สำนักงานคณะกรรมการวิจัย ...wwmms.up.ac.th/research/uploads/1230/fileID-1230-18d... · Web viewสมม ต ฐาน 2 : สารสก

โครงการวจย

แบบเสนอโครงการวจย (r r r )esea ch p ojectประกอบการเสนอของบประมาณ แผนบรณาการพฒนาศกยภาพ วทยาศาสตร เทคโนโลย วจยและนวตกรรม

ประจำปงบประมาณ พ.ศ. 2563( เปาหมายท 12 และ )3

------------------------------------

ชอโครงการวจย (ภาษาไทย) การศกษาฤทธของสารสกดหยาบจากใบปาชาหมอง (Vernonia amygdalina Del.) ตอภาวะกลามเนอหวใจขาดเลอดในเซลลกลามเนอหวใจและเอนโดธเรยลเซลลทเหนยวนำใหเกดภาวะนำตาลสง

(ภาษาองกฤษ) The effects of Vernonia amygdalina Del. crude extract on myocardial ischemia/reperfusion injury in hyperglycemia induced H9c2 cell and endothelial cell

ชอชดโครงการวจย (ภาษาไทย)……………………………………………………………………………………………………………………

(ภาษาองกฤษ) ……………………………………………………………………………………………………………………

ชอแผนบรณาการ (ภาษาไทย) การพสจนสรรพคณทางยาของพชสมนไพรภมปญญาทองถนภาคเหนอ: เพอการตอยอดพฒนาเปนผลตภณฑธรรมชาตในการปองกนและรกษาโรค

(ภาษาองกฤษ) Medicinal properties evaluation of f local wisdom herbs in Northern Thailand: Improvement into natural product for disease prevention and treatment

สวน ก : ลกษณะโครงการวจย โครงการวจยใหม โครงการวจยตอเนอง

ระยะเวลา ....... ป ………เดอน ปนเปนปท ....... (ระยะเวลาดำเนนการวจยไมเกน 5 ป)

1. ยทธศาสตรชาต 20 ปยทธศาสตร ยทธศาสตรท 3 : การพฒนาและเสรมสรางศกยภาพทรพยากรมนษย

เปาประสงค 3.5 การเสรมสรางใหคนไทยมสขภาวะทด 2. ยทธศาสตรการพฒนาประเทศตามแผนพฒนาเศรษฐกจและสงคมแหงชาต

ยทธศาสตร ยทธศาสตรการวจยท 8 : การพฒนาวทยาศาสตร เทคโนโลย วจย และนวตกรรม เปาประสงค -ไมตองระบ -

3. ยทธศาสตรวจยและนวตกรรมแหงชาต 20 ป ยทธศาสตร 4. การพฒนาโครงสรางพนฐาน บคลากร และระบบวจยและนวตกรรมของประเทศ

ประเดนยทธศาสตร 4.7 โครงสรางพนฐานทางการวจย วทยาศาสตร และเทคโนโลยเพอตอยอดอตสาหกรรมการเกษตรและสขภาพ

ไฟล Templ at e1 22092560V B 1


แผนงาน 2.3.2 การปองกนและเสรมสรางสขภาพ 4. ยทธศาสตรการวจยของชาตรายประเดน ยทธศาสตรการวจยรายประเดนดานการพฒนาสมนไพร 5. อตสาหกรรมและคลสเตอรเปาหมาย

ไมสอดคลอง6. ยทธศาสตรของหนวยงาน โครงการวจยเพอพฒนา หรอสบสาน ศลปะ วฒนธรรม หรอภมปญญาทองถน ของกลมชาตพนธในจงหวดพะเยา

---เลอกยทธศาสตรหนวยงาน---สวน ข : องคประกอบในการจดทำโครงการวจย

1. ผรบผดชอบ

คำานำาหนา ชอ-สกล ตำาแหนงใน

โครงการ สดสวนการม

สวนรวม

เวลาททำาวจย

(ชวโมง/สป

ดาห)ดร. เอกพจน พรมพนธ หวหนาโครงการ 60 25นางสาว สภาพร ขำจนทร ผรวมวจย 20 20นาย นพดล เมองซอ ผรวมวจย 15 20ผศ.ดร. สราวธ คำปวน ทปรกษาโครงการวจย 5 5

2. สาขาการวจยหลก EO CD 3. วทยาศาสตรการแพทยและสขภาพ

สาขาการวจยยอย EO CD 3.3 วทยาศาสตรการแพทยและสขภาพ : เทคโนโลยเภสชและผลตภณฑธรรมชาต

ดานการวจย สขภาพ 3. สาขา EISC D 09 Health and welfare

091 Health 0917 Traditional and complementary medicine and therapy

4. คำาสำาคญ ( rd)keywo คำาสำาคญ ( )TH ภาวะนำตาลในเลอดสง, ปาชาหมอง, p38 MAPK, JNK, ภาวะแทรกซอนของโรคเบาหวาน คำาสำาคญ (E )N Diabetes, hyperglycemia, Vernonia amygdalina Del., p38 MAPK, JNK

5. ความสำาคญและทมาของปญหาททำาการวจย โรคเบาหวานเปนโรคไมตดตอเรอรง ( Non - Communicable Diseases :

) NCD ทเปนสาเหตหลกของการเสยชวตของประชากรและเปนปญหาสาธารณสขทวโลกA E E DDIN N.CIT

E d A r d r A r r r2017< n Note><Cite>< utho >Fe e ation</ utho ><Yea > </Yea >( )498 1<RecNum> </RecNum><DisplayText> </

ไฟล TTTTTTTT 1 22092560V B 2


r rd r r r r r498DisplayText>< eco >< ec-numbe > </ ec-numbe ><fo eign- "E " d d " d r r d r r " 5 908 059 50keys><key app= N b-i = zv ew afzax ev k fafx xv ap w

" " r r 1531729949 498timestamp= > </key></fo eign-keys>< ef-type"E r " r44name= lect onic Book > </ ef-

r r r r r type><cont ibuto s><autho s><autho > Inte national Diabetesd r r r r rFe e ation</autho ></autho s></cont ibuto s><titles><title><styl

" r " "d " " " A E E 100e face= no mal font= efault size= % >IDF DI B T SA A "TT rT TT" TTTTT "dTTTTTT" TTTrTTTT"TTT" 22 2

" " " r " "d " 12size= > </style><style face= no mal font= efault" " E d 100size= % > ighth e ition

d " r " 2017</style></title></titles><e ition><style face= no mal"d " rTTTT "TTT" 2 2 2

" " d d r " r " 12 8size= > </style></e ition>< ates><yea ><style face= no mal"d " rTTTT "TTT" 2 2 2

" " r d12 2017size= > </style></yea ></ ates><pub-location>https://wwd r r r d r r d d134w.i f.o g/e-lib a y/epi emiology- esea ch/ iabetes-atlas/ -i f-

d d8 9782iabetes-atlas- th-e ition.html.</pub-location><isbn> - -r r r rd930229874- - </isbn><u ls></u ls></ eco ></Cite></

E dTTTTT(T) 1 จากการรายงานของสมาพนธเบาหวานนานาชาต( rInte national d r ) Diabetes Fe e ation : IDF ไดมการตดตามและประเมนสถานการณ

ในการเกดโรคเบาหวานทวโลกในป พ.ศ 2560 พบวามผทปวยเปนโรคเบาหวาน จำานวน 425 ลานคน A E E DDIN N.CIT

E d A r d r A r r r2017< n Note><Cite>< utho >Fe e ation</ utho ><Yea > </Yea >( )498 1<RecNum> </RecNum><DisplayText> </

r rd r r r r r498DisplayText>< eco >< ec-numbe > </ ec-numbe ><fo eign- "E " d d " d r r d r r " 5 908 059 50keys><key app= N b-i = zv ew afzax ev k fafx xv ap w

" " r r 1531729949 498timestamp= > </key></fo eign-keys>< ef-type"E r " r44name= lect onic Book > </ ef-

r r r r r type><cont ibuto s><autho s><autho > Inte national Diabetesd r r r r rFe e ation</autho ></autho s></cont ibuto s><titles><title><styl

" r " "d " " " A E E 100e face= no mal font= efault size= % >IDF DI B T SA A "TT rT TT" TTTTT "dTTTTTT" TTTrTTTT"TTT" 22 2

" " " r " "d " 12size= > </style><style face= no mal font= efault" " E d 100size= % > ighth e ition







E dTTTTT(T) 1 ซงในภมภาคเอเชยตะวนออกเฉยงใตมผปวยโรคเบาหวานจำานวน 8 2 ลานคน และคาดวาผปวยเบาหวานมแนวโนมสงขนเปน 151 ลานคน คดเปนรอยละ

8 4 ในป พ.ศ A E E 2588. DDIN N.CITE d A r d r A r r r2017< n Note><Cite>< utho >Fe e ation</ utho ><Yea > </Yea >

( )498 1<RecNum> </RecNum><DisplayText> </r rd r r r r r498DisplayText>< eco >< ec-numbe > </ ec-numbe ><fo eign-

"E " d d " d r r d r r " 5 908 059 50keys><key app= N b-i = zv ew afzax ev k fafx xv ap w" " r r 1531729949 498timestamp= > </key></fo eign-keys>< ef-type

"E r " r44name= lect onic Book > </ ef-r r r r r type><cont ibuto s><autho s><autho > Inte national Diabetes

d r r r r rFe e ation</autho ></autho s></cont ibuto s><titles><title><styl " r " "d " " " A E E 100e face= no mal font= efault size= % >IDF DI B T S

A A "TT rT TT" TTTTT "dTTTTTT" TTTrTTTT"TTT" 22 2" " " r " "d " 12size= > </style><style face= no mal font= efault" " E d 100size= % > ighth e ition





E dTTTTT(T) 1 นอกจากน IDF ไดมการรายงานสถาการณเบาหวานในประเทศไทยวา มผ ปวยเบาหวานในวยเจรญพนธจำานวน 42. ลานคน และพบวารอยละ 8 5 -9 5 เปนผ

ปวยเบาหวานชนดท ( d M A E E 2 2Type II iabetes mellitus; T D DDIN N.CITE d A r d r A r r r2017< n Note><Cite>< utho >Fe e ation</ utho ><Yea > </Yea >

( )498 1<RecNum> </RecNum><DisplayText> </r rd r r r r r498DisplayText>< eco >< ec-numbe > </ ec-numbe ><fo eign-

"E " d d " d r r d r r " 5 908 059 50keys><key app= N b-i = zv ew afzax ev k fafx xv ap w" " r r 1531729949 498timestamp= > </key></fo eign-keys>< ef-type

"E r " r44name= lect onic Book > </ ef-r r r r r type><cont ibuto s><autho s><autho > Inte national Diabetes

d r r r r rFe e ation</autho ></autho s></cont ibuto s><titles><title><styl " r " "d " " " A E E 100e face= no mal font= efault size= % >IDF DI B T S

A A "TT rT TT" TTTTT "dTTTTTT" TTTrTTTT"TTT" 22 2" " " r " "d " 12size= > </style><style face= no mal font= efault" " E d 100size= % > ighth e ition







E dTTTTT(T) 1 ซงเบาหวานชนดนเกดจากภาวะดอตออนซลน ( r ) Insulin esistance และม สาเหตหลกจากภาวะความผดปกตของระบบเมตาบอลสม ( dr ) metabolic syn ome

A E E A E E A A ( ) 23DDIN N.CIT DDIN N.CIT .D T , โดยเกดจากเซลลของอวยวะเปาหมาย ของฮอรโมนอนซลนไมตอบสนองตอการกระตนโดยฮอรโมนอนซลน สงผลใหไมสามารถนำา

นำาตาลเขาสเซลลเพอใชในการผลตพลงงานได จงทำาใหนำาตาลคงเหลอในกระแสเลอดสง และเกดโรคเบาหวานตามมา A E E A E E A A ( ) 23DDIN N.CIT DDIN N.CIT .D T , โรคเบาหวาน

ชนดท 2 นนมความรนแรงทำาใหเกดโรคแทรกซอนตางๆตามมา คอ โรคแทรกซอนชนด เรอรงทเกดกบเสนเลอดขนาดเลก เชน จอประสาทตาเสอม (r ) et i nopat hy เสนเลอด

ทไตเสอม ( r ) neph opat hy โรคแทรกซอนเรอรงทเกดกบเสนเลอดขนาดใหญเชน โรค กลามเนอหวใจขาดเลอด ( rd ) myoca ial ischemia เปนตน A E E A DDIN N.CIT DDIN

E E A A ( )45N.CIT .D T ,จากการรายงายของคณ Morrish NJ. และคณะพบวา ผปวยโรคเบาหวานชนดท 2 มโอกาสสงทจะเกดภาวะ

โรคแทรกซอนจากโรคหวใจและหลอดเลอดมากกวาคนปกต 2-4 เทา(6) โดยเฉพาะอยางยงโรคกลามเนอหวใจขาดเลอด(6) โดยพบวาโรคกลามเนอหวใจขาดเลอดนเปนสาเหตอนดบหนงของการตายของผปวยโรคเบาหวานชนดท 2 ซงเบาหวานชนดท 2 นจะเพมอตราการบาดเจบและการตายของเซลลกลามเนอหวใจ เพมพนทกลามเนอหวใจตายหลงจากการขาดเลอด(4-6) เพมสารอนมลอสระ (reactive oxygen species) ทเกดขนในเซลลหวใจ(7) และเพมอตราการกระตน p38-Mitogen Activate Protein Kinase (MAPK) ใหสงขน โดย p38 MAPK นเปนการสงสญญาณระดบเซลลทกอใหเกดการตายของเซลลกลามเนอหวใจมากขน(7) ดงนนการลดนำตาลในกระแสเลอดและการยบยงการตายของเซลลกลามเนอหวใจจากภาวะขาดเลอดในผปวยเบาหวานชนดท 2 จงเปนการรกษาทดทสด เพอใหผปวยโรคเบาหวานชนดท 2 มชวตทยนยาวมากขน

ปาชาหมอง (Vernonia amygdalina Del.) เปนพชทมตนกำเนดมาจากทวปแอฟรกา(8) ซงนำมาประกอบอาหารและนำมาเปนตวยาผสมในตำรบยาพนบานของชนเผาพนเมองเพอการรกษาโรคไดหลายโรค ยกตวอยางเชน โรคมาลาเรย โรคเบาหวาน โรคเกยวกบลำไส เปนตน(8) โดยจากงานวจยทผานมาพบวาปาชาหมองประกอบดวยสารตานอนมลอสระ (วตามน A, C, E, และ riboflavin)(9, 10) สารประกอบแรธาต (Fe, Se, Zn, Cu, Cr, และ Mn)(9, 10) และสาร phyto-compounds (polyphenols, flavonoids และ tannins) เปนตน(9, 10) โดยการทปาชาหมองประกอบดวยสารตานอนมลอสระหลายชนดจงทำใหสามารถลดระดบนำตาลในกระแสเลอดไดด โดยมการศกษาถงฤทธของปาชาหมองตอภาวะนำตาลในเลอดสงทงในระดบเซลลและสตวทดลอง(10-14) พบวาสารสกดจากพชสมนไพรปาชาหมองสามารถลดระดบนำตาลในกระแสเลอดของหนทเปนเบาหวานได ชวยใหการทำงานของตบและไตดขน(10, 15) โดยพบวาสารสกดจากพชสมนไพรปาชาหมอง (Vernonia amygdalina Del.) ไดถกนำมาใชทางการแพทยในประเทศไทยมาหลายสบปแลว ซงปจจบนนปาชาหมองไดมการปลกและใชกนโดยทวไปในเขตภาคเหนอ จากการลงพนทสอบถามคณอจฉรา อนตะสวรรณ ผอำนวยการโรงพยาบาลสงเสรมสขภาพตำบลดงเจน อำเภอภกามยาว จงหวดพะเยา พบวาสมนไพรปาชาหมองมการใชอยางแพรหลายในเขตจงหวดพะเยา โดยมวตถประสงคเพอควบคมระดบนำตาลในกระแสเลอด ลดการอกเสบ และเสรมภมคมกน และมการผสมพชสมนไพรปาชาหมองลงในตำรบยาพนบาน (ปบสา) ของตำบลดงเจนเพอใชในการรกษาและควบคมระดบนำตาลในกระแสเลอดอกดวย



แตอยางไรกตามยงไมมการรายงายถงการศกษาฤทธของสารสกดจากพชสมนไพรปาชาหมองในเซลลหวใจของผปวยโรคเบาหวาน โดยเฉพาะอยางยงในผปวยเบาหวานทมภาวะกลามเนอหวใจขาดเลอดแทรกซอน ดงนนโครงการวจยนจงมวตถประสงคเพอศกษาวจยในเชงลกเกยวกบกลไกการออกฤทธของสารสกดจากพชสมนไพรปาชาหมองในเซลลกลามเนอหวใจทถกเหนยวนำใหเกดภาวะนำตาลสง ซงจะทำใหเกดความรความเขาใจทดขน และเปนขอมลพนฐานทสำคญทจะนำไปสการพฒนาสารสกดพชสมนไพรปาชาหมองเพอประโยชนในการเปนยารกษาผปวยโรคเบาหวานทมภาวะกลามเนอหวใจขาดเลอดแทรกซอนตอไป

6. วตถประสงคของโครงการวจย เพอศกษาผลของสารสกดหยาบจากพชสมนไพรปาชาหมอง ( r Ve noni a

d ) amyg alina Del. ตอภาวะกลามเนอหวใจขาดเลอดในเซลลกลามเนอหวใจ 92H c และ เอนโดธเรยลเซลลทถกเหนยวนำาใหเกดภาวะนำาตาลสงในหลอดทดลอง โดยมวตถประสงค

ยอยดงตอไปนวตถประสงค 1 : เพอศกษาผลของการใหสารสกดหยาบจากพชสมนไพรปาชาหมองตอภาวะกลามเนอหวใจขาดเลอดในเซลลกลามเนอหวใจ H9c2 ทถกเหนยวนำใหเกดภาวะนำตาลสงวตถประสงค 2 : เพอศกษาผลของการใหสารสกดหยาบจากพชสมนไพรปาชาหมองตอภาวะกลามเนอหวใจขาดเลอดในเอนโดธเรยลเซลลทถกเหนยวนำใหเกดภาวะนำตาลสง

7. ขอบเขตของโครงการวจย งานวจยนเปนการศกษาผลของการใหสารสกดหยาบจากใบปาชาหมอง ( โดยจะใช

ETTTT TTTTTTT เปนตวทำาละลาย) ในเซลลกลามเนอหวใจ 92H c และเอนโดธเรยล เซลลทเพาะเลยงในอาหารเลยงเซลลทมความเขมขนของ D-glucose สงและชกนำาใหเกด

ภาวะกลามเนอหวใจขาดเลอดจำาลอง โดยการศกษานจะประเมนประสทธภาพของสารสกด จากใบปาชาหมองจากอตราการตายและการบาดเจบของเซลล และอตราการสรางสารอนมล

อสระ ( ) ROS ภายในเซลล นอกจากนยงศกษาถงกลไกการสงสญญาณระดบเซลลท เกยวของกบการรอดชวตของเซลล

8. ทฤษฎ สมมตฐาน และกรอบแนวคดของโครงการวจย กรอบแนวคดวจย



งานวจยนมวตถประสงคเพอเพอศกษาผลของสารสกดหยาบจากพชสมนไพรปาชา หมอง ( r d ) Ve nonia amyg alina Del. ตอภาวะกลามเนอหวใจขาดเลอดในเซลลกลามเนอ

หวใจ 92H c และเอนโดธเรยลเซลลทถกเหนยวนำาใหเกดภาวะนำาตาลสงในหลอดทดลองโดยมสมมตฐานดงตอไปน

วตถประสงค 1 : เพอศกษาผลของการใหสารสกดหยาบจากพชสมนไพรปาชาหมองตอภาวะกลามเนอหวใจขาดเลอดในเซลลกลามเนอหวใจ H9c2 ทถกเหนยวนำใหเกดภาวะนำตาลสง

- สมมตฐาน 1 : สารสกดหยาบจากพชสมนไพรปาชาหมองสามารถลดอตราการตายและการบาดเจบของเซลลกลามเนอหวใจ H9c2 ทถกเหนยวนำใหเกดภาวะนำตาลสง จากภาวะกลามเนอหวใจขาดเลอดในหลอดทดลองได

- สมมตฐาน 2 : สารสกดหยาบจากพชสมนไพรปาชาหมองสามารถลดการการแสดงออกของยน RACK (epsilon-PKC activator (psi(epsilon)) และเพมการแสดงออกของยน Bcl-2 ในเซลลกลามเนอหวใจ H9c2 ทถกเหนยวนำใหเกดภาวะนำตาลสง จากภาวะกลามเนอหวใจขาดเลอดในหลอดทดลองได

- สมมตฐาน 3 : สารสกดหยาบจากพชสมนไพรปาชาหมองสามารถลดการเตมหมฟอสเฟตใหกบโปรตน p38 MAPK, JNK, RACK และเพมการเตมหมฟอสเฟตของโปรตน Akt, Bcl-2 ในเซลลกลามเนอหวใจ H9c2 ทถกเหนยวนำใหเกดภาวะนำตาลสง จากภาวะกลามเนอหวใจขาดเลอดในหลอดทดลองได



- สมมตฐาน 4 : สารสกดหยาบจากพชสมนไพรปาชาหมองสามารถลดการเกดอนมลอสระ (ROS) ในเซลลกลามเนอหวใจ H9c2 ทถกเหนยวนำใหเกดภาวะนำตาลสง จากภาวะกลามเนอหวใจขาดเลอดในหลอดทดลองได

วตถประสงค 2 : เพอศกษาผลของการใหสารสกดหยาบจากพชสมนไพรปาชาหมองตอภาวะกลามเนอหวใจขาดเลอดในเอนโดธเรยลเซลลทถกเหนยวนำใหเกดภาวะนำตาลสง

- สมมตฐาน 1 : สารสกดหยาบจากพชสมนไพรปาชาหมองสามารถลดอตราการตายและการบาดเจบของเอนโดธเรยลเซลลทถกเหนยวนำใหเกดภาวะนำตาลสง จากภาวะกลามเนอหวใจขาดเลอดในหลอดทดลองได

- สมมตฐาน 2 : สารสกดจากใบปาชาหมองในเพมการแสดงออกของยน eNOS (endothelial cell nitroxide synthase) และ VEGF (Vascular endothelial growth factor) ในเซลล EAhy.926 (endothelial cell) ทกระตนดวย simulated ischemia/reperfusion injury ในภาวะ Hyperglycemia ได

- สมมตฐาน 3 : สารสกดจากใบปาชาหมองในลดการเตมหมฟอสเฟตใหกบโปรตน p38 MAPK, JNK และเพมการเตมหมฟอสเฟตใหกบโปรตน Akt, eNOS (endothelial cell nitroxide synthase) และ VEGF (Vascular endothelial growth factor) ในเซลล EAhy.926 (endothelial cell) ทกระตนดวย simulated ischemia/reperfusion injury ในภาวะ Hyperglycemia ได

- สมมตฐาน 4 : สารสกดหยาบจากพชสมนไพรปาชาหมองสามารถลดการเกดอนมลอสระ (ROS) ในเอนโดธเรยลเซลลทถกเหนยวนำใหเกดภาวะนำตาลสง จากภาวะกลามเนอหวใจขาดเลอดในหลอดทดลองได

9. การทบทวนวรรณกรรม/สารสนเทศ (information) ทเกยวของ โรคเบาหวาน

โรคเบาหวาน คอ โรคทเกดจากการทเซลลไมสามารถนำนำตาลมาใชไดเนองจาก insulin ไมสามารถนำนำตาลเขาสเซลลได หรอพบความผดปกตในการหลงของ β-cell สงผลใหเซลลสามารถนำนำตาลไปใชไดอยางมประสทธภาพ เพราะฉะนนนำตาลในเลอดจะสงจงสามารถวนจฉยไดโดยการตรวจวดระดบนำตาลในกระแสเลอดและภาวะนำตาลในเลอดสง (Hyperglycemia : HG) สงผลเสยตอรางกายซงจะสรางความเสยหายตอเซลลตาง ๆ ของรางกายรวมถงกอพยาธสภาพตออวยวะ เชน ตบ ไต ตบออน และสมอง เปนตน เรยกวาพยาธสภาพของโรคเบาหวาน(16) โรคเบาหวานในประเทศไทยใชเกณฑของสมาคมโรคเบาหวานสหรฐอเมรกา (American Diabetes Association : ADA) โดยสามารถแบงออกเปน 4 ประเภท(17) ดงตอไปน

โรคเบาหวานชนดท 1 (Type 1 Diabetes) พบรอยละ 5 - 10 ของประชากรโรคเบาหวานโดยโรคเบาหวานชนดนมกเกดขนในเดกซงเกดจากการแพภมคมกนของ β-cells ในตบออนซงทำใหถกทำลายและสงผลใหเกดการสรางรวมถงการหลงอนซลนทลดลง เนองจากอนซลนทลดลงจะสงผลใหเซลลไมสามารถนำนำตาลไปใชงานไดจงสงผลใหนำตาลในกระแสเลอดสง (HG) ทำใหเกดอาการกระหายนำ ออนเพลย เหนอยงาย เปนตน

โรคเบาหวานชนดท 2 (Type 2 Diabetes) หรอ Insulin independent diabetes พบรอยละ 85 - 95 ของประชากรโรคเบาหวานและมกเกดจากพฤตกรรมสวนบคคล เชน การไมออกกำลงกาย การดม



เครองดมแอลกอฮอล และการกนอาหารจานดวน เปนตน โดยโรคเบาหวานชนดนพบมากเมอมอายสงขน ผปวยอาจไมตองไดรบการรกษาดวยอนซลนเพอมชวตอยตอกได โรคเบาหวานชนดท 2 เกดจากภาวะดอตออนซลนหรอมการตอบสนองตออนซลนลดลง มกพบอาการกระหายนำ ออนเพลย เหนอยงาย เปนตน โรคเบาหวานชนดท 2 ใชเวลาในการเกดโรคชาซงทำใหผปวยมกมาตอนทเปนโรคแลว

โรคเบาหวานในหญงตงครรภ เกดจากภาวะการทนตอกลโคส (Glucose intolerance) ซงจะพบในชวงทายองการตงครรภ และสาเหตหลกเกดจากฮอรโมนในรางกายทมการเปลยนแปลงและเบาหวานชนดนจะหายไปหลงคลอด

โรคเบาหวานชนดอน ๆ การเกดโรคเบาหวานชนดนจะขนอยกบชนดของโรคทเปนสาเหต เชน Acromegaly, Cushing syndrome เปนตน ซงสาเหตของเบาหวานชนดน ไดแก การผาตดตบออน หรอตบออนอกเสบ โรคเกยวกบตบออนทเกดจาการกระตนของยาหรอสารเคมตาง ๆ

โรคเบาหวานทมแนวโนมเพมสงขน มาจากพฤตกรรมการดำเนนชวตประจำวน ไดแก การไมออกกำลงกาย การดมเครองดมแอลกอฮอล และการกนอาหารจานดวน เปนตน จากพฤตกรรมขางตนนำไปสภาวะอวนและกอใหเกดโรคเบาหวาน พบวาผปวยทเปนโรคเบาหวานรอยละ 85 - 95 ปวยเปนโรคเบาหวานชนดท 2 โรคเบาหวานชนดท 2 เกดจากภาวะทรางกายไมสามาถนำนำตาลมาใชไดอนเนองมาจากภาวะดอตอ insulin ในภาวะปกตระดบนำตาลทสงจะไปกระตนให β-cells ในตบออนหลงอนซลนเพอนำนำตาลเขาสเซลลโดยอนซลนจะจบกบ insulin receptor ทอยบนผวเซลลทำใหเกดการเตมหมฟอสเฟตทตำแหนงของกรดอะมโน Tyrosine ซงจะชกนำให insulin receptor substrate-1 (IRS-1) ทำงานและกระตน Phosphoinositide 3 kinase (Pi3k) , Protein kinase B (Akt) ตามลำดบ การกระตน Protein kinase B สงผลใหเกดการเตมหมฟอสเฟตบน glucose transporter 4 (GLUT - 4) ใหไปยงผวเซลลเพอนำนำตาลเขาสเซลล ดงรป

รปท 1 การทำงานของอนซลน(18)

แตในภาวะดอตออนซลน พบวามการเพมขนของ free fatty acid (FFA), Reactive oxygen species (ROS) และระดบนำตาลทสงกวาปกต ทำใหเกดการกระตน Protein kinase อน ๆ ซงเปน Serine / Threonine kinase สงผลใหมการเตมหมฟอสเฟตทตำแหนง กรดอะมโน Serine เพมขน และ Tyrosine ลดลง ดงนนสญญาณ



จาก insulin receptor ส IRS-1, PI3K, Akt จงลดลงทำใหลดการแสดงออกและขนสงของ GLUT-4 บนผวเซลลและไมสามารถนำนำตาลเขาสเซลลไดจงทำใหเกดภาวะนำตาลในเลอดสง (Hyperglycemia)

จากการศกษาทผานมาพบวา Insulin resistance syndrome เปนกลมทมภาวะดอตออนซลนซงผปวยจะมระดบอนซลนในกระแสเลอดสง มภาวะอวน มระดบไขมนไตรกลเซอไรด (Triglyceride) ในกระแสเลอดสง ระดบไขมนเอชดแอล (HDL) ตำและความดนโลหตสง ซงกลมอาการเหลานเรยกวา metabolic syndrome และเปนปจจยทสามารถเพมความเสยงในการเกดโรคเบาหวาน โรคหวใจและหลอดเลอด ตามเกณฑขององคการอนามยโลก metabolic syndrome สามารถตรวจวนจฉยไดตามเกณฑดงน ซงจะตองเขาเกณฑอยางนอย 3 ใน 5 (19, 20)

เสนรอบเอวมากกวา 35 นวในเพศหญงและมากกวา 40 นวในเพศชาย ระดบ Triglyceride มากกวา 150 mg/dl ระดบ HDL ตำกวา 50 mg/dl ในเพศหญงและตำกวา 40 mg/dl ในเพศชาย ความดนโลหตมากกวา 130/85 mmHg ระดบนำตาลในกระแสเลอดภาวะ FBG มากกวา 110 mg/dlระยะเวลาของโรคเบาหวานชนดท 2 สามารถแบงออกเปน 2 ระยะดงน คอ ระยะแรกการทำงาน

ของฮอรโมนอนซลนทมประสทธภาพในการจบกบเซลลเปาหมายลดลงในสภาวะทมความเขมขนของระดบฮอรโมนในกระแสเลอดปกต หรอทเรยกวา ภาวะดอตออนซลนและระยะทสอง β-cell ไมทำงาน เนองจากมการเรงการสรางฮอรโมนอนซลนทมากเกนไปทำใหการทำงานของเซลลลดลงซงจะเกดในระยะทายของโรค(19)

นอกจากนการเกดโรคเบาหวานชนดท 2 ยงพบวาเกดจาก β-cell มการทำงานมากขนโดยเรงผลตฮอรโมนอนซลนจากการกระตนของระดบนำตาลในกระแสเลอดเพอปรบระดบนำตาลใหเปนปกต แตผลจากการมปรมาณของฮอรโมนอนซลนทมากขน ทำให receptor ไมสามารถจบกบฮอรโมนอนซลนไดทำใหในระยะแรกมระดบของฮอรโมนอนซลนสงหรอเรยกวา hyperinsulinemia และในทางกลบกน β-cell ททำหนาทผลตฮอรโมนอนซลนเสอมประสทธภาพและไมสามารถทำงานไดอยางปกตทำใหระดบนำตาลในกระแสเลอดสง เซลลทตองการนำตาลเพอใชเปนพลงงานในการทำงานไมสามารถทำงานได เนองจากไมสามารถนำนำตาลเขาสเซลลไดจงมการสลายนำตาลจากกลามเนอและไขมนทดแทน(19) นอกจากนยงพบวาปจจยทางสงแวดลอมสามารถสงเสรมใหเกดโรคเบาหวานชนดท 2 ได เชน การรบประทานอาหารทมไขมนและคารโบไฮเดรตสงเปนระยะเวลานานและการไมออกกำลงกาย เปนตน พบวาสามารถพฒนาใหเกดโรคเบาหวานชนดท 2 ได และจากผลการสำรวจขอมลพบวาผปวยโรคเบาหวานชนดท 2 ประมาณ 60% - 80% จะมภาวะอวนรวมดวย(19)สำหรบแนวทางการรกษาโรคเบาหวานชนดท 2 ของ สมาพนธเบาหวานนานาชาต ป ค.ศ. 2011 (21) (รปท ) ซงเปนแนวทางการรกษาทใชทวโลก เรมจากการควบคมอาหารและการออกกำลงกาย การปรบเปลยนพฤตกรรม แลวตรวจวดระดบนำตาลในเลอดดวย HbA1c แตถายงมระดบ HbA1c ทไมไดตามเปาหมาย (คาตามเปาหมาย คอ ตองมระดบ HbA1c นอยกวา 7%) พจารณาใหยารกษาเบาหวานโดยยารกษาเบาหวานระดบแรกทนยมเลอกใช คอ ยาเมทฟอรมน แตอาจจะใชยากลม sulfonylurea หรอ α-glucosidase inhibitor หากการรกษายงไมไดตามเปาหมาย พจารณายากลมท 2 คอ sulfonylurea แตอาจจะใชยา metformin ในกรณทไมไดใชยา metformin เปนยาตวแรก หรออาจจะพจารณาใชยา α-glucosidase inhibitor, DPP-4 inhibitor หรอ Thiazolidinedione ถายงไมสามารถควบคมได พจารณาใชยาชนดรบประทาน 3 ชนด หรอใชยาอนซลนรวม ซงการเรมอนซลนอาจจะเรมเปน basal หรอ premixed insulin หรอในกรณทใชอนซลนเปน basal หรอ premixed แตยงไมสามารถควบคมไดพจารณาการฉดยา basal bolus



รปท 2 แนวทางการรกษาโรคเบาหวานชนดท2 ตามแนวทางของ International รป Diabetes Federation (IDF) 2011

ทมา: http://www.idf.org/sites/default/files/Type%202%20treatment%20algorithm_0.jpg

ภาวะแทรกซอนจากเบาหวานผทเปนโรคเบาหวานมกจะมโรคแทรกซอนเรอรง ซงแตละคนกจะมโรคแทรกซอนทเกดขนแตกตางกนออกไป

ขนอยกบระดบนำตาลในกระแสเลอดและระยะเวลาทเปนโรคเบาหวาน เนองจากนำตาลทสงกวาระดบปกตอยในกระแสเลอดเปนระยะเวลานานและไมไดรบการควบคมทเหมาะสมจะสงผลใหเกดความเสอมสภาพกบหลอดเลอดทงขนาดใหญและขนาดเลกทงรางกาย เชน ตา ไต หลอดเลอดหวใจ เสนเลอดทบรเวณปลายมอปลายเทา เปนผลใหเกดโรคแทรกซอนตออวยวะนนๆได(20)

ภาวะแทรกซอนทางสายตา (diabetic retinopathy) เกดจากการทนำตาลในเลอดทมอยมากเกนปกตเขาไปยง endothelium ของหลอดเลอดขนาดเลกในลกตา ทำใหหลอดเลอดเหลานมการสรางไกลโคโปรตนซงจะถกขนยายออกมาเปน Basement membrane มากขน ทาให basement membrane หนา แตเปราะ หลอดเลอดเหลานจะฉกขาดไดงาย เลอดและสารบางอยางทอยในเลอดจะรวออกมาและมสวนทำใหตาพรามว (macula) หลอดเลอดทฉกขาดจะสรางแขนงของหลอดเลอดใหมออกมามากมายจนบดบงแสงทมาตกกระทบยง retina ทำใหการมองเหนของผปวยแยลง ตาหรอจอตาเสอม หรอมองเหนจดดำลอยไปมา และอาจจะทำใหตาบอดไดในทสด(20, 22)

ภาวะแทรกซอนทางไต (diabetic nephropathy) พยาธสภาพของหลอดเลอดเลกๆ ท glomeruli จะทำให nephron ยอมให albumin รวออกไปกบ filtrate ได proximal tubule จงตองดดกลบสารมากขน ซงถาเปนระยะเวลานานกจะทำใหเกด Renal failure ได ผปวยมกจะเสยชวตภายใน 3 ป นบจากแรกเรมมอากา (20, 22)



ภาวะแทรกซอนทางระบบประสาท (diabetic neuropathy) เบาหวานจะทำใหหลอดเลอดขนาดเลกทมาเลยงเสนประสาทบรเวณปลายมอปลายเทาเกดพยาธสภาพ ทำใหเสนประสาทนนไมสามารถนำความรสกตอไปได เชน รสกชาหรอปวดแสบปวดรอนตามปลายมอ เมอผปวยมแผล ผปวยกจะไมรตว และไมดแลแผลดงกลาว ประกอบกบเลอดผปวยมนำตาลสง จงเปนแหลงอาหารใหกบเชอโรคทำใหแผลเกดการอกเสบละนำไปส amputation ในทสด ในผชายอาจมภาวะหยอนสมรรถภาพทางเพศ (impotence)(20, 22)

โรคหลอดเลอดหวใจ (coronary vascular disease) ภาวะเบาหวานจะเปนตวกระตนใหเกดการเสอมของหลอดเลอดทวรางกายและเมอหลอดเลอดทเลยงหวใจเสอมสภาพ ประกอบกบการมไขมนในเลอดสง กจะสงผลใหมการตบของหลอดเลอดหวใจ ทำใหเกดโรคหวใจขาดเลอดเปนผลทำใหหลอดเลอดเกดอดตน และเกดอาการกลามเนอหวใจตาย(23) ในทสด ปญหาทสำคญมากอกประการหนงของผเปนเบาหวานคอผทมปญหาเกยวกบหลอดเลอดหวใจจะไมแสดงอาการผดปกตซงจะบงชวาเปนโรคหวใจใหเหนกอน เชน อาการเจบหนาอก ซงเปนอาการเบองตนของผปวยโรคหวใจทวไป ดงนนผปวยเบาหวานบางรายอาจจะแสดงอาการครงแรกดวยอาการทรนแรง เชน กลามเนอหวใจตายหรอหวใจลมเหลว ทำใหแพทยวนจฉยโรคไดชากวาปกต ซงอาจเปนอนตรายได(20, 22)

โรคหลอดเลอดสมอง (cerebrovascular disease) ผทมภาวะโรคเบาหวานจะมอตราเสยงในการเกดอมพาตชนดหลอดเลอดตบไดสง เพราะเบาหวานทำใหเกดภาวะหลอดเลอดแขงไดงาย โดยจะมหลอดเลอดแขงทวรางกายและถาเปนทหลอดเลอดของสมองกจะเกดอมพาตขน โดยอตราเสยงของผปวยทเปนโรคเบาหวาน จะมโอกาสเปนอมพาตไดสงกวาผปวยปกต 2-4 เทา โดยจะมอาการเบองตนสงเกตไดจาก กลามเนอแขน ขาออนแรงครงซกอยางทนททนใดหรอเปนครงคราว ใบหนาชาครงซกใดซกหนง พดกระตกกระตก สบสนหรอพดไมไดเปนครงคราว ตาพราหรอมดมองไมเหนชวคร เหนแสงผดปกต วงเวยน เดนเซ ไมสามารถทรงตวได กลนอาหารแลวสำลกบอยๆ มอาการปวดศรษะอยางรนแรงโดยอาการปวดมกจะเกดในขณะทเครงเครยดหรอมอารมณรนแรง(20, 22)

โรคของหลอดเลอดสวนปลายอดตน (peripheral vascular disease) เกดขนจากผนงหลอดเลอดดานในมความเสอมหรอเกดการอกเสบทำใหเกดรอยแผลทหลอดเลอดดานในสงผลใหมการกระตนสารประกอบในหลอดเลอด อนไดแก เกรดเลอด ไขมน คลอเลสเตอรอล ทำใหผนงหลอดเลอดแดงดานในหนาตวขนจากการเกดคราบไขมนและหนปน ทำใหรของหลอดเลอดแดงแคบลง ความยดหยนลดลงและเปราะ สงผลใหปรมาณเลอดทถกสงไปยงอวยวะเปาหมายลดลง อาการขนอยกบวามการอดตนทตำแหนงใด หากเปนในระยะแรก อาจมอาการปวดนอง ขา เวลาเดนไกลๆ (claudication) แตถามการอดตนอยางรนแรงกจะมอาการปวดแมขณะนงอยเฉยๆ นอกจากนยงอาจพบปลายเทาเยน สผวหนงเปลยนแปลงไป เชนเปนสขาวซด บางครงกลายเปนสมวงคลำและหากเกดบาดแผลทเทาจะเปนแผลเรอรงหายยาก(24)

จากขอมลทกลาวมาขางตนนนทำใหทราบวาโรคเบาหวานสามารถทำใหเกดภาวะแทรกซอนกบหลายอวยวะดงทไดกลาวไวขางตน ซงอาจสงผลรายแรงถงชวตได ปจจบนพบวาผปวยเบาหวานมโอกาสทจะพฒนาเปนกลามเนอหวใจตายจากการขาดเลอดมากทสดเมอเทยบกบภาวะแทรกซอนอนๆ(22, 25) และผปวยเบาหวานมความเสยงตอการเกดภาวะกลามเนอหวใจขาดเลอด 2-4 เทาเมอเทยบกบคนปกตทไมไดเปนโรคเบาหวาน(26) อกทงยงมอตราการเสยชวตมากกวาผทไมไดเปนโรคเบาหวานมากถง 7 เทา

โรคกลามเนอหวใจขาดเลอดเมอกลามเนอหวใจขาดเลอดเปนเวลานาน ทำใหเซลลไมไดรบ O2 และสารอาหารซงมความสำคญตอ

กระบวนการสงเคราะหพลงงาน Adenosine-Triphosphate (ATP) ทำใหเกดการเปลยนแปลงของเมทาบอลสม ทำใหเซลลสรางพลงงานดวยกระบวนการทไมใชออกซเจน (Anaerobic metabolism) สงผลทำใหเกดการคงของ



กรดแลกตคและไฮโดรเจนไอออน (H+) ภายในเซลลกลามในหวใจ สงผลใหเกดภาวะเปนกรดในเซลล (Intracellular acidosis)(27)

นอกจากนยงมการสรางอนมลอสระ (Reactive oxygen species) เพมมากขน ทำใหเกดการทำลายสารชวโมเลกลทสำคญของเซลล ทำใหเซลลเกดการบาดเจบและการตายมากขน แตอยางไรกตามเซลลกลามเนอหวใจกมกระบวนการตอบสนองโดยการขบไฮโดรเจนไอออน (H+) ออกจากเซลลโดยแลกเปลยนกบโซเดยมไอออน (Na+) เขามาในเซลลผาน Na+- H+ exchangers ซงเปนการขนสงแบบไมใชพลงงาน (ATP-independent membrane glycoprotein transporters) แตจะขนอยกบ Electrochemical gradient ของไอออนแตละตวในขณะนน โดยมอตราการแลกเปลยนคอ 1H+: 1Na+ เมอมการขนสง Na+ เขามาในเซลลมากขนจะทำใหมการคงของ Na+ ภายในเซลลกลามเนอหวใจมากขน ซงการขนสง Na+ เขามาภายในเซลลจะมนำเขามาภายในเซลลพรอมกบ Na+ ดวย จงทำใหเกดการบวมและการแตกของเซลลได ซงการแตกของเซลลจะทำใหมเอนไซมตางๆออกมานอกเซลล สงผลทำใหเซลลใกลเคยงเกดการตายแบบ Necrosis ตามมาได ดงนนเซลลตองพยายามขบ Na+ ออกนอกเซลลเพอรกษาสมดลของไอออน ซงถาเปนกระบวนการโดยปกตทมพลงงานเหลออย เซลลจะเลอกใช Na+-K+ ATPase pump ในการขบ Na+ ออกนอกเซลล แตในภาวะกลามเนอหวใจขาดเลอดเปนภาวะทไมมพลงงานหรอมพลงงานนอยมาก ดงนนเซลลจงเลอกขบ Na+ ออกนอกเซลลโดยใชวธทไมใชพลงงาน นนคอ การขบ Na+ ออก โดยแลกเปลยนกบแคลเซยมไอออน (Ca2+) เขามาภายในเซลลผาน Na+- Ca2+ exchangers โดยมอตราการแลกเปลยน คอ 3Na+: 1Ca2+ สงผลทำใหเกด Ca2+ คงภายในเซลลดงภาพท 3

รปท 3 แสดงการแลกเปลยนไอออนในภาวะกลามเนอหวใจขาดเลอด(27)จากทกลาวมาขางตนสงผลใหเกดภาวะ Ca2+ overload ขน ซงเซลลจะตองพยายามกำจด Ca2+ ใหเรวทสด

เพอใหปรมาณของ Ca2+ ภายในเซลลลดลง แตอยางไรกตามสภาวะ กลามเนอหวใจขาดเลอด คอสภาวะทเซลลไมมพลงงาน ดงนนการทเซลลกลามเนอหวใจจะเกบ Ca2+ เขาส Sarcoplasmic reticulum (SR) โดยผาน Sarco-endoplasmic reticulum (SR) calcium ATPase (SERCA) หรอจะขนสงออกนอกเซลลโดยผาน Plasma membrane Ca2+ ATPase (PMCA) นนไมสามารถเกดขนได เพราะทงสองกระบวนการนเปนกระบวนการทอาศยใชพลงงาน ดงนนในสภาวะ Ca2+ overload ทางเดยวทนาจะลดปรมาณ Ca2+ ลงได คอ การขนสงเขาไปเกบท



mitochondria โดยผานทาง H+-Ca2+ exchangers , Na+-Ca2+ exchangers และ Ca2+ uniporter สงผลใหปรมาณของ Ca2+ ภายใน mitochondria เพมมากขน ซง Ca2+ ทเพมมากขนน จะทำให Cyclophilin D สามารถเคลอนตวไปจบท Adenine nucleotide translocase (ANT) ทบรเวณ Inner membrane ของ Mitochondria ได ทำใหเกด Conformational change สงผลให Mitochondrial permeability transition pore (MPTP) เปด และมการหลง mediator ตวทสำคญในกระบวนการ Apoptosis คอ Cytochrome C จากภายใน Mitochondria ออกมายง Cytoplasm โดย Cytochrome C จะไปรวมตวกบ Apoptosis protease activating factor-1 (Apaf-1) เกดการ Hydrolysis ของ ATP สงผลใหเกดการรวมกน (Oligomerisation) ของ Cytochrome C, Apaf-1 และ Procaspase-9 โดยใชบรเวณ Caspase Recruitment Domain (CARD domain) ของ Apaf-1 และ Procaspase-9 ในการรวมตวกนครงนเกดเปน Apoptosome complex เกดขน ซงจะทำให Procaspase-9 สามารถแยกยอยตวเอง (Self-cleavage analogue) กลายเปน Caspase-9 ซงอยในรปทวองไว และจะไปกระตนให Caspase-3 อยในรปวองไวอกทอดหนง ซง Caspase-3 นจะเปนเอนไซมททำหนาทยอยโปรตนตางๆ จงทำใหเซลลเกด Apoptosis ตามมา นอกจากน Ca2+ ทเพมมากขนนยงสามารถกระตนการทำงานของเอนไซม Protease เชน Cathepsin G, Elastase, Trypsin และ Chymotrypsin ใหทำงานมากขนซงเอนไซมเหลานจะทำลายโปรตนทสำคญของเซลล สงผลใหเซลลเกดการบาดเจบและตายของเซลลกลามเนอหวใจมากขน (28)

การกระตน p38 MAPK ในผปวยเบาหวานและภาวะกลามเนอหวใจขาดเลอดMitogen Activated Protein Kinase (MAPK) เปนกลมของเอนไซมททำหนาทหลกในการควบคมการ

ทำงานของเซลล เกยวของกบกระบวนการสงสญญาณภายในเซลลทเกดจากการกระตนภายนอกเซลลและภายในเซลล เปนการสงสญญาณเขาสนวเคลยสของเซลล เพอควบคมกาพฒนาชนดของเซลล (cell differentiation) การเพมจำนวนของเซลล (proliferation) การตายของเซลล (cell death) โดยเอนไซมกลมนจะปรบความสามารถในการทำงานของโปรตนเปาหมายทจำเพาะภายในเซลลโดยการเตมหมฟอสเฟตเขาไปยงโปรตนเปาหมาย ณ ตำแหนงกรดอะมโน Serine หรอ Threonine ทจำเพาะ MAPK จงจดเปนกลมเอนไซมทเรยกวา Serine/Threonine kinase(29)

การกระตนการทำงานของ p38 MAPK ในภาวะกลามเนอหวใจขาดเลอดจากรายงานการวจยแสดงใหเหนวา ภาวะกลามเนอหวใจขาดเลอดนน มการกระตนการทำงานของ

p38 MAPK สงเสรมใหเกดการการบาดเจบและการทำลายเซลลกลามเนอหวใจ โดยอาจจะเกดจากการกระตนการสราง cytokine ชนด TNF-α และเมอเกดการคงของเมดเลอดขาวจงทำใหเกดกระบวนการอกเสบตามมา และยงพบวา การกระตนการทำงานของ p38 MAPK ในภาวะกลามเนอหวใจขาดเลอดนนทำใหเกดการตายของเซลลแบบ apoptosis โดย p38 MAPK จะกระตนการเตมหมฟอสเฟตให B-crystallin เมอถกกระตนดวย p38 MAPK โปรตนทงสองชนดจะเคลอนทเขาสไมโทรคอนเดรยและทำใหไมโทรคอนเดรยเสยสภาพ และจากการศกษายงพบอกวา การกระตน p38 MAPK ยงมความสำคญตอการทำใหเกดการเคลอนทของโปรตน B cell leukemia/lymphoma-2 associated X protein(30) ไปสไมโทรคอนเดรย และเมอเกดการรวมตวกบโปรตน Bax จะทำใหเกดรโหวบนผนงหมของไมโทรคอนเดรย เกดการหลง cytochrome c ออกมาไมโทรคอนเดรยและนำไปสการตายของเซลล(31)การกระตนการทำงานของ p38 MAPK ในภาวะดอตออนซลนและโรคเบาหวานชนดท 2 ในเซลลกลามเนอหวใจ(32)

ภาวะดอตออนซลน (insulin resistance) และโรคเบาหวานชนดท 2 สามารถกระตนการทำงานของ p38 MAPK โดยทภาวะดอตออนซลนทำใหเกดกระบวนการเปลยนแปลงทางชวเคมของรางกายทผดปกต ไดแกการอกเสบเรอรง hyperinsulinemia, free fatty acid ทเพมมากขน นำไปสการเกดโรคเบาหวานชนดท 2 ซงจะอย



ในภาวะ hyperglycemia จากปจจยตางๆทกลาวมาขางตนทำใหเซลลอยในสภาวะเครยดและสามารถกระตนการทำงานของ p38 MAPK ได(32)

ภาวะดอตออนซลนเปนภาวะท insulin receptor ทใชการสงสญญาณทำงานไดอยางไมมประสทธภาพหรอเสยสภาพไปโดยการสงสญญาณนนจะถกสงผานทาง PI3K/Akt(32)

ในภาวะปกตการเจรญเตบโตของกลามเนอหวใจ กระบวนการเมทตบอลซมและการทำงานจะถกควบคมโดยการสงสญญาณของ PI3K-Akt รวมกบ การสงสญญาณหลก (Ras-ERK) โดยททงสองสญญาณนจะทำงานเทาๆ กน แตในทางตรงกนขาม พบวาภาวะดอตออนซลนในเซลลของกลามเนอหวใจเกยวของกบ การทำงานของ PI3K-Akt ทมากกวา Ras-ERK โดยจะไปลดความไวตอการนำสญญานของ insulin(32)

นอกจากน ภาวะดอตออนซลนและการตอบสนองเนองมาจากการเพมขนของ Plasma Free Fatty Acid (FFA) จะกระตนการทำงานของ p38 MAPK ในหวใจได โดยท FFA สามารถทจะไปขดขวางการสงสญญานของ IRS-1 ซงเปน insulin receptor ทอยภายในเซลล เปนผลใหลดการกระตน PI3K-Akt เมอ PI3K-Akt ถกลดการกระตนจะสงผลใหเกดการกระตนการทำงานของ p38 MAPK ไดทางออม การกระตน p38 MAPK ผานการสงสญญาณของ PI3K-Akt ไมเพยงแตทำใหเกดการเตมหมฟอสเฟตใน AMPK เทานน แตยงไปลดการทำงานของ MAPK phosphatase-1 (MKP-1), การทำงานของเอนไซม phosphatase สงผลใหเกดการกระตน p38 MAPK(32)

ในสวนอนๆ ทเกยวกบการเสยสภาพการสงสญญาณของ PI3K-Akt ทำใหกระตนการเตมหมฟอสเฟต (phosphorylation) ใหกบ endothelial nitric oxide synthase (eNOS) และภาวะ hyperglycemia ยงทำใหเกด eNOS glycosylation โดยการเปลยนแปลงของ O-GlcNAc จากการกระตนนสงผลใหการสราง NO หลงจากนน NO จะไปกระตน cGMP และ protein kinase G-1 (PKG 1) นำไปสการเกด autophosphorylation ของ p38 MAPK และรบกวนการทำงานของ TAB1 protein และจะทำใหเกดการทำลายและการบาดเจบของเซลลกลามเนอหวใจ และเกดการตายแบบ apoptosis(32)

จากขอมลทกลาวมาขางตนแสดงใหเหนวาการมภาวะกลามเนอหวใจขาดเลอดจะกระตนการทำงานของ p38 MAPK และการมภาวะดอตออนซลนและโรคเบาหวานกสามารถกระตนการทำงานของ p38 MAPK ไดเชนกน ดงนนหากผทเปนโรคเบาหวานรวมกบมภาวะกลามเนอหวใจขาดเลอดแทรกซอนจะกระตนการทำงานของ p38 MAPK ใหเพมมากยงขน สงผลใหเกดการตายของเซลลมากขนเชนกน ดงนนการยบยงการทำงานของ p38 MAPK โดย p38 MAPK inhibitor คาดวาจะชวยชะลอและลดการตายของเซลลได(32)

ปาชาหมอง (Vernonia amygdalina Del.)



ชอวทยาศาสตร Vernonia amygdalina Del.ชอวงศ ASTERACEAEชอทองถน ปาชาหมอง, ปาเฮวหมอง, หนานเฉาเหวยชออนๆ African bitter leaf

ปาชาหมองเปนไมพมยนตนขนาดเลกทมใบสเขยวเขม เปลอกหยาบ สงประมาณ 1-6 เมตร เปนประเภทไมเนอออน และพบโดยทวไปในทวปแอฟรกาโดยเฉพาะอยางยงแอฟรกาตะวนออก(33) เนองจากใบของปาชาหมองมรสขม ชนพนเมองของแอฟรกาจงเรยกวา “bitter leaf” ปาชาหมองเปนพชทมคณคาเปนอยางมากเนองจากประกอบไปดวยแรธาตและวตามนทสำคญเปนจำนวนมาก(33) ยกตวอยางเชน สารตานอนมลอสระ (วตามน A, C, E, และ riboflavin)(9, 10) สารประกอบแรธาต (Fe, Se, Zn, Cu, Cr, และ Mn)(9, 10) และสาร phyto-compounds (polyphenols, flavonoids และ tannins)(9, 10) เปนตน โดยปาชาหมองถกใชในการรกษาโรคในเขตรอนไดหลากหลายโรค ยกตวอยางเชน amoebic dysentery, gastrointestinal disorders, antimicrobial และ antiparasitic disorder เปนตน(33)

การปลกและการกระจายพนธของปาชาหมองปาชาหมองพบไดทวไปในธรรมชาตบรเวณใกลทะเลสาบหรอแมนำ หรอบรเวณปาทอดมสมบรณทมความสง

ตงแต 2,800 เมตรเปนตนไป โดยมกจะขนในพนทปาดบชนทมปรมาณนำฝน 750-2000 มลลเมตรตอป(33) แตอยางไรกตามแมวาปาชาหมองจะเปนพชทเขตปาดบชน แตกสามารถทนภยแลวไดด โดยสามารถขนไดในดนทกประเภท แตจะเจรญเตบไดดใน humus-rich soils(33)

ในประเทศไนจเรยจะมการปลกปาชาหมองไวประจำบานเพอเปนอาหารคนและอาหารสตว และนยมนำมาทำอาหารหลงจากมการขจดความขมจากใบทงแลว(33) ในพนทราบสงของเอธโอเปยจะทำการปลกปาชาหมองเพอเปนอาหารสตว เนองจากวามการขยายพนธเรว เจรญเตบโตงาย การดแลรกษาไมยาก และเปนการรกษาหนาดนไดเปนอยางด(33) ปาชาหมองเปนพชทไมมเมลดการขยายพนธทำไดโดยการตดกงเพาะชำเทานน(33)

การใชประโยชนจากพชสมนไพรปาชาหมอง



ปาชาหมองเปนสมนไพรทนยมนำมาทำอาหาร โดยสามารถใชประโยชนไดมากมายในดานเภสชวทยา ซงนยมนำมาใชในการรกษาแบบพนถน (traditional medicine) ซงชาวพนเมองในประเทศแถบแอฟรกานำมารกษาโรคหลายชนดทงโรคทเกดในคน และโรคทเกดในสตว(33) ในประเทศไนจเรย ใบของปาชาหมองนำมาใชแทนยาควนนเพอรกษาอาการไขจากมาลาเรย(34) นอกจากนในผหญงชาวแอฟรกานำปาชาหมองมากระตนการตกไขเพอเขาสวยเจรญพนธ(35) หรอใชเปนยาระบาย/ยาถาย หรอเปนยาสวนทวารหนกไดอกดวย(33)

เปนทนาสนใจอยางยงเกยวกบสรรพคณของปาชาหมองในการรกษาโรคทเกดขนในเขตรอน โดยมการใชโดยทวไปสำหรบการรกษาโรคตดเชอพยาธ ยกตวอยางเชน amoebic dysentery, schistosomiasis, helminthosis, hiccups โรคตดเชอแบคทเรย ยกตวอยางเชน typhoid fever โรคตดเชอไวรส ยกตวอยางเชน yellow fever, measles โรคตดเชอรา ยกตวอยางเชน candidiasis และโรคไมตดตอเรอรง เชน การปวดทอง ไฟไหม นำรอนลวก เบาหวาน มะเรง โรคปอด เปนตน(33) โดยการนำเอาปาชาหมองมาใชในการรกษาโรคสามารถสรปไดดงตาราง

โรคทนำมาใชในการรกษา สวนประกอบของปาชาหมอง

ประเทศทนำมาประยกตใช

วธการสกด อางอง

Malaria ใบ Southern Uganda

Infusion (36)

Convulsion, stomachache ใบ, ราก Uganda Infusion (37)Worms ใบ, ราก Uganda Infusion (38)Malaria ใบ Ethiopia Homogenization (39)Wound healing ใบ Ethiopia Concoction,

infusion(40)

Malaria ใบ, ตนออน Nigeria Infusion (41)Breast milk enhancement ใบ Nigeria The dried

leaves are powdered andtaken orally

(42)

Yellow fever, hypertension, malaria ใบ North-easternNigeria

Infusion (43)

Stomach ache, vagina itching, laxative, appetizer

ใบ,ราก Nigeria Infusion (44)

Pile ใบ Nigeria (45)Candidiasis ใบ Nigeria Infusion with

lime and potash

(46)

Boils and burns ใบ Nigeria Infusion (47)Diabetes ใบ Nigeria (47)Malaria ใบ Togo (48)Diabetes, cancer and viral diseases ใบ Cameroon Boiling (49)Malaria, jaundice ใบ Cameroon Maceration (50)Diabetes, malaria, fever, constipation, ใบ Ghana Decoction (51)



โรคทนำมาใชในการรกษา สวนประกอบของปาชาหมอง

ประเทศทนำมาประยกตใช

วธการสกด อางอง

and high blood pressure and as laxativeInduction of uterine mobility and control of post-parturn hemorrhage

ใบ Malawi (52)

Diabetes, hypertension and hypercholestrolaemia

ใบ Malaysia (53, 54)

Febrile convulsions, fever, malaria ใบ, ราก Tanzania Squeezing (55)Liver diseases ใบ Rwanda Crush a handful

and boil in 3 L of water and 1 glass of banana wine

(56)

Voluntary skin depigmentation ใบ Rwanda (57)Antihelminth, antiscorbutic ใบ West Africa (58)Haematuria caused by Schistosoma haematobium infection, and/or stomach troubles caused by Schistosoma mansoni infection

ใบ South Africa (59)

Molluscicide ใบ South Africa (59)

ฤทธตานอนมลอสระของสมนไพรปาชาหมองปจจบนเปนทรกนดวาสมนไพรปาชาหมองสามารถลด และตานการเกดอนมลอสระได ซงใหผลทสอดคลอง

กบการวจยทางเภสชวทยาของตวพช ซงมงานวจยหลายงานวจยทศกษาเกยวกบสารตานอนมลอสระทสามารถแยกไดจากสารสกดจากใบปาชาหมอง ดงน Iwalewa และคณะรายงานถงสารตานอนมลอสระและสารททำหนาทปกปองเซลลของสารสกดจากใบปาชาหมองทสกดดวยเมทานอลโดยใชวธ 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl free radical assay and hemagglutination assay พบวาสารสกดทไดจากใบปาชาหมองมคณสมบตของการเปนสารตานอนมลอสระ(60) ตอมามการรายงานจาก Iwalokun และคณะไดทำการทดสอบฤทธการตานอนมลอสระของใบปาชาหมองทสกดดวยนำพบวา สารสกดจากใบปาชาหมองสามารถลดการเกดอนมลอสระจาก acetaminophen-induced hepatotoxicity และ oxidative stress ในหนทดลองได(61) การใหสารสกดใบปาชาหมองกอนการเกดการบาดเจบของตบพบวายบยงการเกด lipid peroxidation และ oxidative stress ทเหนยวนำโดย acetaminophen ได ซงการศกษานเปนการยนยนไดวาสารสกดจากใบปาชาหมองสามารถลดการบาดเจบของเซลลตบจาก acetaminophen โดยมคณสมบตเปนสารตานอนมลอสระ(61) นอกจากนยงมการรายงานจาก Adesanoye และ Farombi วาสาร methanolic ทสกดไดจากใบปาชาหมองสามารถปองกนการบาดเจบของเซลลตบจากการกระตนโดย carbon tetrachloride ได โดยผานกระบวนการเปนสารตานอนมลอสระ และ phase 2 enzymes(62)

โดยคณสมบตของการเปนสารตานอนมลอสระของใบปาชาหมองไดมการศกษาโดย Igile และคณะ โดยไดศกษาและแยกสารประกอบฟลาโวนอยดในใบปาชาหมองโดยการใช spectroscopic techniques พบวาประกอบดวยสารฟลาโวนอยดสามชนดคอ luteolin, luteolin 7-O-β-glucuronoside, และ luteolin 7-O-β-glucoside



(63) หลงจกานนจงทำการทดสอบคณสมบตการตานอนมลอสระของสารฟลาโวนอยดทงสามชนดพบวา Luteolin เปนสารทมคณสมบตตานอนมลอสระไดดทสด(63)

จากการทใบปาชาหมองมสารประกอบฟลาโวนอยด ซงจากการรายงานทผานมาพบวาสารประกอบฟลาโวนอยดนสามารถผาน blood brain barrier เขาสสมองได(64) ดงนนใบปาชาหมองจงเปนประโยชนอยางยงตอการรกษาโรคสมองอนเนองมาจากอนมลอสระทเกดขน ซงจากการายงายของ Owoeye และคณะไดยนยนถงคณสมบตนของใบปาชาหมอง โดยมการรายงานวาสารสกดจากใบปาชาหมองทสกดดวยเมทานอลสามารถปองกนการบาดเจบของเซลลสมองสวน cerebellum ได เมอมการกระตนดวยรงสแกมมาในสมองของหนแรท(65) ซงจากขอมลทผานมาจะเหนไดวาสารสกดจากใบปาชาหมองสามารถลดสารอนมลอสระ และสามารถปองกนการเกดโรคอนเนองมาจากสารอนมลอสระได

ฤทธตานเบาหวานของสมนไพรปาชาหมองสารสกดจากใบปาชาหมองมคณสมบตลดไขมนในกระแสเลอดทเกดขนในโรคเบาหวานได นอกจากนยง

สามารถลดระดบไตรกลเซอไรด และทำใหระดบของคลอเลสเตอรอลกลบคนสชวงปกตในหนทดลองทถกเหนยวนำใหตบออนเสยสภาพและเปนเบาหวาน ซงสามารถยนยนไดวาสารสกดจากใบปาชาหมองมคณสมบตในการลดระดบไขมนในกระแสเลอดในภาวะทเกดโรคเบาหวานได(66, 67)

นอกจากนยงมรายงานถงฤทธของสารสกดจากใบปาชาหมองในการลดระดบนำตาลในกระแสเลอดในหนแรททเปนเบาหวาน โดยเปนการศกษาของ Akpaso และคณะในป 2011 ซงสกดสารจากใบปาชาหมองโดยใช chloroform หลงจากนนใชสารสกดนใหกบหนแรททเหนยวนำใหตบออนเสยสภาพ พบวาสารสกดนสามารถลดระดบนำตาลในกระแสเลอดในหนแรททเปนเบาหวานหลงจากการใหสารสกดเปนเวลา 14 วน(68) โดยการศกษานใหผลในลกษณะเดยวกนกบ Nwanjo และคณะทพบวา การสกดสารจากใบปาชาหมองดวยนำ และใหการรกษาในหนแรททเปนเบาหวาน สามารถลดระดบนำตาลในหนแรททถกเหนยวนำใหเกดภาวะเบาหวานดวยยา streptozotocin ได และการใหสารสกดใบปาชาหมองรวมกบสารสกดจากแกนของ Gongronema latifolium สามารถลดระดบนำตาลและตานการเกดเบาหวานในหนแรททถกเหนยวนำดวยยา streptozotocin ไดเชนกน(68)

มากไปกวานนยงมการศกษาถงประสทธภาพของสารสกดจากใบปาชาหมองตอกระบวนการ Transcription ของเอนไซมทสำคญทเกยวของกบกระบวนการใชนำตาลกลโคสของเซลลในหนทถกเหนยวนำใหเปนโรคเบาหวานโดยยา streptozotocin จากผลการทดลองพบวาสารสกดจากใบปาชาหมองลดนำตาลในกระแสเลอดหลงจากใหไปแลว 14 วน โดยยบยงกระบวนการ gluconeogenesis และ กระตนการเกด glucose oxidation ผานทาง pentose phosphate pathway (PPP) pathway ซงกระบวนการทงหมดนเกดขนในตบ(13)

นอกจากนยงมการหาสารประกอบทสำคญททำหนาทในการตานเบาหวานและตานอนมลอสระในสารสกดจากใบปาชาหมองโดยใช Gas chromatography–mass spectrometry (GC-MS) ในการวเคราะห พบวาสารสกดจากใบปาชาหมองประกอบไปดวย linoleic acid (4.72%), α-linolenic acid (10.8%) และ phytols (12.0%) และหลงจากการใหสารสกดจากใบปาชาหมองในหนทเปนเบาหวานพบวาสามารถลดนำตาลในกระแสเลอดได(10) จากการศกษาเหลานจงทำใหเหนประสทธภาพของสารสกดจากพชสมนไพรปาชาหมองในการลดระดบนำตาลในกระแสเลอดทเกดขนในภาวะทเปนโรคเบาหวานได

10. ระดบความพรอมเทคโนโลย (เฉพาะเปาหมายท 1)10.1 ระดบความพรอมเทคโนโลยทมอยในปจจบน (เลอกความสอดคลองสงสดเพยงหวขอเดยวเทานน)



Basic Research

Basic principles observed and reported

Concept and/or application formulated

Concept demonstrated analytically or experimentally

Prototype Development

Key elements demonstrated in laboratory environments

Key elements demonstrated in relevant environments

Representative of the deliverable demonstrated in relevant environments

Pre-commercial Demonstration/Product Development and Commercialisation

Final development version of the deliverable demonstrated in operational

environment

Actual deliverable qualified through test and demonstration

Operational use of deliverable

10.2 ระดบความพรอมเทคโนโลยทจะเกดขนถางานประสบความสำเรจ (เลอกความสอดคลองสงสดเพยงหวขอเดยวเทานน)

Basic Research

Basic principles observed and reported

Concept and/or application formulated

Concept demonstrated analytically or experimentally

Prototype Development



Key elements demonstrated in laboratory environments

Key elements demonstrated in relevant environments

Representative of the deliverable demonstrated in relevant environments

Pre-commercial Demonstration/Product Development and Commercialisation

Final development version of the deliverable demonstrated in operational

environment

Actual deliverable qualified through test and demonstration

Operational use of deliverable

11. ศกยภาพทางการตลาดของเทคโนโลยและนวตกรรมทจะพฒนา (เฉพาะเปาหมายท 1 หากระบเปนตวเลขได โปรดระบ)

11.1) ขนาดและแนวโนมของตลาด/โอกาสทางการตลาด………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………

11.2) ความสามารถในการแขงขน (คแขง/ตนทน)………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………

12. วธการดำเนนการวจย สมนไพรปาชาหมอง และการเตรยมสมนไพร

ปาชาหมองไดรบความอนเคราะหจากคณอจฉรา อนตะสวรรณ ผอำนวยการโรงพยาบาลสงเสรมสขภาพตำบลดงเจน อำเภอภกามยาว จงหวดพะเยา ซงเปนเจาของตนปาชาหมองททำการปลก และดแลการเลยง โดยทำการเพาะปลกในเขตจงหวดพะเยาประเทศไทย โดยสารสกดจากใบปาชาหมองทนำมาใชในการทดลอง ไดทำการสกด ซงมวธการสกดโดยยอ คอทำการเกบตวอยางจากใบของตนปาชาหมอง นำมาสบใหเปนชนเลกและนำมาทำใหแหงในทรม เมอแหงดแลว นำมาบดเปนผงละเอยด โดยครก ผงทไดจากการบดใบปาชาหมอง ประมาณ 100 กรม จะนำมาสกดดวย Ethyl acetate ทอณหภม 60-80 oC โดยใชชดเครองมอ soxlet เปนเวลา 72 ชวโมง สารสกดทไดจะ



นำมาทำใหเขมขนโดย vacuum และทงไวใหแหงทอณหภมหอง และเกบไวทอณหภม 4 oC เพอนำมาทดสอบฤทธตอไป

การเพาะเลยงเซลล H9c2 และเอนโดธเรยลเซลลทำการเพาะเลยงดวยเทคนคการเลยงเซลลแบบปลอดเชอ โดยเพาะเลยงในอาหารเลยงเซลลชนด

Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM) ทมสวนผสมของ 10% Fetal Bovine Serum (FBS) เพาะเลยงทอณหภม 37°C + 5% CO2 จนกระทงเซลลเจรญได 80% เซลลจะถก subculture โดยดดอาหารเลยงเซลลเกาออก เตม Phosphate Buffer Saline (PBS) ปรมาตร 5 ml ดดออก ทำซำ 2 ครง จากนนเตมเอนไซม Trypsin-EDTA นำไปดภายใตกลอง inverted microscope จนกระทงเซลลหลด 50% จงเตม DMEM ปรมาตร 5 ml เพอหยดการทำงานของเอนไซม Trypsin จากนนจงดดอาหารและเซลลจากใน flask ใสลงใน sterile tube นำไปปนท 1800 rpm เปนเวลา 10 นาท จากนนดดอาหารเลยงเซลลสวนบนทง เตม DMEM ทมสวนผสมของ 10% FBS ลงใน sterile tube จากนนทำการ resuspend เพอทำใหตะกอนเซลลผสมกบอาหารเลยงเซลล ดดเซลลใสลงใน flask ใหมแลวเตมอาหารเลยงเซลล DMEM ทมสวนผสมของ 10% FBS ตามปรมาตรทตองการ เพอนำไปใชในการทดลองหรอเพอเพาะเลยงตอไป

การหาระยะเวลาทเหมาะสมในการเหนยวนำใหเกดภาวะขาดเลอดจำลอง (sI) ในเซลล H9c2 และเอนโดธเรยลเซลล

นำเซลล H9c2 หรอ เอนโดธเรยบเซลล ปรมาณ 4.5 ×105 cells/ml ทเพาะเลยงในอาหารเลยงเซลล DMEM ทมสวนผสมของ 10% FBV , penicillin 5,000 U/ml และ streptomycin 5,000 µg/ml ลงใน 96 well culture plate เพาะเลยงตอทอณหภม 37 °C + 5% CO2 จนกระทงเซลลเจรญได 80% confluence จงดดอาหารเลยงเซลลเกาออกแลวลางเซลลดวย PBS ปรมาตร 150 µl ตอหลม 1 ครง หลงจากนนเตม ischemic buffer 10X stock basic buffer (137 mM NaCl , 3.58 mM KCl, 0.49 mM MgCl26H2O, 1.8 mM CaCl22H2O, 4 mM HEPES, sterile ddH2O, 20 mM 2-deoxyglucose, 30% Na lactate, 1.0 mM Na dithionite)(69) แลวนำไป incubate ทอณหภม 37 °C + 5% CO2 เปนเวลา 0, 20, 40, 60, 120 และ 180 นาท ตามลำดบ เมอครบเวลาดงกลาวขางตน ทำการดด ischemic buffer ทงแลวเตมอาหารเลยงเซลล DMEM 150 µl เพอ reperfusion จากนน incubate ทอณหภม 37 °C + 5% CO2 เปนเวลา 24 ชวโมง แลวนำไปตรวจวดการมชวตของเซลลดวยหลกการ MTT cell viability assay เพอหาเวลาทเหมาะสมททำใหเซลลตาย 50% สถตทใชคอ One Way-Analysis of Variance (ANOVA) แลใช Tukey post hoc. analysis ในการวเคราะหความแตกตางของคาเฉลยระหวางกลมทดลอง

การทดสอบการรอดชวตของเซลลดวยหลกการ MTT cell viability assay MTT (3-(4, 5-dimethylthiazolyl-2)-2, 5-difenyltetrazolium bromide) cell survival assay มหลก

การคอ MTT จะถกรดวซโดยเซลลทมชวตดวยปฏกรยาของเอนไซมในกลม Dehydrogenase ไดสารประกอบ formazan ทมสมวง และสามารถดดกลนแสงทความยาวคลน 490 nm(70) ทำการดดอาหารเลยงเซลลทง แลวเตมสายละลาย MTT ความเขมขน 0.5 mg/ml นำไป incubate ท 37°C เปนเวลา 120 นาท จากนนดดสารละลาย MTT ทง แลวเตม dimetylsulfoxide (DMSO) ปรมาตร 100 µl เพอชะลางสออกจากเซลล แลวนำไปวเคราะหการดดกลนแสงทความยาวคลน 490 nm

วตถประสงค 1 : เพอศกษาผลของการใหสารสกดหยาบจากพชสมนไพรปาชาหมองตอภาวะกลามเนอหวใจขาดเลอดในเซลลกลามเนอหวใจ H9c2 ทถกเหนยวนำใหเกดภาวะนำตาลสง

การเพาะเลยงเซลล H9c2 ในภาวะนำตาลสง



นำเซลล H9c2 ปรมาณ 1.5 ×105 cells/ml ทเพาะเลยงในอาหารเลยงเซลล DMEM ทมสวนผสมของ 10% FBS , penicillin 5,000 U/ml และ streptomycin 5,000 µg/ml เพาะเลยงใน 96 well cell culture plate จนไดความหนาแนน 80% confluence ซงกลมการทดลองแบงออกเปน 4 กลม คอ กลมควบคม (control) กลมทถกเหนยวนำใหเกดภาวะนำตาลสง กลมทกระตนใหเกดภาวะขาดเลอดจำลอง และกลมทถกเหนยวนำใหเกดภาวะนำตาลสงรวมกบภาวะขาดเลอดจำลอง ซงกลมทถกเหนยวนำใหเกดภาวะนำตาลสงจะทำการเปลยนเปนอาหารเลยงเซลล DMEM ทมสวนผสมของ D-glucose ความเขมขน 33 mM ซงเปนความเขมขนทเหมาะสมทสามารถเหนยวนำใหเซลลอยในภาวะนำตาลสงได(71) ทำการเพาะเลยงตอทอณหภม 37 °C + 5% CO2 เปนเวลา 24 ชวโมง จากนนจงทำการทดสอบการรอดชวตของเซลล (cell viability) ดวย MTT cell viability assay โดย cell viability ของกลมควบคมจะนำมาเปรยบเทยบเปน คาการดดกลนแสง ทำการทดสอบ 3 ครงแลวนำ คาการดดกลนแสงมาเขยนเปนกราฟแทง เพอเปรยบเทยบความแตกตางระหวางกลม สถตทใชคอ Two Way-Analysis of Variance (ANOVA) ในการทดสอบความแตกตางของคาเฉลยใช Turkey post hoc. analysis

การทดสอบความเขมขนของสารสกดจากใบปาชาหมองทเหมาะสมในการปองกนการตายของเซลลกลามเนอหวใจ H9c2 ทถกกระตนใหเกดภาวะขาดเลอดจำลอง ในภาวะ Hyperglycemia

นำเซลล H9c2 มาเพาะเลยงในสภาวะควบคม (control group) ซงไมไดถกกระตนใหอยใหเกดภาวะขาดเลอดจำลอง และกลมทเพาะเลยงแลวกระตนใหเกดภาวะขาดเลอดจำลอง (ischemic group) โดยเซลลในแตละกลมจะถกแบงออกเปน 5 กลมยอยทมสภาวะแตกตางกนซงในกลมยอยนนจะมกลมทถกเหนยวนำใหเกดภาวะนำตาลสงและกลมทไดรบสารสกดจากปาชาหมอง ดงแสดงในตาราง 3 นำไป incubate ท 37 °C + 5% CO2 เปนเวลา 1 ชวโมง หลงจากนนวดการมชวตรอดของเซลลดวยหลกการ MTT cell viability assay ทดสอบความแตกตางของคาเฉลยโดย One Way-Analysis of Variance (ANOVA) และใช Tukey post hoc. analysis ในการวเคราะหความแตกตางของคาเฉลยระหวางกลมทดลอง

ตาราง แสดงการทดลองเซลลในสภาวะตางๆของการไดรบสารสกดจากใบปาชาหมองตอเซลล H9c2 ทถกเหนยวนำใหเกดภาวะนำตาลสง (hyperglycemia) และกระตนใหเกด ischemia/reperfusion



การทดสอบความเขมขนของสารสกดจากใบปาชาหมองทเหมาะสมในการลดการเกดสารอนมลอสระ (ROS) ในเซลลกลามเนอหวใจ H9c2 ทถกกระตนดวย H2O2 ในภาวะ Hyperglycemia

นำเซลล H9c2 ปรมาณ 1.5 ×105 cells/ml ทเพาะเลยงในอาหารเลยงเซลล DMEM ทมสวนผสมของ 10% FBS , penicillin 5,000 U/ml และ streptomycin 5,000 µg/ml เพาะเลยงใน 96 well cell culture plate จนไดความหนาแนน 80% confluence หลงจากนนทำการเตมสารสกดจากใบปาชาหมองทความเขมขนตางๆ


Group Condition

Control

H9c2 cell in complete mediumH9c2 + 0.0001% DMSOH9c2 + 33 mM of D-glucoseH9c2 + 0.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมองH9c2 + 1 mg/ml สารสกดใบปาขาหมองH9c2 + 1.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมองH9c2 + 2.0 mg/ml สารสกดใบปาขาหมองH9c2 + 2.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมองH9c2 + 3.0 mg/ml สารสกดใบปาขาหมองH9c2 + 0.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucoseH9c2 + 1 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucoseH9c2 + 1.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucoseH9c2 + 2.0 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucoseH9c2 + 2.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucoseH9c2 + 3.0 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucose

Simulated ischemia group

H9c2 + sI bufferH9c2 + 33 mM of D-glucose + sI bufferH9c2 + 0.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + sI bufferH9c2 + 1 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + sI bufferH9c2 + 1.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง+ sI bufferH9c2 + 2.0 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง+ sI bufferH9c2 + 2.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง+ sI bufferH9c2 + 3.0 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง+ sI bufferH9c2 + 0.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucose+ sI bufferH9c2 + 1 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucose+ sI bufferH9c2 + 1.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucose+ sI bufferH9c2 + 2.0 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucose+ sI bufferH9c2 + 2.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucose+ sI bufferH9c2 + 3.0 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucose + sI buffer


เปนเปนเวลา 24 ชวโมง เมอครบเวลาทำการดดอาหารเลยงเซลลทง และเตมอาหารเลยงเซลลทม carboxy-H2DCFDA ความเขมขน 25 μM ลงไปแทนท ทำการบมทอณหภม 37 ○C ในทมดเปนเวลา 30 นาท แลวจงทำการลางดวย PBS หลงจากนนทำการเตม H2O2 ความเขมขน 250μM ทำการบมทอณหภม 37 ○C เปนเวลา 30 นาท และทำการวดคาการดดกลนแสงท excitation wavelength at 498 nm และ emission wavelength at 522 nm

ตาราง แสดงการทดลองเซลลในสภาวะตางๆของการไดรบสารสกดจากใบปาชาหมอง ของเซลล H9c2 ทถกเหนยวนำใหเกดภาวะนำตาลสง (hyperglycemia) และกระตนดวย H2O2

การทดสอบประสทธภาพของสารสกดจากใบปาชาหมองในการลดการแสดงออกของยน Bcl-2 (cardiac cell death), ROCK (cardiac cell injury) และ เพมการแสดงออกของยน Akt ในเซลลกลามเนอหวใจ H9c2 ท


Group Condition

Experimental groups

H9c2 cell in complete medium H9c2 cell in complete medium + H2DCFDAH9c2 cell in complete medium + H2O2

H9c2 cell in complete medium + H2O2+ H2DCFDAH9c2 + 0.0001% DMSO + H2O2 + H2DCFDAH9c2 + 33 mM of D-glucose + H2O2 + H2DCFDAH9c2 + 0.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + H2O2 + H2DCFDAH9c2 + 1 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + H2O2 + H2DCFDAH9c2 + 1.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + H2O2 + H2DCFDAH9c2 + 2.0 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + H2O2 + H2DCFDAH9c2 + 2.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + H2O2 + H2DCFDAH9c2 + 3.0 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + H2O2 + H2DCFDAH9c2 + 0.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucose + H2O2 + H2DCFDAH9c2 + 1 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucose + H2O2 + H2DCFDAH9c2 + 1.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucose + H2O2 + H2DCFDAH9c2 + 2.0 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucose + H2O2 + H2DCFDAH9c2 + 2.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucose + H2O2 + H2DCFDA H9c2 + 3.0 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucose+ H2O2 + H2DCFDA


กระตนดวย simulated ischemia/reperfusion injury ในภาวะ Hyperglycemia ดวยวธ Quantitative Real-Time PCR

ทำการเลยงเซลล H9c2 ในอาหารเลยงเซลล DMEM ทมนำตาล D-glucose สงกวาปกต และมสารสกดจากใบปาชาหมองทความเขมขนตางๆ กนผสมอย หลงจากนนเหนยวนำใหเซลลเกดภาวะ simulated ischemia แลวจงทำการหยดปฏกรยาทงหมดในเซลล ตอมาจงทำการสกด RNA จากเซลล H9c2 โดยใชชดสำเรจรป GeneJET RNA purification kits (Thermo scientific) หลงจากนนจงทำ real time PCR โดยใชชดทดสอบสำเรจรป CFX96™ IVD Real-Time PCR Systems (Bio-Rad) โดยการแสดงออกของ mRNA จะคำนวณไดจาก comparative cycle threshold (CT) method โดยทำการเทยบกบการแสดงออกของยน GAPDH ตาราง แสดง primer ทใชในการทดสอบการแสดงออกของยน

Gene specific primer Sequences

Bcl-2 SenseAntisense

5- GACGCGAAGTGCTATTGGT-3 5- TCAGGCTGGAAG GAGAAGAT-3

RACK SenseAntisense

5- CAAGGTCGGGCAGGAAGAG-3 5- TAGAAGGCACAGTCGAGG-3

GAPDH SenseAntisense

5- ATCTGATGGATTTCAAGAACC-3 5- CTCTGAGACGGGTTGACTTC-3

การทดสอบประสทธภาพของสารสกดจากใบปาชาหมองในการลดการเตมหมฟอสเฟตของโปรตน p38 MAPK, JNK, RACK และเพมการเตมหมฟอสเฟตของโปรตน Akt, Bcl-2 ในเซลลกลามเนอหวใจ H9c2 ทกระตนดวย simulated ischemia/reperfusion injury ในภาวะ Hyperglycemia

ทำการเพาะเลยงเซลล H9c2 ในจานเพาะเลยงเซลลทมและไมมสารสกดหยาบจากใบปาชาหมองทความเขมขนทเหมาะสมทใหผลในการลดการบาดเจบและการตายของเซลลไดมากทสดเปนเวลา 24 ชวโมงกอนการทำ simulated ischemia หลงจากนนทำการสกดโปรตนดวย Triton X-100 lysis buffer (20 mM Tris-HCl, pH 7.4, 0.8% Triton X-100, 150 mM NaCl, 2 mM EDTA, 10% glycerol, 100 mM PMSF, 5 mg/ml aprotinin และ 5 mg/ml leupeptin) หลงจากนนทำการวดโปรตนดวย Bio-Rad protein assay kit ทใช bovine serum albumin (BSA) เปน standard หลงจากนนสารตวอยางจะถกผสมกบ loading buffer และทำการ denaturedดวยความรอนทอณหภม 95 ○C กอนทจะทำการแยกโปรตนดวย SDS-PAGE ท 12.5% polyacrylamide gel หลงจากนนทำการ transferred protein ในเจลส PVDF membrane ทำการเตม primary antibody ตอ p38 MAPK, JNK, และ Akt ทำการบมทอณหภม 4 ○C บน shaker ขามคน หลงจากนนเตม HRP-conjugated secondary antibodies บมทอณหภมหองเปนเวลา 1 ชวโมง กอนทำการเตม substrate และทำการตรวจสอบดการแสดงออกของโปรตนดวย chemiluminescence detection system

วตถประสงค 2 : เพอศกษาผลของการใหสารสกดหยาบจากพชสมนไพรปาชาหมองตอภาวะกลามเนอหวใจขาดเลอดในเซลล EAhy.926 (endothelial cell) ทถกเหนยวนำใหเกดภาวะนำตาลสง



การเพาะเลยงเซลล EAhy.926 ในภาวะนำตาลสงนำเซลล EAhy.926 ปรมาณ 1.5 ×105 cells/ml ทเพาะเลยงในอาหารเลยงเซลล DMEM ทมสวนผสม

ของ 10% FBS , penicillin 5,000 U/ml และ streptomycin 5,000 µg/ml เพาะเลยงใน 96 well cell culture plate จนไดความหนาแนน 80% confluence ซงกลมการทดลองแบงออกเปน 4 กลม คอ กลมควบคม (control) กลมทถกเหนยวนำใหเกดภาวะนำตาลสง กลมทกระตนใหเกดภาวะขาดเลอดจำลอง และกลมทถกเหนยวนำใหเกดภาวะนำตาลสงรวมกบภาวะขาดเลอดจำลอง ซงกลมทถกเหนยวนำใหเกดภาวะนำตาลสงจะทำการเปลยนเปนอาหารเลยงเซลล DMEM ทมสวนผสมของ D-glucose ความเขมขน 33 mM ซงเปนความเขมขนทเหมาะสมทสามารถเหนยวนำใหเซลลอยในภาวะนำตาลสงได(71) ทำการเพาะเลยงตอทอณหภม 37 °C + 5% CO2 เปนเวลา 24 ชวโมง จากนนจงทำการทดสอบการรอดชวตของเซลล (cell viability) ดวย MTT cell viability assay โดย cell viability ของกลมควบคมจะนำมาเปรยบเทยบเปน คาการดดกลนแสง ทำการทดสอบ 3 ครงแลวนำ คาการดดกลนแสงมาเขยนเปนกราฟแทง เพอเปรยบเทยบความแตกตางระหวางกลม สถตทใชคอ Two Way-Analysis of Variance (ANOVA) ในการทดสอบความแตกตางของคาเฉลยใชTurkey post hoc. analysis

การทดสอบความเขมขนของสารสกดจากใบปาชาหมองทเหมาะสมในการปองกนการตายของเซลลกลามเนอหวใจในเซลล EAhy.926 (endothelial cell) ทถกกระตนใหเกดภาวะขาดเลอดจำลอง ในภาวะ Hyperglycemia

นำเซลล EAhy.926 มาเพาะเลยงในสภาวะควบคม (control group) ซงไมไดถกกระตนใหอยใหเกดภาวะขาดเลอดจำลอง และกลมทเพาะเลยงแลวกระตนใหเกดภาวะขาดเลอดจำลอง (Ischemic group) โดยเซลลในแตละกลมจะถกแบงออกเปน 5 กลมยอยทมสภาวะแตกตางกนซงในกลมยอยนนจะมกลมทถกเหนยวนำใหเกดภาวะนำตาลสงและกลมทไดรบสารสกดจากปาชาหมอง ดงแสดงในตาราง 3 นำไป incubate ท 37 °C + 5% CO2 เปนเวลา 1 ชวโมง หลงจากนนวดการมชวตรอดของเซลลดวยหลกการ MTT cell viability assay ทดสอบความแตกตางของคาเฉลยโดย One Way-Analysis of Variance (ANOVA) และใช Tukey post hoc. analysis ในการวเคราะหความแตกตางของคาเฉลยระหวางกลมทดลอง



ตาราง แสดงการทดลองเซลลในสภาวะตางๆของการไดรบสารสกดจากใบปาชาหมองตอเซลล EAhy.926 ทถกเหนยวนำใหเกดภาวะนำตาลสง (hyperglycemia) และกระตนใหเกด ischemia/reperfusion

การทดสอบความเขมขนของสารสกดจากใบปาชาหมองทเหมาะสมในการลดการเกดสารอนมลอสระ (ROS) ในเซลล EAhy.926 (endothelial cell) ทถกกระตนดวย H2O2 ในภาวะ Hyperglycemia

นำเซลล EAhy.926 ปรมาณ 1.5 ×105 cells/ml ทเพาะเลยงในอาหารเลยงเซลล DMEM ทมสวนผสมของ 10% FBS , penicillin 5,000 U/ml และ streptomycin 5,000 µg/ml เพาะเลยงใน 96 well cell culture plate จนไดความหนาแนน 80% confluence หลงจากนนทำการเตมสารสกดจากใบปาชาหมองทความเขมขนตางๆ เปนเปนเวลา 24 ชวโมง เมอครบเวลาทำการดดอาหารเลยงเซลลทง และเตมอาหารเลยงเซลลทม carboxy-


Group Condition

Control

EAhy.926 cell in complete mediumEAhy.926 + 0.0001% DMSOEAhy.926 + 33 mM of D-glucoseEAhy.926 + 0.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมองEAhy.926 + 1 mg/ml สารสกดใบปาขาหมองEAhy.926 + 1.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมองEAhy.926 + 2.0 mg/ml สารสกดใบปาขาหมองEAhy.926 + 2.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมองEAhy.926 + 3.0 mg/ml สารสกดใบปาขาหมองEAhy.926 + 0.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucoseEAhy.926 + 1 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucoseEAhy.926 + 1.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucoseEAhy.926 + 2.0 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucoseEAhy.926 + 2.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucoseEAhy.926 + 3.0 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucose

Simulated ischemia group

EAhy.926 + sI bufferEAhy.926 + 33 mM of D-glucose + sI bufferEAhy.926 + 0.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + sI bufferEAhy.926 + 1 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง+ sI bufferEAhy.926 + 1.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง+ sI bufferEAhy.926 + 2.0 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง+ sI bufferEAhy.926 + 2.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง+ sI bufferEAhy.926 + 3.0 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง+ sI bufferEAhy.926 + 0.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucose+ sI bufferEAhy.926 + 1 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucose+ sI bufferEAhy.926 + 1.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucose+ sI bufferEAhy.926 + 2.0 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucose+ sI bufferEAhy.926 + 2.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucose+ sI bufferEAhy.926 + 3.0 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucose+ sI buffer


H2DCFDA ความเขมขน 25 μM ลงไปแทนท ทำการบมทอณหภม 37 ○C ในทมดเปนเวลา 30 นาท แลวจงทำการลางดวย PBS หลงจากนนทำการเตม H2O2 ความเขมขน 250 μM ทำการบมทอณหภม 37 ○C เปนเวลา 30 นาท และทำการวดคาการดดกลนแสงท excitation wavelength at 498 nm และ emission wavelength at 522 nm

ตาราง แสดงการทดลองเซลลในสภาวะตางๆของการไดรบสารสกดจากใบปาชาหมอง ของเซลล EAhy.926 ทถกเหนยวนำใหเกดภาวะนำตาลสง (hyperglycemia) และกระตนดวย H2O2

การทดสอบประสทธภาพของสารสกดจากใบปาชาหมองในเพมการแสดงออกของยน eNOS (endothelial cell nitroxide synthase) แ ล ะ VEGF (Vascular endothelial growth factor) ใ น เ ซ ล ล EAhy.926 (endothelial cell) ทกระตนดวย simulated ischemia/reperfusion injury ในภาวะ Hyperglycemia ดวยวธ Quantitative Real-Time PCR

ทำการเลยงเซลล EAhy.926 ในอาหารเลยงเซลล DMEM ทมนำตาล D-glucose สงกวาปกต และมสารสกดจากใบปาชาหมองทความเขมขนตางๆกนผสมอย หลงจากนนเหนยวนำใหเซลลเกดภาวะ simulated ischemia แลว


Group Condition

Experimental groups

EAhy.926 cell in complete medium EAhy.926 cell in complete medium + H2DCFDAEAhy.926 cell in complete medium + H2O2

EAhy.926 cell in complete medium + H2O2+ H2DCFDAEAhy.926 + 0.0001% DMSO + H2O2 + H2DCFDAEAhy.926 + 33 mM of D-glucose + H2O2 + H2DCFDAEAhy.926 + 0.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + H2O2 + H2DCFDAEAhy.926 + 1 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + H2O2 + H2DCFDAEAhy.926 + 1.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + H2O2 + H2DCFDAEAhy.926 + 2.0 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + H2O2 + H2DCFDAEAhy.926 + 2.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + H2O2 + H2DCFDAEAhy.926 + 3.0 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + H2O2 + H2DCFDAEAhy.926 + 0.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucose + H2O2 + H2DCFDAEAhy.926 + 1 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucose + H2O2 + H2DCFDAEAhy.926 + 1.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucose + H2O2 + H2DCFDAEAhy.926 + 2.0 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucose + H2O2 + H2DCFDAEAhy.926 + 2.5 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucose + H2O2 + H2DCFDA EAhy.926 + 3.0 mg/ml สารสกดใบปาขาหมอง + 33 mM of D-glucose+ H2O2 + H2DCFDA


จงทำการหยดปฏกรยาทงหมดในเซลล ตอมาจงทำการสกด RNA จากเซลล EAhy.926 โดยใชชดสำเรจรป GeneJET RNA purification kits (Thermo scientific) หล งจากน นจ งทำ real time PCR โดยใช ช ดทดสอบสำเร จร ป CFX96™ IVD Real-Time PCR Systems (Bio-Rad) โ ดยก า รแ สด งออ กข อ ง mRNA จ ะค ำน วณ ไ ด จ า ก comparative cycle threshold (CT) method โดยทำการเทยบกบการแสดงออกของยน GAPDH ตาราง แสดง primer ทใชในการทดสอบการแสดงออกของยน

Gene specific primer Sequences

eNOS SenseAntisense

5- GACTGGCATTGCACCCTTCCGG-3 5- GTTGCCAGAATTCTCTGCACGG-3

VEGF SenseAntisense

5- TCTTCAAGCCATCCTGTGT-3 5- CTTTCTTTGGTCTGCATTC-3

GAPDH SenseAntisense

5- ATCTGATGGATTTCAAGAACC-3 5- CTCTGAGACGGGTTGACTTC-3

การทดสอบประสทธภาพของสารสกดจากใบปาชาหมองในการลดการเตมหมฟอสเฟตของโปรตน p38 MAPK, JNK, และเพมการเตมหมฟอสเฟตของโปรตน eNOS , VEGF, Akt ในเซลล EAhy.926 (endothelial cell) ทกระตนดวย simulated ischemia/reperfusion injury ในภาวะ Hyperglycemia

ทำการเพาะเลยงเซลล EAhy.926 ในจานเพาะเลยงเซลลทมและไมมสารสกดหยาบจากใบปาชาหมองทความเขมขนทเหมาะสมทใหผลในการลดการบาดเจบและการตายของเซลลไดมากทสดเปนเวลา 24 ชวโมงกอนการทำ simulated ischemia หลงจากนนทำการสกดโปรตนดวย Triton X-100 lysis buffer (20 mM Tris-HCl, pH 7.4, 0.8% Triton X-100, 150 mM NaCl, 2 mM EDTA, 10% glycerol, 100 mM PMSF, 5 mg/ml aprotinin และ 5 mg/ml leupeptin) หลงจากนนทำการวดโปรตนดวย Bio-Rad protein assay kit ทใช bovine serum albumin (BSA) เปน standard หลงจากนนสารตวอยางจะถกผสมกบ loading buffer และทำการ denatured ดวยความรอนทอณหภม 95 ○C กอนทจะทำการแยกโปรตนดวย SDS-PAGE ท 12.5% polyacrylamide gel หลงจากนนทำการ transferred protein ในเจลส PVDF membrane ทำการเตม primary antibody ตอ p38 MAPK, JNK, และ Akt ทำการบมทอณหภม 4 ○C บน shaker ขามคน หลงจากนนเตม HRP-conjugated secondary antibodies บมทอณหภมหองเปนเวลา 1 ชวโมง กอนทำการเตม substrate และทำการตรวจสอบดการแสดงออกของโปรตนดวย chemiluminescence detection system

การวเคราะหขอมลผลการวจยทไดจากโครงการนจะถกนาเสนอขอมลในรปของ Mean ± S.D. วเคราะหดวยสถต One-way

ANOVA ในกรณทมการเปรยบเทยบตงแตสามกลมขนไปซงทดสอบหาความแตกตางระหวางกลมโดยใช Turkey’s Post Hoc test ในกรณทมตวแปรอสระมากกวาหนงตวและมมากกวาสามกลมขนไปจะใชสถต Two-way ANOVA โดยกำหนดคานยสำคญท p value < 0.0513. เอกสารอางองของโครงการวจย



1. d r A E E A A E d 2017Fe e ation ID. IDF DI B T S TL S ighth e ition . d r r r d r r dhttps://www.i f.o g/e-lib a y/epi emiology- esea ch/ iabetes-

d d d134 8 2017atlas/ -i f- iabetes-atlas- th-e ition.html. .2. Zheng Y, Ley SH, Hu FB. Global aetiology and epidemiology of type 2 diabetes mellitus

and its complications. Nat Rev Endocrinol. 2018;14(2):88-98.3. Cheng D. Prevalence, predisposition and prevention of type II diabetes. Nutr Metab

(Lond). 2005;2:29.4. Papatheodorou K, Papanas N, Banach M, Papazoglou D, Edmonds M. Complications of

Diabetes 2016. J Diabetes Res. 2016;2016:6989453.5. Chawla A, Chawla R, Jaggi S. Microvasular and macrovascular complications in diabetes

mellitus: Distinct or continuum? Indian J Endocrinol Metab. 2016;20(4):546-51.6. Morrish NJ, Wang SL, Stevens LK, Fuller JH, Keen H. Mortality and causes of death in the

WHO Multinational Study of Vascular Disease in Diabetes. Diabetologia. 2001;44 Suppl 2:S14-21.

7. Ki YW, Park JH, Lee JE, Shin IC, Koh HC. JNK and p38 MAPK regulate oxidative stress and the inflammatory response in chlorpyrifos-induced apoptosis. Toxicol Lett. 2013;218(3):235-45.

8. Farombi EO, Owoeye O. Antioxidative and chemopreventive properties of Vernonia amygdalina and Garcinia biflavonoid. Int J Environ Res Public Health. 2011;8(6):2533-55.

9. Atangwho IJ, Ebong PE, Eyong EU, Williams IO, Eteng MU, Egbung GE. Comparative chemical composition of leaves of some antidiabetic medicinal plants: Azadirachta indica, Vernonia amygdalina and Gongronema latifolium. African Journal of Biotechnology. 2009;8(18):4685-9.

10. Atangwho IJ, Egbung GE, Ahmad M, Yam MF, Asmawi MZ. Antioxidant versus anti-diabetic properties of leaves from Vernonia amygdalina Del. growing in Malaysia. Food Chem. 2013;141(4):3428-34.

11. Asante DB, Effah-Yeboah E, Barnes P, Abban HA, Ameyaw EO, Boampong JN, et al. Antidiabetic Effect of Young and Old Ethanolic Leaf Extracts of Vernonia amygdalina: A Comparative Study. J Diabetes Res. 2016;2016:8252741.

12. Abdulmalik O, Oladapo OO, Bolaji MO. Effect of aqueous extract of Vernonia amygdalina on atherosclerosis in rabbits. ARYA Atheroscler. 2016;12(1):35-40.

13. Atangwho IJ, Yin KB, Umar MI, Ahmad M, Asmawi MZ. Vernonia amygdalina simultaneously suppresses gluconeogenesis and potentiates glucose oxidation via the pentose phosphate pathway in streptozotocin-induced diabetic rats. BMC Complement Altern Med. 2014;14:426.



14. Ong KW, Hsu A, Song L, Huang D, Tan BK. Polyphenols-rich Vernonia amygdalina shows anti-diabetic effects in streptozotocin-induced diabetic rats. J Ethnopharmacol. 2011;133(2):598-607.

15. Iwo MI, Sjahlim SL, Rahmawati SF. Effect of Vernonia amygdalina Del. Leaf Ethanolic Extract on Intoxicated Male Wistar Rats Liver. Sci Pharm. 2017;85(2).

16. federation id. What is diabetes [8/6/2018]. Available from: https://www.idf.org/aboutdiabetes/what-is-diabetes.html.

17. 2. Classification and Diagnosis of Diabetes. Diabetes Care. 2015;38(Supplement 1):S8.18. Yu Y, Chai J. The function of miRNAs and their potential as therapeutic targets in burn-

induced insulin resistance (review). International journal of molecular medicine. 2015;35(2):305-10.

19. Sawyer BG. Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics: Elsevier; 2015.

20. Cho NH, Whiting D, Forouhi N, Leonor Guariguata, Hambleton I, Li L, et al. IDF Diabetes Atlas. 7 ed2015.

21. ศรนนภาก ว, ดโรจนวงศ ช, ทองคำสนทรเทพวรากล. ตำราอนซลน. กรงเทพ: กรงเทพเวชสาร; 2555. 340 p.

22. กรมการแพทย, กระทรวงสาธารณสข. แนวทางเวชปฏบต การดแลโภชนบำบดในโรคเบาหวาน โรคความดนโลหตสง และภาวะไขมนในเลอดผดปกต สำหรบผสงอาย. พมพครงท 1. ชมนมสหกรณการเกษตรแหงประเทศไทย จำกด.

23. Task Force on the management of STseamiotESoC, Steg PG, James SK, Atar D, Badano LP, Blomstrom-Lundqvist C, et al. ESC Guidelines for the management of acute myocardial infarction in patients presenting with ST-segment elevation. European heart journal. 2012;33(20):2569-619.

24. โ ร ง พ ย า บ า ล พ ญ า ไ ท . โ ร ค ห ล อ ด เ ล อ ด แ ด ง ส ว น ป ล า ย อ ด ต น [Available from: http://www.phyathai.com/medicalcenterdetail_article/1/44/PYT1/th.

25. Domingueti CP, Dusse LM, Carvalho M, de Sousa LP, Gomes KB, Fernandes AP. Diabetes mellitus: The linkage between oxidative stress, inflammation, hypercoagulability and vascular complications. Journal of diabetes and its complications. 2016;30(4):738-45.

26. Joseph JJ, Donner TW. Long-term insulin glargine therapy in type 2 diabetes mellitus: a focus on cardiovascular outcomes. Vascular health and risk management. 2015;11:107-16.

27. Sanada Shoji, Komuro Issei, Kitakaze Masafumi. Pathophysiology of myocardial reperfusion injury: preconditioning, postconditioning, and translational aspects of protective measures. American journal of physiology Heart and circulatory physiology. 2011 Nov;301(5):H1723-41.

28. Hakan Parlakpinar, MH Orum, M Sagir. Pathophysiology of Myocardial Ischemia Reperfusion Injury: A Review. Medicine Science 2013;2(4):935-54. 2013.



29. Bagley MC, Davis T, Murziani PGS, Widdowson CS, Kipling D. Use of p38 MAPK Inhibitors for the Treatment of Werner Syndrome. Pharmaceuticals. 2010;3(6):1842.

30. Gunton JE, Delhanty PJ, Takahashi S-I, Baxter RC. Metformin rapidly increases insulin receptor activation in human liver and signals preferentially through insulin-receptor substrate-2. The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism. 2003;88(3):1323-32.

31. Vassalli G, Milano G, Moccetti T. Role of Mitogen-Activated Protein Kinases in Myocardial Ischemia-Reperfusion Injury during Heart Transplantation. Journal of transplantation. 2012;2012:928954.

32. Kumphune S, Chattipakorn S, Chattipakorn N. Roles of p38-MAPK in insulin resistant heart: evidence from bench to future bedside application. Curr Pharm Des. 2013;19(32):5742-54.

33. Oyeyemi IT, Akinlabi AA, Adewumi A, Aleshinloye AO, Oyeyemi OT. Vernonia amygdalina: A folkloric herb with anthelminthic properties. Beni-Suef University Journal of Basic and Applied Sciences. 2018;7(1):43-9.

34. Masaba SC. The antimalarial activity of Vernonia amygdalina Del (Compositae). Trans R Soc Trop Med Hyg. 2000;94(6):694-5.

35. Adedapo AA, Aremu OJ, Oyagbemi AA. Anti-oxidant, anti-inflammatory and antinociceptive properties of the acetone leaf extract of vernonia amygdalina in some laboratory animals. Adv Pharm Bull. 2014;4(Suppl 2):591-8.

36. Njan AA, Adzu B, Agaba AG, Byarugaba D, Diaz-Llera S, Bangsberg DR. The analgesic and antiplasmodial activities and toxicology of Vernonia amygdalina. J Med Food. 2008;11(3):574-81.

37. Tugume P, Kakudidi EK, Buyinza M, Namaalwa J, Kamatenesi M, Mucunguzi P, et al. Ethnobotanical survey of medicinal plant species used by communities around Mabira Central Forest Reserve, Uganda. J Ethnobiol Ethnomed. 2016;12:5.

38. Innocent T, Deogracious O. The Anthelmintic Activity of Selected Indigenous Medicinal Plants Used by The anyankole of Western Uganda. Journal of Animal and Veterinary Advances. 2006;5(8):712-7.

39. Asnake S, Teklehaymanot T, Hymete A, Erko B, Giday M. Survey of Medicinal Plants Used to Treat Malaria by Sidama People of Boricha District, Sidama Zone, South Region of Ethiopia. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2016;2016:9.

40. Yineger H, Yewhalaw D. Traditional medicinal plant knowledge and use by local healers in Sekoru District, Jimma Zone, Southwestern Ethiopia. J Ethnobiol Ethnomed. 2007;3:24.

41. G. O, A. OI, E. E, C. OP, O. I. Ethnobotanical study of medicinal plants useful for malaria therapy in eight local government areas of Abia State, Southeast Nigeria. Advancement in Medicinal Plant Research. 2013;1(2):39-44.



42. Kankara SS, Ibrahim MH, Mustafa M, Go R. Ethnobotanical survey of medicinal plants used for traditional maternal healthcare in Katsina state, Nigeria. South African Journal of Botany. 2015;97:165-75.

43. A.C E, Atawodi SE. Ethnomedicinal survey of plants used by the Kanuris of North-eastern Nigeria2012. 640-5 p.

44. Olugbenga Ebenezer I. Preliminary Investigation on the Ethnomedicinal Plants of Akoko Division, South West, Nigeria2011.

45. Nwauzoma AB, Dappa MS. Ethnobotanical Studies of Port Harcourt Metropolis, Nigeria. ISRN Botany. 2013;2013:11.

46. A. MA, G. O, I. UI. Plant Remedies Practiced by Keffi People in the Management of Dermatosis. Journal of Medicinal Plants Studies. 2013;1(5).

47. Ajibesin KK, Ekpo BA, Bala DN, Essien EE, Adesanya SA. Ethnobotanical survey of Akwa Ibom State of Nigeria. J Ethnopharmacol. 2008;115(3):387-408.

48. Agbodeka K, Gbekley HE, Karou SD, Anani K, Agbonon A, Tchacondo T, et al. Ethnobotanical Study of Medicinal Plants Used for the Treatment of Malaria in the Plateau Region, Togo. Pharmacognosy Res. 2016;8(Suppl 1):S12-8.

49. Juliette K, Sélestin Sokeng D, Valentin Désiré G, Elisabeth Ngo B. Ethnomedicinal survey of Gavdé (Acacia nilotica): a medicinal plant used in sahelian zone of Cameroon, Central Africa. International Journal of Innovation and Applied Studies. 2016;16(4):820-7.

50. Simbo DJ. An ethnobotanical survey of medicinal plants in Babungo, Northwest Region, Cameroon. J Ethnobiol Ethnomed. 2010;6:8.

51. Asante D-B, Effah-Yeboah E, Barnes P, Abban HA, Ameyaw EO, Boampong JN, et al. Antidiabetic Effect of Young and Old Ethanolic Leaf Extracts of Vernonia amygdalina: A Comparative Study. Journal of Diabetes Research. 2016;2016:13.

52. Bullough CH, Leary WP. Herbal medicines used by traditional birth attendants in Malawi. Trop Geogr Med. 1982;34(1):81-5.

53. Atangwho IJ, Edet EE, Uti DE, Obi AU, Asmawi MZ, Ahmad M. Biochemical and histological impact of Vernonia amygdalina supplemented diet in obese rats. Saudi J Biol Sci. 2012;19(3):385-92.

54. Mohd Abd Razak MR, Afzan A, Ali R, Amir Jalaluddin NF, Wasiman MI, Shiekh Zahari SH, et al. Effect of selected local medicinal plants on the asexual blood stage of chloroquine resistant Plasmodium falciparum. BMC Complement Altern Med. 2014;14:492.

55. Moshi MJ, Otieno DF, Mbabazi PK, Weisheit A. Ethnomedicine of the Kagera Region, north western Tanzania. Part 2: The medicinal plants used in Katoro Ward, Bukoba District. J Ethnobiol Ethnomed. 2010;6:19.



56. Mukazayire MJ, Minani V, Ruffo CK, Bizuru E, Stevigny C, Duez P. Traditional phytotherapy remedies used in Southern Rwanda for the treatment of liver diseases. J Ethnopharmacol. 2011;138(2):415-31.

57. Kamagaju L, Bizuru E, Minani V, Morandini R, Stevigny C, Ghanem G, et al. An ethnobotanical survey of medicinal plants used in Rwanda for voluntary depigmentation. J Ethnopharmacol. 2013;150(2):708-17.

58. Jisaka M, Ohigashi H, Takagaki T, Nozaki H, Tada T, Hirota M, et al. Bitter steroid glucosides, vernoniosides A1, A2, and A3, and related B1 from a possible medicinal plant, Vernonia amygdalina, used by wild chimpanzees. Tetrahedron. 1992;48(4):625-32.

59. A. O. Ojewole J. Indigenous plants and Schistosomiasis control in South Africa: Molluscicidal activity of some Zulu medicinal plants2004.

60. Iwalewa EO, Adewunmi CO, Omisore NO, Adebanji OA, Azike CK, Adigun AO, et al. Pro- and antioxidant effects and cytoprotective potentials of nine edible vegetables in southwest Nigeria. J Med Food. 2005;8(4):539-44.

61. Iwalokun BA, Efedede BU, Alabi-Sofunde JA, Oduala T, Magbagbeola OA, Akinwande AI. Hepatoprotective and antioxidant activities of Vernonia amygdalina on acetaminophen-induced hepatic damage in mice. J Med Food. 2006;9(4):524-30.

62. Adesanoye OA, Farombi EO. Hepatoprotective effects of Vernonia amygdalina (astereaceae) in rats treated with carbon tetrachloride. Exp Toxicol Pathol. 2010;62(2):197-206.

63. Igile GO, Oleszek W, Jurzysta M, Burda S, Fafunso M, Fasanmade A. Flavonoids from Vernonia amygdalina and their antioxidant ativities1993.

64. Youdim KA, Dobbie MS, Kuhnle G, Proteggente AR, Abbott NJ, Rice-Evans C. Interaction between flavonoids and the blood-brain barrier: in vitro studies. J Neurochem. 2003;85(1):180-92.

65. Owoeye O, Farombi EO, Onwuka SK. Gross morphometric reduction of rats' cerebellum by gamma irradiation was mitigated by pretreatment with Vernonia amygdalina leaf extract. Rom J Morphol Embryol. 2011;52(1):81-8.

66. Adaramoye OA, Akintayo O, Achem J, Fafunso MA. Lipid-lowering effects of methanolic extract of Vernonia amygdalina leaves in rats fed on high cholesterol diet. Vasc Health Risk Manag. 2008;4(1):235-41.

67. Nwanjo HU. Efficacy of aqueous leaf extract of vernonia amygdalina on plasma lipoprotein and oxidative status in diabetic rat models. Niger J Physiol Sci. 2005;20(1-2):39-42.

68. Akpaso MI, Atangwho I, Akpantah A, Fischer VA, Igiri A, Ebong PE. Effect of combined leaf extracts of Vernonia amygdalina (Bitter Leaf) and Gongronema latifolium (Utazi) on the pancreatic beta-Cells of streptozotocin-induced diabetic rats2011. 24-34 p.



69. Jermsri P, Jiraviriyakul A, Unajak S, Kumphune S. Effect of Aquilaria crassna crude extract on simulated ischemia induced cardiac cell death. Int J Pharm Biol Sci. 2012;3:604-13.

70. Riss TL, Moravec RA, Niles AL, Benink HA, Worzella TJ, Minor L. Cell Viability Assays. In: Sittampalam GS, Coussens NP, Nelson H, Arkin M, Auld D, Austin C, et al., editors. Assay Guidance Manual. Bethesda (MD)2004.

71. Li W, Li X, Wang B, Chen Y, Xiao A, Zeng D, et al. ZLN005 protects cardiomyocytes against high glucose-induced cytotoxicity by promoting SIRT1 expression and autophagy. Experimental cell research. 2016;345(1):25-36.

14. ประโยชนทคาดวาจะไดรบ เปาหมายสดทายของโครงการนคอ เพอใหเกดองคความรทจะนาไปสการพฒนายา

รกษาทมาจากสมนไพรไทย คอ ปาชาหมอง ในผปวยกลามเนอหวใจขาดเลอดทมภาวะกลาม เนอหวใจขาดเลอดแทรกซอน โดยสามารถพฒนาสงทศกษานไปเปนยาทพฒนาความรมา

จากนกวจยไทย นำาไปสการจดสทธบตรยา เพอการผลตและจำาหนาย นำารายไดมาส ประเทศไทยไดในอนาคต นอกจากนสงทผวจยหวงใหเกดคอเกดการอนรกษภมปญญาพน

บานไทยทมมาแตโบราณโดยเฉพาะตารบยาพนบานทมการนาสมนไพรมารกษาโรคตางๆโดยมการคนควาและการทำาวจยทถกตองเพอยนยนผลของสมนไพรไทยและตารบยาพน

บานนนวาสามารถนามารกษาไดจรง เพอนำาไปสการใชสมนไพรตารบพนบานในการรกษาโรค ตางๆ ในอนาคต

การนำาไปใชประโยชนในดาน ดานวชาการ

ผทนำาผลการวจยไปใชประโยชน ผใช การใชประโยชน

1. อาจารย นกวจย มหาวทยาลยทงภาครฐและเอกชน

เกดองคความรทจะนำไปสการพฒนายารกษาทมาจากสมนไพรไทย คอ ปาชาหมอง ในผปวยโรคอนๆ หรอการพฒนาสมนไพรชนดอนๆ

2. หมอยาพนบาน ไดทราบฤทธของสารสกดปาชาหมอง 3. บรษทยา พฒนาปาชาหมองไปเปนยาทรกษาผปวยเบาหวานทมภาวะกลาม

เนอหวใจขาดเลอดแทรกซอนได

15. แผนการถายทอดเทคโนโลยหรอผลการวจยสกลมเปาหมาย ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………

16. ระยะเวลาการวจย ระยะเวลาโครงการ 1 ป 0 เดอน



วนทเรมตน 1 ตลาคม 2562 วนทสนสด 30 กนยายน 2563

แผนการดำาเนนงานวจย ( ปทเรมตน สนสด– )

ป(งบประมา

ณ) กจกรรม

ต.ค.

พ.ย.

ธ.ค.

ม.ค.

ก.พ.

ม.ค.

เม.ย.

พ.ค.

ม.ย.

ก.ค.

ส.ค.

ก.ย.

รอยละของกจกรรมใน

ปงบประมาณ

2563 การหาระยะเวลาทเหมาะสมในการเหนยวนำใหเกดภาวะขาดเลอดจำลอง (sI) ในเซลล H9c2 และเอนโดธเรยลเซลล

x 5

2563 การทดสอบความเขมขนของสารสกดจากใบปาชาหมองทเหมาะสมในการปองกนการตายของเซลลกลามเนอหวใจ H9c2 และเอนโดธเรยลเซลล ทถกกระตนใหเกดภาวะขาดเลอดจำลอง ในภาวะ Hyperglycemia

x x x x x 15

2563 การทดสอบความเขมขนของสารสกดจากใบปาชาหมองทเหมาะสมในการลดการเกดสารอนมลอสระ (ROS) ในเซลลกลามเนอหวใจ H9c2 และเอนโดธเรยลเซลล ทถกกระตนดวย H2O2 ในภาวะ Hyperglycemia

x x x x x 15

2563 การทดสอบประสทธภาพของสารสกดจากใบปาชาหมองในการลดการแสดงออกของยน Bcl-2 (cardiac cell death), ROCK (cardiac cell injury) และ เพมการแสดงออกของยน Akt ในเซลลกลามเนอหวใจ H9c2 ทกระตนดวย simulated ischemia/reperfusion injury ในภาวะ Hyperglycemia ดวยวธ Quantitative Real-Time PCR

x x x x 15

2563 การทดสอบประสทธภาพของสารสกดจากใบปาชาหมองในเพมการแสดงออกของยน eNOS (endothelial cell nitroxide synthase) และ VEGF (Vascular endothelial growth factor) ในเซลล EAhy.926 (endothelial cell) ทกระตนดวย simulated ischemia/reperfusion injury ในภาวะ Hyperglycemia ดวยวธ Quantitative Real-Time PCR

x x x x 15

2563 การทดสอบประสทธภาพของสารสกดจากใบปาชาหมองในการลดการเตมหมฟอสเฟตของโปรตน p38 MAPK, JNK, RACK และเพมการเตมหมฟอสเฟตของโปรตน Akt, Bcl-2 ในเซลล

x x x x 15



ป(งบประมา

ณ) กจกรรม

ต.ค.

พ.ย.

ธ.ค.

ม.ค.

ก.พ.

ม.ค.

เม.ย.

พ.ค.

ม.ย.

ก.ค.

ส.ค.

ก.ย.

รอยละของกจกรรมใน

ปงบประมาณ

กลามเนอหวใจ H9c2 ทกระตนดวย simulated ischemia/reperfusion injury ในภาวะ Hyperglycemia

2563 การทดสอบประสทธภาพของสารสกดจากใบปาชาหมองในการลดการเตมหมฟอสเฟตของโปรตน p38 MAPK, JNK, และเพมการเตมหมฟอสเฟตของโปรตน eNOS , VEGF, Akt ในเซลล EAhy.926 (endothelial cell) ทกระตนดวย simulated ischemia/reperfusion injury ในภาวะ Hyperglycemia

x x x x 15

2563 Data collection and analysis x 32563 Preparation/submission of report x 12563 Preparation and submission of

manuscript and submissionx 1

รวม 100

17. งบประมาณของโครงการวจย17.1 แสดงรายละเอยดประมาณการงบประมาณตลอดโครงการ (กรณของบประมาณเปนโครงการตอเนอง

ระยะเวลาดำเนนการวจยมากกวา 1 ป ใหแสดงงบประมาณตลอดแผนการดำเนนงาน) ปทดำาเนนการ ปงบประมาณ งบประมาณทเสนอขอ

ปท 1 ปท12563 400,000 บาทรวม 400,000 บาท

172. แสดงรายละเอยดประมาณการงบประมาณปทเสนอขอ ประเภทงบ

ประมาณ

รายละเอยด งบ

ประมาณ (บาท)

งบดำเนนการ : คาตอบแทน

คาตอบแทนคณะผวจย 30,000 บาท

งบดำเนนการ : คาใชสอย คาซอเซลลเอนโดธเรยล 22,000 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย คา DMEM สำหรบเลยงเซลล 6 กลอง กลองละ 2,400 บาท

(2,400 X 6)14,400 บาท



ประเภทงบประมา

ณ รายละเอยด

งบประมาณ

(บาท)งบดำเนนการ : คาใชสอย Fetal bovine serum 10 ขวด ขวดละ 1,200 บาท (10 X

1200)12,000 บาท

งบดำเนนการ : คาใชสอย Penicillin/Streptomycin 2 ขวด ขวดละ 2,000 บาท (2000 X 2)

2,000 บาท

งบดำเนนการ : คาใชสอย Phosphate Buffer Saline (PBS) 3 กระปก กระปกละ 1,000 บาท (3 X 1000)

3,000 บาท

งบดำเนนการ : คาใชสอย Trypsin EDTA 4,800 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย 2-deoxyglucose 2 กระปก กระปกละ 12,000 บาท 24,000 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย Na lactate 1 ขวด 2,000 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย Na dithionite 1 กระปก 8,000 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย HEPES 1 กระปก 2,000 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย CaCl22H2O 1 กระปก 800 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย MgCl26H2O 1 กระปก 900 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย KCl 1 กระปก 800 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย NaCl 5 กระปก กระปกละ 500 บาท 2,500 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย Dimetylsulfoxide (DMSO) 800 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย MTT (3-(4, 5-dimethylthiazolyl-2)-2, 5-

difenyltetrazolium bromide)12,000 บาท

งบดำเนนการ : คาใชสอย 96 well cell culture plate 3 กลอง กลองละ 2400 บาท 7,200 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย 24 well cell culture plate 3 กลอง กลองละ 2400 บาท 7,200 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย 6 well cell culture plate 3 กลอง กลองละ 2400 บาท 7,200 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย 75 mm3 cell culture flask 3 กลอง กลองละ 4000 บาท 12,000 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย 25 mm3 cell culture flask 3 กลอง กลองละ 4000 บาท 12,000 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย D-glucose 1 กระปก 500 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย carboxy-H2DCFDA 7,800 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย GeneJET RNA purification kits (Thermo scientific) 12,000 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย CFX96™ IVD Real-Time PCR reagent (Bio-Rad) 5,000 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย PCR primer 10,000 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย Anti-Phospho p38 antibody 12,000 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย Anti-Total p38 antibody 12,000 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย Anti-Phospho JNK antibody 12,000 บาท



ประเภทงบประมา

ณ รายละเอยด

งบประมาณ

(บาท)งบดำเนนการ : คาใชสอย Anti-Total JNK antibody 12,000 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย Anti-Phospho Akt antibody 12,000 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย Anti-Total Akt antibody 12,000 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย Anti-Bcl-2 antibody 12,000 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย Anti-mouse secondary antibody 12,000 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย Anti-Rabbit secondary antibody 12,000 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย chemiluminescence detection solution 8,000 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย Anti-eNOS antibody 12,000 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย Anti- VEGF antibody 12,000 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย Tris-HCl 500 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย Triton X-100 1,200 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย EDTA 500 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย glycerol 1,000 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย aprotinin 3,800 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย leupeptin 3,800 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย Tris 5 กระปก กระปกละ 1500 บาท 7,500 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย Sodium Dodecyl Sulphate 2,500 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย Polyacrylamide gel 2,500 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย Beta-mercaptoethanol 1,500 บาทงบดำเนนการ : คาใชสอย Anti-actin fluorescence 12,300 บาท

รวม 400,000 บาท

173. เ ห ต ผล ค ว า ม จ ำา เ ป น ใ น ก า ร จ ด ซ อ ค ร ภ ณฑ (พร อ ม แ น บ ร า ย ล ะ เ อ ย ด ค ร ภ ณฑ ท จ ะจ ด ซ อ )

ชอครภณฑ

ครภณฑทขอสนบสนนลกษณะการใชงานแ ล ะค ว า ม

การใชประโยชน

ของค ร ภ ณฑ น เ ม อโครงการ

สนสด

สถานภาพค ร ภ ณฑ ใ ก ล

เคยงทใช ณ ป จ จ บ

น (ถาม)

สถานภาพ การใชงาน ณ

ป จ จ บ

ไมมครภณฑน 0ไมมครภณฑน 0



18. ผลผลต (Output) จากงานวจย

ผลงานทคาดวาจะไดรบรายละเอยดของ

ผลผลต

จำานวนนบหนวย

นบ

ระดบความสำเรจป

2563ป

2564ป

2565ป

2566ป

2567รวม

1. ตนแบบผลตภณฑ โดยระบ ดงน 1.1 ระดบอตสาหกรรม

ตนแบบ

Primary Result

1.2 ระดบกงอตสาหกรรมตนแบ

บ

Primary Result

1.3 ระดบภาคสนามตนแบ

บ

Primary Result

1.4 ระดบหองปฏบตการตนแบ

บ

Primary Result

2.ตนแบบเทคโนโลย โดยระบ ดงน 2.1 ระดบอตสาหกรรม

ตนแบบ

Primary Result

2.2 ระดบกงอตสาหกรรมตนแบ

บ

Primary Result

2.3 ระดบภาคสนาม ตนแบ

บ

Primary Result

2.4 ระดบหองปฏบตการตนแบ

บ

Primary Result

3. กระบวนการใหม โดยระบ ดงน 3.1 ระดบอตสาหกรรม

กระบวนการ

Primary Result

3.2 ระดบกงอตสาหกรรมกระบวนการ

Primary Result

3.3 ระดบภาคสนามกระบวนการ

Primary Result

3.4 ระดบหองปฏบตการกระบวนการ

Primary Result

4.องคความร (โปรดระบ) 4.1 องคความรทจะนำไป 1 1 เรอง Primary

Result




ผลผลต


นบ


2563ป

2564ป

2565ป

2566ป

2567รวม

สการพฒนายารกษาทมาจากสมนไพรไทย คอ ปาชาหมองในผปวยกลามเนอหวใจขาดเลอดและภาวะหลงจากการเกดภาวะกลามเนอหวใจขาดเลอด

5. การใชประโยชนเชงพาณชย 5.1 การถายทอดเทคโนโลย

ครงPrimary Result

5.2 การฝกอบรม ครง Primary Result

5.3 การจดสมมนา ครง Primary Result

6. การใชประโยชนเชงสาธารณะ 6.1 การถายทอดเทคโนโลย


6.2 การฝกอบรม ครง Primary Result

6.3 การจดสมมนา ครง Primary Result

7. การพฒนากำาลงคน 7.1 นศ.ระดบปรญญาโท คน Primary

Result

7.2 นศ.ระดบปรญญาเอก

คน Primary Result

7.3 นกวจยหลงปรญญาเอก


7.4 นกวจยจากภาคเอกชน ภาคบรการและภาคสงคม


8. ทรพยสนทางปญญา ไดแก สทธบตร/ลขสทธ/เครองหมายการคา/ความลบทางการคา เปนตน (โปรดระบ) 8.1 ............... เรอง Primary

Result

8.2 ............... เรอง Primary Result

8.3 ............. เรอง Primary Result

9. บทความทางวชาการ 9.1 วารสารระดบชาต บทความทางวชาการ TCI

กลม 11 1 เรอง

Primary Result

9.2 วารสารระดบนานาชาต

เรองPrimary Result

10. การประชม/สมมนาระดบชาต 10.1 นำเสนอแบบปากเปลา


10.2 นำเสนอแบบโปสเตอร





ผลผลต


นบ


2563ป

2564ป

2565ป

2566ป

2567รวม

11. การประชม/สมมนาระดบนานาชาต 11.1 นำเสนอแบบปากเปลา


11.2 นำเสนอแบบโปสเตอร

นำเสนอผลงานแบบ Proceeding

1 1 ครงPrimary Result

19. ผลลพธ ( ) Outcome ทคาดวาจะไดตลอดระยะเวลาโครงการชอผลลพธ ป ร ะ เ ภ ท ปรมาณ ร า ย ล ะ เ อ ย ด

ไดผลงานตพมพ คอ The effects of Vernonia amygdalina Del. crude extract on myocardial ischemia/reperfusion injury in hyperglycemia induced H9c2 cell and endothelial cell

เชงปรมาณ จำนวน 1 เรอง

20. ผลกระทบ (Impact) ทคาดวาจะไดรบ (หากระบเปนตวเลขได โปรดระบ)

ชอผลงานลกษณะผลงาน

กลมเปาหมาย /

ผใชประโยชนผลกระทบทคาดวาจะไดรบ

บทความวชาการเรอง The effects of Vernonia amygdalina Del. crude extract on myocardial ischemia/reperfusion injury in hyperglycemia induced H9c2 cell and endothelial cell

ผลงานต พ ม พ ใ นว า ร ส า รระดบชาต

1. นกวจย2.นกเรยน นกศกษา3. อาจารยมหาลย4. แพทยพนบาน5.ผใชสมนไพรการแพทยทางเลอก

1 เกดองคความรทจะนำไปสการพฒนายารกษาทมาจากสมนไพรไทย คอ ปาชาหมอง ในผปวยกลามเนอหวใจขาดเลอดและภาวะหลงจากการเกดภาวะกลามเนอหวใจขาดเลอด ซงปองกนการเกดภาวะหวใจลมเหลวตามมาได2.สามารถพฒนาสงทศกษานไปเปนยาทพฒนาความรมาจากนกวจยไทย นำไปสการจดสทธบตรยา เพอการผลตและจำหนาย นำรายไดมาสประเทศไทยไดในอนาคต3.เกดการอนรกษภมปญญาพนบานไทยทมมาแตโบราณโดยเฉพาะตำรบยาพนบานทมการนำสมนไพรมารกษาโรคตางๆ โดยมการคนควาและการทำวจยทถกตองเพอยนยนผลของสมนไพรไทยและตำรบยาพนบานนนวาสามารถนำมารกษาไดจรง เพอนำไปสการใชสมนไพรตำรบพนบาในการรกษาโรคตางๆในอนาคต

21. การตรวจสอบทรพยสนทางปญญาหรอสทธบตรทเกยวของ ไมมการตรวจสอบทรพยสนทางปญญา และ/ หรอ สทธบตรท

เกยวของ ตรวจสอบทรพยสนทางปญญาแลว ไมมทรพยสนทางปญญา

และ/ หรอ สทธบตรทเกยวของ



ตรวจสอบทรพยสนทางปญญาแลว มทรพยสนทางปญญา และ/ หรอสทธบตรทเกยวของ

รายละเอยดทรพยสนทางปญญาทเกยวของหมายเลขทรพยสน

ทางปญญา

ประเภททรพยสน

ทางปญญา

ชอทรพยสนทางปญญา ชอผประดษฐ ชอผครอบ

ครองสทธ

22. มาตรฐานการวจย มการใชสตวทดลอง

มการวจยในมนษย มการวจยทเกยวของกบงานดานเทคโนโลยชวภาพสมยใหม มการใชหองปฎบตการทเกยวกบสารเคม

23. หนวยงานรวมลงทน รวมวจย รบจางวจย หรอ M dat c hi ng f un

ประเภท ชอหนวยงาน/บรษท

แนวทางรวมดำาเนนการ

การรวมลงทน

จำานวนเงน

(In cash (บาท))

ภาคการศกษา (มหาวทยาลย/สถาบนวจย)

1 ไมระบ 0

ภาคอตสาหกรรม (รฐวสาหกจ/บรษทเอกชน)

1 ไมระบ 0

*กรณมการลงทนรวมกบภาคเอกชน ใหจดทำหนงสอแสดงเจตนาการรวมทนวจยพฒนาประกอบการเสนอขอ

24. สถานททำาการวจย



ใ นประเทศ/ต างประเทศ

ชอประเทศ/จงห

ว ด พ น ท ท ท ำา

วจย ชอสถานท พกดสถานท GPT

(ถาม)ละตจด ลองจจด

ในประเทศ พะเยา หองปฏบตการ คณะสหเวชศาสตร มหาวทยาลยพะเยา

ในประเทศ พษณโลก หองปฏบตการ คณะสหเวชศาสตร มหาวทยาลยนเรศวร

*องศาทศนยม (DD) 25. สถานทใชประโยชน

ใ นประเทศ/ต างประเทศ

ชอประเทศ/จงห

ว ด ชอสถานท

พกดสถานท GPT (ถาม)ละตจด ลองจจด

ในประเทศ กรงเทพมหานคร งานประชมวชาการระดบชาตหรอนานาชาต

*องศาทศนยม (DD) 26. การเสนอขอเสนอหรอสวนหนงสวนใดของงานวจยนตอแหลงทน

อน หรอเปนการวจยตอยอดจากโครงการวจยอน ม ไมม

หนวยงาน/สถาบนทยน ......................................................................................................... ....................

ชอโครงการ ......................................................................................................... ....................

ระบความแตกตางจากโครงการน........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................

สถานะการพจารณา ไมมการพจารณา โครงการไดรบอนมตแลว สดสวนทนทไดรบ .......... T โครงการอยระหวางการพจารณา

27. คำาชแจงอน ๆ (ถาม)………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………



28. ลงลายมอชอ หวหนาโครงการวจย พรอมวน เดอน ป

ลงชอ................................................. (ดร. เอกพจน พรมพนธ)

หวหนาโครงการวจย วนท....31...... เดอน ...กรกฎาคม.. พ.ศ. ..2561.


Documents

สำนักงานคณะกรรมการวิจัย ...wwmms.up.ac.th/research/uploads/1230/fileID-1230-18d... · Web viewสมม ต ฐาน 2 : สารสก