岛津液相色谱维护保养

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岛津液相色谱维护保养岛津液相色谱维护保养


液相色谱基础知识液相色谱基础知识

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液相色谱：以液体作为流动相的色谱分离方法液相色谱：以液体作为流动相的色谱分离方法适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的

分析分析流动相具有运载样品分子和选择性分离的双重作用流动相具有运载样品分子和选择性分离的双重作用气相色谱：以气体作为流动相的色谱分离方法气相色谱：以气体作为流动相的色谱分离方法适用于沸点较低、热稳定性好的中小分子化合物的分析适用于沸点较低、热稳定性好的中小分子化合物的分析流动相只起运载样品分子的能力流动相只起运载样品分子的能力




液相色谱流程图液相色谱流程图

溶剂输液泵

进样器

柱温箱检测器数据处理



采用 “采用 “ HPLC” HPLC” 级溶剂级溶剂避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶

剂剂对试样有适宜的溶解度对试样有适宜的溶解度溶剂粘度要小溶剂粘度要小与检测器相匹配与检测器相匹配

流动相的选择流动相的选择


溶剂等级

水的等级水的等级纯化水纯化水蒸馏水蒸馏水去离子水去离子水

波长 (nm)

纯化水

去离子水

因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高

纯化水中去除了无机和有机的污染物

吸光吸光

率率


水 / MeOH 梯度

ODS 柱

鬼峰

Gradient C

urve

1 ml/min, 0-100% MeOHover 10 mins and hold for15 mins.

溶剂等级

鬼峰的出现鬼峰的出现


溶剂等级

溶剂的等级溶剂的等级 HPLCHPLC 级级优级纯优级纯分析纯分析纯

都经过蒸馏和 0.45u 的过滤 ( 除纤维毛 , 未溶解的机械颗粒

优级纯的纯度比分析纯大 , 但里面含有防腐剂和抗氧化剂

HPLC 级经过 0.2u 的过滤 , 且除去有紫外吸收的杂质

微量分析、梯度洗脱微量分析、梯度洗脱


甲醇乙睛正己烷

分析纯级和 HPLC 级溶剂的吸光度比较图

溶剂等级


General Maintenance and Troubleshooting

缓冲液的使用使用前必须过滤使用后一定要进行清洗，以免造成腐蚀、磨损、阻塞 : 用纯水冲洗 30-60min （ 1ml/min ），再用甲醇冲洗 30

min 易受到细菌和霉菌的影响

溶剂等级

不能直接用有机溶剂冲洗


过滤：过滤：0.45um0.45um或更小孔径滤膜或更小孔径滤膜目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液。目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液。脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡气泡对测定的影响：气泡对测定的影响： 11）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积 22）柱中气泡使流动相绕流，峰变形）柱中气泡使流动相绕流，峰变形 33）检测器中的气泡产生基线波动）检测器中的气泡产生基线波动无在线脱气应注意：无在线脱气应注意： 11）每天脱气）每天脱气 22）如使用氦脱气，对混合溶剂脱气时间不能过长）如使用氦脱气，对混合溶剂脱气时间不能过长

溶剂前处理


岛津 VP 系列输液泵岛津 VP 系列输液泵

目的单元流速范围特性和应用

分析 LC-10ADVP 0.001-9.999 无脉动，适于半微量 LC 和 LC-MS

LC-10ATVP 0.001-9.999 非凡的耐用性，适于常量分析

* 所有单元都既可做高压梯度又可做低压梯度



LC-10ATvp 泵：

串联式往复泵

LC-10ADvp 泵：

并联式微体积往复泵

LC-10ADVP / LC-10ATVP 工作原理


单向阀结构

抛光面

透明塑料垫片

宝石球

单向阀原理吸液冲程排液冲程出口单向阀

进口单向阀

泵头

LC-10ADVP / LC-10ATVP 工作原理



梯度洗脱形式：梯度洗脱形式：线性梯度：在梯度洗脱时，流动相强度的变化和时间成线性比例

指数梯度：在梯度洗脱时，流动相强度随时间的变化呈指数关系

折线梯度：

梯度洗脱装置：梯度洗脱装置：高压梯度：用两台高压输液泵将两种溶剂输入低压梯度：在常压下将两种溶剂（或多元溶剂）混合，然

后用高压输液泵将流动相输入到色谱柱中。


梯度洗脱形式的选择梯度洗脱形式的选择


1. 使用流动相溶解样品 -- 减少溶剂峰，尤其是组分峰靠近溶剂峰时由为重

要 -- 保证样品在流动相中的溶解度，避免样品在系统

中尤其在柱中产生沉淀 2. 进样前最好使用 0.45um 的膜进行过滤如果样品很脏，要使用 0.2um 的膜进行过滤

样品处理样品处理


进样器进样器自动进样器自动进样器手动进样器手动进样器原理：（原理：（六通阀六通阀））注入方式：注入方式： 11 ）全量注入）全量注入 22 ）部分注入）部分注入



进样量和检测器响应的关系示意图


进样体积

检测器响应值

定量环体积的一半 3 倍定量环体积

全量注入

部分注入


手动进样器的原理图

装填状态


进样状态


交叉污染的原因交叉污染的原因

微量注射器

红色表示残留样品


手动进样法手动进样法一般的方法一般的方法 1.1. 在进样状态下清洗针口在进样状态下清洗针口 2.2. 在装填状态下插入微量注射器在装填状态下插入微量注射器 3.3. 注入样品注入样品 4.4. 切到进样状态切到进样状态


手动进样法手动进样法

便捷的方法（不需清洗）便捷的方法（不需清洗） 1.1. 进样状态下插入微量注射器进样状态下插入微量注射器 2.2. 切到装填状态切到装填状态 3.3. 注入样品注入样品 4.4. 切回到进样状态切回到进样状态


柱温箱柱温箱分析结果重现性好分析结果重现性好提高柱效提高柱效降低柱压降低柱压保证检测稳定性保证检测稳定性



柱压低于柱压低于 150kgf/cm150kgf/cm22

柱温在柱温在 40℃40℃左右，最高使用温度为左右，最高使用温度为 50℃50℃ 缓冲液缓冲液 PHPH 使用范围为使用范围为 22 ～～ 77 流动相有机溶剂比例过低 , 柱效下降快

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ODSODS 柱的使用注意点：柱的使用注意点：

硅胶在硅胶在 PHPH 为为 33 ～～ 44 时稳定性最好时稳定性最好碱浓度越低，流动相含水量越低，硅胶越稳定。碱浓度越低，流动相含水量越低，硅胶越稳定。



硅胶基底聚合物基底pH 范围 2 - 7.5 宽范围有机溶剂所有有限制压力〈 250 kgf/cm2 低压温度宽范围〈 60C


色谱柱的类型及适用范围


分析柱的维护

1. 在使用新柱之前，最好用强溶剂在低流量下 (0.2-0.3 ml/min)冲洗 30 mins ，长时间未用的分析柱也要同样处理

2. 定期使用强溶剂冲洗柱子

3 、使用缓冲盐时，要先用水冲洗，再用有机溶剂冲洗

4 、净化样品

5 、分离条件

6 、不使用时，要盖上盖子，避免固定相干枯


常用检测器常用检测器常用检测器常用检测器

紫外检测器（包括二极管阵列检测器）紫外检测器（包括二极管阵列检测器）荧光检测器荧光检测器示差折光检测器示差折光检测器电导检测器电导检测器



原理：基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性吸原理：基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性吸收收

定量基础：比耳定律，定量基础：比耳定律， AA ＝＝ KCLKCL

优点：优点： 11 ）灵敏度高）灵敏度高 22 ）对温度和流速不敏感）对温度和流速不敏感 33 ）可用于梯度洗提）可用于梯度洗提缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质

紫外检测器紫外检测器


二极管阵列检测器


二极管阵列检测器二极管阵列检测器（（ SPDSPD －－ M10AVPM10AVP ））

-- 二十一世纪标准紫外检测器二十一世纪标准紫外检测器

色谱定性依据：色谱定性依据：

保留时间常规紫外检测器保留时间常规紫外检测器

峰纯度二极管阵列检测器峰纯度二极管阵列检测器



样品池

二极管阵列

光栅

D2 / W 灯每一组分可在每一波长处得到一吸光度值

二极管阵列检测器


11 ）采集三维谱图）采集三维谱图22 ）峰纯度检验）峰纯度检验33 ）光谱库检索）光谱库检索44 ）可以发现单波长检测时未测到的峰）可以发现单波长检测时未测到的峰

二极管阵列检测器的优点二极管阵列检测器的优点


原理：基于被分析组分发射的荧光强度进行检测原理：基于被分析组分发射的荧光强度进行检测优点：优点： 11 ）灵敏度极高，是最灵敏的检测器之一）灵敏度极高，是最灵敏的检测器之一 22 ）选择性好）选择性好 33 ）对温度和流速不敏感，可用于梯度洗脱）对温度和流速不敏感，可用于梯度洗脱缺点：仅适用于测定可产生荧光的物质缺点：仅适用于测定可产生荧光的物质可检测物质：多环芳烃、霉菌毒素、酪氨酸、色氨酸可检测物质：多环芳烃、霉菌毒素、酪氨酸、色氨酸

、卟啉、儿茶酚氨等（具有对称共轭体系）、卟啉、儿茶酚氨等（具有对称共轭体系）

荧光检测器荧光检测器


原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试样中各组分浓度。原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试样中各组分浓度。优点：通用型检测器，优点：通用型检测器，缺点：缺点：11 ）对温度变化敏感）对温度变化敏感22 ）对溶剂组成变化敏感，不能用于梯度检测）对溶剂组成变化敏感，不能用于梯度检测33 ）属于中等灵敏度的检测器）属于中等灵敏度的检测器

示差折光检测器示差折光检测器


原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的电导变化来测原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的电导变化来测定电离物质含量。广泛应用于离子色谱法定电离物质含量。广泛应用于离子色谱法

优点：对流动相流速和压力的改变不敏感，可用于梯度洗脱优点：对流动相流速和压力的改变不敏感，可用于梯度洗脱缺点：对温度变化敏感（每升高缺点：对温度变化敏感（每升高 11 度，电导率增加度，电导率增加 2%-2.5%)2%-2.5%) 主要用于离子色谱检测水溶性无机和有机离子主要用于离子色谱检测水溶性无机和有机离子

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电导检测器电导检测器

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