(19) 한민 특허청(KR)

(12) 등 특허공보(B1)

(45) 공고 2014 11월14

(11) 등 10-1461281

(24) 등 2014 11월06

(51) 특허 (Int. Cl.)

A61K 8/60 (2006.01) A61K 8/63 (2006.01)

A61Q 19/00 (2006.01)(21) 원 10-2012-0126103

(22) 원 2012 11월08

심사청 2012 11월08

(65) 공개 10-2013-0135012

(43) 공개 2013 12월10

(30) 우 주

1020120057098 2012 05월30 한민 (KR)

(56) 행 술 사 헌

KR1020050088741 A

KR1020100132206 A

술 망 : 술양도, 실시 허여, 술지도

(73) 특허

강원 학 산학 단

강원도 천시 강원 학 1 ( 동)

(72)

창진

울특별시 산 88 15, 2동 410 (동, 아 트)

(74) 리

병갑

체 청 항 수 : 7 항 심사 : 염

(54) 20(Ｒ)-진 사 드-Ｒｈ2 포함하 피 지 료

(57) 약

본 20(R)-진 사 드-Rh2 포함하 료 에 한 것 , 보다 상

하게 본 20(R)-진 사 드-Rh2 포함하 피 지 료 , 피 탄

진 피 주 개 료 과 본 상 료 간 피 에 하여

피 지, 피 주 개 피 탄 진 과 갖 것 특징 하 에 한 것 다. 본

에 상 료 20(R)-진 사 드-Rh2 산 (ROS) 생 억 하 항산

우수하고, MMP-9(matrix metalloproteinases-9) MMP-2(matrix metalloproteinases-2) 억

우수하여 각 료 재 할 수 다.

도 - 도3

등록특허 10-1461281

- 1 -

지원한 가연 개 사업

과 고 A103017

처 보건복지

연 리 스 틱연 개 사업단

연 사업 스 틱연 개 사업

연 과 삼 래 항 진 사 드 규 연

여 1/1

주 강원 학

연 간 2011.11.01 ~ 2012.10.31

등록특허 10-1461281

- 2 -

특허청

청 항 1

20(R)-진 사 드-Rh2 포함하 피 지 료 .

청 항 2

20(R)-진 사 드-Rh2 포함하 피 탄 진 피 주 개 료 .

청 항 3

1항 2항에 어 ,

20(R)-진 사 드-Rh2 0.1~100uM 도 상 에 함 것 특징 하 료 .

청 항 4

1항 2항에 어 ,

상 20(R)-진 사 드-Rh2 MMP-9(matrix metalloproteinases-9), pro-MMP-9 MMP-2(matrix

metalloproteinases-2) 억 하 것 특징 하 료 .

청 항 5

1항 2항에 어 ,

상 20(R)-진 사 드-Rh2 산 (ROS) 생 억 하 항산 갖 것 특징 하

료 .

청 항 6

1항 2항에 어 ,

상 20(R)-진 사 드-Rh2 프 스타 란 E2 (PGE2) 생 억 하 갖 것 특징 하

료 .

청 항 7

1항 2항에 어 ,

상 액, 탁액, 탁액, 스트, 겔, 림, , 우 , 비 , 징, ,

말 운 , 탁액 운 , 스 운 , , 마사지 림 스프 루어진 에 택

어 하나 갖 것 특징 하 료 .

청 항 8

삭

술 야

본 20(R)-진 사 드-Rh2 포함하 피 지, 피 탄 진 피 주 개[0001]

료 에 한 것 다.

경 술

사람 피 과 에 다양한 리 학 변 가 어난다. 그 원 게 내[0002]

(intrinsic aging) (photo-aging) 에 한 연 가 루어 다. ,

스트 스, 질병 상태, 경 , 상처, 나 가 들어감에 라 프리라 어 야 수 ,

등록특허 10-1461281

- 3 -

런 상태가 심 경우 생체 내에 재하 항산 어망 하고, 포 직 상시 병

진하게 다.

보다 체 살펴보 피 주 질 지질, 단 질, 다당 핵산 등 산 어 피 포 [0003]

직 고, 결 피 상 생겨난다.

특 단 질 산 피 결합 직 라겐 (collagen), 아루 산 (hyaluronic acid), 엘[0004]

라스틴(elastin), 프 리 (proteoglycan), 피브 틴 (fibronectin) 등 단 어 심한 과다 염

과 피 탄 에 지 주고 것 심해질 경우 DNA 변 에 해 돌연변 , 암 , 역

하 같 생하게 다.

라 신체 사 과 생하 프리라 나 사, 염 에 해 매개 어 생하 프리[0005]

라 거하여 포막 보 하고, 한 미 상 포 한 신진 사에 해 재생시 포

식시 야 피 빠 게 복 고 건강한 피 지할 수 다.

한, 에 러한 프리라 뿐만 아니라 라겐 해 질 단 질 해 (Matrix[0006]

Metalloproteinase; MMP)라 도 여한다. , 생체 내에 라겐과 같 포 질 합 과 해

하게 고 , 가 진행 라겐 합 감 하고, 라겐 해하 질

단 질 해 (MMP) 진 어 피 탄 하 고 주 다. 한, 사에 해

도 러한 해 가 도 한다.

그러므 포 내에 가 도 MMP 하거나 그 억 할 수 질 경우, 피[0007]

탄 개 , 주 개 억 한 료 재 할 수 다.

한편, 삼 계 알 진 약 , 간 건강 진시 한 과가 알 [0008]

, 특 항암 , 항알 , 항당뇨 통 과가 알 다.

한 삼에 진 사 드, 다당 , 타 드, 폴리아 틸 닉 알 지 산과 같 함 어[0009]

, 특 진 사 드 그 가 30 상 나 , 다 에 비해 진 사 드가 삼 가지

다양한 약학 주 식 고 다.

진 사 드 삼 사포닌 라고 컫 , 아 리 다 과 같 3가지 하[0010]

고 다. 첫째 프 낙사 (Ra1,Ra2, Ra3, Rb1, Rb2, Rb3, Rc, Rd, Rg3, Rh2 등), 째 프 낙사

트리 (Re, Rg1, Rg2, Rf, Rh1 등), 째 아 릭(Ro) 진 사 드 한다.

특 재 피 하지 않 피 지 미 갖 원료에 한 연 , 그 [0011]

재 삼 하 연 가 진행 고 , 그 삼 에 삼 사포닌 에 한

연 가 개 고 , 삼 사포닌 750여 식 에 함 다 식 사포닌과 학 가 상 할

뿐 아니라 약리 도 다 것 지고 다. 특 , 삼 숙한 삼 사포닌 약 매우 하

고 과량 여에 한 독 없 뿐만 아니라 도 거 없다 것 다.

삼 사포닌 하나 진 사 드 Rh2 프 낙스 계에 하 진 사 드 삼에 거 재하[0012]

지 않고 숙 과 거쳐 삼에만 량 함 어 것 알 고, 항암 갖

질 처 에 알 다.

러한 진 사 드 Rh2 2가지 체 질체가 재하 , 20(R)-진 사 드-Rh2[20(R)-Rh2][0013]

20(S)-진 사 드-Rh2[20(S)-Rh2] 2가지 질체가 다. 20(S)-Rh2가 20(R)-Rh2에 비해 많 양

연계에 재한다.

한, 근에 진 사 드 Rh2에 해 각각 체 질체 하 에 한 연 가 진행 고 고,[0014]

어 리 진 사 드 Rh2에 해 각각 질체가 갖 생리 질체 어

상 계가 지 연 가 진행 에 다.

러한 연 결과 , 골다공 에 한 20(R)-진 사 드-Rh2[20(R)-Rh2] 20(S)-진 사 드-[0015]

Rh2[20(S)-Rh2] 사한 결과, 20(R)-Rh2 만 골다공 료 과가 진 고(Liu

etal.,2009), 항암 에 해 20(R)-Rh2에 비해 20(S)-Rh2가 암 포 식 억 하고, 포주

G1 단계 어 스트 하여 우수한 항암 갖 다 사실 진 다(Zhang etal.,2011).

라 다양한 생리 갖 약 삼에 해 주 생리 가지 새 운 질 도 필 하[0016]

등록특허 10-1461281

- 4 -

지만, 어 가 상 한 진 사 드 체 질체에 해 도 들 생리 간 한

상 계 규 연 도 필 하다.

에 본 들 진 사 드 Rh2가 가지 2가지 체 질체 20(R)-진 사 드-Rh2[20(R)-Rh2][0017]

20(S)-진 사 드-Rh2[20(S)-Rh2] 에 특 20(R)-진 사 드-Rh2[20(R)-Rh2]가 항산 가지

, 질 단 질 해 (Matrix Metalloproteinase; MMP) 해 가지고 어,

피 지, 피 주 개 피 탄 진 한 료 에 하게 사 할 수

함 본 하 다.

행 술 헌

특허 헌

(특허 헌 0001) 한민 공개특허 10-2012-0023876 [0018]

내

해결하 과

그러므 본 20(R)-진 사 드-Rh2 포함하 피 지 료 [0019]

공하 것 다.

본 다 20(R)-진 사 드-Rh2 포함하 피 탄 진 피 주 개[0020]

료 공하 것 다.

본 다 본 료 간 피 에 하여 피 지, 피 주 개 [0021]

피 탄 진 과 갖 것 특징 하 공하 것 다.

과 해결 수단

상 달 하 하여, 본 20(R)-진 사 드-Rh2 포함하 피 지[0022]

료 공한다.

한, 본 20(R)-진 사 드-Rh2 포함하 피 탄 진 피 주 개 료[0023]

공한다.

본 실시 에 어 , 20(R)-진 사 드-Rh2 0.1~100uM 도 상 에 함 수 다. [0024]

본 실시 에 어 , 상 20(R)-진 사 드-Rh2 MMP-9(matrix metalloproteinases-9) MMP-[0025]

2(matrix metalloproteinases-2) 억 할 수 다.

본 실시 에 어 , 상 20(R)-진 사 드-Rh2 산 (ROS) 생 억 하여 항산 [0026]

가질 수 다.

본 실시 에 어 , 상 액, 탁액, 탁액, 스트, 겔, 림, , 우 , 비 ,[0027]

징, , 말 운 , 탁액 운 , 스 운 , , 마사지 림 스프 루어진

에 택 어 하나 가질 수 다.

나아가 본 상 본 료 간 피 에 하여 피 지, 피 주 개 [0028]

피 탄 진 과 갖 것 특징 하 공한다.

과

본 20(R)-진 사 드-Rh2 포함하 피 지 료 , 피 탄 진[0029]

피 주 개 료 과 본 상 료 간 피 에 하여 피 지,

피 주 개 피 탄 진 과 갖 것 특징 하 에 한 것 다. 본 에 상

료 20(R)-진 사 드-Rh2 산 (ROS) 생 억 하 항산

우수하고, MMP-9(matrix metalloproteinases-9) MMP-2(matrix metalloproteinases-2) 억

등록특허 10-1461281

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우수하여 각 료 재 할 수 과가 다.

도 간단한

도 1 RAW264.7 식 포에 20(R)-진 사 드-Rh2 도별 처리한 후, LPS 극시킬 경우 생 산[0030]

질 (1a), 프 스타 란 (1b) 산 (ROS)(1c) 수 각각 하여 그래프 나타낸 것 다.

도 2 RAW264.7 식 포에 LPS 극에 해 pro-MMP-9, MMP-9 MMP-2 20(R)-진 사

드-Rh2가 억 하 과가 라틴 그래피 사 하여 한 결과 나타낸 것 다.

도 3 간 각질 포(human keratinocytes)에 산 질 (NO), 산 (ROS) MMP에 미 20(R)-

진 사 드-Rh2 나타낸 결과 , 3a 20(R)-진 사 드-Rh2 처리 도에 산 질 양

나타낸 것 고, 3b 산 양 나타낸 것 , 3c 3d MMP-1, 2 9 한 결과 나타

낸 것 다.

도 4 간 각질 포(human keratinocytes)에 20(R)-진 사 드-Rh2 처리 도에 포 독 여

MTT 통해 한 결과 나타낸 것 다.

실시하 한 체 내

본 들 피 지하고, 피 주 개 하 피 탄 진시킬 수 새 운 [0031]

재 연 하 , 삼 래 20(R)-진 사 드-Rh2가 러한 갖고 함 , 삼 래

20(R)-진 사 드-Rh2 포함하 피 지 료 공한다.

한, 본 삼 래 20(R)-진 사 드-Rh2 포함하 피 탄 진 피 주 개[0032]

료 공한다.

본 료 에 함 상 20(R)-진 사 드-Rh2 삼 리한 것[0033]

사 할 수 고, 학 합 합 것 사 할 수 다.

앞 래 술에 도 술한 같 , 삼에 다양한 삼 사포닌 들 함 하고 다. 특 진[0034]

사 드-Rh2 2가지 체 질체 가지고 , 본 에 2가지 체 질체 20(R)-진

사 드-Rh2가 피 지, 피 탄 진 피 주 개 과가 처 규 하 다.

근 많 연 결과들에 하 , 합 사하다고 할지라도 특 해 가지[0035]

학 질 생리 상 하다 보고가 고 다.

래 술에 도 언 한 같 , 골다공 료 과에 20(R)-Rh2 만 료 과가 었고, 20(S)-[0036]

Rh2 료 과가 미비한 것 알 다.

라 특 합 체 질체 같 사한 식 가지고 다고 할지라도 미 한 차[0037]

상 한 생리 나타낼 수 므 , 단지 사 그 할 수 없다.

한편, 본 에 20(R)-Rh2 재 사 할 수 지 하 해 다양한 실험들 수[0038]

행하 , , 본 실시 에 , RAW 264.7 식 포주 상 LPS 극에 해 도 산

질 산 생 20(R)-진 사 드-Rh2가 억 할 수 지 사한 결과, 20(R)-진 사 드-

Rh2가 도 LPS에 한 산 질 산 생 억 하 과가 다 것 할 수

었다(도 1a 1b 참 ).

한, 본 다 실시 에 하 , 간 각질 포 상 염 처리하지 않 건[0039]

하에 본 20(R)-진 사 드-Rh2 산 생 억 하 과가 것 나타났 ,

20(R)-진 사 드-Rh2 도 산 생 억 것 나타났다(도 3b 참 ).

피 나 경 에 해 생 산 프리라 에 해 포막 공격당하[0040]

게 어 포가 고, 피 에 염 (inflammation) 어나 , 염 직 생리학 진행 니 에

해 단 질 나 질 등 하여 주 등 하 어난다.

러한 피 주원 프리라 , 산 , 생 원 , 공해, 합[0041]

등 , 내 염 , 포 , 심리 스트 스 등 다. 한 산 에 한

피 포 상 주원 태양 시 피 에 생 어 피 단 질 변 지질 과산

등록특허 10-1461281

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시 , 피 염 암 등 킬 수 다

한 피 포가 피 포 내 과산 수 격 가하고, 산 에 해 포 포막[0042]

과산 질 어 단 질 상 어나 포 포막 원 수행 지 않 다.

한 프리라 에 해 상 포나 직 하 하여 질 계 상 생체

보 하 생리 염 어난다. 그러나 러한 염 해 직 포 비 포

에 상 도 한다. 한 건 하에 염 상태가 지난 후 상 찾게 지만,

염 극하 질 거 지 않거나 지 생 만 염 어나 심각한 직 상 하게

, 과다염 에 한 단 질 해 에 해 포 결합 직 상 고 결합 직 상 피 탄

감 시 주 원 뿐 아니라 나아가 빠 피 래하게 다. 그러므 산 억

하 것 피 억 에 하다.

라 러한 에 볼 본 20(R)-진 사 드-Rh2 피 포(각질 포)에 산 생[0043]

억 하 항산 과가 므 피 억 가 다 것 알 수 었다.

한편, 질 단 해 (Matrix Metalloproteinase; MMPs) 아연 에 , 막 나 간질[0044]

직 등에 재하 포 질(Extracellular Matrix; ECM) 해하 단 해 다(Steven D

shapiro, Cell Biol, 10, 602, 1998). 비 체 합 어진 후, 단 질 가수 해에 해

, MMPs 과 비 과 , 억 과 에 해 다고 알

다(Woodhouse et al., Cancer, 80, 1529, 1997; Wass et al., Br J Cancer, 86, 1876, 2002; Nagase

et al., J Biol Chem, 274, 21491, 1999).

러한 MMPs 질 특 에 라 약 20여 가지가 알 , 질 특 과 본 에 라 5[0045]

수 , , 라게나아 (MMP-1, MMP-8, MMP-13), 라티나아 (MMP-2, MMP-9), 스트 라

신(MMP-3, MMP-7, MMP-10, MMP-11, MMP-12), 브 타 -MMPs (MT1-MMP, MT2-MMP, MT3-MMP, MT4-MMP), 비

MMPs 다(Kleiner DE et al., Cancer Chemother Pharmacol (1999) 43; 42-51).

MMPs 신 타 드, 프 타 드 도 , 아연 (Zn) 결합 가지고 매 도[0046]

(catalytic domain) 그리고 지 역에 해 매 도 과 연결 어 헤 신- 사 도

(haemopexin-like domain) 루어 , 특 MMP-2 MMP-9 러한 본 에 매 도

안에 삽 피브 틴 타 II(fibronectin type Ⅱ) 가지고 다.

한, 게 다양한 MMPs들 에 라티나아 (MMP-2, MMP-9) 악 직에 지 검 고 양[0047]

공격 , 과 계가 다고 알 (Wilson CL et al., Proc Natl Acad Sci USA (1997)

94; 1402-1407, Fingleton BM et al., APMIS (1999) 107; 102-110), MMP-2 MMP-9 많 수 체들에 어

아주 사한 들 다. 하지만 들 , 당 (glycosylation), 프 엔 (proenzyme)

질에 어 한 차 다. 들어, MMP-2 72-kDa 비당 단 질 92-kDa

MMP-9 프 도 (prodomain) 과 매 도 에 2개 당 가지고 다(L.P. Kotra et al.,

Bioorg Chem (2002) 30; 356-370, P.M. Rudd et al., Biochemistry (1999) 38; 13937-13950, T.S. Mattu et

al., Biochemistry (2000) 39; 15695-15704). 한, 항상 하고 하 MMP-2 달리, MMP-9

TNF-α 같 염 매개체 극 가 것 특징 , NF-κB 등 특 사 에 해

다(Sanseau et al., J Biol Chem, 227, 35766, 2002). 포 질 해할 수

어 상처 태아 생 신생 생 , 월경, 란, 신 등 직 재 과 에 생리학 각각

상 지시 지만 과도하게 피 , 마티스 염, 만 양, 주염, 동맥

경 , 야 양 포 과 등 여러 병리 상에 여하 것 보고 었다(Linda et al.,

Chem Biol, 2, 466, 1998).

한, 러한 MMPs들 피 에 복 한 신 달 경 거쳐 원질 합 감[0048]

그 가 다고 알 다(Lee et al., J. Dermatol Sci, 17, 182, 1998). 실 1 사

에도 피 내 MMP-9 가 피 내 라겐 하게 시킴 MMP-9가 진피 라겐

에 향 미 고, 에 매우 한 역할 하고 것 보고 (Lee et al., J.

Dermatol Sci, 17, 182, 1998), MMP-2 역시 라겐 에 향 미 고 에 한 역할 하 것

알 다.

그러므 MMP-2 MMP-9에 해 라겐 감 하 , 피 강도 어지고 피 보 하 [0049]

등록특허 10-1461281

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감 피 도 가 다. 같 , 가 MMP-2 MMP-9 피

해하여 피 가 래하므 들 억 시 거나 단 질 억 시킬 수

질 피 개 하거나 하 새 운 도 질 사 할 수 다.

에 본 들 본 20(R)-진 사 드-Rh2가 MMPs(Matrix Metalloproteinase) [0050]

억 하 지 하 해 사한 결과, 본 실시 에 , LPS 극 어 식 포에

가 MMP-2 MMP-9 20(R)-진 사 드-Rh2 처리한 결과, 20(R)-진 사 드-Rh2에 해 MMP-9만

라틴 해 억 것 나타났다(도 2 참 ). 라 러한 결과 통해 본 들 LPS 같

염 극 식 포에 해 본 20(R)-진 사 드-Rh2가 MMP-9 특 억 할 수

다 것 알 수 었다.

한편, 본 다 실시 에 , 간 피 포 각질 포 상 염 같 [0051]

극 주어지지 않 상태에 20(R)-진 사 드-Rh2 처리한 결과, MMP-2 MMP-9 라틴 해

억 것 나타났 , 러한 억 과 20(R)-진 사 드-Rh2 도 가하 것

나타났다(도 3c 참 ). 나아가, 본 들 간 각질 포에 극 TNF-a 처리한 경우에도

20(R)-진 사 드-Rh2가 MMPs들 억 할 수 지 사한 결과, MMP-2 MMP-9 라틴 해

억 것 나타났다(도 3d 참 ).

라 본 들 본 20(R)-진 사 드-Rh2가 피 포에 MMP-2 MMP-9 억 하[0052]

므 피 억 하고 피 탄 진시 , 피 주 개 하 과가 상할 수

었다.

뿐만 아니라, 본 20(R)-진 사 드-Rh2 피 포에 해 포 독 시 지 않아 포 안[0053]

갖 특징 다.

하 해, 본 들 간 각질 포 상 20(R)-진 사 드-Rh2 도별 처리한[0054]

후, MTT 통해 포 사 도 하 , 도 달리하여 처리한 각 실험 (0, 0.2, 1, 5, 25uM)

20(R)-진 사 드-Rh2 처리하지 않 과 포 생 에 차 가 없 것 나타났

다(도 4 참 ). 라 러한 결과 통해 20(R)-진 사 드-Rh2 피 포에 독 나타내지 않 므 ,

피 에 하 에 안심하고 사 할 수 알 수 었다.

그러므 본 20(R)-진 사 드-Rh2 포함하 피 지 료 공[0055]

할 수 , 한, 20(R)-진 사 드-Rh2 포함하 피 탄 진 피 주 개

료 공할 수 다.

한, 본 에 상 에 20(R)-진 사 드-Rh2 0.1~100uM 도 포함할 수 , 만약[0056]

0.1uM 미만 함 경우에 하고 하 상 술 과 얻지 못하 , 100uM 과하 경우에

피 에 상 못한 생할 수 고, 과 도가 미미하 에, 상 술 함량

포함하 것 람직하다.

한, 본 료 에 포함 상 20(R)-진 사 드-Rh2[0057]

에 료 에 통상 들 포함할 수 , 컨 항산 , 안 , 해

, 비타민, 안료 향료 같 통상 보 , 그리고 담체 포함한다.

본 료 당업계에 통상 어 한 도 수 , 들어,[0058]

액, 탁액, 탁액, 스트, 겔, 림, , 우 , 비 , 계 -함 징, , 말 운

, 탁액 운 , 스 운 스프 등 수 나, 에 한 것 아니

다. 보다 상 하게 , 본 료 연 수, 양 수, 양 림, 마사지 림, 에 스,

아 림, 징 림, 징 폼, 징 워 , , 스프 우 수 다.

본 스트, 림 겔 경우에 담체 동 , 식 , 스, 라핀, [0059]

, 트라 트, 룰 스 도체, 폴리에틸 리 , 실리 , 나 트, 실리 , 탈 산 아연 등

수 다.

본 액 탁액 경우에 담체 매, 해 탁 가 고, [0060]

컨 , 에탄 , 프 , 에틸 보 트, 에틸 아 트, 질 알 , 질 에 트, 프 필

리 , 1,3- 틸 리 , 리 지 에스 , 폴리에틸 리 비탄 지 산 에스

등록특허 10-1461281

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가 다.

본 탁액 경우에 담체 , 에탄 프 필 리 과 같 액상 ,[0061]

에 실 스 아릴 알 , 폴리 시에틸 비 에스 폴리 시에틸 비탄 에스 같

탁 , 미 결 룰 스, 알루미 타 드 시드, 나 트, 아가 트라 트 등

수 다.

본 우 스프 경우에 담체 락 스, 탈 , 실리 , 알루미 드 시[0062]

드, 슘 실리 트 폴리아미드 우 가 수 고, 특 스프 경우에 가

플루 드 본, 프 / 탄 틸 에 같 진체 포함할 수 다.

본 계 함 징 경우에 담체 지 알 트, 지 알[0063]

에 트, 포숙신산 에스 , 티 트, 미다 리 도체, 틸타우 트, 사

시 트, 지 산 아미드 에 트, 알킬아미도 타 , 지 알 , 지 산 리 리드, 지 산

에탄 아미드, 식 , 라 린 도체 에 실 리 지 산 에스 등 수 다.

한, 본 20(R)-진 사 드-Rh2 포함하 료 하여 산 억[0064]

통한 항산 MMP-2 MMP-9과 같 MMPs 억 통해 피 지, 피 주 개 피 탄

진 과 갖 것 특징 하 공할 수 다.

본 본 료 하 든 컫 다. , 료 [0065]

하 당업계에 공지 든 본 에 한다.

본 료 단독 복하여 사 하거나, 본 다 료 과 복하여 사[0066]

할 수 다. 한 본 에 료 통상 사 에 라 사 수 , 사 피

상태 취향에 라 그 사 수 달리할 수 다.

본 료 비 , 계 함 징 계 비함 징 경우,[0067]

피 에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 씻어낼 수도 다. 체 , 상 비 액상비 , 가루비

, 고 비 비 , 상 계 함 징 징 폼, 징 워 , 징 수건

징 , 상 계 비 함 징 징 림, 징 , 징 워 징 겔

, 에 한 것 아니다.

본 20(R)-진 사 드-Rh2 포함하 료 하 수행하 , 피 주 개[0068]

과, 피 탁 개 과 피 억 과 얻 수 다.

[0069]

하 본 실시 에 하여 욱 상 하게 한다. 들 실시 단지 본 보다 체 [0070]

하 한 것 , 본 가 들 실시 에 한 지 않 다 것 당업계에 통상 지식 가진

에게 어 할 것 다.

<실시 >[0071]

시약[0072]

하 실시 해 사 한 시약들 다 과 같다. , 20(R)-진 사 드 Rh2[20(R)-Rh2,purity≥98%][0073]

ChromaDex Corp.(Irvine,CA,USA) 한 것 사 하 고,TNF-α(Tumor necrosis factor-α), 라틴,

SDS(sodium dodecyl sulfate), LPS(E.coli lipopolysaccharide), HEPES(4-(2-hydroxyethyl)-1-

piperazineethanesulfonic acid), MTT(4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid), DCFH-

DA(2',7'-dichlorofluorescein diacetate) Griess 시약 Sigma Chemical Co. (St Louis, MO, USA)

한 것 사 하 다. 한, DMEM(Dulbeccos' modified Eagles' medium), FBS(fetal bovine serum), 니실

린-스 마 신 트립신-EDTA Gibco-BRL(Gaithersburg, MD, USA) 한 것 사 하 ,

든 시약들 상 고 상 질 것 사 하 다.

포 양[0074]

등록특허 10-1461281

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간 각질 포주(human keratinocyte cell) HaCat 과 식 포주 RAW264.7(ATTC, Manassas, VA,[0075]

USA) 포들 열처리 10% FBS, 100 U/mL 니실린 100 μg/mL 스트 마 신 함 DMEM

지 하여 5% CO2 습 37℃ 도가 지 건 하에 양시 다. 한, RAW264.7 포

해 상 양 지에 25mM HEPES(pH7.5) 첨가하여 양하 고, 실험에 사 한 든 포들 6-웰

플 트 상에 주하여 사 하 다.

통계처리[0076]

실험결과 평균± 편차 하 고, 각 실험 들 통계 비 unpaired Student's t-test 통해 수행[0077]

하 다. p 값 0.05 미만 통계 하다고 단하 다.

<실시 1>[0078]

RAW 264.7 포주에 LPS 극 한 NO ROS 생 에 하 20(R)-진 사 드-Rh2 향[0079]

본 들 20(R)-진 사 드-Rh2가 RAW 264.7 식 포주에 LPS 처리하 경우, LPS 도 산 질[0080]

(NO) 산 (ROS) 생 감 시킬 수 지 사하 해, 5.0 x 105

포수 RAW 264.7 식

포 6-웰 플 트 상에 양하 고, 여 에 DMSO(dimethyl sulfoxide)에 해 20(R)-진 사 드-Rh2

0, 10, 30 50uM 도 각각 포에 처리한 다 , 1시간 동안 양하 다. 후 LPS 1㎍/mL 도

양 상 포들에 각각 처리한 다 , 24시간 동안 양하고, LPS에 해 생 질산염 지 산 질

통해 하 고, 한 ROS 양 하 다.

산 질 양 포 양액 상 Griess (Sherman et al., 1993) 한 비색[0081]

(colorimetric assay) 통해 하 , 곡 미 알 진 아질산나트 도 하여

하여 사 하 다.

한, ROS Royall Ischiropoulos에 해 고안 독스-민감 프 브 DCFH-DA [0082]

하여 하 , 상 LPS 극시 후 24시간 동안 양한 포들에 5μM 도 DCFH-DA 처리하

고, 37℃에 30 동안 양시 다 , 포들 집하고 포 사 하여 포내 ROS 양

하 다.

결과, 도 1에 나타낸 같 , LPS 처리한 경우, LPS 처리하지 않 에 비해 포내 염[0083]

매개체 알 진 산 질 생 약 4.9 가한 것 나타났 나, 본 20(R)-진 사 드-Rh2

처리한 에 20(R)-진 사 드-Rh2 도 산 질 생 감 하 것

나타났 , 10, 30 50μM 도 20(R)-진 사 드-Rh2 처리하 , 산 질 각각 97%, 86%

55% 생양 감 것 나타났다.

한, ROS 결과도 산 질 결과 사한 결과 보 , RAW 264.7 식 포주에 LPS 처리한 [0084]

경우, LPS 처리하지 않 에 비해 ROS가 약 3 가한 것 나타났다. , 20(R)-진 사 드-Rh2

10, 30 50μM 도 처리한 경우, LPS만 처리한 에 비해 ROS가 각각 98%, 96% 33% 생 량 감 하

것 나타났다.

라 러한 결과 통해 본 들 본 20(R)-진 사 드-Rh2가 RAW 264.7 식 포에 LPS[0085]

극 어 생 염 매개체 NO ROS 생 과 억 시킬 수 과가 함에

라 20(R)-진 사 드-Rh2가 항산 갖 다 사실 알 수 었다.

<실시 2>[0086]

RAW 264.7 포주에 LPS에 한 프 스타 란 E2 (PGE2) 에 하 20(R)-진 사 드-Rh2 향[0087]

프 스타 란 E2 (PGE2) 염 하 질 보통 constitutive cyclooxygenase-1 (COX-1) [0088]

constitutive cyclooxygenase-2 (COX-2) 에 해 합 , 다양한 염 포 식 포에 COX-2 염

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진시 사 나 LPS 포함한 다 들에 해 어 PGE2가 것 알

다.

에 본 들 식 포 RAW 264.7 에 LPS 처리하여 도 프 스타 란 E2 (PGE2) 생[0089]

20(R)-진 사 드-Rh2가 감 시킬 수 지 사하 해, 프 스타 란 E2 (PGE2) 양 하 다.

결과, 도 1b에 나타낸 같 LPS만 처리한 경우, LPS 처리 하지 않 에 비해 PGE2 도[0090]

가 게 가한 것 나타났 , 본 20(R)-진 사 드-Rh2 처리한 에 20(R)-진 사 드-

Rh2 도 PGE2 도가 감 하 것 나타났 , 50μM 도 20(R)-진 사 드-Rh2 처

리하 경우 가 과 것 나타났다.

라 러한 결과 통해 본 들 본 20(R)-진 사 드-Rh2가 RAW 264.7 식 포에 LPS[0091]

극 어 생 염 매개체 PGE2 생 과 억 시킬 수 것 하 다.

<실시 3>[0092]

RAW 264.7 포주에 LPS에 한 pro-MMP-9, MMP-9 MMP-2 에 하 20(R)-진 사 드-Rh2 향[0093]

질단 질 해 MMPs(matrix metallproteinases) 염 생 에 포 질 해 리[0094]

링 하 주 한 역할 담당하고 것 알 고, 본 들 러한 질단 질 해 들

에 MMP-9 MMP-2 LPS 극에 한 변 본 20(R)-진 사 드-Rh2 처리에 한

변 라틴 그래피(gelatin zymography) 통해 사하 다.

해, 상 실시 1에 사 한 동 건 처리 양 RAW 264.7 식 포(다양한 도[0095]

20(R)-진 사 드-Rh2 처리하고 LPS 극시 포, LPS만 처리한 포 아 것도 처리하지 않

포) 포 양액들 각각 수득한 다 , 1mg/ml 라틴 함 8%(v/v) SDS-PAGE 겔에 비 원 건

동 시 고, 겔 안 단 질들 2.5% Triton X-100 사 하여 상 에 1시간 동안 양하여

변 시 다. 후, 겔 0.1% Coomassie Brilliant Blue R-250 염색시 고, 라틴 해 들 색

그라운드 비 리어 (clear zone) 재 여 하 다.

그 결과, 도 2에 나타낸 같 , 본 20(R)-진 사 드-Rh2 LPS 극 RAW 264.7 식 포에[0096]

pro-MMP 라틴 해 특 억 하 것 나타났 , pro-MMP 라틴 해 20(R)-

진 사 드-Rh2 10, 30 50uM 도 처리하 경우 도 라틴 해 억

것 나타났다. , MMP-2 라틴 해 에 본 20(R)-진 사 드-Rh2가 향 미

지 못하 것 나타났다.

라 러한 결과 통해 본 들 본 20(R)-진 사 드-Rh2가 LPS 극 RAW 264.7 식[0097]

포에 MMP-9 수 특 억 한다 사실 알 수 었다.

<실시 4>[0098]

간 각질 포주에 NO, ROS MMP 수 에 하 20(R)-진 사 드-Rh2 향[0099]

피 에 다양한 MMP들 염 , 암, 신생, 아폽 시스 직 상 등 하 것 알[0100]

다. 에 본 들 20(R)-진 사 드-Rh2가 피 포에 MMPs 에 미 향뿐만 아니

라 산 질 ROS 생 에 미 향 사하 다.

해 1.0 x 105

포수 간 각질 포(human keratinocytes)들 6-웰 플 트 상에 주하여 24[0101]

시간 동안 양한 후, FBS가 없 지에 해 20(R)-진 사 드-Rh2 0, 0.2, 1, 5 25uM 도 각

각 포에 처리한 다 , 24시간 양하 다. 양 포들 상 실시 1에 수행한 과 동 하게 생

산 질 (NO) 산 (ROS) 양 하여 하 , 상 실시 2에 수행한 동 한

사 하여 MMP-1, MMP-2 MMP-9 라틴 해 하 다.

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한, 20(R)-진 사 드-Rh2 각 도별 처리하고 24시간 양 포들 상 10ng/ml TNF-α[0102]

처리한 다 , 들 포 양액 수집하고 상 실시 2에 수행한 동 한 사 하여 MMP-2 MMP-

9 라틴 해 하 다.

그 결과, 도 3에 나타낸 같 , 20(R)-진 사 드-Rh2 간 피 각질 포에 산 질 생 에[0103]

향 주지 못하 것 나타났 나, 산 생 도 감 하 것 나타났

, 특 25uM 20(R)-진 사 드-Rh2 처리한 경우, 20(R)-진 사 드-Rh2 처리하지 않 (ROS

생 100%)에 비해 ROS 생 77% 감 것 나타났다(도 3a 3b 참 ).

한, 라틴 그래피 통한 MMPs 라틴 해 결과, 20(R)-진 사 드-Rh2 MMP-2 MMP-9[0104]

억 하 것 나타났 나, 처리 도 경향 보 지 않았다. 한편, MMP-1 20(R)-진

사 드-Rh2 처리한 과 처리하지 않 에 변 보 지 않 것 나타났다(도 3c 참 ).

나아가, 도 3d 결과에 간 피 각질 포에 20(R)-진 사 드-Rh2에 한 MMP-2 MMP-9 라[0105]

틴 해 억 과 나타내고 , 참고 MMP-9 라틴 해 TNF-a에 해 도 ,

TNF-a MMP-2 라틴 해 에 향 주지 않 것 알 다.

라 러한 고 하 , 본 20(R)-진 사 드-Rh 간 피 각질 포에 염 사[0106]

극 여 계 없 MMP-2 MMP-9 해 억 하 과가 다 것 알 수 었고,

라 , 20(R)-진 사 드-Rh2 항 한 피 료 에 사 할 수 알 수 었다.

<실시 5>[0107]

20(R)-진 사 드-Rh2 포독 평가 [0108]

피 에 료 들 피 에 해 안 아야 할 필 가 다. 라 본 들[0109]

20(R)-진 사 드-Rh2가 피 포에 해 포독 지 하 해 1.0 x 105

포수 간 각질

포(human keratinocytes)들 6-웰 플 트 상에 주하고 0, 0.2, 1, 5 25uM 도 20(R)-진

사 드-Rh2 각각 처리한 다 , 24시간 동안 양하 다. 후 포사 도 MTT 어 통해 수행하

, , 20(R)-진 사 드-Rh2 처리하고 양한 각 포들 20 ㎕ 5mg/ml MTT 액 처리하고 2시간 동

안 양하여 트립신 시 다. 그런 , 포들 프 필 알 해시 고, 살아 포 미 드리

아에 해 원 MTT 포 마 양 540nm 도에 하 다.

그 결과, 다양한 도 20(R)-진 사 드-Rh2 처리한 간 각질 포 20(R)-진 사 드-Rh2 처리[0110]

하지 않 과 비 했 생 거 사한 것 었고, 특 도 4에 나타낸 같 25uM

도 처리한 에 도 포사 거 어나지 않 것 알 수 었다.

라 러한 결과 통해 본 들 20(R)-진 사 드-Rh2가 피 각질 포에 해 포 독 [0111]

시 지 않아 비 포에 해 안 므 , 피 에 하 료 에 안심하고 사 할 수

알 수 었다.

< 1>[0112]

연 수(스 ) [0113]

하 에 나타난 같 연 수 통상 에 라 하 다.[0114]

1

[0115] 함량 ( 량%)

20(R)-진 사 드-Rh2 1.0

1,3- 틸 리 6.0

리 린 4.0

알 0.1

폴리 트 20 0.5

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에탄 15.0

-9 0.05

향, 미량

수 to 100

< 2>[0116]

양 수( ) [0117]

하 에 나타난 같 양 수 통상 에 라 하 다.[0118]

2

[0119] 함량 ( 량%)

20(R)-진 사 드-Rh2 3.0

프 필 리 6.0

리 린 4.0

트리어탄 아민 1.2

릴아 트 3.0

동 라핀 5.0

스쿠알란 3.0

마 다미아 트 2.0

폴리 트 60 1.5

리탄 스 트 1.0

복시비닐 폴리 1.0

비에 티 0.01

EDTA-2Na 0.01

향, 미량

수 to 100

< 3>[0120]

양 림 [0121]

하 에 나타난 같 양 림 통상 에 라 하 다.[0122]

3

[0123] 함량 ( 량%)

20(R)-진 사 드-Rh2 10.0

스 아릴 알 2.0

리 릴 스 아 트 1.5

트리 타 5.0

폴리 트 60 1.2

리탄스 아 트 0.5

스쿠알란 5.0

동 라핀 3.0

싸 3.0

비에 티 0.05

타 0.2

리 린 4.0

1.3- 틸 리 2.0

산타검 0.1

EDTA-2Na 0.5

향, 미량

수 to 100

지 본 에 하여 그 람직한 실시 들 심 살펴보았다. 본 하 술 야에 통[0124]

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상 지식 가진 본 본 본질 특 에 어나지 않 에 변 태

수 해할 수 것 다. 그러므 개시 실시 들 한 아니라 에 고

어야 한다. 본 술한 아니라 특허청 에 나타나 , 그 동등한 내에

든 차 본 에 포함 것 해 어야 할 것 다.

도

도 1

도 2

등록특허 10-1461281

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도 3

도 4

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