Upload
elmer-elliott
View
255
Download
1
Embed Size (px)
Citation preview
ها و small RNA هایکاربرد RNA (RNAمکانیسم خاموشی
silencing)در قارچ ها
استاددکترمسعودشمسبخشارئهولیالهمهدیزاده
سمینار کالسی دکتری
تعالی بسمه
3
Types of RNAs Produced in Cells
Types of RNAs Functions
mRNAs messenger RNAs, code for proteins
rRNAs comprise ribosomes
tRNAs adaptors between mRNA and amino acids in protein synthesis
snRNAs splicing of pre-mRNAs
snoRNAs process and chemically modify rRNAs
MicroRNAs translation and mRNA degradation
Other non-codingtelomere synthesis, protein transport
Types of small RNA
تقسیمبندیبراساسمنشاونحوهتشکیل
siRNA/RNAi – from exogenous dsRNA sources such as viruses
miRNA – endogenously transcribed by RNA Pol II (or III to a lesser extent)
piRNA – endogenously expressed somehow, but longer and not dependant on any known mechanism
Gene Regulation
Promoters active
Gene hypermethylated in coding region
Transcriptional gene silencing (TGS) Posttranscriptional gene silencing (PTGS)
Promoters silenced
Genes hypermethylated
in promoter region
خاموشی ژنPost-transcriptional gene silencing (PTGS)
RNA silencing Gene silencing RNA interference (RNAi) in animal Virus-induced gene silencing (VIGS) Quelling in fungi Cosuppression in plant Host induced gene silencing (HIGS)
RNAi mechanism in C.elegans: basic schemeRNAi mechanism in C.elegans: basic scheme
less mRNA, less protein = gene silencing
siRNA
Cell membrane
Cytosol
Endogeneous mRNA
RISC
RNA interference: siRNA
Summary RNAi Pathway
IR-PTGS Inverted repeat transgene
aRNA
dsRNA
siRNA
qde3
qde1
qde2/RISC
S-PTGSsense transgene
dicer
mRNA degradation
mRNA cleavage and degradation
transgenesNucleus
endogene
epigeneticmodifications
QDE3
DNA\DNA interaction
QDE3
aberrant ssRNA
mRNAAAA
RdRPactivity
QDE1
DCR2
dsRNA
siRNA
AAA
QDE2
RISC
DCR1 dicer
mRNA cleavage and degradation
RNA Silencing Movement RNA silencing – Initiation in a few cells leads
progressively to the sequence-specific suppression of homologous sequences in neighboring cells
Spreading of silencing occurs through the plasmodesmata and results in cell-to-cell movement
Signal – Also spreads through the phloem system of the plants along with translocation of other metabolites
Signal moves from cell to cell
Complete translocation – through the phloem
Results in uniform gene silencing
1 ویدئو ویدئو 2ویدئو 3ویدئو 4ویدئو 5ویدئو 6ویدئو 7ویدئو 8ویدئو 9
ویدئو 10ویدئو 11ویدئو 12ویدئو 13
RNAویدئو های مربوط به خاموشی
RNAانیمیشن های مربوط به خاموشی
1 انیمیشن
2 انیمیشن
3 انیمیشن
4 انیمیشن
5 انیمیشن
6 انیمیشن
7 انیمیشن
8 انیمیشن
9 انیمیشن
Dicer Dicer is an endoribonuclease in the RNase III
family that cleaves double-stranded RNA (dsRNA) and pre-microRNA (miRNA) into short double-stranded RNA fragments called small interfering RNA (siRNA) about 20-25 nucleotides long, usually with a two-base overhang on the 3' end.
Dicer contains two RNase III domains and one PAZ domain; the distance between these two regions of the molecule is determined by the length and angle of the connector helix and may influence the length of the siRNAs it produces
Dicer
Double-stranded RNA triggers processed into siRNAs by enzyme RNAseIII family, specifically the Dicer family
Processive enzyme - no larger intermediates.
Dicer family proteins are ATP-dependent nucleases.
These proteins contain an amino-terminal helicase domain, dual RNAseIII domains in the carboxy- terminal segment, and dsRNA-binding motifs.
Dicer
• They can also contain a PAZ domain, which is thought to be important for protein-protein interaction.
• Dicer homologs exist in many organisms including C. elegans, Drosphila, yeast and humans
• Loss of dicer: loss of silencing, processing in vitro
• Developmental consequence in Drosophila and C. elegans
The Argonautes
Bind small RNA’s – direct localiztion Serve as the base for complexes Have the slicer activity that cleaves target mRNA
RNA-Induced Silencing Complex, or RISC
A multiprotein complex that incorporates one strand of a
small interfering RNA (siRNA) or micro RNA (miRNA).
RISC uses the siRNA or miRNA as a template for
recognizing complementary mRNA.
When it finds a complementary strand, it activates RNase
and cleaves the RNA.
RISC complex
RISC is a large (~500-kDa) RNA-multiprotein complex, which triggers mRNA degradation in response to siRNA
Some components have been defined by genetics, but
function is unknown, e.g.
1. – Unwinding of double-stranded siRNA (Helicase !?)
2. – Ribonuclease component cleaves mRNA
(Nuclease !?)
3. – Amplification of silencing signal (RNA-dependent
RNA Polymerase !?)
Cleaved mRNA is degraded by cellular exonucleases
Roles of RNAi pathway in the cell
Protects against RNA virus infections, especially in plants and invertebrate animals
Maintains genome stability by keeping mobile elements silent
Represses protein synthesis and regulate the development of organisms
Keeps chromatin condensed and suppress transcription
Applications
تراریخت ایجاد گیاهان
مقاوم )خصوصا ویروس ها(
تعیین فانکشن یک ژن )مثال در انتقال پیام
نقش دارد؟(
باال بردن کیفیت گیاهان )تولید گیاهی که
توکسین تولید نکند، خاموشی ژن ترکیبات
نامطلوب گیاهی
خاموشی ژن های گیاهی مورد نیاز آلودگی
ویروس
Commercial Applications of RNA Silencing
RNA Silencing in Plants-Applications
Small RNAی کشف شده در هاقارچ ها
QDE-2-interacting small RNAs (qiRNAs)
از شده مشتق ای ان آر tRNA (tRNA-derived RNA fragmentsقطعات
(tRFs))
small RNAsهایشبهmiRNA (miRNA-like small RNAs (milRNAs))
siRNAs(هایمستقلازدایسرDicer-independent siRNAs (disiRNAs))
(آرانایهایکوتاهدرونزادEndogenous short RNAs (esRNAs))
(آرانایهایمداخلهگرکوچکSmall interfering RNAs (siRNAs))
(میکروآرانایهاMicroRNA (miRNAs))
QDE-2-interacting small RNAs (qiRNAs)
،ونdتا کنqiRNA ط درdا فقdه N. crassa .ده اندdیف شdتوص qiRNA اdه
پdرایم 5 نوکلئوتیdد دارنdد و معمdوال دارای یوراسdیل در سdر 21تقریبdا
هdا بdر small RNA پdرایم می باشdند. این گdروه از 3و آدنین در انتهdای
اسddاس رشddته هddای سddنس و انddتی سddنس تکddرار هddای دی ان ای
ریبوزومی می باشند.
( هdای بیگانdآر ان ای هaberrant RNAs (aRNAs) یب دیdیله آسdه وسdب )
بdه کdار qiRNAان ای القdا شdده و بdه عنdوان پیش سdاز بdرای بیdوژنز
می باشddند، امddا QDE-2 همddراه بddا qiRNAگرفتddه می شddوند. اگرچddه
;Lee et al., 2009 و دایسر نیاز دارد )QDE-1، QDE-3بیوژنز شان فقط به
Li et al., 2010; Dang et al., 2011.)
tRNAقطعات آر ان ای مشتق شده از (tRNA-derived RNA fragments (tRFs))
tRFها در یکی از مطالعات توالی یابی ( Deep Sequencing
Studies)شناسایی شدند ( Kawaji et al., 2008; Nunes et al., 2011;
J€ochl et al., 2008).
والdمعم tRF ا ازdا 5 هdرایم یdرایم 3 پdای پdه tRNAژن
40 تddddا 27منشddddا می گیرنddddد و دارای طddddول بین
نوکلئوتیddد می باشddند، علی رغم اینکddه در بddرخی از
نوکلئوتایddدی هم گddزارش 22ارگانیسddم هddا اعضddای
. (Kawaji et al., 2008; Nunes et al., 2011 )شده است
small RNAs های شبه miRNA (miRNA-like small RNAs (milRNAs))
milRNA ار درdتین بdا نخسdه N. crassa هdدند و بdف شdکش نامیده شدند.miRNAs، milRNAsدلیل شباهت با
دازهdروه دارای انdا 19 این گdوان 25 تdه عنdد بdنوکلئوتی یdک کانسdکئونس چهdار مکانیسdم مشdخص بیdوژنزیس
small RNAمسdتلزم ترکیبdات متفdاوت اجdزای بیdوژنزیز RNase و یک QDE-2، exonuclease QIPشامل دایسرها،
III domain-containing protein MRPL3 .می باشد
ایdاده هdار پیش مdه همه ی چهdاگرچRNA ولdر طdاز نظ متغdیر می باشdند و از نdواحی بین ژنی نسdخه بdرداری
از مولکdول هdای آر ان ای سdنجاق milRNAsمی شdوند، )یوراسdیل( در انتهdای Uسdری منشdا می شdوند، دارای
پdرایم می باشdند و همdراه بdا پروتdئین آرگونdات می 5باشند.
ایddا، نقش هddاس دانش مddبر اسmilRNAs اکنونddت ( است نشده ;Lee et al., 2010; Li et al., 2010گزارش
Dang et al., 2011 .)
siRNAs های مستقل از دایسر (Dicer-independent siRNAs (disiRNAs))
دdهماننmilRNAs ،اdه disiRNAs در فقdط هdا N. crassa
از دایسdر می بیوژنزشdان مسdتقل انdد و گdزارش شdده
باشد.
هdد کdنهاد می کنdیر پیشdات اخdتحقیقdsRNA دهdا شdمنش ،
لپ اور سdنس آنdتی و سdنس هdای ترانسdکریپت از
(overlapping sense and antisense transcripts ولdمولک احتمdاال ،)
ها می باشند. disiRNAsهای پیش نیاز برای
DisiRNAs دارای دارای 5 هdا و یوراسdیل هسdتند پdرایم
;Lee et al., 2010 نوکلئوتیدی می باشند )22اندازه متوسط
Li et al., 2010; Dang et al., 2011 .)
Endogenous)داخلیآر ان ای های کوتاه short RNAs (esRNAs))
esRNAs ها در میسلیوم M. circinelloides .کشف شدند
کالس تdرین هdاesRNAsشایع از exonic-siRNAs اdمنش
گرفتنdد و بdه وسdلیه آر ان ای پلیمdراز وابسdته بdه آر ان
( و شdبه دایسdر RNA-dependent RNA polymerase 1 (RdRp1) )1ای
2( Dicer-like 2 (DCL2).تولید می شوند )
ایdکریپت هdذف ترانسdئول حdمسmRNA دdای کdیی ژن ه
کننده پروتئین می باشند.
وژنزیزdبیesRNAs واحیdا و نdپوزان هdده از ترانسdاد شdایج
نdیز بdه نظdر می رسdد بdه نیdاز DCL2 و RdRp1بین ژنی
(. Nicolas et al., 2010داشته باشد )
Small interferingگر کوچک )تداخل آر ان ای های RNAs (siRNAs))
siRNAs ایdه مولکdول معمdوال هdا تdا 21 24 از مولکdول هdا پیش نوکلئوتیdدی مشdتق شdده
می باشdند، کdه در تعdداد زیdادی از dsRNAسdاز یوکdاریوت هdا شdامل قdارچ هdا توصdیف شdده انdد.
ل جفتdای مکمdکریپت هdته ترانسdک رشdدرون یمی شdوند و در ادامdه سdبب تشdکیل اس آی آر
( داخلی های ای -endogenous-siRNAs (endoان
siRNA) .می شود )
dsRNA الdرای مثdرون زاد بdاوی آر ان ای بdح transgene ادdایج سdبب ویروسdی ای ان آر یdا
siRNAs( های برون زاد exo-siRNAs .می شود )
(MicroRNA (miRNAs)میکرو آر ان ای ها )
miRNAs د. اینdده انdیف شdانوران توصdان و جdادی در گیاهdیزان زیdه مdا بdه
small RNAs ایdا 21 هdای 25 تdدی از ژن هdنوکلئوتی miRNA ا میdداخلی منش
گیرند.
هdت کdده اسdخص شdمشmiRNA و وdد، نمdامل رشdا شdد هdا طیفی از فرآینdه
پاسdخ بdه اسdترس هdای غdیر زنdده و زنdده شdامل اینتراکشdن بین میزبdان و
(. Katiyar-Agarwal and Jin, 2010میکروب را تنظیم می کنند )
،اdم دانش اسdاس بdر وجdود، این هdا miRNAsبا قdارچ در متعdارف هdای
بdه وسdیله بdرداری انdد. بعdد از نسdخه )در بdرخی RNA Pol IIتوصdیف نشdده
(، مولکdول هdای آر ان ای تdک رشdته کdه ممکن اسdت تdا یdک کیلdو Pol IIIمdوارد
بdه پشdت خم شdده و سdاختار سdنجاق سdری تحت عنdوان بdاز طdول دارنdد
miRNA( اولیه primary miRNA (pri-miRNA) .را شکل می دهند )
،االتdرخی حdدر بpri-miRNAs انوادهdاد خdبب ایجdترونیک سdای پلی سیسdه
از )miRNAs می شود. miRNAهای متفاوتی اینترونی نواحی از intronic ها
regions( اdیرترون هdه مdک )Mirtrons وند و ازdده می شdنامی )pri-miRNAs اهdکوت
,.Kim et al., 2009; Kim, 2005; Winter et alتر تشکیل می شوند منشا می گیرند )
2009 .)
و small RNAمطالعهروش های در قارچ هاRNAخاموشی
و small RNAمطالعهروش های
در قارچ هاRNAخاموشی عملک:رددوژنک:دکنن:دهدایس:ردرژن:ومN. crassa ،
M. oryzaeوM. circinelloidesب:هوس:یلهغ:یرفع:ال( ژن اس:تgene knockoutک:ردن ش:ده شناس:ایی )
(Nicol_as et al., 2007; de Haro et al., 2009; Catalanotto et al., 2004; Kadotani et al., 2004.)
زی:ادی م:یزان ب:ه ه:ا ق:ارچ ژن:وم ب:ودن دس:ترس درشناس:اییژنه:ایک:دکنن:دهپروت:ئینه:ادرتع:دادزی:ادیازگون:هه:ایق:ارچیراتس:هیلک:ردهاس:ت.ب:رامث:ال،ازت:والیژنه:ایدایس:ریک:هب:هخ:وبیحف:اظتش:دهاس:ت،آرگون:ات،وآرانایپلیم:رازوابس:تهب:هآر
( ای هومول:وگRdRpان شناس:ایی ب:رای ت:وان می )هایآنهادرگونههایقارچیدیگراستفادهکرد.
و small RNAمطالعهروش های در قارچ هاRNAخاموشی
ماازمزای:ایت:والیه:ایعم:ومیژن:وماس:تفادهای ان آر ب:رایخاموش:ی ه:ایی داده و ک:ردهه:ایی دومین و ک:ردیم اس:تخراج ق:ارچی ه:ای
(IPR005034(،دایس:ر)IPR003100ب:رایآرگون:ات)RdRpو )IPR007855)از اس:تفاده ب:ا InterPro
ژن:وم54(.دراینج:ام:ا1تش:ریحک:ردیم)ج:دولرابررس:یک:ردیموب:هم:یزانزی:ادیآنالیزه:ای
,Nakayashiki and Nguyenقبلیراوسعتدادیم)2008; Nakayashiki et al., 2006.)
و small RNAمطالعهروش های
در قارچ هاRNAخاموشی تع:دادهومول:وگه:ایژنه:ایخاموش:یآرانایدرمی:انگون:ه
ه:ا ق:ارچ از زی:ادی تع:داد باش:د. متغ:یرمی ک:امال ق:ارچی ه:ایک:پیازه:رژنمیباش:ند،علیرغماینک:هب:رخی3ت:ا2دارای
مانن:::د ه:::ا گون:::ه وSchizosaccharomyces japonicasاز Schizosaccharomyces pombeمی دارا را ژن ه:ر از ک:پی ی:ک تنه:ا
باشند.
گون:هق:ارچیش:امل13عالوهب:راین،م:امش:اهدهک:ردیمک:هدرClavispora lusitaniae،S. cerevisiae،Ustilago maydis،Ashbya gossypii،Candida glabrata، Laccaria bicolor، Lachancea thermotolerans،Lodderomyces elongisporus، Malassezia globosa، Pichia guilliermondii،
Pichia pastoris،Yarrowia lipolyticaو Zygosaccharomyces rouxiiک:امال فاقدماشینخاموشیآرانایمیباشند.
مطالعهروش های small RNA ودر قارچ ها RNA خاموشی
(استفادهازآغازگرهایدژنرهdegenerative PCR primersمیتواندبهشناساییژنهایشبه)
کمککند.RdRpدایسر،شبهآرگوناتیاشبهتوالیهایشناختهشدهدایسر،آرگونات،و
RdRpازگونههاییدارایارتباطنزدیکفیلوژنتیکیممکناست
پروبهایالیگونوکلئوتیدیمنطبقباconserved RNase IIIوdsRNA-binding domain of Dicer
proteinsممکناستبرایاسکرینکردنکتابخانههایدیانایقارچهایموردنظر
استفادهشود،خصوصااگرکتابخانههاییمانندBACs.هادردسترسمیباشند
استفاده از سایر قارچ های برای مطالعه ماشین خاموشی ژن در قارچ های سخت کشت
ازUstilago hordeiی:کجانش:ینمناس:بب:رایمطالع:هماش:ینپروتئی:نیخاموش:یآرانایدردیگ:ربازیدیومیس:ته:اباش:د.
siRNAs 25راب:::هGUS hairpin RNAsاینق:::ارچق:::ادراس:::تراخ:اموشکن:دGUSنوکلئوتی:دیتب:دیلکن:دوترانس:کریپته:ای
(Laurie et al., 2008.)موت:انته:ایU. hordei(ک:هدارایی:کح:ذفdeletionمیباش:ند)
میتوانن:دب:رایتوص:یفعملک:ردژنه:ایم:وردنظ:رازگون:هه:ایاس:تفادهش:وند.functional complementationنزدی:کخ:ودب:راس:اس
اینروشب:هط:ورم:وفقیتآم:یزیب:رایتوص:یفژنه:ایژنه::ایپروت::ئینکین::ازآسکومیس::ته::اوبازیدیومیس::ته::ادر
جایگزینهایقارچیقابلکشتاستفادهشدهاست.(اآرافORF)Bka1قارچBlumeria graminis f. sp. Hordei (Blumeria
graminis f. sp. hordei Bka1 ORF)ب:هط:ورم:وثریبیم:اریزاییوب::ازM. oryzaeق::ارچDcpkAتکمی::لاپرس::وریومرادرموت::انت
Bindslev et al., 2001گرداندهاست)
از بافت های گیاهی آلوده small RNAsجداسازی به قارچ ها
تکنی:که:ایمناس:بیب:رایجداس:ازیبیم:ارگرازب:افته:ایگی:اهیآل:ودهبای:د
بهکارگرفتهشود:
(ری:زتجزی:هب:هکم:کل:یزرLaser micro dissection (LM)درچن:دیننمون:هب:رای)
شناس:اییترانس:کریپتومخصوص:اهم:راهب:اب:افته:ایآل:ودهب:اق:ارچه:اب:رای
ب:رای وColletotrichum graminicolaمث:ال Melampsora larici-populinaاس:تفاده
شدهاست
مانن:د خ:اص ق:ارچی ه:ای س:لول گ:رفتن ب:رای ن:یز دیگ:ری ه:ای روش
آم:ادهس:ازی ب:رای اس:تفاده و آل:ودهش:ده گی:اهی ه:ای ازس:لول هاس:توریوم
اس:تفادهک:ردP. triticinaمانن:دکتابخان:ههوس:ترویومیق:ارچcDNAکتابخان:هه:ای
(Catanzariti et al., 2011; Song et al., 2011.)
ب:رایجداس:ازی ب:اsmall RNAsاس:تراتژی ف:یزیکیهم:راه ب:هط:ور ییک:ه
میباش:ندک:هازخ:الصس:ازیب:راس:اسN. crassa(درQDE-2پروت:ئینارگون:ات)
(.Lee et al., 2009خصوصیاتایمنولوژیکیاستفادهمیکند)
خاتمهبحثباتعدادیسوال
اdوان از آیdرای می تdی آر ان ای بdاهش خاموشdوع کdتن؟ استفاده کردژنتیکی قارچ های بیمارگر گیاهی
وانdا می تdاز آی siRNAs ایdول هdا مولکdنوعی یdای مصdهdsRNA اریdوتروف اجبdای بیdارچ هdتکاری قdرای دسdب
؟کردمهم استفاده
اdآیsmall RNAs اهی میdارگر گیdای بیمdارچ هdای قdه ژنهddای در post-transcriptionallyتواننddد بddه صddورت
؟اختالل ایجاد کننددفاعی میزبان
ی ازddاهی جمعیت خاصddاریزای گیddای بیمddارچ هddا قddآیsmall RNAs اریزاییdه بیمdط بdای مرتبdاختار هdرا در س
ماننdد اپرسdوریوم هdا یdا هاسdتوریوم هdا را تولیdد می در طی وقdایع قبdل و بعdد از small RNAs و آیdا کننdد
نفوذ نقش دارند یا خیر؟
The End
P-Bodies
RISC RNA-induced silencing complex dsRNA double-stranded RNA RNAi RNA interference siRNA small interfering RNA miRNA microRNA piRNA PIWI-interacting RNA scnRNA small scan RNA RNP ribonucleoprotein P-bodies processing bodies.
What is RNA interference /PTGS?
dsRNA needs to be directed against an exon, not an intron in order to be effective
homology of the dsRNA and the target gene/mRNA is required
targeted mRNA is lost (degraded) after RNAi
the effect is non-stoichiometric; small amounts of dsRNA can wipe out an excess of mRNA (pointing to an enzymatic mechanism)
ssRNA does not work as well as dsRNA
double-stranded RNAs are produced by:
– transcription of inverted repeats
– viral replication
– transcription of RNA by RNA-dependent RNA-
polymerases (RdRP)
double-stranded RNA triggers cleavage of
homologous mRNA
PTGS-defective plants are more sensitive to infection
by RNA viruses
in RNAi defective nematodes, transposons are much
more active
RNAi vector for T. reesei
trpC T
benomyl
pIR
XmaI
XmaI XmaIintron
The inverted repeat is placed under the control of a quinic acid inducible promoter
dsRNA
945nt350nt
5’end
3’end
qa-2p
Gene silencing in plants.
p 35S GFPLB RBPFGintron
Transcription
GFP PFGintronCAP
Poly A
Poly A
PFG
GFPCAP
DICER
RISC
DICER
p 35S GFPLB RB
Translation
GFPCAP
Poly A
Transcription
Fluorescence
gene silencingmRNA degradation
CAP
Poly A
No Fluorescence
GFPCAP
Poly ARISC
1.a. Gene silencing of transiently expressed sequences.
Nb
p 35S GFPLB RB
p 35S GFPLB RBPFGintron
p 35S GFPLB RB
UV
1.b. Triggering gene silencing of established transgene by transient expression.
GFP
UV
p 35S GFPLB RBPFGintron
1.c. Virus-induced gene silencing (VIGS)
pTRV2CPp 35SLB RBRZPDS
Nt
Agroinfiltration PTGS PDS
Nt Nt
Sistemic PTGS
pTRV1
MPp 35SLB RB16K RZRpRd
2. Systemic gene silencing.
Sistemic PTGS
GFP
Agroinfiltration
UV
GFP
PTGS GFP
GFP
p 35S GFPLB RBPFGintron
3.a. Suppressing gene silencing of transiently expressed sequences.
UV
Nb
p 35S GFPLB RB p 35S GFPLB RB
p 35S GFPLB RB
p 35S HcProLB RB
p 35S GFPLB RBPFGintron
p 35S GFPLB RBPFGintron
3.b. Silencing of trangenes or endogenous genes cannot be established in the presence of silencing suppressor.
p 35S HcProLB RB
GFP
UV
p 35S GFPLB RBPFGintronp 35S GFPLB RBPFGintron
3.c. Suppression of gene silencing mediated by virus infection.
Plant silenced for the Magnesium chelatase
gene.
Plant silenced for the Magnesium chelatase
gene.
PVY infection.
Technological Applications of RNAi
Antiviral therapy e.g. knockdown of host receptors for HIV; silencing of hepatitis A and B genes
Biotechnologye.g. engineering of food plants that produce lower levels of natural plant toxins.
Experimental applications of RNAi
Genome-scale screens, driven by genome sequence data
Useful for the analysis of signal transduction pathways, and obtain a global understanding of biological processes