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4 、 PCR 产物与质粒酶切. 朱旭芬博士 浙江大学生命科学学院. 1 、实验目的: (p70) 将目的基因与载体 DNA 用适当的限制性内切酶进行处理,用于 DNA 的体外重组。 2 、实验原理*: 限制性内切酶:命名与写法 缓冲液. 限制性内切酶. 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并在特定的切割点上将 DNA 分子切断。目前已发现的限制酶有 200 多种。. 酶切反应 ( 甲 ). 1. 在 0.5 ml eppendorf 管中加入下列成分,(定容 40µl ). A : PCR 产物 ddH 2 O 2 µl - PowerPoint PPT Presentation
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一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并在一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并在特定的切割点上将特定的切割点上将 DNA DNA 分子切断。目前已发现的限分子切断。目前已发现的限制酶有制酶有 200200多种。多种。
A : PCR 产物 ddH2O 2 µl
PCR 30µl(5g)
10×缓冲液 4 µl
Hind III 2 µl
BamH I 2 µl
酶切反应 ( 甲 )
B :质粒 DNA : ddH2O 2 µl
pBSSK(0.5µg/µl) 30µl
10×通用缓冲液 4 µl
Hind III (10U/µl) 2 µl
BamH I (10U/µl) 2 µl
1. 在 0.5 ml eppendorf 管中加入下列成分,(定容 40µl )
2. 混匀,少许离心一下。3. 在 37℃ 条件下反应 2-4 小时以上,或酶切过夜。 4. 取 5 µl 酶切质粒进行凝胶电泳,预检 。
1. 在 eppendorf 管中加入下列成分(定容 40µl ) A: pBSSKChiA : B: 质粒 DNA : ddH2O 2 µl ddH2O 2 µl
质粒 ( 5g ) 30µl pET28c(+) (0.5µg/µl) 30µl
10×缓冲液 4 µl 10×通用缓冲液 4 µl
Hind III 2 µl Hind III (10U/µl) 2 µl
BamH I 2 µl BamH I (10U/µl) 2 µl
2. 混匀,少许离心一下。 3. 在 37℃ 条件下反应 2-4 小时以上,或酶切过夜。 4. 取 5µl 酶切质粒进行凝胶电泳,预检 。
(乙)