6
Êëèíè÷åñêèé îïûò 70 Êëåòî÷íàÿ òðàíñïëàíòîëîãèÿ è òêàíåâàÿ èíæåíåðèÿ Òîì III, ¹ 1, 2008 Ñîãëàñíî ñîâðåìåííûì ïðåäñòàâëåíèÿì, âîññòàíîâëå- íèå ïîâðåæäåííûõ òêàíåé è îðãàíîâ âçðîñëîãî îðãàíèçìà îñóùåñòâëÿåòñÿ ïðè ó÷àñòèè íèçêîäèôôåðåíöèðîâàííûõ èëè ñòâîëîâûõ êëåòîê. Îñíîâíûì èñòî÷íèêîì ñòâîëîâûõ êëå- òîê ÿâëÿåòñÿ êîñòíûé ìîçã, ñïîñîáíûé ãåíåðèðîâàòü êëåòêè- ïðåäøåñòâåííèêè äëÿ áîëüøîãî ÷èñëà òêàíåé îðãàíèçìà.  ýêñïåðèìåíòàõ íà æèâîòíûõ áûëà ïîêàçàíà âîçìîæíîñòü ñòèìóëÿöèè ðåãåíåðàöèè ïå÷åíè àóòîãåííûìè ñòâîëîâûìè êëåòêàìè êîñòíîãî ìîçãà [1, 2] è àëëîãåííûìè ñòâîëîâû- ìè êëåòêàìè ïóïîâèííîé êðîâè [3]. Ïîëó÷åíû ïåðâûå ïîëî- æèòåëüíûå ðåçóëüòàòû ëå÷åíèÿ çàáîëåâàíèé ïå÷åíè ó ëþ- äåé - óñòàíîâëåíà âûñîêàÿ ýôôåêòèâíîñòü ïðèìåíåíèÿ àë- ëîãåííûõ ñòâîëîâûõ êëåòîê ïóïîâèííîé êðîâè ïðè ëå÷å- íèè âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ [4]. Áîëåå òîãî, ñòâîëîâûå êëåòêè ñ ôåíîòèïîì CD133 + , ïîëó÷åííûå èç êðîâè áîëüíûõ è ââå- äåííûå â ïå÷åíü ÷åðåç âîðîòíóþ âåíó, â 2,5 ðàçà óñêîðÿëè ïðîöåññ ðåãåíåðàöèè ïå÷åíè ïîñëå ðåçåêöèè îïóõîëè [5]. Ïîëîæèòåëüíàÿ äèíàìèêà ôóíêöèîíàëüíûõ ïðîá ïå÷åíè áûëà îòìå÷åíà â ðàìêàõ ïåðâîé ôàçû êëèíè÷åñêèõ èññëåäî- âàíèé, êîãäà áîëüíûì õðîíè÷åñêèìè ãåïàòèòàìè (5 ÷åëîâåê) À.Ï. Êèÿñîâ 1,2 , À.Õ. Îäèíöîâà 3 , À.À. Ãóìåðîâà 1 , È.Ì. Ãàçèçîâ 1,2 , À.Ç. Ôàððàõîâ 3 , Ã.Ã. Êóíäàê÷ÿí 2 , Ñ.Ð. Àáäóëõàêîâ 1 , Í.À. ×åðåìèíà 3 , Ò.Ñ. Éûëìàç 1, 2 1 Êàôåäðà íîðìàëüíîé àíàòîìèè, Êàçàíñêèé ãîñóäàðñòâåííûé ìåäèöèíñêèé óíèâåðñèòåò 2 Áàíê ñòâîëîâûõ êëåòîê, Êàçàíñêèé ãîñóäàðñòâåííûé ìåäèöèíñêèé óíèâåðñèòåò 3 Ðåñïóáëèêàíñêàÿ êëèíè÷åñêàÿ áîëüíèöà ÌÇÐÒ, Êàçàíü Transplantation of autologous hemopoietic stem cells to patients with chronic hepatitis A.P. Kiasov 1,2 , A.Kh. Odintsova 3 , A.À. Gumerova 1 , I.M. Gazizov 1,2 , A.Z. Farrakhov 3 , G.G. Kundakchyan 2 , S.R. Abdulkhakov 1 , N.A. Cheremina 3 , T.S. Iilmaz 1, 2 1 Deparment of Anatomy 2 Stem cell bank, Kazan State Medical University 3 Republic Clinical Hospital of the Tatarstan Public Health Ministry ÊËÈÍÈ×ÅÑÊÈÉ ÎÏÛÒ Òðàíñïëàíòàöèÿ àóòîãåííûõ ãåìîïîýòè÷åñêèõ ñòâîëîâûõ êëåòîê áîëüíûì õðîíè÷åñêèìè ãåïàòèòàìè  ñòàòüå èçëîæåíû ðåçóëüòàòû ïåðâîé ôàçû êëèíè÷åñêèõ èñ- ñëåäîâàíèé ýôôåêòèâíîñòè àóòîòðàíñïëàíòàöèè ãåìîïîýòè÷åñêèõ ñòâîëîâûõ êëåòîê áîëüíûì õðîíè÷åñêèìè ãåïàòèòàìè â ñòàäèè òÿ- æåëîãî ôèáðîçà ïå÷åíè. Ïîñëå ñòèìóëÿöèè âûõîäà ïðåäøåñòâåííè- êîâ ãåìîïîýçà â ïåðèôåðè÷åñêóþ êðîâü «Íåéïîãåíîì» âûäåëåííûå ãåìîïîýòè÷åñêèå ñòâîëîâûå êëåòêè ââîäèëè â ÷ðåâíûé ñòâîë, ÷òî îáåñïå÷èâàëî äîñòàâêó òðàíñïëàíòèðîâàííûõ êëåòîê â ïå÷åíü êàê ñ àðòåðèàëüíûì, òàê è ñ âåíîçíûì êðîâîòîêîì.  êà÷åñòâå êðèòåðèåâ îöåíêè ýôôåêòèâíîñòè òðàíñïëàíòàöèè íàðÿäó ñ êëèíè÷åñêèìè è áèîõèìè÷åñêèìè ïîêàçàòåëÿìè èñïîëüçîâàëè ðåçóëüòàòû ìîðôî- ëîãè÷åñêîãî àíàëèçà (èíäåêñ ãèñòîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè) è èì- ìóíîãèñòîõèìè÷åñêîãî îêðàøèâàíèÿ (âûÿâëåíèå ïðîëèôåðàòèâíîé àêòèâíîñòè, âûðàæåííîñòè àêòèâàöèè ìèîôèáðîáëàñòîâ è êàïèë- ëÿðèçàöèè ñèíóñîèäîâ). Ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî òðàíñïëàíòàöèÿ àóòîãåííûõ ãåìîïîýòè÷åñêèõ ñòâîëîâûõ êëåòîê â ÷ðåâíûé ñòâîë áîëüíûì õðîíè÷åñêèì ãåïàòèòîì â ñòàäèè òÿæåëîãî ôèáðîçà ÿâëÿåòñÿ áåçîïàñíîé ïðîöåäóðîé. ×åðåç ìåñÿö ïîñëå òðàíñ- ïëàíòàöèè óëó÷øàþòñÿ îáùåå ñîñòîÿíèå áîëüíîãî, ïîêàçàòåëè ôóí- êöèîíàëüíûõ ïðîá ïå÷åíè, óìåíüøàåòñÿ âûðàæåííîñòü íåêðîçîâ è âîñïàëåíèÿ è ïðîèñõîäÿò êà÷åñòâåííûå ñòðóêòóðíûå èçìåíåíèÿ â ïå÷åíè - çíà÷èòåëüíî ñíèæàåòñÿ ïðîëèôåðàöèÿ ãåïàòîöèòîâ, óìåíüøàåòñÿ ÷èñëî ìèîôèáðîáëàñòîâ â ïàðåíõèìå, ÷òî ïðèâîäèò ê ðàçðåøåíèþ ïåðèñèíóñîèäàëüíîãî ôèáðîçà è âîññòàíîâëåíèþ íîðìàëüíîãî ñòðîåíèÿ ñèíóñîèäíûõ êàïèëëÿðîâ. Ïîëó÷åííûå ðå- çóëüòàòû ïîçâîëÿþò ñäåëàòü âûâîäû î ïåðñïåêòèâíîñòè äàííîãî ìåòîäà ëå÷åíèÿ äëÿ ïîäàâëåíèÿ ïðîãðåññèðîâàíèÿ ãåïàòèòà è ôèá- ðîçèðîâàíèÿ ïå÷åíè è î âûñîêîé èíôîðìàòèâíîñòè èììóíîãèñòî- õèìè÷åñêèõ ìåòîäîâ â îöåíêå ýôôåêòèâíîñòè òðàíñïëàíòàöèè. Êëþ÷åâûå ñëîâà: õðîíè÷åñêèå ãåïàòèòû, ãåìîïîýòè÷åñêèå ñòâîëîâûå êëåòêè, àóòîòðàíñïëàíòàöèÿ, èììóíîãèñòîõèìèÿ. The results of the clinic trial first phase of autotransplantation efficacy of hemopoietic stem cells to patients with chronic hepatitis in a severe hepatic fibrosis stage are given in the article. After hemopoietic precursors having been stimulated by Neipogen into peripheral blood, isolated hemopoietic stem cells were introduced into the celiac trunk. It provided the delivery of transplanted cells into the liver with both the arterial and venous blood flow. As the assessment criteria of transplantation efficacy the morphologic analysis results (the histologic activity index) and immunohistochemical staining (detection of proliferation activity, myofibroblasts activation and capillarization of sinusoids) were used together with clinical and biochemical values. The investigation results show that transplantation of autologous hemopoietic stem cells into the celiac trunk of patients with chronic hepatitis in the stage of severe fibrosis is a safe procedure. A month after transplantation the patients general condition and the functional tests indices improved, the necrosis and inflammation became less pronounced, qualitative structure alterations within the liver occured - that is hepatocytes proliferation decreased significantly, the number of myofibroblasts was reduced within the parenchyma that resulted in resolving of perisinusoidal fibrosis and restoration of the normal structure of sinusoid capillaries. The data obtained confirm that this method can be used to suppress the progression of hepatitis and fibrosis formation within the liver, as well as immunohistochemical methods provide reliable information on the efficacy of transplantation. Key words: chronic hepatitis, hemopoietic stem cells, autotransplantation, immunohistochemistry. è

ТРАНСПЛАНТАЦИЯ АУТОГЕННЫХ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК БОЛЬНЫМ ХРОНИЧЕСКИМИ ГЕПАТИТАМИ

  • Upload
    -

  • View
    216

  • Download
    0

Embed Size (px)

Citation preview

����������� ����

��������������� ��������������������������������������������������

������������ ���� ������������ �����������

������������������������������������������ �

������������� ��� ������� ����������������������

���������������� !����� ��������� �����������

����������������� ���������"�������������#�������

����$��������� ��� "��#$��� ����� ������ ������� �

%&������ ��������������"������������� ������#

��� �������������������������������� ������� �

������ ��������� ����'(�)*���������� ��������

������� ��������������'+* ,�����������������

�����#��������#�������������"���������������-�

��������������������&����������#��� ���������

�������� ������� ������ ��������� ���� ��� �����

������������������'.* /�����������������������

�������� 01(++2� ���������� �� ���� "��#��� � ��

�����������#�����������-����)�3������������

������� ����������� ������ ����� �������� ������� '3*

,��������#��� ���� ��� ����������#��� ���" ������

"����� ������� �������������������������������

����������"��#�� ���������� ��������� �43������5

���������� � ��������������� ��������������� �������������� � ����������� ���

����������!"���� �#�$���%��& �!��� �'����(��������� �)�#��*+&����� ��

����,���������&-�.����/��� ������!�.�0����/����+.��������!�.��������/�/

��1��!�/�&�+ �!&�/! ������!�.�0����/����+.��������!�.��������/�/

��$�2�%&�!��!���!&���"�!���%&-�������$) ������-

!"#$%&"#'"'()#�)*�"+')&),)+$�-./)%)(.'(0�$'./�0.&&$�')�%"'(.#'$�1('-�0-!)#(0�-.%"'('($

3�4��56789:�� � �3�5;��<=6>?89:7�� �3����@ABCD9:7�� �E�F��@7G6G9:�� � �3�H��I7DD7J;9:�� �@�@��5A>=7JK;L7>��

M�N��3O=APJ;7J9:��� �Q�3��R;CDCB6>7�� �S�M��E6PB7G�� ��

��TCU7DBC>?�9V�3>7?9BL

��M?CB�KCPP�O7>J �57G7>�M?7?C�FC=6K7P�W>6:CD86?L

��NCUAOP6K�RP6>6K7P�X98U6?7P�9V�?;C�S7?7D8?7>�4AOP6K�XC7P?;�F6>68?DL

�2343567�38�9:;�

6������������������������� ���&��������

�������������"��#�� ���������� ��������� �

Y�/�/-����&Z��+�����&-/�/+�2���.�,��+�!&���"�!� ��[

&������.�\,,�!/���/����//���2&��/�����0��2\/�"�!�

/�&�+ �!&�/!�%&-�+�� ���"�!����0�2�/�/������/�����/�[

Z�&0�,�%����2�"������&��/���&������+ ���2���]�/�����[

!��0��2\�����2���,���"�!�^�!��-�_'�.20���`��+��&���+�

0��2\/�"�!���/�&�+��!&�/!������&����"����+.�/�& �"/

%�2�"���&��/��!��/���2&��/������+ �!&�/!���2�"��-�!�!�

��/����&-�+� �/�!���������+��!��/!���Y�!�"�/���!��/�����

���!��\,,�!/���/��/���2&��/�������������!&���"�!�����

%� ���"�!����2!���/�&�����2&-���&������&-/�/+���,[

&0�"�!0����&���� a����!�0�/&0�"�!.��!/���/�b�����[

���0�/ ���"�!0�!��]�������a�+��&�����2�&�,���/���.

�!/���/� ��+��Z���/���!/���������,�%�%&�/����!�2�&[

&���������������b��$���&-/�/+��&��������2!���&� �"/

/���2&��/�������/0���+ �0��2\/�"�!� �/�&�+ �!&�/!��

"����+.�/�&�%&-�+�� ���"�!���0�2�/�/����/�����/�Z�&0

,�%������&��/��%��2��.�2������.��(����������2&��/���[

2&��/������&�"]�^/��%c���/�����%&-�0 �2!���/�&��,��[

!����&-�+ �2�%�2�"��� �����-]��/���+��Z���/-���!�����

�2�&�������2�� ��/�!�"�/����+��/��!/���+�������������

2�"���� [� ���"�/�&-�� ��Z��/�� 2�&�,������� 0�2�/��/�

����-]��/��"�&���,�%�%&�/����2���� ��� �"/�2�����/�!

�����]���^�2���������&-�0�,�%�������/���&���^

����&-�0�/������������+ �!�2�&&������&�"���+����[

��&-/�/+�2��&�^/���&�/-��+��+��2��2�!/���/������0

��/���&�"������&��2���&�����2�0����������0�2�/�/����,�%[

����������2�"��������+!.���,���/���/�������0�/[

���"�!� ���/��������!��\,,�!/���/��/���2&��/�����

��<������ �����= ����������� ��������� �� ���&��������

������� ������� ������������������� � ���������� ��

S;C�DC8AP?8�9V� ?;C�KP6>6K� ?D67P� V6D8?�U;78C�9V�7A?9?D7>8UP7>?7?69>

CVV6K7KL�9V�;CB9U96C?6K�8?CB�KCPP8�?9�U7?6C>?8�d6?;�K;D9>6K�;CU7?6?68

6>� 7� 8C:CDC� ;CU7?6K� V6OD9868� 8?7eC� 7DC� e6:C>� 6>� ?;C� 7D?6KPC��3V?CD

;CB9U96C?6K�UDCKAD89D8�;7:6>e�OCC>�8?6BAP7?C=�OL� fQC6U9eC>g� 6>?9

UCD6U;CD7P�OP99= �689P7?C=�;CB9U96C?6K�8?CB�KCPP8�dCDC�6>?D9=AKC=�6>?9

?;C�KCP67K�?DA>J��E?�UD9:6=C=�?;C�=CP6:CDL�9V�?D7>8UP7>?C=�KCPP8�6>?9�?;C

P6:CD�d6?;�O9?;�?;C�7D?CD67P�7>=�:C>9A8�OP99=�VP9d��38�?;C�788C88BC>?

KD6?CD67�9V� ?D7>8UP7>?7?69>�CVV6K7KL� ?;C�B9DU;9P9e6K�7>7PL868� DC8AP?8

a?;C� ;68?9P9e6K� 7K?6:6?L� 6>=Chb� 7>=� 6BBA>9;68?9K;CB6K7P� 8?76>6>e

a=C?CK?69>� 9V� UD9P6VCD7?69>� 7K?6:6?L �BL9V6OD9OP78?8� 7K?6:7?69>� 7>=

K7U6PP7D6G7?69>� 9V� 86>A896=8b�dCDC� A8C=� ?9eC?;CD�d6?;� KP6>6K7P� 7>=

O69K;CB6K7P� :7PAC8�� S;C� 6>:C8?6e7?69>� DC8AP?8� 8;9d� ?;7?

?D7>8UP7>?7?69>�9V�7A?9P9e9A8�;CB9U96C?6K�8?CB�KCPP8�6>?9�?;C�KCP67K

?DA>J�9V�U7?6C>?8�d6?;�K;D9>6K�;CU7?6?68�6>�?;C�8?7eC�9V�8C:CDC�V6OD9868

68� 7� 87VC� UD9KC=ADC��3�B9>?;�7V?CD� ?D7>8UP7>?7?69>� ?;C� U7?6C>?i8

eC>CD7P� K9>=6?69>� 7>=� ?;C� VA>K?69>7P� ?C8?8� 6>=6KC8� 6BUD9:C= � ?;C

>CKD9868� 7>=� 6>VP7BB7?69>� OCK7BC� PC88� UD9>9A>KC= � jA7P6?7?6:C

8?DAK?ADC�7P?CD7?69>8�d6?;6>� ?;C� P6:CD�9KKADC=�[� ?;7?� 68�;CU7?9KL?C8

UD9P6VCD7?69>�=CKDC78C=�86e>6V6K7>?PL � ?;C�>ABOCD�9V�BL9V6OD9OP78?8

d78� DC=AKC=�d6?;6>� ?;C�U7DC>K;LB7� ?;7?� DC8AP?C=� 6>� DC89P:6>e�9V

UCD686>A896=7P� V6OD9868� 7>=� DC8?9D7?69>�9V� ?;C�>9DB7P� 8?DAK?ADC�9V

86>A896=�K7U6PP7D6C8��S;C�=7?7�9O?76>C=�K9>V6DB�?;7?�?;68�BC?;9=�K7>

OC� A8C=� ?9� 8AUUDC88� ?;C� UD9eDC8869>� 9V� ;CU7?6?68� 7>=� V6OD9868

V9DB7?69>�d6?;6>�?;C�P6:CD �78�dCPP�78�6BBA>9;68?9K;CB6K7P�BC?;9=8

UD9:6=C�DCP67OPC�6>V9DB7?69>�9>�?;C�CVV6K7KL�9V�?D7>8UP7>?7?69>�

>.?� 1)!@$=� 0-!)#(0 789:;<;<=� 78>?9?<8;<@ =;8> @8AA=�

:B;?;C:D=9A:D;:;<?D� <>>BD?7<=;?@78><=;CE

����������� �� ��

��������������� ��������������������������������������������������

"����������������������������������������������

������������ 01+.2'F* 6��� �"���� �� � ����������

��$����"���� ����#��������������&������ �����#����

����������� ����������� ��� ��������� ������������

����������������������� �������������������� ����

&����������������������������������������

������� ������� ���

G����� &���������������#��������������������

���� �"�������"��������������������������������

��� !��������#�� � ����� � �����"�������� ���������

���-���H(5�����"������������������������������

���#I)5��������������&�������������������������

Y+%��2%��/���2&��/����

%&������ �������������������� �������������

������������������������������������������

"�-$������������J���������������������������-

����������-������# %���������������������������

����������� �����-���������������������������

��������� � ����� �������� ������ �������������"�

���������������������'K*4���&�� "��#$������#������

����� ���������#��������� �5���"�������-��� L

&�� ������ �� ������ ��������� �����# � �������

���#-'3�F*

M��#-��$��������������"������������� �����

��� �����#������ ������� ������ ������� �� ������

����������� ��������� � ����������� �������� ������

����������"������������ %&����������"��#�������

������������#�������������������� ������������

������- ��� �� ���� ������#��� ����������� ����

����#�������������������� ��������������

N�������&����� �����������������������"���������

����# �� ������- ���� � ��������#��� �������

,���� ��������������������"����������#�����

�J�����-������-������������4��� (5�����������

������� ���J������ �������� ���� ���������� ������� �

�����J�������������4��� )5 %�����#��������������

�������#������������������������#���"������J����

�����������������������������$����������������J����

����������#�����#�����������#-�����������-

���4��� +5

,��� ������ ������������� ����� ������� ��

��$� � ����-�������������#�����"����������#����

�� ������#����������#������ ������� �������

�����������������������#�� O����� �������#���

���#������������� ������ L����������4�������

���#�������������������"�-$����������5������

������ ������� 4��������#��� ���# �� �����5 %�������

���# ��������� �� PQR ��� ����� ���������� �����

�����#���� �����������#������������� �-��������

���������������������������� S�������#������#�

������� ���������#�������������"�����������#���

� ������ � � ��������� �� ��������� ������#���

��������������������������������'P* O�����������

����������#�� ��"���������������� �������������

��������� ������� ������� ������� � �� �� �����������

������������4������������������5�����#���$� �����

������� � ����$���� &����������� ������� ������ 'T*

%����������� �� � ������������������ ��������

�����#�����������#��4�����������#-5������"�

�����������#���������4���������#������#-5

���/��������!��\,,�!/���/��/���2&��/����

U���� ���������� �����"�������� ��������� ��

��-��� ����� ������ &����������� �����#������

��������������������������������������� !������

�-��-����� ���� �����������#�����$���������

�� �����������- �������������- ������������ �������

�������V������ ��������� W����������������������

�������� G����� ����������������������������

'3�K* &��� ���� �� "�� �����#���� � &����������#

X�������������

�������

,����#

Y���������

������������

�������

!"�������������

�������

���������

/�-$��������

$������Y�/���"����0�/�&��a ���b $�������������������/�.����+�2�"����a ���b

,����#

%�������

���

���������

,������������

������

������������

���

$�����# �������������/�&�+ �!&�/!���"����+.�/�&

����������� ����

��������������� ��������������������������������������������������

����������"���� ������ ���������� ������������

���������������������-�������������������

����������������

Z�� ����������������������������������"������#�

�� ����������� �������������������������"�����

����"�������� ������ ���������� �������������H

(5�����������������������������������4��&�������

������������������������������-����������[C?A<\8C:;<D]

08AA^B@A8:C_D;<]8D�[0^_5I)5�������� ����"��"�����

4��&�����������#��������� �$�������������α�U`S5I+5

�����������������������4��&���������01+.5

a����#�������������������������#����������

���������������������������������������������

α�U`S L &�� ���� �� ����������#��� "���� �������

�$������������������������"��������������#�

�� �$������������������������ ,������������

���������� ������ ���������� �������������������

��������������#��������������� ����"��"�����������

��������������������-���������������������������-

��"���� `������ ����"��"����� ������� α�U`S

,������� α�U`S���������� ����"��"������ ����

�"���� �����������������-��������������������

��������������-��"����

01+.L&���������������������������������������

������������� � "����&���������#����������������

������������������������ %������������������#��-�

�����������������������������������������

�� ������ ,�� ������������� �����������"������

��01+.���������������� �����&����������������

�� ������ O��� �� � ��� &�������� ���������������

������������&����������������������������� %������

�����������������������������������������$���

"����#��� � "��������&�� ��� � "����&���������#�

������������ �������01+. 01+.���������&������

���������������#�������������� ����������������

��������� %&�� �����������������O�������������

������������4��������������#�����"���5���� �������

����"��"����#��� � "���������$���������������

��������������������� 6��� �"���� ���������

01+.�����������������������#�����$������ ����

�� �������������������

O�� ��������� ��������������� ������� "�������

����������������(QR�������#�� ��� ���������

������������������������� ������� N ���������

�� �����������$������������������������������

�������"������� ����� '(Q* � �����#������

�� �������� ���������#��� ������� � [0^_� α�U`S�

01+. � ��������������� ����� ��� 1_bc 4O����5 �

^cdc0_efg_4%�����"�������5

�/%��%&-�+

Z������� ��-������������������� ����������

��������������"���������������������� �����������

�������������������������������4&���������5��������

�����������"���������� %��������� � ���������

����� ��������������������+������������"�������

() %��"��#�������-����������� ������������

���$���������������������������������$���������

������������������4a�������Z������� � 5 a��������

��"�������������� ����������������#������"���

����H�� ��������$����������� ��������������4SX6�

������ )����5�γ������ ����������������4γ�U6,�

)�.����5��������������� "�������������4��KQR5

,����#�������� ������������������"�����������

�$���� &���������� � ��������� �������������# ��

������� � ,���� ������ ������� �� "��#�� "���

�������������������"������������

�&�"�����/�&�+ �!&�/!

��� �����-������������������-���#����$��

���������� ���&������������� ��#-VG��������W

����.PQ ����������������.�3���� G���������#

��� ������� ����� ��"�-����� ��������� ���������� �

�������� ����������������������������������

��������������� ��������������������� �������

he02����������������������������4i:8>?D8;<@=�je_5

S���������������������������������������������

���������� �������������������(�K×(QF4(��"��#�

���5�(�.×(QF4)��"��#���5�)�Q×(QF4+��"��#���5( �

O�����# ����������������������"������������

����������������J������������������ %������

�������������������$��"������������ a��������

��-������#������������"������"��������

��������������������

G�"�-����� �� "��#�� � ������� .�� �����# �����

�������������������������������$�����"�������

�����������$������"��������"�����������������

���"���������� ��������� �����"��#� Y���� ��

�������������������������������"��#�������

�����# ���������� ��������� �������� ������ "�����

�������������$����������γ�U6,4���� ������������

�54��"� (5

�������������������� "��#�� "����������������

�������"���������������������������������������

��� � ����� ���� ����� �������������� ��������#���

������ ������� ��������������� ��������� 4NUS5 �����

��������"� )

)�%&�������:��A������BC�D�����E��F� ��G

������H������� �����D�����������F�����

������A�������D� ���������� �����D��

kNUS��(��+L������������������� ��� ��#����������

��#-INUS��.��PL���"������������������#������������

��������INUS��T��()L� ���������������#���������������

������INUS��(+��(PL�������������������������

���������� �

����������

�� ����

���������� ����������

���� ��������

)�%&�������:��A��������H�����������������

����������I3JKL�H������� �����D�����������F

�����������A�������D� ���������� �����D��

��������� ��

����������� � � � � � �

������������

����� � � � � � �

�������

������� � � � � � �

�� ! �� �� �� �� �� �

"�#�� � � � � � �

���������

����������

��

$%&'(&)&�*&+,- �� �� �� �� . ��

/%&'(&)&��&+,- �* �� 0� �� .� ��

γ1�%�'(&)&��)��&+,- ��2 ��� ��. �� ��� 00

�%�

'(&)&2*)�**3- .� 2� �0 .� �0 2�

����

���������� ����������

���� ��������

����������� �� �M

��������������� ��������������������������������������������������

Y���� ���������������������������"��#�������

���$����������NUS��)�+"���� l���������������$�

�� &�� ��������m % ����- ������#� �� ���� � ��#$����

��������#���� ������� � ����������� ������� � �

������#������������� Z��������-�����������#���

����������������#������������� ������#��"���

�������� �����������������#��� ����������������

n�� ������� ����� "��� ����������� �"����� ������

������#�������������#����������������������������

"��#���"������������������������"���4+"����5

!�������������� �����������������������������

��$���� ��"���� % �� �� �� � �������� NUS �� ����

� ��#$���� ��������#���� ����������� � ������#����

��������� �������� ��������� �� ������ ���������

������ ����� �������������� /���� ����� "������������

���������������� ������������� ��������"o�����

-�����������#��-���� ���"���� ������������������

G��"������������ ������������� �� ������ �

������� ��"���������"������������������������#�

���������������������O���� O�������������������

"��#���"���������������������#�����"����������

������������������������������������ ����"���

�������������������������������� ����&��������

����������� �4��� .5

������������������"�����������$������������ �

����� [0^_� α�U`S � 01+. O����� � ���������� ��

�������������������������������"����+ O�����

���"����-�����"��� ����L��������������������

����������������������������������������01+.

� "�����&������������������������������������

%����������������������������#�������������

��������������4��� 3S5����������������������#���

������������� ����� 6����� ���� ������������# �����

��"�-����������������������������������������

���������������� ��#$������������� ����������

�������� ���������� Y���� ���� ����� ������������

�������������������-�������������"�����������

(�3R��������������������� �"����� ���� �4��� 3/5

N����������� ������������$�������������������

�����������������&�������� ��������� a���"��#�

�������������������"���������������������������

��������&���������#���������&�������������01+.

4��� FS5 6����������� ��������������&�����������

�������� ������ ������-� �� ��� ��� ���������������

&�������� ���� ���� �������� � Y���� ���� �����

������������������������������#���� ������#����

���������"�����������$#���������01+.2&��������

��#���������4��� F/5

$���k������������&-�+.�,�%��l���[���/���2&��/����m�1�[�"������������2&��/���2&��/�����

�!��!��2�Y��[����� �×knn

$���o����&�,���/�������!/���/-�0�2�/��/�l���[���/���2&��/����m�1�[�"������������2&��/���2&��/�����

�!��]���������/�/�&����!�4RQ3�a�����2�&�,�����^c� �0�2�/��/��[�!���0����/�b �×knn

K N

NK

����������� ���O

��������������� ��������������������������������������������������

!������������� ��������"�-�����#�&���������

α�U`S O�������������������"��#��������������

�����#��������� ���� ������������ ����"��"�����

4��� KS5����������������������-������������� �

�����������������#��������������������������"���

�� a������"��#���� ����"��"�����"����"���������

�����������������������"����������� ��������������

������� ��������#���$�����"������������������

������� ,��������������������������� ����"��"�

������� ����� ��#$����#���� �������������α�U`S2

�������"������������#����������������� ������

��� ����������#��������� ����� ������ �� α�U`S

����������������� �$�������������������������

����4��� K/5

����������������

�� ����

���������� ����������

���� ��������

)�%&�������:�������P� �������������������G�� ����F� ������H������� �����D�����������F�����

������A�������D� ���������� �����D��

45(67&3

��������

α1�8

59��

�&��:&���

�&�*

�&�����;7&�����;

�&��������;

�&<������7

����=������=

�&�����;

�&�����>��;

<���������;

�����;

�*

�&�����;

�&�����;

�&<������7

����=������=

�&�����;

�&�����;

�&�����>��;

<���������;

�����;

2*)0*

�&�����;

�&�����;

�&<������7

����=������=

�)�

�&�����;

�&�����>��;

<���������;

�����;

$���p����2�&&���������������l���[���/���2&��/�����a�+��Z�����bm�1�[�"������������2&��/���2&��/�����a�����"�+��RT�kq

!&�/!���������� b����!��]����������/�/�&����!�RT��k�a2���!/������0�/ ���"�!.����!����[�!���0����/�b �×knn

$���r���!/���������,�%�%&�/�l���[���/���2&��/�����a�+��Z�����bm�1�[�"������������2&��/���2&��/����

a�����"�+��!&�/!�b���!��]����������/�/�&����!�α[����a2���!/������0�/ ���"�!.����!����[�!���0����/�b �×knn

N

K

K

N

����������� �� �Q

��������������� ��������������������������������������������������

,�����#��� ���� ����"��"��������-���������

��������� ����������#��� ����� ����������-��� ���

������ ��#$������������"o���������������������

��� ��#��� ��������� ����������� ���������� ��� � ���

�����������������������#������"����

p����#��������������������������������-�����

�-���#� ��� �������������� ���������� �� ���&��������

�����������������������"��#�� ���������� ���

������ ������ �������� ��"���� ������� "���������

���������� Y���� ���������������������������������

�� ���&�������������������������$�-����"������

������� "��#���� � ���������� ����������#��� ���" ���

������������������������#����� ������ ���������

������ 4��������� ������ ��������������� ��������� ��

����� ��#$���������������������#��������������

��������#�����������5 !������� � ���� �����#�

���� �������������� �� ���&�������� ������� ������

����������������������������������������������

�������� ���������������#�����������������������

������������ ��#$���������� ����"��"�����������

�� �� ��� ������� � �����$���- ��������������#����

��"����������������-��� ��#�������������������

�������������� 6��� �"���� ����������������#���

�� ������-� ������# ��� � �������������� �������

����������������������������������������������

�����"����������������������������� ��������

� ���������� ������� �����������&�����������

��������������

XN6qpS6apSH

( h:==?De �i:CC<=?D1 r �[A8sC<=r ^ 8;:A [?;8D;<:A?\78>:;?9?<8;<@

=;8>@8AA;78C:9E<D789:;?A?]EH:@C<;<@:AC8s<8t e;8>@8AA=)QQ.I))4F5HPTK�

TQK

) uBv<<i �i<C?=8f �c8e 8;:A 0?D;C<wB;<?D?\w?D8>:CC?t@8AA=;?A<s8C

C8]8D8C:;<?D:\;8C9:C;<:A789:;8@;?>E<D><@8 r i89:;?A )QQ)I+F435HF3+�T

+ b:x<DB>::e �f:D:x::y �07<Dz8<:g 8;:A iB>:Dj>w<A<@:A0?C{|A??{

:=:e?BC@8?\fC:D=9A:D;:wA8i89:;<@[C?]8D<;?C08AA= e;8>08AA)QQ+I)(H)(K�

)K

. f:D] } [ � y:D] } � f:D i 8; :A 0A<D<@:A :D{ 8~98C<>8D;:A =;B{E ?D

;78C:98B;<@8\\8@;?\B>w<A<@:A@?C{wA??{;C:D=9A:D;:;<?D?D=8s8C8s<C:A789:;<;<=

�?CA{r �:=;C?8D;8C?A )QQ+IT4T5H(TTT�)QQ+

3 �=@7r e �bD?8\8A� f �bA8<Dh 8;:A [?C;:A:99A<@:;<?D?\:B;?A?]?B=

01(++2 w?D8 >:CC?t @8AA= ;? ;78 A<s8CH : D?s8A @?D@89; ;? =B99?C; 789:;<@

C8]8D8C:;<?D e;8>08AA=)QQ3I)+4.5H.F+�KQ

F �?C{?D h y � �8s<@:C ^ � [:< h 8; :A 07:C:@;8C<z:;<?D :D{ @A<D<@:A

:99A<@:;<?D ?\ 7B>:D 01+.2 =;8>�9C?]8D<;?C @8AA 9?9BA:;<?D= >?w<A<z8{ <D;?

;78 wA??{ wE ]C:DBA?@E;8 @?A?DE�=;<>BA:;<D] \:@;?C e;8> 08AA= )QQFI ).4K5H

(P))�+Q

K f8C:<e � �=7<x:t:f �c>?C<b 8;:A �>9C?s8{A<s8C\BD@;<?D<D9:;<8D;=

t<;7A<s8C@<CC7?=<=:\;8C:B;?A?]?B=w?D8>:CC?t@8AA<D\B=<?D;78C:9E e;8>08AA=

)QQFI).4(Q5H))T)�P

P �:B{<? � � uC:D@7<;;? _ � [:DD:C:A8 � 8; :A 07?A:D]<?@E;8= :D{ wA??{

=B99AE �?CA{r �:=;C?8D;8C?A )QQFI()4))5H+3.F�3)

T 078Dy b ��7:?} } ��<r � 8;:A 1B@;BA:C9C?A<\8C:;<?D<DA<s8C;<==B8=

t<;7 =8s8C8 @7C?D<@ 789:;<;<= |H :D <>>BD?7<=;?@78><@:A =;B{E �?CA{ r

�:=;C?8D;8C?A )QQFI()4T5H(..+�F

(Q Z���� S , ���� ����� ���������� ��������������

����������� `���������������"������������������������������

�������� Z����#HZU`aI)QQ(

�/�2�&���o�����nnr