} Bilas sel*ruh per:nukaan dalatn corong penyaring ric*g:r:r air pengenccr atau airsuling steril yang jumlahny;r sama dengan junr,ali cuplik;.n I'ang disaring cairanpembilas

e) Sesudah pernbilasarr selesai. hentihan vakum* Buka kemi:ali peralatan penyaring dan dengan pir:s*t yrlng steill angkat membran

penyaring dari alat penyaring.g] Letakal lnerubr*n penyaring di atas peri:enilr viol*t red bil* ag::r elalar:r carvan petri

{usahakan jangan ada gelernbung udara di bawatr rnembr*r: i.hi lnkubasikan calvan dengan pcsisi terbalik paela 36 * 1 of si:lama 48 j;un.i) Hitung kol*ni yang i:erwartta merah gelap yang berukuran 0.5 *nr *:tau iebih pada

nembran yang ilenyatakan junrkh bakteri ciform dalarn 1ili] rnl coflroh.

tI

lf

6"9.3 Analisls Ersler*eorri (5tr*pt*co*cii dengan :xe!*cla ;:eny*ri*gaa6"9.3. t Pd*sip

tls{t:r*cnr:r:t$ g:t'ugy r**rupakan sub grup darl fe*al str*Ftoeor$*s yaitu n:elipxti : 5.f*eralis, ,F-f*ec:ia.s, 5- gullin*rnrr da:: S. at'ittttt.E*teret{}t::i dibedakan dzri streplrv:ocef yang lai* dengan k*r'r':ar*pua::ny* untuk tumbu}tdalam perber':ihan rnengandrrng 6i9'i' .,1"i*triunr k!*riela {f:aCl} pad< perbenihan d*:gan p}I9,6 dan p*da l0'f darr 45'e .K*l*ni-l:*lgnt ent*r*e**ei berrv*rn* rurerah mud* san":pai merah d*rrg** endapatiberwarna coklat ke*rerah-i'ueraha:r dibawah saringan paela prircnihan E Agar *nluke nter***cti setei*h dieram pada s*,hrr 4l'C -.l, 0,SoC selan':a 48 jern.

6.*.3.? Feralat**

a) Batnl c*r:t*hbJ Bot*l pengencerc) Fipetdi Carva* petrie) Unit alat pe*yarirrgfl Penyaiing mernbran 0,45pnrg) Finseth) lnkr:trat*ri) Mikroskop/kaea pembesarj) Tabung reaksikJ Aut*klaf

S.q.3.3 Perbenihan

a. rnE agar untuk crllt'r'(rcoc(i

P*ptone i 0.0 *qNatriun klarida, NaCl 15,0 gEkstrak ragi :0,0 gEseulin I,il gActidi*ne ieycl*1":exirnide) 0,05 gNalrium ezida {Nnh0:} 0,1-< gAgar 15.0 gAir suting I tPanaskan unt*k nelarutka:r bahan, sterilksn dan dinginkan paila penangas air pada sr:h*44 * 4{:*t.. farrlpur"kan 0,25 g tralit/i-rie rrr:leJ $gnsnn i :*} air sul:ng. tarrtba}tkan be}:erapat*tes NaOH *.1 N *ntr-rk nrela*rtkan antibiotik d*n tarrrbahkan l":edalant rnseliunr Lrasal.Tambahkan 0,15 g:,3.5 - trilenit telraz*1!ulr"! khk:rida dan k*i:ok benar sr,rpaya lalr.it.Tuangban agar kedalar:r caw&ft petri I x 50 r::nr srtrlratr 4 sanrplri 5 rnnr {kira-kira 4 - 6rnl) darr biarkan ntcmadat, prH akhir l:arus ?.1 ;0,3. Sirnpan cawan yang sririahdituangkan, d*!am gelap pada suhu 2 - 1fi"C. Euang *etelah -10 hi,ri tr':enyin':panart{fatatan . Medium ini diliarankan r:rrluk nte:'rrbiakkart ctr{rrtrctu"ti dalaln air ilarr air lautr:*t*k k*perl*an rekr*asi).

t:

Subrrr*t ll-i..1

il scu iirrFei;-ic i:iiraie

. \l|- St.rlillg,

pltr sebel*l:T iJi au:r-:!l:if 1:;i;.tis 7.1 ':' i.i.2 F:rrr;*t;,:* *nlLrk lt-q:lai-r!f!:an i,:rl:;r*-l:,.:?.:r:n,si*l'ilLell- Cal: di::ginkatt p;lda ilcr11il;1!.:t5;rir 1:;iri.r.s.lirrr .1J -.ir,"C.'i"L;;*:ri:L:,:n r.riciJirl:rkr.dal**r Cfi!1'en p:clri trkirr'*ti 5rl rltr.r.er:il:l -{ - ! i:r:.lt ik;ie-kir;:.1 _ {: rrrij Carr 1.:iaik*::tll*11'ii1{jfi|. 5!npsn r.a1vft:l

_v:ilrq sutjall ditr;:at},*r.: ii:lli.:r friai: i.;:rc:r sul:rr : - ia:,,(, 13*:*ig5eaelah il.l haii penf inr;;arra*.

{: :lt a gai t t t lr rt ;t:t:t:t' tr.1 i1;tf t1}i.,{iar tt / .tl t.t, t' :/ r ir,,r., I

I il r;fIi r.. :

.Li tt ,,lt

i tvplr-;.t

Ferric citrateAgarAir suling

O5 t'l5,S gll

Panaskan untuk rnelarui!

$.?.3.6 Ujipe*egasa;r

Aftbil k*l*:'ti-kcilani yang diduga dari m*:nbr::n den g*res kr: afas pe.rrukaa* agarbrai*t'hesrt infirsiat etralam f&rvan Erarn pada suhLi J5iC + 0 i"e seian:a 34 {g jarnFindahkan satu sengkelit koloni yang terisolasi deng** baik na*a agar lsrair>ie*t.rittfusiisrz ke dala::r seb'uah tabxng ya*g berisi kaldu &rajlr-he*rt ti{rt.ri*t-daL.r ke masing-:n*sing k* atas permukaa:r 2 gelas sediaarr ya;:g bersih. trram kaldu hy*itt-he*rt infrtsiottp*da suhu 35of t *,5uC selan,a 24 jarx. Tambihk*n beberapa t*:*s hidrogen peruksida{F{.Ct} segar ke atas *lesan pada gcfas sediaan. h.{irnc:;lnya {tin"rbulnya} gei*rlbung-gelernbung udara pada *lesan iersebut rrenrnjukka* uji latalai* pcsitif cla*mennnjukkan bahwa k*lani yang diduga buka* anggata darl grup fecaf strepftse7sui"kala* u.ji kalalase negatif {tidak ada gel*rr,l*ung-gele*rbr,t':g ud*r*} bual pervarn*uo grun";dari gelas s*diaan kedua Fccsl s!rcpftlc*t:t'i **n ttsrcrrsrsici adalah bakieri gru,r, pouitiqsel-sel bul*t, diarneter 0.5 - !,* pn: paling b**yak rJitcr*uk*n dslam bentuk berpasanganaiau rantai pe*dek.Findahkan salu sengkelit srrspensi perlumbuhan dari kaldrt hr*in-,iear-t ittfitsi*rt masing-rnesing k* dalam perbenihan sebagai berikut : agar lflr esesrlirr {rram pad-a suhu 35*e i:s"5'c {*ela:ns 48 j*m}. kaldu hr*ifi-}reart iurttsiru ieran", pada srihu e5"c t 0,5oc{selama 4& jam} kalelu hruitt*hesrt i*fir.tirxt tleng*n g"5% N:rriiu::r klarid;r {fq*Cf } {erampada suhu 35.C t 0,5of selarna 48 ja:nl.Bila uji pengasan pada koloni-kcilcini tersangka rr"renghasilkan uji katalas* negati{tambah pada agar hile es*lin, merupakan hakteri b*lat gram plsitii d:rn tumbuh ladasuhu 45"C dalam kaldu br'an>!r*at'l infitsirn, rriaka kal*ni yuog diduga tersebutiermasek dalarn grup ,&cs{ strtg;{etuocclrs. Bira knl*ni-koloni 1:ang ciiduga itu dapartumbnh juga pada suhu 45nC dan kaldu hrtin-!t,ut r ntlir-vrtrr ynng rxenganduyrg 6,56r'oNaCl menunjukkan bahwa koloni-k*lcni tersebut ciinrilki q:*'n-*runt dalarn Srupetvter$e {}{:c!r"s

.

6.9.4. Pseudcmon*s aenrginasa

,9.4.1 Metoda penyaringan {rnembrane filt*r)6.9.4,1. 1 " Fririsip

fertunttrnlran P. aeruginr.rscr pada pengeringan me*rbran dengan llat in appearanee withlight auter rims dan bir:tik coklat sanrpni hijau hira;':r clitengair sereialr ilierinr pdea suhu41,5 t n,5'C selama 72 iart rJar.:ra per:.rbenihan yans c*er:k.6?.4 l? Peralarana. Gelas ukur l0* r:'rltr Pipel I0$ nrle. Finggan p*tri 50 x l3 nmd. Pengering *rernbran garis tengah 0.45 n':rne. Pinset sterilf. Unit alat pengeringan {filtratir':n unitig l,ercari pengeram 41.5 t fi,i "C

l]

ln r r -

h0..r.+. ! .-i. rernenrl'):rn

a. R'{-PA agarAgar ir:i tidak bis* didap*t dalams*bagai* b*rikut :

L- Lysine HCI?=lairir"rrn kla rid a, NaClYeast sxtractXilosaSuhr**aLakt*saPher"r*1redFerric an:rncnium citrateNatrium tiostilfat, Na-S "O,Agar.,\ir suting

bentuk clehydratcd & bisa rlis,i:pkan dari bahaa rlasar

Larutkan semua baharu-bahan dal.tm air suling. atur pH 6-5 ::0.1, rtsriikan menggr:nakanaui*klap pada suh* l?l "C selama l5 rnenit, setelah steril, dingir,!:an sanrpai suhu 5-5*S0nC, Aiur pH kernbati rxenjadi 1,1 *t),?. Tambal'rkan antibislrih kerirg sulfapyridi** 176mg; kanai:rycin $,5 mg,nalidixic acid i7,0 nrg; dan cy*lcheximid* 150 nrg untuk I literperbenih*r: iersebrit diaias {antibiatik ter:al'rllf pr*cluksi Sigr:ra Cl*lr:isal Ca., St. L*uis,Mo., atau sejenitnya) Sesudali sei:1ua aniibiatik tereampur, :.*ang sebanyak I n{perbenihan kedalam pinggan petri berukirran 50 x 1? mnr. Simp*r pir:gga:r-pinggan yangberisi perbenihan tersebut pada suhu 3-10 "C. Buang perbenih*n yang tidak t*rpakaisesudah *atu bulan penyin:pa:ran.

b. X,{odifikasi M-PA asar

{M-FA-C agar yang iersedia secara kr:n,ersinl :udah menganrigng :nagnesium,sul&t,kananrycin, dan nalidixic acid).

c. Agar susu {milk agar) nrr:difikasiBrrrvn ci*:r Sc*tt f *ster

"1,{i gritl cr'I 1l *r

?.5 grl.?5 grI ?i trr0,*8 grflRcr6,8 grI5,0 grI liter

Bagian A

Susu instan tirlak berle:xakAir sirling

Bagian 13

?rj*1:iel brc,)lhNatriurr kl*rida . XlClAgarAir suling

{carnatiorr atar: sejeni sr:yaJ l0t) gr50{} nrl

Steriiisasi bagian A d:in B secaraSee.ara aseptik canrpurL*r: bagiandalam plagan petri b*nikLrran trliO

l?'5 gr? \ gr

15.0 gr5{i0 rnl

terpisah. setr:lah sieril c*pat d:nginkan sar:rpai 55 *C.& da* B, Ialu t*anq lebih kura*g 2l]0 ruI iierb*nihan kex I 5 nirii

l{'

6.t.4.I 4. Cara kerja

a. Uji pendugaan

- Fasang peralat pelyaring necrb:'srr yang i*rcriri eiari cr:reng, Frea-:bran penya,i$g da*penenrpllng ya*g telah disterilkan iebih dal'rLrlu dan hub*ngkin ii,:ng*,r uutu* sislJr*.- &4asukan 200 E:d cuplihanm contoi:{naiur*l waler} ata* i0* - ji}i} :*! cL;plikan c*;'tch{air kotamrenacg} keelala$} c{trong dari alat p*nyuiing

6.{}.4 2.2 Fer;rlatan

a. Tabu:rg reeksib. Pipet ukurc. Inkubslar { le*rari peng*r:tm } 35 - i7 '{1,

6 9.4.2.i Perbenihan.

a. Asparaglne bn*thPeri;enitrra* i*i lieiak bi:a didap;il dalar:: ber,tuk dchydratcd dan bisadisiapka:r dari baha* dasar sebagai berikut.

Asparagine, FLfu*rydr**s dikati*m hid r* gerr f,*sfat, K;} {FS1Magnesiun suliat" l\4.r50+.? H:OAir suii*gAtur pH 6"q - 7.7 sebelunr nt*rilisasi.

b. Acetan:ide hrath.

Ferbenihan tidak bisadasar sebagai bcrikut:Ace:amide

didapat dalarn bentr.rk dehydrated eian hisa. dlriaptan dari bahan

l,o gl.o g{15 cri liter

Natriun: khlorida, Na Cliurhydrou s di k*liurn hidrog*rr fc sfat- K:HF *.rKalium dihidragen fo*fat, K[{zpO;Magnesi*rn sulfat" MgSOa.?H;OFhenol redAir suli*gAtur pi{ 6,9 - 7,2 :ebelum st*rilisasi.

c.' Agar :xiring acetan:ide.

10,il g5On'r'3

1"39 gtt ! \ ct0ir'.\'5

0rll? o' -'--I liter

Siapkan bahan-t-:ahafl se Fsrti pada peitrbuatan afielerxide hr*iir. l:t * tantbairkan l5 g agart*ntr"lk i I perbeniha*. Panaskan hahan-bahart iersebut s:ulrp:ri agar larut, Pipet 3 mlp*rbenihitn ke rlalan: tabung r-eaksi b*ruk*ran 1{: rnfit. Seti*dah $trilsa5i niiringka*tabung-tal:ur:g dan biarkan sauil:ai agar dingi* dan rnen:l,ekir irtttr,rk merrriapatpernrukaa:r miring vnng llas

6.*"1.?.4. Cara kerla.

. Uji p*nil*gaan

Pipet masing-rnasing l{i rll eupiikan ke d;rlartt I iahurrg }:ang herisi l0 nrl asparagitebroth double strenqll']Pipet rr:asir:g-nrasir:g I rr:l elan {i.l rnl euplikan kc rlalnrri 5 t*Lrung kcdLra dan kctigayang bcrisi lt) irrl pelh*nihan aspar;rgine br*th si*glc stren,;th Pr:trgcncerall

-y*a*glebih tinggi eliperl;:kar': urtt*k air kolattt relang.Erar: tabung-lab:ing terschul pnela strhLi i5 - .i;''C.Sesudah 34.ian.r dan sesirdalr 4$ j*rn pcn**r*inan nNtlati iid.'.lrrs-lalrtrng lerseh'rrt dii:arvah panje*g gelo::rbang sinar ttltra violet {sinar hi:arn} f;lattt l'i:a:rg g*lap, Bilatin:bul pi{inen tlutrese*tt hlau dirryatakan p*sitil'.

l$

l: Llii pe*-*ai:irl

- lr:*kulerikar: t-l I :'r:l 1 1 s,.:t:rkelii] bi,;l:;:r 1:i:tg 1,i:.,ifil',1:.,;.i;:pr:rber:ii":ltir:lf*t;i111;dr'br'*thl1i:i'Lt {i:fits i;:;:ia:;:,.:;.;i:i;!:;:llt;ti:;

- l4i p;:*c*a:-R;t riir:valrrL:t:: !.11i;iii Irila ]-srl. :r,,i .:r ....,',.,ii ,,..*.;L*rcla pl{ ti*gti se,t*drir ii,.:r.lu;r :e:ltn:;i 2J,i::l:r .}* irl:: l::ri:

.:.:i p*r::iilr::.':;::: kr r-l::}:::r:: : :r : ri tt * ;,,er l ;..r::i r-j':;t rrlrri.j;:i!i'.:r':qri {1:* r'6ii: ;.;; ;1r: i ': \-l "t-

**{:_i Pi'rl-:iixlgart{'atat i*n.:l:il': tebLjng vanql'. .t*tiit.3.!'.? p*t 1aJil i::I-r:: r - 1li.

poiitif petla t:,.i': pe;t*gitiilrl Eeielr g*l'l r:tt:i.:aEl:n:k::;r {;:irr:l

;lLr hin:l;: :lngla it;i;:,t!r rarr::g!"in,11'11 i;*';1' 5 r i lrhr:l:ii f-i"*L*l

i. 53:tr*t lul*s ujiPiirrlrrk iil;':,vci*kell lLritis rrji *};rbila;r;i::r::,::tilii iittl:.;i:ri biiljr.i ii,ur s,,niat r1-::.i:u br::!r .1E, S-var:rr p**a*d::;rrr

$yarat pe::arrda.:n scsLrai derrga:r l.inj**g-ui;da;tt lll n*l ? tui:i'tanq nlaini!: ai s*k r: rai : **!.ur*llqr1v3 t.r:r.n :: i:l la. Na:;ia pr;elu!:h llafiar hahan 1,;ri"rrr, ;.iigr:;tak,:rrc. lSeral b*; sili al:iu iri bcr::rhd r\a:*li da;r ;ri;rrral pti:rlusc:r atar.L inrl:i:r-1ire 'lanl'ga1, hrillrl r:1;tn i;ilrlrn kariah-ial-ll:

* ir,.i,l{r lii}t!*n* Fan::::.:

i )'{*t*slalprri5e:i ilcrlthuatatlg 3*1;r r''lcrl'rr.rat kanriurge* {*rg,'i }K . xa . {l;l . 1ls . l;i'i}:. .i{).r , \l)., ( tL l'flrgrlnrts;r lr

P:cdi:k riiLsr:r:ir il;rlar:t n'ajah vi]ng t:i'1rlrr:Lri rai:;r.:irl:ik iiipr::gerirl;i ;:t:;u nr.:rr:pentlrrrihlisi. Fr*riul'; lii-sir:rpar' il;rn

':i!,1**tr:t clerrg;r:'r r.ir.i .,ilrurr iik rlr,ir ,lr-:r;i t,:,,i.i. r.;t:, tli!.:::::

t;