Insulin · monitoring insulin therapy in the absence of statistics establishing therapeutic or toxic ranges. So far it appears that glucose control in diabetics cannot in

Insulin

IMMULITE® 2500 Insulin

2 IMMULITE 2500 Insulin (PIL5KIN-6, 2005-05-31)

English

Intended Use: For in vitro diagnostic usewith the IMMULITE 2500 Analyzer — forthe quantitative measurement of insulin inserum or heparinized plasma, for themanagement of diabetes.

Catalog Number: L5KIN2 (200 tests),L5KIN6 (600 tests)Test Code: INS Color: Orange

Summary and ExplanationHuman insulin is a polypeptide hormoneoriginating in the beta cells of thepancreas and serving as a principalregulator for the storage and production ofcarbohydrates. Its secretion is normallystimulated by increases in the amount ofglucose in circulation. This leads to higherinsulin levels and more rapid tissue-assimilation of glucose — followed by adecline in the insulin level as the glucoselevel subsides.

In a number of conditions, notablyinsulinoma and diabetes, this relationshipis impaired. Insulin tends to circulate atinappropriately high levels in patients withinsulin-secreting pancreatic tumors; suchtumors can thus be a cause ofhypoglycemia. Accordingly, insulinimmunoassays — used sometimes inconnection with provocative doses oftolbutamide or calcium — play anessential role in the identification (andlocalization) of insulinomas. The finding offasting hypoglycemia in association withan inappropriately high serum insulinconcentration is considered diagnostic.Insulin levels do not figure in thesubclassification of diabetes worked outby the National Diabetes Data Group.Nevertheless, when obtained in thecourse of a glucose tolerance test, theyappear to be of some prognostic value inpredicting the benefits of insulin therapyand the likelihood of progression toinsulin-dependence and the complications(such as retinopathy) characteristic ofdiabetes.The application of insulin immunoassay topatients already undergoing insulin

therapy is complicated by the fact thatsuch therapy typically leads to theformation of anti-insulin antibodiescapable of interfering with the assay.Some investigators have sought thereforeto measure insulin in urine, or in serumsamples subjected to columnchromatography or PEG precipitation. Butthe measurement of "free" insulin remainsof limited interest as a technique formonitoring insulin therapy in the absenceof statistics establishing therapeutic ortoxic ranges. So far it appears thatglucose control in diabetics cannot ingeneral be achieved by normalizing theinsulin profile. Nor is it known at what pointabnormally high insulin levels becomedangerous.

Principle of the ProcedureIMMULITE 2500 Insulin is a solid-phase,two-site chemiluminescent immunometricassay.Incubation: 60 minutes.

Specimen CollectionThe use of an ultracentrifuge isrecommended to clear lipemic samples.

Hemolyzed samples may indicatemistreatment of a specimen before receiptby the laboratory; hence the results shouldbe interpreted with caution.

EDTA tubes should not be used in theIMMULITE 2500 Insulin procedure.In collecting samples for insulindeterminations, it is important to avoidhemolysis, which can lead to spuriouslylow results.21,22

Icteric, lipemic, or grossly contaminatedsamples may give erroneous results.Centrifuging serum samples before acomplete clot forms may result in thepresence of fibrin. To prevent erroneousresults due to the presence of fibrin,ensure that complete clot formation hastaken place prior to centrifugation ofsamples. Some samples, particularlythose from patients receivinganticoagulant therapy, may requireincreased clotting time.

IMMULITE 2500 Insulin (PIL5KIN-6, 2005-05-31) 3

Blood collection tubes from differentmanufacturers may yield differing values,depending on materials and additives,including gel or physical barriers, clotactivators and/or anticoagulants.IMMULITE 2500 Insulin has not beentested with all possible variations of tubetypes. Consult the section on AlternateSample Types for details on tubes thathave been tested.Volume Required: 100 µL serum orheparinized plasma.Storage: 7 days at 2–8°C, or 3 months at–20°C.20

Warnings and PrecautionsFor in vitro diagnostic use

Reagents: Store at 2–8°C. Dispose of inaccordance with applicable laws.Follow universal precautions, and handleall components as if capable oftransmitting infectious agents. Sourcematerials derived from human blood weretested and found nonreactive for syphilis;for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitisB surface antigen; and for antibodies tohepatitis C.Sodium azide, at concentrations less than0.1 g/dL, has been added as apreservative. On disposal, flush with largevolumes of water to prevent the buildup ofpotentially explosive metal azides in leadand copper plumbing.Chemiluminescent Substrate: Avoidcontamination and exposure to directsunlight. (See insert.)Water: Use distilled or deionized water.

Materials SuppliedComponents are a matched set. Labels onthe inside box are needed for the assay.

Insulin Bead Pack (L2IN12)With barcode. 200 beads, coated withmonoclonal murine anti-insulin antibody.Stable at 2–8°C until expiration date.L5KIN2: 1 pack. L5KIN6: 3 packs.

Insulin Reagent Wedge (L2INA2)With barcode. 18.5 mL alkalinephosphatase (bovine calf intestine)conjugated to polyclonal sheep anti-insulinantibody and alkaline phosphatase(bovine calf intestine) conjugated to

monoclonal murine anti-insulin antibody inbuffer, with preservative. Stable at 2–8°Cuntil expiration date.L5KIN2: 1 wedge. L5KIN6: 3 wedges.Before use, tear off the top of the label atthe perforations, without damaging thebarcode. Remove the foil seal from the topof wedge; snap the sliding cover down intothe ramps on the reagent lid.

Insulin Adjustors (LINL, LINH)Two vials (Low and High), lyophilizedinsulin in a nonhuman serum matrix, withpreservative. At least 30 minutes beforeuse, reconstitute each vial by adding4.0 mL distilled or deionized water. Mix bygentle swirling or inversion. Aliquot andfreeze: stable at –20°C for 60 days afterreconstitution.L5KIN2: 1 set. L5KIN6: 2 sets.

Insulin Controls (LINC1, LINC2)Two vials of lyophilized insulin in anonhuman serum matrix, withpreservative. At least 30 minutes beforeuse, reconstitute each vial by adding4.0 mL distilled or deionized water. Mix bygentle swirling or inversion. Aliquot andfreeze: stable at –20°C for 60 days afterreconstitution.L5KIN2: 1 set. L5KIN6: 2 sets.Refer to the control insert forconcentration levels.

Before running adjustors or controls, placethe appropriate Aliquot Labels (suppliedwith the kit) on test tubes, so that thebarcodes can be read by the on-boardreader.

Kit ComponentsSupplied Separately

Insulin Sample Diluent (L2INZ)For on-board dilution of high samples.25 mL of concentrated (ready-to-use)processed, insulin-free nonhuman serummatrix, with preservative. Storage: 30 days(after opening) at 2–8°C or 6 months(aliquotted) at –20°C.Barcode labels are provided for use withthe diluent. Before use, place anappropriate label on a 16 x 100 mm testtube, so that the barcodes can be read bythe on-board reader.L2INZ: 3 labels


L2SUBM: Chemiluminescent SubstrateL2PWSM: Probe WashL2KPM: Probe Cleaning KitLRXT: Reaction Tubes (disposable)L2ZT: 250 Sample Diluent Test Tubes(16 × 100 mm)L2ZC: 250 Sample Diluent Tube CapsAlso requiredDistilled or deionized water; test tubes.

Assay ProcedureNote that for optimal performance, it isimportant to perform all routinemaintenance procedures as defined in theIMMULITE 2500 Operator's Manual.See the IMMULITE 2500 Operator'sManual for: preparation, setup, dilutions,adjustment, assay and quality controlprocedures.Recommended Adjustment Interval:2 weeks.

Quality Control Samples: Use InsulinControls supplied with the kit.

Expected ValuesThe reference range values weregenerated on the IMMULITE 2000analyzer.

Based on its relationship to IMMULITE2000 Insulin (See Method Comparison 1)IMMULITE 2500 Insulin can be expectedto have essentially the same referencerange.A study performed on 83 fasting,apparently healthy laboratory volunteersyielded a median of 9.3 µIU/mL and alower 95% range of up to 29.1 µIU/mL.Consider these limits as guidelines only.Each laboratory should establish its ownreference ranges.

LimitationsCirculating anti-insulin antibodies are oftenfound in patients who have been treatedwith nonhuman forms of insulin. If present,these antibodies may interfere with theassay.

For individuals who are significantlyoverweight, fasting insulin levels aretypically somewhat higher than for adultsof normal weight.

EDTA plasma has an effect on themeasurement of insulin in theIMMULITE 2500 Insulin procedure.Heterophilic antibodies in human serumcan react with the immunoglobulinsincluded in the assay components causinginterference with in vitro immunoassays.[See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilicantibodies: a problem for allimmunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinelyexposed to animals or animal serumproducts can demonstrate this type ofinterference potentially causing ananomalous result. These reagents havebeen formulated to minimize the risk ofinterference; however, potentialinteractions between rare sera and testcomponents can occur. For diagnosticpurposes, the results obtained from thisassay should always be used incombination with the clinical examination,patient medical history, and other findings.

Performance DataSee Tables and Graphs for datarepresentative of the assay's performance.Results are expressed in µIU/mL. (Unlessotherwise noted, all were generated onserum samples collected in tubes withoutgel barriers or clot-promoting additives.)

The IMMULITE 2500 assay employs thesame reagent and bead formulation asIMMULITE 2000. All performancecharacteristics are equivalent between thetwo platforms.All performance data except MethodComparison 1 were generated on theIMMULITE 2000 analyzer.Conversion Factor:µIU/mL × 1 → mIU/LµIU/mL × 7.217 → pmol/LCalibration Range: up to 300 µIU/mL(WHO NIBSC 1st IRP 66/304).Analytical Sensitivity: 2 µIU/mLHigh-dose Hook Effect: None up to70,000 µIU/mL.

Precision: Samples were assayed induplicate over the course of 20 days, tworuns per day, for a total of 40 runs and 80replicates. (See “Precision” table.)

Linearity: Samples were assayed undervarious dilutions. (See "Linearity" table forrepresentative data.)


Recovery: Samples spiked 1 to 19 withthree insulin solutions (280, 960 and2,000 µIU/mL) were assayed. (See"Recovery" table for representative data.)Specificity: The antibody is specific forinsulin. (See "Specificity" table.)

Alternate Sample Type: To assess theeffect of alternate sample types, bloodwas collected from 20 volunteers into plainglass and plastic serum tubes, plasticheparinized and EDTA tubes, sodiumfluoride and plastic gel barrier tubes(SST®). All tubes were from BectonDickinson. Eight samples were spiked withinsulin to provide values throughout thecalibration range of the assay. All sampleswere assayed by the IMMULITE 2000Insulin procedure, with the followingresults. By linear regression:(Serum Plastic) = 0.99 (Serum Glass) – 0.64 µIU/mLr = 0.999

(Heparin Plastic) = 1.03 (Serum Glass) +1.23 µIU/mLr = 0.999

(SST Plastic) = 1.01 (Serum Glass) + 0.51 µIU/mLr = 0.999

(NaFI Plastic) = 0.88 (Serum Glass) – 7.1 µIU/mLr = 0.995

(EDTA Plastic) = 0.26 (Serum Glass) + 0.48 µIU/mLr = 0.977

Means:106 µIU/mL (Serum Glass)104 µIU/mL (Serum Plastic)110 µIU/mL (Heparin Plastic)108 µIU/mL (SST Plastic)86.4 µIU/mL (NaFI Plastic)27.3 µIU/mL (EDTA Plastic)

EDTA plasma is not suitable for use.Sodium fluoride causes a depression invalues.Bilirubin: Severe icterus (bilirubin up to200 mg/L) may cause a depression ofvalues. (See “Bilirubin” table.)Lipemia: Presence of triglycerides maycause a depression of values. (See“Lipemia” table.)

Method Comparison 1: IMMULITE 2500Insulin was compared to IMMULITE 2000Insulin on 76 samples. (Concentrationrange: approximately 2 to 275 µIU/mL.See graph 1.) By linear regression:(IML 2500) = 1.00 (IML 2000) – 1.5 µIU/mLr = 0.998

Means:32.6 µIU/mL (IMMULITE 2500)34.1 µIU/mL (IMMULITE 2000)

Method Comparison 2: IMMULITE 2000Insulin was compared to DPC'sCoat-A-Count Insulin on 112 patientsamples. (Concentration range:approximately 2 to 77 µIU/mL. Seegraph 2.) By linear regression:(IML 2000) = 0.87 (CAC) + 1.7 µIU/mLr = 0.95

Means:22.4 µIU/mL (IMMULITE 2000)23.6 µIU/mL (Coat-A-Count)

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Technical AssistanceIn the United States, Contact DPC'sTechnical Services department.Tel: 800.372.1782 or 973.927.2828Fax: 973.927.4101. Outside the UnitedStates, contact your National Distributor.Manufactured by EURO/DPC Ltd. under aQuality System registered to ISO 13485:2003.

Tables and Graphs

Precision (µIU/mL)

Within-Run1 Total2

Mean3 SD4 CV5 SD CV

1 7.67 0.42 5.5% 0.56 7.3%

2 12.5 0.50 4.0% 0.62 4.9%

3 17.2 0.57 3.3% 0.71 4.1%

4 26.4 1.04 3.9% 1.32 5.0%

5 100 3.75 3.8% 4.20 4.2%

6 291 10.8 3.7% 15.5 5.3%

Specificity

Compound1Ng/mLAdded2

% Crossreactivity3

C-peptide 1,000 ND

Glucagon 1,000 ND

Pro-insulin 10 8%

ND: Not detectable4.

Linearity (µIU/mL)

Dilution1 Observed2 Expected3 %O/E4

1 8 in 85 149 — —

4 in 8 70.4 74.5 94%

2 in 8 38.5 37.3 103%

1 in 8 20.0 18.6 108%

2 8 in 8 157 — —

4 in 8 69.0 78.5 88%

2 in 8 37.2 39.2 95%

1 in 8 19.9 19.6 101%

3 8 in 8 200 — —

4 in 8 83.4 100 83%

2 in 8 45.6 50.0 91%

1 in 8 25.6 25.0 102%

4 8 in 8 239 — —

4 in 8 102 120 85%

2 in 8 52.2 59.8 87%

1 in 8 30.2 29.9 101%

5 8 in 8 269 — —

4 in 8 124 135 92%

2 in 8 64.0 67.3 95%

1 in 8 37.2 33.6 110%


Recovery (µIU/mL)

Solution1 Observed2 Expected3 %O/E4

1 — 11.8 — —

A 25.2 25.2 100%

B 54.5 59.2 92%

C 99.1 111 89%

2 — 15.6 — —

A 28.2 28.8 98%

B 56.1 62.8 89%

C 94.2 115 82%

3 — 16.4 — —

A 28.6 29.6 97%

B 59.3 63.6 93%

C 101 116 87%

4 — 24.5 — —

A 36.8 37.3 99%

B 64.3 71.3 90%

C 108 123 88%

5 — 27.9 — —

A 39.8 40.5 98%

B 70.5 74.5 95%

C 112 127 89%

6 — 39.8 — —

A 47.5 51.6 92%

B 75.2 85.6 88%

C 115 138 83%

Bilirubin

Conjugated2 Unconjugated3

Unspiked1100mg/L

200mg/L

100mg/L

200mg/L

1 7.6 5.8 5.7 5.5 5.7

2 15.1 12.5 12.8 12.5 11.9

3 20.6 16.4 16.9 16.8 16.4

4 69.1 58.6 55.6 56.8 55.2

5 266 217 209 213 198

Lipemia

TriglyceridesAddedmg/dL Observed1 Expected2 %O/E3

1 — 6.22 — —

1,000 5.32 5.91 90%

2,000 4.96 5.60 89%

3,000 4.28 5.29 81%

2 — 16.5 — —

1,000 13.8 15.7 88%

2,000 12.2 14.9 82%

3,000 10.6 14.0 76%

3 — 24.7 — —

1,000 22.9 23.5 98%

2,000 21.0 22.2 94%

3,000 19.1 21.0 91%

4 — 91.0 — —

1,000 86.9 86.5 101%

2,000 84.7 81.9 103%

3,000 69.8 77.4 90%

5 — 273 — —

1,000 251 259 97%

2,000 220 246 90%

3,000 198 232 85%

Method Comparison 1

0

100

200

300

0 100 200 300

IMMULITE 2000 Insulin, µIU/mL

IMM

ULI

TE 2

500

Insu

lin

(IML 2500) = 1.00 (IML 2000) – 1.5 µIU/mLr = 0.998


Method Comparison 2

0

20

40

60

80

0 20 40 60 80

Coat-A-Count Insulin, µIU/mLIM

MUL

ITE

2000

Insu

lin

(IML 2000) = 0.87 (CAC) + 1.7 µIU/mLr = 0.95

Deutsch. Precision: 1Intra-Assay, 2Gesamt,3Mittelwert, 4S (Standardabweichung), 5CV(Variationskoeffizient). Linearity: 1Verdünnung,2Beobachtet (B), 3Erwartet (E), 4% B/E, 58 in 8.Recovery: 1Lösung, 2Beobachtet (B), 3Erwartet(E), 4% B/E. Specificity: 1Verbindung,2zugesetzte Menge, 3% Kreuzreaktivität, 4NN:Nicht nachweisbar. Bilirubin: 1Ohne Zugabevon, 2Konjugiertes, 2Nichtkonjugiertes. MethodComparison: Insulin: Insülin.

Español. Precision: 1Intraensayo, 2Total,3Media, 4DS, 5CV. Linearity: 1Dilución,2Observado (O), 3Esperado (E), 4%O/E, 58 en 8.Recovery: 1Solución, 2Observado (O),3Esperado (E), 4%O/E. Specificity:1Compuesto, 2Cantidad añadida, 3% Reaccióncruzada, 4ND: no detectable. Bilirubin: 1Sinañadir, 2Conjugada, 2No Conjugado. MethodComparison: Insulin: Insulina.

Français. Precision: 1Intraessai, 2Total,3Moyenne, 4SD, 5CV. Linearity: 1Dilution,2Observé (O), 3Attendu (A), 4%O/A, 58 dans 8.Recovery: 1Solution, 2Observé (O), 3Attendu(A), 4%O/A. Specificity: 1Composé, 2ajouté,3Réaction croisée%. 4ND: non détectable.Bilirubin: 1Non chargés, 2Conjuguée, 2Non-conjuguée. Method Comparison: Insulin:Insuline.

Italiano. Precision: 1Intra-serie, 2Totale, 3Media,4SD (Deviazione Standard), 5CV (Coefficiente diVariazione). Linearity: 1Diluizione, 2Osservato(O), 3Atteso (A), 4%O/A, 58 in 8. Recovery:1Soluzione, 2Osservato (O), 3Atteso (A), 4%O/A.Specificity: 1Composto, 2quantità aggiunta,3Percentuale di Crossreattività, 4ND: nondeterminabile. Bilirubin: 1Semplice, senzaaggiunte, 2Coniugata, 2Non coniugato. MethodComparison: Insulin: Insulina.

Português. Precision: 1Entre-ensaios, 2Total,3Média, 4Desvio padrão, 5Coeficiente devariação. Linearity: 1Diluição, 2Observado (O),3Esperado (E), 4%O/E, 58 em 8. Recovery:1Solução, 2Observado (O), 3Esperado (E),4%O/E. Specificity: 1Composto, 2Quantidadeadicionada, 3Percentagem de reacção cruzada,4ND: não detectável. Bilirubin: 1Não adicionada,

2Conjugada, 2Não Conjugado. MethodComparison: Insulin: Insulina.

Deutsch

IMMULITE 2500 InsulinAnwendung: Zur in vitro-Diagnostik unterVerwendung des IMMULITE 2500Systems – zur quantitativen Bestimmungvon Insulin in Serum oder Heparin-Plasma, für das Disease-Management beiDiabetes.Artikelnummern: L5KIN2 (200 Tests),L5KIN6 (600 Tests)Testcode: INS Farbe: orange

Klinische RelevanzHumanes Insulin ist einPolypeptidhormon, das in den Beta-Zellendes Pankreas gebildet wird und alsRegulator für die Speicherung undProduktion von Kohlehydratenverantwortlich ist. Seine Sekretion wirdnormalerweise durch einen Anstieg derMenge in Zirkulation befindlicher Glukosestimuliert. Dies führt zu höherenInsulinspiegeln und zu schnellererGewebsaufnahme von Glukose, gefolgtvon einem Absinken des Insulinlevelswenn der Glukosespiegel wieder abnimmt.Bei einer Reihe von Erkrankungen,insbesondere bei Insulinom und Diabetesist diese Wechselbeziehung gestört. BeiPatienten mit Insulin-sezernierendenpankreatischen Tumoren zirkuliert Insulinin unangemessen hohen Werten undkönnen somit Ursache vonHypoglykämien sein. Demzufolge spielenInsulin Immunoassays - in Verbindung mitder Verwendung von Provokationsdosenvon Tolbutamit oder Kalcium - einewichtige Rolle bei der Identifizierung (undLokalisierung) von Insulinomen. DasVorliegen einer durch Fasten bedingtenHypoglykamie in Verbindung mit einemunangemessen hohen Serum-Insulin-Spiegel hat diagnostische Bedeutung.

Insulin-Werte fallen nicht unter dieSubklassifizierung für Diabetes, wie sievon der „National Diabetes Data Group“ausgearbeitet wurden. Dennoch sindInsulin-Werte, nach Durchführung eines


Glukose-Toleranztests,von gewissemprognostischem Wert, um den Wert einerInsulintherapie oder der Wahrschein-lichkeit eines Progresses zur Insulin-abhängigkeit und den für Diabetescharakteristischen Komplikationen (wiez.B. einer Retinopathie) vorherzusagen.Die Verwendung von Insulin-Immunoassays bei Patienten unterInsulintherapie ist problematisch durch dieTatsache, dass eine derartige Therapiezur Bildung von anti-Insulin-Antikörpernführt und diese möglicherweise solcheAssays beeinträchtigen können. Ausdiesem Grund haben einigeWissenschaftler nach Möglichkeitengesucht Insulin in Urin oder inSerumproben nach Aufbereitung mittelsSäulenchromatographie oder PEG-Präzipitation zu bestimmen. DieBestimmung von „freiem“ Insulin alsMethode zum Monitoring einerInsulintherapie ist aber nur vonbegrenztem Interesse aufgrund desFehlens von statistischen Angaben zutherapeutischen bzw. toxischenBereichen. Eine Glukosekontrolle beiDiabetikern durch Normalisierung desInsulinprofils kann somit nicht generellbewerkstelligt werden. Darüberhinaus istnicht bekannt, ab welchem Punktabnormal hohe Insulinspiegel für denPatienten gefährlich werden können.

MethodikDer IMMULITE 2500 Insulin ist einFestphasen-, Zweischritt-,Chemilumineszenz-, ImmunometrischerAssay.Inkubation: 60 Minuten.

ProbengewinnungDer Einsatz einer Ultrazentrifuge wird zurKlärung von lipämischen Probenempfohlen.

Bei hämolysierten Proben besteht dieMöglichkeit einer unsachgemäßenHandhabung vor Eintreffen im Labor,daher sind die Ergebnisse zurückhaltendzu interpretieren.EDTA-Röhrchen sollten nicht verwendetwerden.Bei der Abnahme von Proben für dieInsulin-Bestimmung ist Hämolyseunbedingt zu vermeiden, da diese zu

verfälscht niedrigen Ergebnissen führenkann.21,22

Ikterische, lipämische, oder grobkontaminierte Proben können zufehlerhaften Ergebnissen führen.Die Zentrifugation der Serumproben vordem völligen Abschluss der Gerinnungkann zu Fibringerinnseln führen. Umfehlerhaften Analysenergebnissen infolgevon Gerinnseln vorzubeugen, istsicherzustellen, dass die Gerinnung vorder Zentrifugation der Proben vollständigabgeschlossen ist. Insbesondere Probenvon Patienten unter Antikoagulantien-therapie können eine verlängerteGerinnungszeit aufweisen.Blutentnahmeröhrchen von verschiedenenHerstellern können differierende Werteverursachen. Dies hängt von denverwendeten Materialien und Additiven(Gel oder physische Trennbarrieren,Gerinnungsaktivatoren und /oderAntikoagulantien) ab. IMMULITE 2500Insulin ist nicht mit allen möglichenRöhrchenvariationen ausgetestet worden.Details der getesteten Röhrchenarten sinddem Kapitel "Alternative Probenarten" zuentnehmen.Erforderliche Menge: 100 µl Serum oderHeparin-Plasma.Lagerung: 7 Tage bei 2–8°C oder3 Monate bei –20°C.20

Hinweise undVorsichtsmaßnahmenZur In-vitro-Diagnostik.Reagenzien: Bei 2–8°C lagern. UnterEinhaltung der geltenden gesetzlichenVorschriften entsorgen.

Die generell geltendenVorsichtsmaßnahmen sind einzuhaltenund alle Komponenten als potenziellinfektiös zu behandeln. Alle ausmenschlichem Blut gewonnenenMaterialien wurden auf Syphilis,Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2,Hepatitis-B-Oberflächenantigen undHepatitis-C-Antikörper untersucht undnegativ befundet.

Bestimmten Komponenten wurdeNatriumazid (<0,1 g/dl) hinzugefügt. Umdie Bildung von explosiven Metallaziden inBlei- und Kupferrohren zu vermeiden,sollten die Reagenzien nur zusammen mit


großen Wassermengen in die Kanalisationgespült werden.

Chemilumineszenz-Substrat:Kontamination und direkteSonneneinstrahlung vermeiden. SiehePackungsbeilage.

Wasser: Destilliertes oder deionisiertesWasser verwenden.

Im Lieferumfang enthaltenDie Bestandteile sind aufeinanderabgestimmt. Die Aufkleber auf derInnenverpackung werden zurTestdurchführung gebraucht.

Insulin Kugel-Container (L2IN12)Der barcodierte Kugel-Container enthält200 Kugeln, beschichtet mitmonoklonalem Anti-Insulin Antikörpern(Maus). Bei 2–8°C bis zum Verfallsdatumhaltbar.L5KIN2: 1 Container L5KIN6: 3 Container

Insulin Reagenzbehälter (L2INA2)Mit Barcode. Ein Behälter mit 18,5 mlalkalischer Phosphatase(Rinderkalbsdarm) konjugiertespolyklonales Anti-Insulin (Schaf) undalkalischer Phosphatase(Rinderkalbsdarm) konjugiertesmonoklonales Anti-Insulin (Maus) inPufferlösung, mit Konservierungsmittel.Bei 2–8°C bis zum Ablaufdatum haltbar.L5KIN2: 1 Behälter. L5KIN6: 3 Behälter.Vor Gebrauch den Aufkleber an derPerforation abreißen, ohne dabei dieBarcodierung zu beschädigen. Die Folievon der Oberseite des Containersentfernen. Den Schiebedeckel nach untenin die Führung des Reagenziendeckelseinrasten lassen.

Insulin Kalibratoren (LINL, LINH)Zwei Fläschchen (niedrig und hoch) mitlyophilisiertem Insulin in einernichthumanen Serummatrix, mitKonservierungsmittel. Mindestens 30 Min.vor dem Gebrauch die Fläschchen mit je4,0 ml destilliertem oder deionisiertemWasser rekonstituieren. Zum Mischenleicht schwenken oder umdrehen.Aliquotieren und einfrieren. NachRekonstituierung 60 Tage bei–20°C haltbar.L5KIN2: 1 Set. L5KIN6: 2 Sets.

Insulin-Kontrollen (LINC1, LINC2)Zwei Fläschchen mit lyophilisiertem Insulinin einer nichthumanen Serummatrix, mitKonservierungsmittel. Mindestens 30 Min.vor dem Gebrauch die Fläschchen mit je4,0 ml destilliertem oder deionisiertemWasser rekonstituieren. Zum Mischenleicht schwenken oder umdrehen.Aliquotieren und einfrieren. NachRekonstituierung 60 Tage bei–20°C haltbar.L5KIN2: 1 Set. L5KIN6: 2 Sets.Die Konzentrationen entnehmen Sie bitteder Beilage zu den Kontrollen.Vor der Kalibrierung die entsprechendenAufkleber (dem Kit beiliegend) aufRöhrchen kleben, so dass die Barcodesvom Barcode Reader des Systemsgelesen werden können.

Separat erhältliche Testsystem-Komponenten

Insulin–Verdünnungspuffer (L2INZ)Zur on-board Verdünnung von Probenhoher Konzentration. Enthält 25 ml einerInsulin-freien nicht humanen Serum-Matrix(mit Konservierungsmittel). Lagerung: 30Tage (nach Öffnen) bei 2–8°C oder 6Monate bei –20°C (portioniert).Zum Einsatz des Verdünnungsreagenz(Diluents) werden Barcode Etikettenmitgeliefert. Vor Verwendung einentsprechendes Etikett so auf ein16x100 mm Teströhrchen kleben, dass esvom eingebauten Barcode Readergelesen werden kann.L2INZ: 3 EtikettenL2SUBM: Chemilumineszenz-SubstratmodulL2PWSM: WaschmodulL2KPM: ReinigungsmodulLRXT: Einweg-ReaktionsgefäßeL2ZT: 250 Teströhrchen (16 × 100 mm)für die ProbenverdünnungL2ZC: 250 Röhrchenverschlüsse für dieProbenverdünnung

Ebenfalls benötigtDestilliertes bzw. deionisiertes Wasser;Teströhrchen.

TestdurchführungFür eine optimale Funktion des Gerätes istunbedingt zu beachten, dass dieWartungen, wie im IMMULITE 2500-


Handbuch beschrieben, regelmäßigdurchgeführt werden.

Hinweise zur Vorbereitung, täglichenInbetriebnahme des Systems, derKalibrierung sowie Verfahren zur Test-und Qualitätskontrolle entnehmen Sie bittedem IMMULITE 2500-Handbuch.Empfohlenes Kalibrationsintervall:2 Wochen.Proben zur Qualitätskontrolle: Die imLieferumfang enthaltenen Kontrolle(n)verwenden.

ReferenzwerteDie Referenzbereiche wurden mit demIMMULITE 2000 System bestimmt.Basierend auf der Übereinstimmung mitdem IMMULITE 2000 Insulin Assay derDPC (siehe Methodenvergleich 1) kann fürden IMMULITE 2500 Insulin Assay imWesentlichen von übereinstimmendenReferenzwerten ausgegangen werden.

Im Rahmen einer Studie anhand von 83nüchternen gesunden Probanden wurdeein Median von 9,3 µIU/ml, bei einemunteren 95% Vertrauensbereich bis zu29,1 µIU/ml ermittelt.Diese Grenzwerte sind lediglich alsRichtlinien aufzufassen. Jedes Laborsollte seine eigenen Referenzbereicheetablieren.

Grenzen der MethodePatienten, die mit nicht-humanen-InsulinPräparationen therapiert wurden, zeigenhäufig zirkulierende Anti-Insulin-Antikörper. Diese Insulin-Antikörperkönnen mit dem Immunoassayinterferrieren und die Messung stören.Bei stark übergewichtigen Personenwerden im Allgemeinen etwas höhereNüchtern-Insulinspiegel gefunden als beinormalgewichtigen Erwachsenen.Die Verwendung von EDTA Plasmaverfälscht die Bestimmung von Insulin mitdem IMMULITE 2500 Insulin Assay.Heterophile Antikörper in Humanserenkönnen mit Immunglobulinen aus denAssaykomponenten reagieren undInterferenzerscheinungen bei in vitroImmunoassays verursachen. (Clin. Chem.1988:34:27-33) Proben von Patienten, diehäufig mit Tier- bzw. Tierserumprodukten

zu tun haben, können die erwähntenInterferenzen verursachen und zuanomalen Resultaten führen. Dieverwendeten Reagenzien sind sokonzipiert, dass das Risiko einerInterferenz mit den zu messenden Probenminimiert ist. Dennoch können potentiellInteraktionen zwischen seltenen Serenund den Testkomponenten auftreten. Zudiagnostischen Zwecken sollten die mitdem Assay erhaltenen Ergebnisse immerin Kombination mit der klinischenUntersuchung, der Patientenanamneseund anderen Befunden gesehen werden.

LeistungsdatenSiehe Tabellen und Grafiken mitrepräsentativen Daten für den Assay. DieErgebnisse sind als µIU/ml ausgedrückt.(Alle Daten wurden – sofern nicht andersangegeben – aus Serumproben inRöhrchen ohne Gelbarrieren odergerinnungsfördernde Zusätze gewonnen.)Der IMMULITE 2500 verwendet diegleichen Reagenzien und Kugeln wie derIMMULITE 2000. Dadurch ist dieAssaycharakteristik auf beiden Systemengleichwertig.

Alle Leistungsdaten, mit Ausnahme desMethodenvergleichs 1, wurden auf demIMMULITE 2000 System generiert.Umrechnungsfaktor:µIU/ml × 1 → mIU/lµIU/ml × 7,217 → pmol/lMessbereich: Bis 300 µIU/ml(WHO NIBSC 1st IRP 66/304).Analytische Sensitivität: 2 µIU/mlHigh-Dose-Hook-Effect:Bis 70 000 µIU/ml keiner.

Präzision: Proben wurden innerhalb von20 Tagen mit jeweils zwei Testansätzen inDoppelbestimmung gemessen (insgesamt40 Bestimmungen und 80Einzelmessungen. (Siehe Tabelle“Precision.“)Linearität: Proben wurden inverschiedenen Verdünnungen getestet.(Siehe Tabelle ”Linearity” fürrepräsentative Daten.)Wiederfindung: Proben wurden mit 3Insulin-Lösungen (280, 960 und2 000 µIU/ml) im Verhältnis 1:19 versetzt.(Siehe Tabelle "Recovery" fürrepräsentative Daten).


Spezifität: Der Assay ist spezifisch fürInsulin. (Siehe Tabelle ”Specificity”.)

Alternative Probenarten: Um den Effektverschiedener Probenarten abzuschätzenwurde Blut von 20 freiwilligen Spendern inGlas- und Plastik-Serumröhrchengesammelt. Zusätzlich wurden Plastik, -Heparin, -EDTA, Natriumfluorid und -Geltrennröhrchen (SST) verwendet. AlleRöhrchen wurden von Becton Dickinsonbezogen. Acht Proben wurden mit Insulinversetzt, um Konzentrationen über dengesamten Kalibrationsbereich des Assayszu erhalten. Alle Proben wurden mit demIMMULTE 2000 Insulin Assay mit dennachfolgend aufgeführten Ergebnissenbestimmt. Durch lineare Regression:(Serum Plastik) = 0,99 (Serum Glas) – 0,64 µIU/mlr = 0.999

(Heparin Plastik) = 1,03 (Serum Glas) + 1,23 µIU/mLr = 0,999

(SST Plastik) = 1,01 (Serum Glas) + 0,51 µIU/mlr = 0,999

(NaFI Plastik) = 0,88 (Serum Glas) – 7,1 µIU/mlr = 0,995

(EDTA Plastik) = 0,26 (Serum Glas) + 0,48 µIU/mlr = 0,977

Mittelwerte:106 µIU/ml (Serum Glas)104 µIU/ml (Serum Plastik)110 µIU/ml (Heparin Plastik)108 µIU/ml (SST Plastik)86,4 µIU/ml (NaFI Plastik)27,3 µIU/ml (EDTA Plastik)

EDTA-Plasma ist nicht zum Einsatz indiesem Assay geeignet. Natriumfluoriddrückt die Werte.Bilirubin: Stark ikterische Proben(Bilirubin bis zu 200 mg/l) können zu einerErniedrigung der Werte führen (sieheTabelle „Bilirubin“).Lipämie: Das Vorliegen von Triglyceridenkann eine Erniedrigung der Werteverursachen. (siehe Tabelle “Lipemia“)Methodenvergleich 1: Der IMMULITE2500 Insulin Assay wurde unterVerwendung von 76 Patientenproben mitdem IMMULITE 2000 Insulin Assay derDPC verglichen. (Konzentrationsbereichca. 2 –275 µIU/ml. Siehe Grafik 1.)Berechnung der linearen Regression:(IML 2500) = 1,00 (IML 2000) – 1,5 µIU/mlr = 0,998

Mittelwerte:32,6 µIU/ml (IMMULITE 2500)34,1 µIU/ml (IMMULITE 2000)

Methodenvergleich 2: Der IMMULITE2000 Insulin Assay wurde unterVerwendung von 112 Patientenproben mitdem Coat-A-Count Insulin Assay der DPCverglichen. (Konzentrationsbereich ca. 2 –77 µIU/ml. Siehe Grafik 2.) Berechnungder linearen Regression:(IML 2000) = 0,87 (CAC) + 1,7 µIU/mlr = 0,95

Mittelwerte:22,4 µIU/ml (IMMULITE 2000)23,6 µIU/ml (Coat-A-Count)

AnwendungsberatungBei Rückfragen wenden Sie sich bitte anIhre DPC Niederlassung.Hergestellt von Euro/DPC Ltd. unter demQualitätssystem ISO 13485:2003.

Español

InsulinaUtilidad del análisis: Para el diagnósticoin vitro con el Analizador IMMULITE 2500— para la medición cuantitativa deinsulina en suero o en plasmaheparinizado, para el seguimiento de ladiabetes.

Números de Catálogo:L5KIN2 (200 tests), L5KIN6 (600 tests)Código del Test: INS Color: Naranja

Resumen y Explicacióndel TestLa insulina humana es una hormonapolipeptídica producida por las célulasbeta del páncreas y cuya función es ser elprincipal regulador del almacenamiento yla producción de hidratos de carbono. Susecreción se estimula por un aumento dela cantidad de glucosa en sangre,produciendo niveles más altos de insulinay más asimilación de la glucosa por partede los tejidos, seguido de un descenso delnivel de insulina al mismo tiempo quedisminuye el nivel de glucosa.En muchas situaciones, especialmente encasos de insulinoma y diabetes, estarelación se deteriora. La insulina tiende acircular a niveles inadecuadamenteelevados en pacientes con tumorespancreáticos que segregan insulina, por lo


que dichos tumores pueden provocarhipoglucemia; por consiguiente, losinmunoensayos de insulina — a vecesempleados junto con dosis provocadorasde tolbutamida o calcio — desempeñanun papel fundamental en la identificación(y localización) de insulinomas. Elhallazgo de hipoglucemia en estado deayunas asociado con una concentraciónde insulina en suero inadecuadamenteelevada se considera diagnóstico.

Los niveles de insulina no figuran en lasubclasificación de diabetes elaboradapor el National Diabetes Data Group(Grupo Nacional de Datos sobre laDiabetes). Sin embargo, cuando seobtienen en el transcurso de un análisisde tolerancia a la glucosa, parecen teneralgún valor pronóstico para predecir losbeneficios de la terapia de insulina y laprobabilidad de progresión para ladependencia de insulina y complicaciones(tales como la retinopatía) característicasde la diabetes.La aplicación de inmunoensayos deinsulina a pacientes que ya esténsiguiendo una terapia con insulina secomplica, porque esta terapia provoca laformación de anticuerpos anti-insulina quepueden interferir con el ensayo. Algunosinvestigadores han conseguido medirmuestras de insulina en la orina o ensuero sometidas a cromatografía encolumna o a una precipitación PEG. Perola medición de la insulina "libre" tiene uninterés limitado como técnica paracontrolar la terapia de insulina ante laausencia de datos estadísticos queestablezcan intervalos terapéuticos otóxicos. Por lo general, parece que elcontrol de la glucosa en los diabéticos nopuede lograrse normalizando el perfil deinsulina. Tampoco se sabe a partir de quépunto los niveles elevados de insulina sevuelven peligrosos.

Principio del análisisIMMULITE 2500 Insulina es un ensayoinmunométrico con dos sitios de unión,quimioluminiscente en fase sólida.Incubación: 60 minutos.

Recogida de la muestraSe recomienda el uso de unaultracentrífuga para aclarar las muestraslipémicas.

Las muestras hemolizadas podrían indicaruna mala manipulación de la muestraantes de ser recibida por el laboratorio; eneste caso, los resultados debeninterpretarse con precaución.

Los tubos con EDTA no deben utilizarseen el ensayo de insulina deIMMULITE 2500.En la toma de muestras para ladeterminación de insulina, es muyimportante evitar la hemólisis, que puedeconllevar resultados extremadamentebajos.21, 22

Las muestras ictéricas, lipémicas, oampliamente contaminadas pueden darresultados erróneos.La centrifugacion de las muestras desuero antes de que se forme el coágulopuede ocasionar la presencia de fibrina.Para evitar resultados erróneos debidos ala presencia de fibrina, asegurarse que seha formado el coágulo completamenteantes de centrifugar las muestras.Algunas muestras, particularmenteaquellas de pacientes sometidos a terapiaanticoagulante, pueden requerir mayortiempo de coagulación.Los tubos para recoger sangre dedistintos fabricantes pueden producirvalores diferentes, dependiendo delmaterial del tubo y de los aditivos,incluyendo barreras de gel o barrerasfísicas, activadores de la coagulación y/oanticoagulantes. El kit de InsulinaIMMULITE 2500 no ha sido analizado contodos los distintos tipos de tubos. Paraobtener detalles sobre los tipos tubos quese han analizado, consulte la sección deTipos de Muestras Alternativos.

Volumen requerido: 100 µl suero oplasma heparinizado.Conservación: 7 días a 2–8°C, o3 meses a –20°C.20

Advertencias y PrecaucionesPara uso diagnóstico in vitro.Reactivos: Mantener a 2–8°C. Desecharde acuerdo con las normas aplicables.

Siga las precauciones universales ymanipule todos los componentes como sifueran capaces de transmitir agentesinfecciosos. Los materiales derivados desangre humana han sido analizados y sonnegativos para sífilis; para anticuerpos


frente al HIV 1 y 2; para el antígeno desuperficie de hepatitis B y para losanticuerpos de hepatitis C.Se ha usado Azida sódica, enconcentraciones menores de 0,1 g/dl,como conservante. Para su eliminación,lavar con grandes cantidades de aguapara evitar la constitución de residuos deazidas metálicas, potencialmenteexplosivas, en las cañerías de cobre yplomo.Substrato quimioluminiscente: Evitar lacontaminación y exposición a la luzdirecta del sol. (Ver el prospecto).Agua: Use agua destilada o desionizada.

Materiales SuministradosLos componentes representan un juegocompleto. Las etiquetas incluidas en lacaja son necesarias para el ensayo.

Cartucho de bolas de insulina (L2IN12)Con códigos de barras. 200 bolas,recubiertas de anticuerpos monoclonalesmurinos anti-insulina. Estable a 2–8°Chasta la fecha de caducidad.L5KIN2: 1 cartucho.L5KIN6: 3 cartuchos.

Vial de reactivo de insulina (L2INA2)Con códigos de barras. 18,5 ml defosfatasa alcalina (de intestino de ternera)conjugada con anticuerpos policlonales deoveja anti-insulina y fosfatasa alcalina (deintestino de ternera) conjugada conanticuerpos monoclonal de ratón anti-insulina en solución tampón, conconservante. Estable a 2–8°C hasta lafecha de caducidad.L5KIN2: 1 vial. L5KIN6: 3 viales.

Antes de usar, desprender la etiquetasuperior que cubre la perforación, sindañar el código de barras. Quitar elprecinto del orificio del vial; encajar lacubierta deslizante en las rampas de latapa del reactivo.

Ajustadores de insulina (LINL, LINH)Dos viales (bajo y alto) de insulinaliofilizada en una matriz sérica nohumana, con conservante. 30 minutosantes de su uso, como mínimo,reconstituya cada vial añadiendo 4,0 mlde agua destilada o desionizada. Mezclepor agitación o inversión suave. Alicuotary congelar: estable a –20°C durante 60

días tras su reconstitución.L5KIN2: 1 juego. L5KIN6: 2 juegos.

Control de la insulina (LINC1, LINC2)Dos viales de insulina liofilizada en unamatriz sérica no humana, conconservante. 30 minutos antes de su uso,como mínimo, reconstituya cada vialañadiendo 4,0 ml de agua destilada odesionizada. Mezcle por agitación oinversión suave. Alicuotar y congelar:estable a –20°C durante 60 días tras sureconstitución.L5KIN2: 1 juego. L5KIN6: 2 juegos.

Consulte los niveles de concentración enel prospecto del control.Antes de procesar adjustadores ocontroles, colocar las etiquetas a lasalícuotas apropiadas (suministradas conel kit) sobre tubos de ensayo, de forma talque los códigos de barras puedan serleídos por el lector.

Componentes del kit que sesuministran por separado

Diluyente de Insulina (L2INZ)Para la dilución de muestras de altaconcentración dentro del equipo. 25 ml deuna matriz libre de insulina de suero nohumano (lista para usar), conconservante. Estable 30 dias entre 2–8°C(después de abrir) o 6 meses (alicuotado) a–20°C.

Se suministran etiquetas con códigos debarras para usarse con este diluyente.Antes de uso, colocar la etiqueta con elcódigo de barras en un tubo de ensayo de16 × 100 mm, así los códigos de barraspueden ser identificados por el lector delinstrumento.L2INZ: 3 etiquetas

L2SUBM: Substrato quimioluminiscenteL2PWSM: Lavado de sondaL2KPM: Kit de limpieza de sondaLRXT: Tubos de reacción (desechables)L2ZT: 250 Tubos De Prueba DelDiluyente De la Muestra (16 × 100 mm)L2ZC: 250 Casquillos Del Tubo DelDiluyente De la MuestraTambién necesarioAgua destilada o desionizada; tubos deensayo.


EnsayoAviso: para obtener el funcionamientoóptimo, es importante realizar todos losprocedimientos del mantenimiento generalsegún lo definido en el manual deloperador de IMMULITE 2500.

Ver el Manual del OperadorIMMULITE 2500 para: preparación,inicialización, diluciones, ajuste, ensayo yprocedimientos de control de calidad.

Intervalo de ajuste recomendado:2 semanas.Muestras de Control de calidad: Use loscontroles suministrados junto con el kit.

Valores EsperadosEl rango de valores normales fuegenerado con el analizador IMMULITE2000.

Basado en su relación con el kit InsulinaIMMULITE 2000 (ver comparación demétodos 1), se espera que el kit InsulinaIMMULITE 2500 tenga esencialmente losmismos valores de normalidad.Un estudio realizado con 83 voluntariosaparentemente sanos y en ayunas, diouna media de 9,3 µIU/ml y un intervalo dereferencia inferior al 95% de los sujetos,hasta 29,1 µIU/ml.Estos límites han de considerarse sólocomo una guía. Cada Laboratorio deberáestablecer sus propios rangos dereferencia.

LimitacionesA menudo, se encuentran anticuerposanti-insulina circulantes en los pacientestratados con formas de insulina nohumanas, interfiriendo en el análisis.En los individuos con un exceso de pesosignificativo, los niveles de insulina enayunas suelen ser algo más altos que enlos adultos de peso normal.El plasma EDTA tiene efecto en lamedición de la insulina en el ensayo deinsulina de IMMULITE 2500.

Los anticuerpos heterofílicos en el suerohumano pueden reaccionar con lasinmunoglobulinas de los componentes delensayo provocando interferencias con losinmunoanálisis in vitro. [Ver Boscato LM,Stuart MC. Heterophilic antibodies: aproblem for all immunoassays. Clin Chem

1988:34:27-33.] Las muestras de lospacientes que frecuentemente estánexpuestos a animales o a productosséricos animales pueden presentar estetipo de interferencia que potencialmenteocasione un resultado anómalo. Estosreactivos han sido formulados paraminimizar el riesgo de interferencia, noobstante, pueden darse interaccionesanómalas entre sueros conflictivos y loscomponentes del ensayo. Con fines dediagnóstico, los resultados obtenidos coneste ensayo siempre deben ser usados encombinación con el examen clínico, lahistoria médica del paciente y cualquierotro dato clínico relevante.

Características AnalíticasPara ver resultados representativos de lascualidades del ensayo ver las tablas y losgráficos. Los resultados se expresanen µIU/ml. (A no ser que se indique locontrario, todos los resultados fuerongenerados en muestras de suerorecogidas en tubos sin geles oactivadores de la coagulación).El IMMULITE 2500 usa la mismaformulación de reactivos y bolas que elIMMULITE 2000. Todas las carcaterísticasanalíticas son equivalentes en las dosplataformas.

Todos los datos excepto Comparación deMétodos 1 fueron generados con elanalizador IMMULITE 2000.Factor de Conversión:µIU/ml × 1 → mIU/lµIU/ml × 7,217 → pmol/lIntervalo de calibración: Hasta300 µIU/ml (WHO NIBSC 1st IRP 66/304).Sensibilidad: 2 µIU/mlEfecto Gancho a altas dosis: Ningunohasta 70 000 µIU/ml

Precisión: Las muestras fueronprocesadas por duplicado durante 20 días,en dos tandas de trabajo por día, para untotal de 40 tandas y 80 replicados. (Ver latabla "Precision.")

Linealidad: Las muestras fueronanalizadas en varias diluciones. (Ver latabla de “Linearity” para resultadosrepresentativos.)Recuperación: Se sobrecargaron yfueron ensayadas las muestras 1 a 19 con


tres concentraciones de insulina (280, 960y 2 000 µIU/ml). (Ver la tabla de"Recovery".)Especificidad: El ensayo es específicopara insulina (Ver la tabla de “Specificity”).Tipo de Muestra Alternativa: Para ver elefecto de muestras alternativas, serecogieron muestras sanguíneas de 20voluntarios en tubos de vidrio, de plástico,de plástico heparinizados, tubos conEDTA, fluoruro sódico y tubos con gelesde barrera (SST®). Todos los tubos erande la casa Becton Dickinson. Ochomuestras fueron sobrecargadas conInsulina para obtener valores a lo largo detodo el rango de calibración del ensayo.Todas las muestras fueron analizadas conel procedimiento Insulina IMMULITE 2000,con los siguientes resultados. Porregresión lineal:(Suero Plástico) = 0,99 (Suero Cristal) – 0,64 µIU/mlr = 0.999

(Heparina Plástico) = 1,03 (Suero Cristal) +1,23 µIU/mLr = 0,999

(SST Plástico) = 1,01 (Suero Cristal) + 0,51 µIU/mlr = 0,999

(NaFI Plástico) = 0,88 (Suero Cristal) – 7,1 µIU/mlr = 0,995

(EDTA Plástico) = 0,26 (Suero Cristal) + 0,48 µIU/mlr = 0,977

Medias:106 µIU/ml (Suero Cristal)104 µIU/ml (Suero Plástico)110 µIU/ml (Heparina Plástico)108 µIU/ml (SST Plástico)86,4 µIU/ml (NaFI Plástico)27,3 µIU/ml (EDTA Plástico)

El plasma EDTA no es apropiado para suuso. Fluoruro sódico causa una bajada delos valores.

Bilirrubina: La ictericia severa (bilirrubinapor encima de 200 mg/l) puede causardisminución de los valores. (Véase latabla "Bilirubin").

Lipemia: Puede causar una bajada de losvalores. (Véase la tabla "Lipemia").Comparación de los métodos 1: ElIMMULITE 2500 Insulin se ha comparadocon el IMMULITE 2000 Insulin de DPC en76 muestras de pacientes. (Intervalo deconcentración: aproximadamente 2 a275 µIU/ml. Ver la gráfico 1). Porregresión lineal:(IML 2500) = 1,00 (IML 2000) – 1,5 µIU/mlr = 0,998

Medias:32,6 µIU/ml (IMMULITE 2500)34,1 µIU/ml (IMMULITE 2000)

Comparación de los métodos 2: ElIMMULITE 2000 Insulin se ha comparadocon el Coat-A-Count Insulina en 112muestras de pacientes. (Intervalo deconcentración: aproximadamente de 2 a77 µIU/ml. Véase el gráfico 2). Porregresión lineal:(IML 2000) = 0,87 (CAC) + 1,7 µIU/mlr = 0,95

Medias:22,4 µIU/ml (IMMULITE 2000)23,6 µIU/ml (Coat-A-Count)

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IMMULITE 2500 InsulineDomaine d'utilisation : Dosagequantitatif de l'insuline dans le sérum ou leplasma hépariné. Ce test est réservé à unusage diagnostic in vitro avec l'AnalyseurIMMULITE 2500 et constitue une aide ausuivi du diabète.Référence catalogue : L5KIN2 (200 tests),L5KIN6 (600 tests)

Code produit : INS.Code couleur : orange.

IntroductionL'insuline humaine est une hormonepolypeptidique produite dans les cellules βdu pancréas. Elle est la principalehormone de régulation du stockage et dela production des carbohydrates. Sasécrétion est normalement stimulée parl'augmentation de la concentration deglucose dans le sang. Cette dernièreconduit à une concentration plus élevéed'insuline et à une assimilation plus rapidedu glucose par les tissus – suivie par undéclin de la concentration d'insulinependant que la glycémie diminue.Dans certaines conditions, notammentl'insulinome et les diabètes, cet équilibreest rompu. L'insuline a tendance à circuler


à des concentrations trop élevées chez lespatients atteints de tumeurs pancréatiquesinsulino-sécrétantes ; de telles tumeurspeuvent être ainsi la caused'hypoglycémie. Aussi, lesimmunodosages de l'insuline – utilisésquelques fois avec des doses stimulantesde tolbutamide ou de calcium – jouent-ilsun rôle essentiel dans l'identification (et lalocalisation) des insulinomes. Unehypoglycémie à jeun associée à uneconcentration en insuline sériqueanormalement élevée établit le diagnostic.Les concentrations en insuline ne figurentpas dans la sous-classification desdiabètes établie par le National DiabetesData Group. Néanmoins, les résultatsobtenus lors d'un test de tolérance auglucose paraissent avoir une valeurpronostique pour présager des bienfaitsd'une insulino-thérapie, de la possibilitéd'évolution vers une insulino-dépendanceet du risque de complicationscaractéristiques des diabètes (telles que larétinopathie).

L'utilisation d'immunodosages pourl'insuline chez des patients déjà soumis àune insulino-thérapie est compliquée parle fait qu'une telle thérapie conduittypiquement à la formation d'anticorpsanti-insuline pouvant interférer avec ledosage. Certains chercheurs ont alorstenté de doser l'insuline dans l'urine oudans des échantillons sériques soumis àune chromatographie sur colonne ou àune précipitation PEG. Mais le dosage del'insuline libre reste d'un intérêt limitécomme technique de suivi de l'insulino-thérapie en l'absence de statistiques surles domaines thérapeutique ou toxique.Actuellement, il apparaît que le glucosechez les diabétiques ne peut pas êtrecontrôlé en normalisant le profil del'insuline. A ce jour, on ne sait pas nonplus à quel niveau des concentrationsanormalement élevées d'insuline peuventêtre dangereuses.

Principe du testIMMULITE 2500 Insuline est un dosagechimiluminescent immunométrique,double site, en phase solide.Incubation : 60 minutes.

Recueil des échantillonsIl est recommandé de clarifier leséchantillons hyperlipémiques parultracentrifugation.Des échantillons hémolysés peuvent êtrerévélateurs d'une préparation inadéquatedu prélèvement avant son envoi aulaboratoire ; il faudra donc interpréter lesrésultats avec prudence.Les tubes EDTA ne doivent pas êtreutilisés avec la méthode IMMULITE 2500Insuline.Lors du prélèvement d'échantillons pourdes dosages d'insuline, il est importantd'éviter l'hémolyse qui peut donner desrésultats faussement abaissés.21,22

Des échantillons ictériques, lipémiques, oufortement contaminés peuvent donner desrésultats érronés.La centrifugation des échantillonssériques avant la formation complète ducaillot peut entraîner la présence defibrine. Pour éviter les résultats erronésdûs à la présence de fibrine, s'assurer dela formation complète du caillot avant decentrifuger les échantillons. Certainséchantillons, en particulier ceux provenantde patients sous anti-coagulants, peuventnécessiter un temps plus long pour laformation du caillot.

Des tubes pour prélèvements sanguinsprovenant de fabricants différents peuventdonner des résultats différents, selon lesmatériaux et additifs utilisés, y comprisgels ou barrières physiques, activateursde la coagulation et/ou anticoagulants. Lecoffret IMMULITE 2500 Insuline n'a pasété testé sur tous les types de tubespossibles. Veuillez consulter le chapitreintitulé Autres Types d'Échantillons pourplus de renseignements sur les tubes quiont été évalués.Volume nécessaire : 100 µl de sérum oude plasma hépariné.Conditions de conservation :7 jours à +2°C/+8°C ou 3 mois à –20°C.20

Précautions d'emploiRéservé à un usage diagnostique in vitro.

Réactifs : conserver les réactifs à +2°/+8°C. Eliminer les déchets conformémentà la réglementation en vigueur.


Respecter les précautions d'emploi etmanipuler tous les composants du coffretcomme des produits potentiellementinfectieux. Les réactifs dérivés de produitshumains et utilisés dans ce coffret ont subiun test sérologique pour la Syphilis et destests de dépistage pour les anticorpsanti-VIH1 et 2, anti-VHC et pour l'antigènede surface de l'hépatite B, qui se sont tousavérés négatifs.De l'azide de sodium à des concentrationsinférieures à 0,1 g/dl a été ajouté commeconservateur ; lors de l'élimination,l'évacuer avec de grandes quantités d'eaupour éviter une accumulation d'azidesmétalliques explosifs dans lescanalisations.Substrat chimiluminescent : éviter toutecontamination et l'exposition directe à lalumière solaire (voir la fiche technique).

Eau : utiliser uniquement de l'eau distilléeou désionisée.

Matériel fourniLes composants de la trousse ne peuventêtre utilisés que conjointement. Lesétiquettes à l'intérieur du coffret sontnécessaires au dosage.

Cartouche de billes Insuline (L2IN12)Avec code-barres. 200 billes revêtues d'unanticorps monoclonal murin anti-insuline.Stable à +2°C/+8°C jusqu'à la date depéremption.L5KIN2: 1 cartoucheL5KIN6: 3 cartouches.

Cartouche-réactif Insuline (L2INA2)Avec code-barres. 18,5 ml dephosphatase alcaline (intestins de veau)conjuguée à un anticorps polyclonal demouton anti-insuline et de phosphatasealcaline (intestins de veau) conjuguée àun anticorps monoclonal murin anti-insuline dans un tampon, avecconservateur. Stable à +2°C/+8°C jusqu'àla date de péremption.L5KIN2: 1 cartoucheL5KIN6: 3 cartouches.Avant l'emploi, retirer la partie supérieurede l'étiquette au niveau des perforationsen ayant soin de ne pas endommager lecode-barres. Retirer le film protecteursitué sur la partie supérieure de lacartouche-réactif ; insérer le couvercle

coulissant entre les glissières sur ledessus de la cartouche-réactif.

Ajusteurs Insuline (LINL, LINH)2 flacons ("bas" et "haut") d'insulinelyophilisée dans une matrice de sérumnon humain, avec conservateur. Au moins30 minutes avant utilisation, reconstituerchaque flacon avec 4,0 ml d'eau distilléeou désionisée. Mélanger doucement.Aliquoter et congeler: stable à –20°Cpendant 60 jours après reconstitution.L5KIN2: 1 jeu L5KIN6: 2 jeux

Contrôle Insuline (LINC1, LINC2)Deux flacons d'insuline lyophilisée dansune matrice de sérum non-humain, avecconservateur. Au moins 30 minutes avantutilisation, reconstituer chaque flacon avec4,0 ml d'eau distillée ou désionisée.Mélanger doucement. Aliquoter etcongeler: stable à –20°C pendant 60 joursaprès reconstitution.L5KIN2:1 jeu. L5KIN6: 2 jeux.Se reporter à la fiche technique ducontrôle pour les concentrations.

Avant d'effectuer une calibration ou depasser des contrôles, placer les étiquettescorrespondant à l'aliquot (fournies avec lecoffret) sur des tubes en verre de sorteque les code-barres soient lisibles par lelecteur.

Composants du coffret fournisséparément

Diluant échantillon Insuline (L2INZ)Pour la dilution à bord des échantillons deconcentration élevée. 25 ml de matrice(prête à l'emploi) de sérum non humain,avec conservateur concentrée sansinsuline. Stable à +2°C/+8°C pendant 30jours après ouverture ou 6 mois (aliquoté) à–20°C.Les étiquettes à code-barres sont fourniesavec le Diluant. Avant utilisation, placerl'étiquette appropriée sur un tube de16x100 mm de façon que le code-barrepuisse être lu par le lecteur de l'appareil.L2INZ : 3 étiquettes

L2SUBM : Substrat chimiluminescentL2PWSM : Solution de lavageL2KPM : Coffret de décontamination del'aiguille de prélèvementLRXT : Godets réactionnels (jetables)L2ZT : 250 Tubes À essai De Diluant


échantillon (16 × 100 mm)L2ZC : 250 Bouchons pour tubes dediluantsEgalement requisEau distillée ou désionisée ; tubes à essai

Protocole de dosageNoter que pour des performancesoptimales, il est important de réalisertoutes les procédures de maintenance deroutine selon les instructions du Manueld'Utilisation IMMULITE 2500.

Se reporter au manuel d'utilisation del'IMMULITE 2500 pour : la préparation, ledémarrage du système, les ajustements,le dosage et les procédures de contrôlede qualité.

Intervalle d'ajustement recommandé :2 semaines.Echantillons pour le contrôle de qualité :utiliser le(s) contrôle(s) Insuline fournisavec le coffret.

Valeurs de référenceLes valeurs de référence ont été obtenuesavec l'automate IMMULITE 2000.Compte tenu de la corrélation avec le testIMMULITE 2000 Insuline de DPC (voirComparaison de Méthodes 1), le testIMMULITE 2500 Insuline présente lesmêmes valeurs de référence.Une étude réalisée sur 83 volontaires àjeun, apparemment en bonne santé, adonné une médiane de 11,4 µUI/ml et undomaine de référence bas à 95% jusqu'à29,1 µUI/ml.

Utiliser ces valeurs à titre indicatifuniquement. Chaque laboratoire devraitétablir ses propres valeurs de référence.

LimitesDes anticorps anti-insuline circulants sontsouvent trouvés chez des patients ayantété traités par des formes non-humainesd'insuline. Dans un tel cas, ces anticorpspeuvent interférer avec le dosage.Pour les individus ayant un surpoidssignificatif, les concentrations d'insuline àjeun sont typiquement légèrement plusélevées que pour des adultes de poidsnormal.

Le plasma EDTA a un effet sur le dosagede l'insuline avec la méthodeIMMULITE 2500 Insuline.Les anticorps hétérophiles du sérumhumain peuvent réagir avec lesimmunoglobulines faisant partie descomposants du coffret et interférer avecles immunodosages in vitro. [Voir BoscatoLM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: aproblem for all immunoassays. Clin Chem1988:34:27-33.] Les échantillonsprovenant de patients fréquemmentexposés aux animaux ou aux produitssériques d'origine animale peuventprésenter ce type d'interférence pouvantpotentiellement donner un résultatanormal. Ces réactifs ont été mis au pointafin de minimiser le risque d'interférence,cependant des interactions potentiellesentre des sérums rares et les composantsdu test peuvent se produire. Dans un butdiagnostique, les résultats obtenus avecce dosage doivent toujours être utilisés enassociation avec un examen clinique,l'histoire médicale du patient et d'autresrésultats.

Performances du testConsulter les tableaux et graphiques pourobtenir les données représentatives desperformances du test. Les résultats sontdonnés en µUI/ml. (En l'absence deprécision supplémentaire, tous lesrésultats ont été obtenus sur deséchantillons sériques prélevés sur tubessans gel, ni activateur de la coagulation).L'IMMULITE 2500 utilise, pour les réactifset les billes, la même composition quel'IMMULITE 2000. Toutes lescaractéristiques des performances sontéquivalentes entre les deux plateformes.Tous les résultats de performance àl'exception de la Comparaison deméthode 1 ont été obtenus avecl'automate IMMULITE 2000Facteur de conversion :µUI/ml × 1 → mUI/lµUI/ml × 7,217 → pmol/lDomaine de mesure : jusqu'à 300 µUI/ml(WHO NIBSC 1st IRP 66/304).Sensibilité analytique : 2 µUI/mlEffet-crochet aux doses élevées:aucune jusqu'à 70 000 µUI/ml.


Précision : les échantillons sont dosés enduplicata sur une période qui s'étend sur20 jours, avec deux séries par jours, soit40 séries et 80 replicata au total. (Voir letableau “ Precision “.)

Linéarité : les échantillons ont été testésavec des taux de dilution variés. (Voir letableau “ Linearity ” pour des donnéesreprésentatives.)

Récupération: les échantillons testés ontété chargés dans un rapport de 1 à 19avec trois solutions d'insuline (280, 960 et2 000 µUI/ml). (Voir le tableau“ Recovery ” pour des donnéesreprésentatives.)Spécificité : le test est spécifique del'insuline (Voir le tableau “ Specificity ”.)Autres types d'échantillons: Afin dedéterminer l'effet que peuvent avoird'autres types d'échantillons, du sang de20 volontaires a été prélevé sur tubessecs en verre et en plastique, sur tubes enplastique héparinés et EDTA, fluorure desodium et sur tubes en plastique avec gelséparateur (SST®). Tous ces tubesproviennent de chez Becton Dickinson.Huit échantillons ont été surchargés enInsuline afin d'obtenir des valeurs dans ledomaine de mesure du dosage. Tous leséchantillons ont été dosés avec leprotocole IMMULITE 2000 Insuline et ontdonné les résultats suivants. Parrégression linéaire :(Sérum, plastique) = 0,99 (Sérum, verre) –0,64 µUI/mlr = 0,999

(Héparine, plastique) = 1,03 (Sérum, verre) +1,23 µUI/mlr = 0,999

(SST, plastique) = 1,01 (Sérum, verre) + 0,51 µUI/mlr = 0,999

(NaFI plastique) = 0,88 (Sérum, verre) – 7,1 µUI/mlr = 0,995

(EDTA, plastique) = 0,26 (Sérum, verre) +0,48 µUI/mlr = 0,977

Moyennes:106 µUI/ml (Sérum, verre)104 µUI/ml (Sérum, plastique)110 µUI/ml (Héparine, plastique)108 µUI/ml (SST, plastique)86,4 µUI/ml (NaFI plastique)27,3 µUI/ml (EDTA, plastique)

Le plasma EDTA ne convient pas àl'emploi. Fluorure de sodium occasionnentune diminution des valeurs mesurées.

Bilirubine : Un ictère sévère (bilirubinejusqu'à 200 mg/l) peut causer unediminution des valeurs. (Voir le tableau“ Bilirubin “.)Lipémie : peut entrainer une baisse desvaleurs. (Voir le tableau “ Lipemia “.)

Comparaison de méthodes 1 : le testIMMULITE 2500 Insuline a été comparéau dosage IMMULITE 2000 Insuline deDPC sur 76 échantillons (intervalle deconcentrations : 2 à 275 µUI/ml environ.Voir graphique 1). Par régression linéaire :(IML 2500) = 1,00 (IML 2000) – 1,5 µUI/mlr = 0,998

Moyennes:32,6 µUI/ml (IMMULITE 2500)34,1 µUI/ml (IMMULITE 2000)

Comparaison de méthodes 2 : le testIMMULITE 2000 Insuline a été comparéau test Coat-A-Count Insuline de DPC sur112 échantillons (dont les concentrationsallaient d'environ 2 à 77 µUI/ml. Voirgraphique 2). Par régression linéaire :(IML 2000) = 0,87 (CAC) + 1,7 µUI/mlr = 0,95

Moyennes:22,4 µUI/ml (IMMULITE 2000)23,6 µUI/ml (Coat-A-Count)

Assistance techniqueEn France distribué par DPC France 90bd National 92257 La Garenne-Colombes.Fabriqué par EURO/DPC Ltd. dans le cadre d'unSystème Qualité enregistré sousISO 13485:2003.

Italiano

InsulinaUso: Ad uso diagnostico in vitro conl'analizzatore IMMULITE 2500 — per lamisurazione quantitativa dell'insulina nelsiero e nel plasma erparinizzato, per lagestione di pazienti affetti da diabete.Codice: L5KIN2 (200 test),L5KIN6 (600 test)Codice del Test: INS Colore: Arancione


Riassunto e spiegazione delTestL'insulina umana è un ormonepolipeptidico originato nelle cellule betadel pancreas che regola la conservazionee la produzione dei carboidrati. La suasecrezione è normalmente stimolata daaumenti nella quantità di glucosio incircolo, il che porta a livelli d'insulina piùelevati e ad un'assimilazione più rapidadel glucosio da parte dei tessuti – cui faseguito una diminuzione del livellod'insulina conseguente alla diminuzionedel livello di glucosio.In alcune condizioni, principalmentel'insulinoma ed il diabete, questo rapportorisulta alterato. L'insulina tende a circolarea livelli impropriamente elevati in pazienticon tumori pancreatici che secernonoinsulina; per questo motivo questi tumoripossono essere causa di ipoglicemia.Pertanto, i dosaggi di insulina – utilizzati avolte in associazione a dosi stimolanti ditolbutamide o calcio — esercitano un ruoloessenziale nell'identificazione (e nellalocalizzazione) degli insulinomi. Lascoperta di ipoglicemia da digiuno inassociazione ad una concentrazione diinsulina nel siero impropriamente alta èconsiderata diagnostica.I livelli di insulina non rientrano nellasottoclassificazione del diabete preparatadal National Diabetes Data Group.Nonostante ciò, quando questeinformazioni vengono ottenute durante untest di tolleranza del glucosio, sembranoavere un valore prognostico nel precorrerei vantaggi della terapia con insulina e nelleprobabilità di progressione verso ladipendenza da insulina e verso lecomplicazioni (come la retinopatia) chesono caratteristiche del diabete.

L'utilizzo del dosaggio dell'insulina inpazienti già trattati con terapia insulinica ècomplicata dal fatto che tipicamentequesta terapia porta alla formazione dianticorpi anti-insulina capaci di interferirecon il dosaggio. Per questo motivo alcuniricercatori hanno tentato di misurarel'insulina nell'urina, o in campioni di sierosottoposti a cromatografia o precipitazionePEG. Ma la misurazione dell'insulina“libera” rimane di interesse limitato qualetecnica utilizzata per monitorare la terapiainsulinica in assenza di statistiche chestabiliscano range terapeutici o di

tossicità. Sino ad oggi sembra che ilcontrollo del glucosio nel diabete nonpossa essere raggiunto normalizzando ilprofilo dell'insulina. Inoltre non si sa aquale punto i livelli d'insulinaanormalmente alti diventino pericolosi.

Principio del MetodoIMMULITE 2500 Insulina è un dosaggioimmunometrico in chemiluminescenza infase solida a doppio sito.Incubazione: 60 minuti.

Raccolta del CampioneSi consiglia l'utilizzo di un'ultracentrifugaper schiarire i campioni lipemici.

I campioni emolizzati posson indicare iltrattamento non idoneo del campioneprima dell'arrivo al laboratorio; per questomotivo, i risultati devono essereinterpretati con prudenza.Le provette EDTA non dovrebberoessere utilizzate nel procedimentoIMMULITE 2500 per l'insulina.

Nel prelievo dei campioni per ladeterminazione dell'insulina, è importanteevitare l'emolisi che può provocare risultatierroneamente bassi.21,22

I campioni itterici, lipemici, ogrossolamente contaminati possonoprodurre risultati errati.La centrifugazione dei campioni del sieroprima che la coagulazione sia completapuò produrre fibrina. Per evitare risultatierrati dovuti alla presenza di fibrina,assicurarsi che il processo dicoagulazione sia completo prima dicentrifugare i campioni. Alcuni campioni,in modo particolare quelli di pazientisottoposti a terapia con anticoagulanti,possono richiedere tempi di coagulazionepiù lunghi.Provette per il prelievo di sangue diproduttori diversi possono dare valoridifferenti, a seconda dei materiali e degliadditivi usati, incluso gel o barriere fisiche,attivatori di coaguli e/o anticoagulanti.L'IMMULITE 2500 Insulina non é statoverificato con tutte le possibili variazioni ditipi di provette. Consultare la sezioneriguardante Campioni Alternativi perdettagli sulle provette testate.Volume richiesto: 100 µL di siero o diplasma eparinizzato.


Conservazione: 7 giorni a 2–8°C o3 mesi a –20°C.20

Avvertenze e PrecauzioniAd uso diagnostico in vitro.

Reagenti: Conservare i reagenti a 2–8°C.Eliminare in conformità alle leggi vigenti.Seguire le precauzioni generali emanipolare tutti i componenti come sefossero potenzialmente infetti. I materialiderivati dal sangue umano sono statitestati con esito negativo per la sifilide, glianticorpi anti-HIV 1 e 2, l'Antigene diSuperficie dell'Epatite B e gli anticorpiAnti-Epatite C.E' stata aggiunta Sodio Azide aconcentrazioni inferiori a 0,1 g/dL comeconservante. Al momentodell'eliminazione, irrorare con molta acquaper evitare la formazione di azidimetalliche potenzialmente esplosive nelletubature di piombo e di rame.Substrato Chemiluminescente: Evitarela contaminazione e l'esposizione alla lucesolare diretta. (Vedi metodica.)

Acqua: Utilizzare solo acqua distillata odeionizzata.

Materiali FornitiI componenti costituiscono un unico set.Le etichette all'interno della confezionesono necessarie per eseguire i dosaggi.

Contenitore di Sferette Insulina(L2IN12)Con codice a barre. 200 sferette coattatecon un anticorpo monoclonale murino anti-insulina. Stabile a 2–8°C fino alla data discadenza.L5KIN2: 1 confezioneL5KIN6: 3 confezioni

Porta Reagente Insulina (L2INA2)Con codice a barre. 18,5 mL di fosfatasialcalina (intestino di vitello) coniugata conun'anticorpo policlonale di pecora anti-insulina e fosfatasi alcalina (intestino divitello) coniugata con una anticorpomonoclonale murino anti-insulina in untampone, con conservanti. Stabile a 2–8°C fino alla data di scadenza.L5KIN2: 1 Porta ReagenteL5KIN6: 3 Porta Reagenti

Prima dell'utilizzo rimuovere la partesuperiore dell'etichetta lungo laperforazione senza danneggiare il codicea barre. Togliere il foglio protettivo dallaparte superiore del flacone. Far scattarenella corretta posizione il coperchioscorrevole lungo le guide del coperchiodel reagente.

Calibratori Insulina (LINL, LINH)Due flaconi (uno basso ed uno alto), coninsulina liofila in una matrice di siero nonumano, con conservanti. Almeno 30 minutiprima dell'uso, ricostituire ogni flaconeaggiungendo 4,0 mL di acqua distillata odeionizzata. Mescolare agitando oinvertendo delicatamente. Aliquotare econgelare: stabile a –20°C per 60 giornidopo la ricostituzione.L5KIN2: 1 set. L5KIN6: 2 set.

Controlli insulina (LINC1, LINC2)Due flaconi di insulina liofila in una matricedi siero non umano, con conservanti.Almeno 30 minuti prima dell'uso,ricostituire ogni flacone aggiungendo4,0 mL di acqua distillata o deionizzata.Mescolare agitando o invertendodelicatamente. Aliquotare e congelare:stabile a –20°C per 60 giorni dopo laricostituzione.L5KIN2: 1 set L5KIN6: 2 set.Fare riferimento alla metodica dei controlliper i livelli della concentrazione.Prima di calibrare o di eseguire i controllicollocare le etichette giuste sulle aliquote(fornite col kit) sulle provette cosicché icodici a barre possano essere registratidal lettore.

Componenti del kit fornitiseparatamente

Diluente Insulina (L2INZ)Per la diluizione interna di campioni adelevata concentrazione. 25 mL di unamatrice di siero non umano, conconservanti concentrato (pronto all'uso)privo di insulina. Conservazione: 30 giorni(dopo l'apertura) a 2–8°C o per 6 mesi(aliquotato) a –20°C.Vengono fornite le etichette con i codici abarre da utilizzarsi con il diluente. Primadell'utilizzo, collocare un'etichettaappropriata su una provetta 16 x 100 mmcosicchè i codici a barre possano essere


letti dal lettore internoL2INZ: 3 etichette

L2SUBM: Substrato ChemiluminescenteL2PWSM: Tampone di lavaggio dell'AgoL2KPM: Kit di Pulizia dell'AgoLRXT: Tubi di Reazione (monouso)L2ZT: 250 Provette (16 x 100 mm) perDiluente del CampioneL2ZC: 250 Tappini per Provette perDiluente del CampioneMateriali richiestiAcqua distillata o deionizzata; Provette.

Procedura del DosaggioAttenzione: per avere prestazioni ottimali,è importante effettuare le procedure dimanutenzione di routine così comedefinito nel Manuale dell'Operatoredell'IMMULITE 2500.Consultare il Manuale d'UsoIMMULITE 2500 per: preparazione, messaappunto, calibrazione, dosaggio eprocedure di controllo di qualità.Intervallo di Calibrazione Consigliato:2 settimane.

Campioni di Controllo di Qualità:Utilizzare i controlli forniti con il kit.

Valori AttesiI valori del range di riferimento sono statigenerati utilizzando l'analizzatoreIMMULITE 2000.

Sulla base del suo rapporto con ilDosaggio DPC IMMULITE 2000 insulina(Vedi Comparazione di Metodi 1), ci siattende che il dosaggio IMMULITE 2500insulina abbia essenzialmente gli stessirange di riferimento.Uno studio effettuato su 83 volontari adigiuno in apparente buono stato di saluteha prodotto una mediana di 9,3 µIU/mL edun range di riferimento piú bassa del 95%,fino a 29,1 µIU/mL.Detti valori dovrebbero essere consideratisolo come suggerimento. Ogni laboratoriodovrebbe stabilire i propri range diriferimento.

LimitiAnticorpi anti-insulina in circolo sonospesso riscontrati in pazienti trattati conforme non umane di insulina. Se sono

presenti, questi anticorpi possonointerferire con il dosaggio.

Per individui particolarmente insovrappeso, i livelli di insulina durante ildigiuno sono tipicamente superiori ai livellidegli adulti di peso normale.

Il plasma EDTA ha un effetto sullamisurazione dell'insulina nel dosaggioIMMULITE 2500 Insulina.Gli anticorpi eterofili presenti nel sieroumano possono reagire con leimmunoglobuline presenti nellecomponenti del dosaggio provocandoun'interferenza con gli immunodosaggi invitro. [Vedi Boscato LM, Stuart MC.Heterophilic antibodies: a problem for allimmunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Campioni di pazienti routinariamenteesposti agli animali o a prodotti derivati dasiero di animali possono presentarequesto tipo di interferenza causapotenziale di risultati anomali. Questireagenti sono stati formulati perminimizzare il rischio di interferenze,tuttavia, possono verificarsi interazionipotenziali tra sieri rari e componenti deltest. A scopo diagnostico, i risultati ottenutida questo dosaggio devono sempreessere utilizzati unitamente all'esameclinico, all'anamnesi del paziente e adaltre indagini di laboratorio.

Prestazioni del DosaggioVedi tavole e grafici per datirappresentativi. I risultati sono indicatiin µIU/mL. (Laddove non diversamentespecificato, tutti i dati sono stati generatisu campioni di siero raccolti in provettesenza gel separatore o additivi chefavoriscano la formazione di coaguli.)

L'IMMULITE 2500 utilizza gli stessireagenti e la stessa formulazione dellesferette dell'IMMULITE 2000. Tutte lecaratteristiche delle prestazioni sonoequivalenti tra le due piattaforme.Tutti i dati relativi alle prestazioni eccettoquelli della Comparazione di Metodi 1sono stati generati utilizzandol'analizzatore IMMULITE 2000.Fattore di Conversione:µIU/mL × 1 → mIU/LµIU/mL × 7,217 → pmol/L


Range di calibrazione: Fino a300 µIU/mL (WHO NIBSC 1st IRP66/304).Sensibilità analitica: 2 µIU/mLEffetto Aggancio per Dosi Elevate:Nessuno fino a 70 000 µIU/mL.Precisione: I campioni sono stati elaboratiin doppio da 20 giorni, due esecuzioni algiorno, per un totale di 40 esecuzioni e 80ripetizioni. (Vedere la tabella “Precision.”)Linearità: Sono stati dosati campioni invarie forme diluite. (Vedi la Tabella"Linearity" per dati rappresentantivi.)

Recupero: i campioni sono stati diluiti1:19 con tre soluzioni di insulina (280, 960e 2 000 µIU/mL). (Vedi tabella di"Recovery" per dati rappresentativi.)

Specificità: L'anticorpo è specifico perl'insulina (Vedere la tabella “Specificity”).Tipo di Campione Alternativo: Pervalutare l' effetto di campioni alternativi, éstato raccolto del sangue proveniente da20 volontari in provette per siero di vetrosemplice, di plastica, di plasticaeparinizzata, EDTA, fluoruro di sodio e diplastica a barriera di gel (SST®). Tutte leprovette erano di Becton Dickinson. Ottocampioni sono stati diluiti con Insulina perottenere valori lungo tutto il range dicalibrazione del dosaggio. Tutti i campionisono stati dosati con la proceduraIMMULITE 2000 Insulina ottenendo iseguenti risultati. Mediante regressionelineare:(Plastica per Siero) = 0,99 (Vetro per Siero) –0,64 µIU/mLr = 0,999

(Plastica Eparina) = 1,03 (Vetro per Siero) +1,23 µIU/mLr = 0,999

(Plastica SST) = 1,01 (Vetro per Siero) +0,51 µIU/mLr = 0,999

(NaFI Plastica) = 0,88 (Vetro per Siero) –7,1 µIU/mLr = 0,995

(Plastica EDTA) = 0,26 (Vetro per Siero) +0,48 µIU/mLr = 0,977

Valore Medio:106 µIU/mL (Vetro per Siero)104 µIU/mL (Plastica per Siero)110 µIU/mL (Plastica Eparina)108 µIU/mL (Plastica SST)86,4 µIU/mL (NaFI Plastica)27,3 µIU/mL (Plastica EDTA)

Il plasma EDTA non è idoneo per l'uso.Fluoruro di sodio causa una depressionedei valori.Bilirubina: L'ittero grave (bilirubina fino a200 mg/L) può causare una diminuzionedei valori. (Vedere la tabella “Bilirubin”.)

Lipemia: può causare un decremento deivalori. (Vedere la tabella “Lipemia”.)Comparazione di Metodi 1: Il IMMULITE2500 Insulina è stata paragonataall'IMMULITE 2000 Insulina della DPC in76 campioni. (Range di concentrazione:da circa 2 a 275 µIU/mL. Vedi grafico 1.)Mediante regressione lineare:(IML 2500) = 1,00 (IML 2000) – 1,5 µIU/mLr = 0,998

Valore Medio:32,6 µIU/mL (IMMULITE 2500)34,1 µIU/mL (IMMULITE 2000)

Confronto di Metodi 2: l'IMMULITE 2000Insulin è stato comparato al dosaggioCoat-A-Count Insulina della DPC in 112campioni. (Range di concentrazione: da 2a 77 µIU/mL circa. Vedi grafico 2.)Mediante regressione lineare:(IML 2000) = 0,87 (CAC) + 1,7 µIU/mLr = 0,95

Valore Medio:22,4 µIU/mL (IMMULITE 2000)23,6 µIU/mL (Coat-A-Count)

Assistenza TecnicaAll'estero: Si prega di contattare il proprioDistributore DPC Nazionale.Prodotto dalla EURO/DPC Ltd. nell'ambito di unSistema di Qualità Certificato ISO 13485:2003.

Português

InsulinaUtilização: Para diagnósticos in vitro parainsulina, em soro ou plasmaheparinizados, em conjunto com oAnalisador IMMULITE 2500, para ocontrolo da diabetes.Números de catálogo:L5KIN2 (200 testes), LKIN6 (600 testes)

Código do teste: INSCor: Laranja


Sumário e explicação do testeA Insulina humana é uma hormonapolipeptica originária das células beta dopâncreas que actua como reguladoraprincipal do armazenamento e produçãode hidratos de carbono. A sua secreção énormalmente estimulada pelo aumento daquantidade de glicose em circulação. Istoconduz a níveis de insulina mais altos e àassimilação mais rápida de glicose portecido— seguida por um declínio no nívelde insulina, à medida que o nível deglicose decresce.

Em condições variadas, especialmenteinsulinoma e diabetes, esta relaçãoenfraquece. A insulina tende a circular aníveis inadequadamente altos, emdoentes com tumores pancreáticos comsecreção de insulina; tais tumores podemportanto ser a causa de hipoglicémia.Desta forma, imunoensaios de insulina —utilizados por vezes em conjunto comdoses provocativas de tolbutamida oucálcio — possuem uma função essencialna identificação (e localização) deinsulinomas. A descoberta dehipoglicémia, em jejum, em associaçãocom uma concentração de insulina emsoro, inadequadamente alta, édiagnóstica.Os níveis de insulina não aparecem nasub-classificação de diabetesestabelecida pelo Grupo Nacional deDados de Diabetes. Contudo, quandoobtidos no decorrer de um teste detolerância de glicose, parecem encerraralgum valor prognóstico, na previsão dasvantagens da terapia com insulina, e naprobabilidade da progressão para adependência de insulina e dascomplicações características (tais comoretinopatia) de diabetes.A aplicação do imunoensaio de insulina adoentes já em tratamento por terapia deinsulina, complica-se pelo facto de elacausar, tipicamente, a formação deanticorpos anti-insulina, capazes deinterferir com o doseamento. Por essemotivo, alguns pesquisadores procurarammedir a insulina na urina, ou em amostrasde soro submetidas a cromatografia decoluna ou precipitação PEG. Mas amedição da insulina “livre”, tem aindainteresse limitado como técnica demonitorização de terapia de insulina, porfalta de estatísticas para o

estabelecimento de valores terapêuticosou tóxicos. Até agora é possível que ocontrolo da glicose em diabetes, em geral,não possa ser realizado pelanormalização do perfil de insulina.Também não se tem conhecimento doponto em que níveis, anormalmente altos,de insulina se tornam perigosos.

Princípio do ProcedimentoA Insulina IMMULITE 2500 é um ensaioimunométrico em fase sólida,quimioluminescente, de duas voltas.Incubação: 60 minutos.

ColheitaRecomenda-se o uso de uma ultracentrífuga para clarear amostraslipémicas.

Amostras hemolisadas podem indicartratamento incorrecto de uma amostraantes do envio para o laboratório; portantoos resultados devem ser interpretadoscom cuidado.Tubos de EDTA não devem ser usadosno procedimento de InsulinaIMMULITE 2500.

Na colheita de amostras para determinara insulina, é importante evitar hemólise, aqual pode conduzir a resultadosdemasiadamente baixos.21,22

Amostras ictéricas, lipémicas, outotalmente contaminadas podem causarresultados errados.A centrifugação de amostras de soroantes da formação completa do coágulopode resultar na presença de fibrina. Paraprevenir resultados erróneos, devido àpresença de fibrina, certifique-se que aformação do coágulo se completou, antesda centrifugação das amostras. Algumasamostras, em especial as de doentessubmetidos a terapia anti-coagulante,podem requerer um maior tempo deformação do coágulo.Os tubos para colheita sanguínea, defabricantes diferentes, podem originarvalores diferentes, dependendo dosmateriais e aditivos, incluíndo gel oubarreiras fisicas, activadores do coáguloe/ou anti-coagulantes. O IMMULITE 2500Insulina não foi ainda testado com todasas possiveis variações originadas pelostipos de tubos. Consultar a secção “Tipos


de Amostras Alternativas”, para obterdetalhes sobre os tubos testados.

Volume de amostra: 100 µL de soro ouplasma heparinizados.Estabilidade: 7 dias a 2–8° C, ou3 meses a –20°C.20

PrecauçõesPara uso de diagnóstico in vitro.Reagentes: Manter a 2–8° C. Elimine deacordo com as normas aplicáveis.

Manipule com as devidas precauçõestodos os materiais capazes de transmitirdoenças infecciosas. As matérias-primasobtidas de soro humano foram testadas,dando resultados negativos para a sífilis,para os anticorpos do vírus daimunodeficiência humana (HIV) 1 e 2;para o antigénio de superfície da hepatiteB (HBsAg) e para os anticorpos do vírusda hepatite C.Azida de sódio foi adicionada comoconservante; para evitar acumulações deazidas metálicas explosivas emcanalizações de cobre e alumínio, osreagentes devem ser rejeitados no esgotoapenas se estiverem diluídos e foremlavados com grandes volumes de água.Substrato quimioluminescente: Evitecontaminação e exposição directa à luz(ver bula).Água: Utilize água destilada oudesionizada.

Materiais fornecidosOs componentes formam um conjunto unoe indivisível. Os códigos de barras nointerior das caixas são necessários para oensaio.

Embalagem de esferas de Insulina(L2IN12)Com código de barras. Contém 200esferas revestidas com anticorpomonoclonal de rato anti-insulina. Estávelaté a data limite de validade a 2–8°C.L5KIN2: 1 embalagem.L5KIN6: 3 embalagens

Embalagem de Reagente de Insulina(L2INA2)Com código de barras. Contém 18,5 mLde fosfatase alcalina (de intestino debovino) conjugado com anticorpo

policlonal de carneiro anti-insulina efosfatase alcalina (de intestino de bovino)conjugado com anti-insulina monoclonalde rato, tamponizada, com conservante.Estável até a data de validade a 2–8°C.L5KIN2: 1 embalagem.L5KIN6: 3 embalagens.Antes de utilizar, retire a etiqueta deprotecção da tampa deslizante; levante atampa, tire o resto da etiqueta comcuidado para não danificar o código debarras. Remova o selo de alumínio docimo da embalagem, encaixe a tampadeslizante nas ranhuras e verifique sedesliza.

Ajustes de Insulina (LINL, LINH)Contém dois frascos (nível alto e baixo)de insulina liofilizada em matriz de soronão-humano, com conservante. Pelomenos 30 minutos antes de usar,reconstitua cada frasco com 4,0 mL deágua destilada ou desionizada. Misturepor inversão, com movimentos lentos.Divida em alíquotas e congele: Estávelpor 60 dias a –20° C após reconstituição.L5KIN2: 1 conjuntoL5KIN6: 2 conjuntos.

Controlos de Insulina (LINC1, LINC2)Dois frascos com concentraçõesdiferentes de insulina liofilizada numamatriz de soro não-humano, comconservante. Pelo menos 30 minutosantes de usar, reconstitua cada frascocom 4,0 mL de água destilada oudesionizada. Misture por inversão, commovimentos lentos. Divida em alíquotas econgele: Estável por 60 dias a –20° Capós reconstituição.L5KIN2: 1 conjunto.L5KIN6: 2 conjuntos

Consulte a literatura inclusa para obter osníveis de concentração.Antes de realizar qualquer ajuste, coloqueas etiquetas de alíquota apropriadas(fornecidas com o "kit") em tubos deamostra de forma que os códigos debarras possam ser lidos pelo dispositivode leitura do aparelho.


Componentes do kit fornecidosseparadamente

Diluente de amostra para Insulina(L2INZ)Para diluição de amostras no aparelho.25 mL de matriz de soro não-humano,com conservante concentrado, seminsulina, pronto a usar. Estabilidade: 30dias (após abrir) a 2–8° C ou 6 meses (emalíquotas) a –20°C.São fornecidas etiquetas de código debarras, para usar com o diluente. Antes deusar, colocar a etiqueta apropriada numtubo de teste (16 × 100 mm), de modo aque o código de barras possa ser lido pelodispositivo de leitura do aparelho.L2INZ: 3 etiquetasL2SUBM: Substrato quiomioluminescenteL2PWSM: Solução de lavagemL2KPM: Kit de limpeza do pipetadorLRXT: Tubos de reacção (descartáveis)L2ZT: 250 Tubos de diluente da amostra(16 x 100 mm)L2ZC: 250 Tampas para tubos de diluenteda amostraTambém necessários:Água destilada ou desionizada; tubos deamostra.

Procedimento de doseamentoTer em atenção que para obter umdesempenho óptimo, é importanteefectuar todos os procedimentos rotineirosde manutenção, conforme indicado no"Manual do Operador" do IMMULITE2500.

Ver o manual do operador do SistemaIMMULITE 2500 para instruções sobrepreparação, ajuste, doseamento eprocedimentos de controlo de qualidade.Intervalo entre ajustes aconselhável:2 semanas.

Amostras de controlo de qualidade:Utilize os controlos fornecidos com o kit.

Valores de ReferênciaA gama de valores de referência foi obtidano sistema IMMULITE 2000.Baseado na sua relação com o kit deInsulina IMMULITE 2000 da DPC (verComparação do Método 1), pode-seesperar que o kit de Insulina IMMULITE

2500 tenha os mesmos valores dereferência.

Um estudo realizado com 83 voluntários,aparentemente saudáveis, e que nãoestavam em jejum, forneceu os seguintesresultados: Mediana 9,3 µIU/mL e umafaixa de referência de 95% mais reduzidaaté 29,1 µIU/mL.Estes valores devem ser consideradosapenas como directrizes. Cada laboratóriodeve estabelecer os seus própriosvalores.

LimitaçõesEncontram-se frequentemente anti-corposcirculantes anti-insulina, em doentes queforam tratados sob formas não-humanasde insulina. Caso presentes, estes anti-corpos podem interferir com odoseamento.

Para indivíduos muito obesos, os níveisde insulina, em jejum, são ligeiramentesuperiores aos de adultos com pesonormal.

O plasma com EDTA tem efeito nodoseamento de insulina noIMMULITE 2500.Os anti-corpos heterofílicos no sorohumano, podem reagir com asimunoglobulinas presentes no ensaio,causando interferência nos imunoensaiosin vitro. [Ver Boscato LM, Stuart MC.Heterophilic antibodies: a problem for allimmunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] As amostras de doentesfrequentemente expostas a animais ouprodutos ou soros de animais podemdemonstrar este tipo de interferência,potencial causadora de resultadosanómalos. Estes reagentes foramformulados para minimizar o risco deinterferência, contudo podem ocorrerpotenciais interacções entre soros (raros)e componentes do teste. Para fins dediagnóstico, os resultados obtidos nesteensaio devem ser sempre analisados emcombinação com o exame clínico, históriaclínica do doente e outros resultadoscorrelacionavéis.

Características do EnsaioConsultar os dados representativos dodesempenho do doseamento, nas tabelase gráficos. Os resultados sãoapresentados em µIU/mL. Salvo


referência em contrário, todos os dadosprovêm de amostras de soro colhidas emtubos sem anticoagulantes, barreiras degel ou aditivos promotores da coagulação.O IMMULITE 2500 utiliza o mesmo tipo dereagente e esferas que o IMMULITE2000. O desempenho é equivalente emambos os sistemas.Todos os dados do desempenho, exceptoa Comparação de Métodos 1, foramobtidos com o sistema IMMULITE 2000.Factor de conversão:µIU/mL × 1 → mIU/LµIU/mL × 7,217 → pmol/LCalibração: Até 300 µIU/mL (WHONIBSC 1st IRP 66/304).Sensibilidade Analítica: 2 µIU/mL

Efeito Hook de Alta Dose:Nenhum até 70 000 µIU/mL.Precisão: Amostras foram processadasem duplicado num período de 20 dias, doisensaios por dia, perfazendo um total de 40ensaios e 80 réplicas. (Consulte a tabela“Precisão.”)Linearidade: As amostras foramdoseadas sob vários níveis de diluição.(Ver a tabela de "Linearidade" para dadosrepresentativos.)Recuperação: Às amostras foramadicionadas (na relacção de 1 para 19)três soluções de insulina (280, 960 e2 000 µIU/mL) que se testaram. (Ver a“Tabela de Recuperação para dadosrepresentativos".)Especificidade: O anticorpo é específicopara insulina. (Veja tabela de"Especificidade".)

Tipo de amostras alternativas: Paraavaliar o efeito de tipos de amostrasalternativas, foi colhido sangue de 20voluntários em tubos secos de vidro eplástico, tubos heparinizados, com EDTA,fluoreto de sódio e tubos plásticos combarreiras de gel (SST®). Todos os tubossão da marca Becton Dickinson. A oitoamostras se adicionou Insulina, de modoa obter valores situados dentro dacalibração do ensaio. Todas as amostrasforam ensaiadas pelo métodoIMMULITE 2000 Insulina, com osseguintes resultados. Regressão linear:

(Soro em Plástico) = 0,99 (Soro em Vidro) –0,64 µIU/mLr = 0,999

(Heparina em Plástico) = 1,03 (Soro em Vidro) +1,23 µIU/mLr = 0,999

(SST em Plástico) = 1,01 (Soro em Vidro) +0,51 µIU/mLr = 0,999

(NaFI em Plástico) = 0,88 (Soro em Vidro) –7,1 µIU/mLr = 0,995

(EDTA em Plástico) = 0,26 (Soro em Vidro) +0,48 µIU/mLr = 0,977

Means:106 µIU/mL (Soro em Vidro)104 µIU/mL (Soro em Plástico)110 µIU/mL (Heparina em Plástico)108 µIU/mL (SST em Plástico)86,4 µIU/mL (NaFI em Plástico)27,3 µIU/mL (EDTA em Plástico)

Não se deve usar o plasma EDTA. Ofluoreto de sódio causa uma depressãodos valores.

Bilirrubina: A icterícia grave (bilirrubinaaté 200 mg/L) pode causar umadepressão dos valores. (Consulte a tabela“Bilirubin” (Bilirrubina)Lipémia: A presença de triglicerídeospode causar uma depressão dos valores.(Consulte a tabela “Lipemia”Comparação de Métodos 1: OIMMULITE 2500 Insulin foi comparado aoInsulin IMMULITE 2000 da DPC em 76amostras de doentes. (Zona de trabalho:aproximadamente 2 a 275 µIU/mL.Consulte o gráfico 1.) Regressão linear:(IML 2500) = 1,00 (IML 2000) – 1,5 µIU/mLr = 0,998

Médias:32,6 µIU/mL (IMMULITE 2500)34,1 µIU/mL (IMMULITE 2000)

Comparação de Métodos 2: O InsulinIMMULITE 2000 foi comparado ao Kit deInsulin Coat-A-Count da DPC em 112amostras de doentes. (Zona de trabalho:aproximadamente 2 a 77 µIU/mL Consulteo gráfico 2.) Regressão linear:(IML 2000) = 0,87 (CAC) + 1,7 µIU/mLr = 0,95

Médias:22,4 µIU/mL (IMMULITE 2000)23,6 µIU/mL (Coat-A-Count)


Assistência TécnicaPor favor contacte o seu DistribuidorNacional.Fabricado pela EURO/DPC Ltd. de acordo como Sistema de Qualidade registado segundo anorma ISO 13485:2003.

Glyn RhonwyLlanberis, Gwynedd LL55 4ELUnited Kingdom

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Insulin · monitoring insulin therapy in the absence of statistics establishing therapeutic or toxic ranges. So far it appears that glucose control in diabetics cannot in