11

Arbitrary primed PCR fingerprinting and serotyping of clinical Pseudomonas aeruginosa strains

Embed Size (px)

Citation preview

��������� ���� �� ������������ �� ��������� �� ��������

����������� �������� �������

����� ������� ���� ������ �� ��!�� �� ���!� ������� �� ���� �� "#� �

� �� �������� �� �������������� ���������� ������������� ������ �� ��� ��� ����� ��������� � ���� �������� ���������� � !" � �������� ������ ��#��� $����% &�#����"� �� ��������� '������ &����� �() *$!� �+

��� $% �!�!�� $&&%' ���� () "����� $&&%' ����� ($ "����� $&&%

��������

��������� ���� �� *��+�� , �������� #�� ������ #��- ��������� �� � ���� �� -��-+����!���� ������ ��

����������� ��������� .����+��!� ������� ���� ( ������ -�������� �� $/ ����� ������� #� ��!�� .��������

����� ��� ��0 �� �������������� ���-�!�- ��� ������� ��!� ��� � ������� 1����� 23� #�� ������� #��- �

����� $) �!����� ����� *�4!�� 5�+�11 116 �66 1+(�,� 6- ������� #� ��������� ���� �� %$ ������ ��+��

������� �� 789 ���� ��#� )�( �� 7�: ;� #� ������� ��+�� ������� #� ��� ����������� �������� #��- ��������

�!� �-� ������ �!���� ������� �� �- ��� ������� 3!������ �������� �� ��+�� ������� ��� 9 ���!�� �� �- 55<

���������� ���� �� ������ ��������� ������� �� ��- -�������� 6- ��!��� �-�# �-�� ��+�� �������� ������ � �����

�� ��������� �������- �� ������ �, �������� �-�� �� ��� ������������� �-�� ���������� ��������� ��-�� = �!���� �-��

��0��!� ������������� ��� � ��-�� �� � ����������� �� ���- ��-���

+�"-���. ����������� �������� ' 23�' �������� �-��� �������' ��+�� ' .��������' ������������

�� ���� ����

����������� �������� �� � 1���+������ ���+

���!� #��� ������!� �� ���!� �� ��!���� ��+

����!������ ��������� �� -!����� 6- �������� �� ��

��������� ���������� ���-��� �� -��������� ��+

������ ��4!���� �������� #��- ���������� �!�- ��

���������� ��������� ��!��� �� �!�� #�!� ����+

������ ������� !������ ����� ��������� �� ������ ����+

��� *� ,� ������� ������� ��� � �� ���������

�������� �� �- �������� �� �������� �� �- -��+

����� ��������� �� �����+��+����� ������������

�� �� ��� ������-���� �!������ �� ���#�- �� � ����+

�� �� -������� ���������� >$?�

�, �������� ������� �� ����� �� �- ����� ��

�-������� �-������������� �!� �- ���������� ��+

������� #�� -���� !���� ������ �� �- ������+

���� �� ���� ������ ��-�� ��������� 6- ����

�������� !� ������������ ��-��4! �� ������+

���� ��� �� �� ����!�������� ������� ��#� ���+

����� ������������-��� *@�., �� ���+������ ���+

��� ������� >7?� A� $&/(� �� A����������� ��������

6����� .���� *A�6., #�� ���� >(?� �������-+

��� �- 0����� �� �� ���� $9 ��B�� -��+����� ��+

����� �������� �� ( �# ������� -�� �� �+

����� � �� �- 0������ ���!�� >:?� 6-��

��������� ��-� �-��������� ���� ������� ��

)&7/+/7:: C &9 C D$9�)) �������-� E $&&9 ������ �� F!����� ��������������� .������� �!����- �� F����� .���� G�H�

�// . ) & 7 / + / 7 : : * & % , ) ) $ ) ( + :

� ����������� �!�-��� 6�� I J(: *%, (/9 9:7('��0I J(: *%, (/9 9:7&' +����I B-����K!�����!����

F�. A��!������ �� ����� ������������ $9 *$&&9, (98:9

�� �������� ���������� ����� �� ������

���� ���� �������������� ������� ���� �� ����

����� ��� ��� ������ �� �������� ��� ������ �����

��� �� ��� ���� ������������ ��������� ������� �����

�� ��������� ��� ��� ��� �� ��������� �������

������ ����������� �� ������������� ��������������

��� ��� ���� �����!������ ������� �� ����� ���������

������� "�������� �� ��� ���� �� �� �������� �! ����

����������� ��� ��� ��� ������ �#������� �$ %��

&� �������� ����������������� '()������ ����

��� ��� ���� �������� ���� �� ���������� �� �����

���� �������� ������������ �������� �! '() ��������

���� !������� ����� ����������� �! �*() �����

+����������, �-./0� ����������� ������������ ��������

+*1), �/�� ��� ���������������� �! �������� '()

�� ����������� ��� �������������� +�231, �/�./%��

4������ �� ��� �! ���� ������ �� �� ��������

������������ ���������� �� ���������� �� ��������5��

������� ������� �! �� �������� ������#��� ��� ����

���������������� ������ �/-��

)� ����������� ��� ������� ������ �����"�� �����

�� �6* ��� � ������ ���� ��������� ������ +)��

�6*, �� ���� ���� �������!���� !�� �� ������ �!

������� ��������� ��������� �������������� �78� ���

������� �� �������� �/$ 7/ 77�� &� )���6* ������

��� �� ������� '() �� �������� ����� ������ ����

������������� �! ����������� ����� ��"������ ���

������������� ��������� ������������ ��������� �� �

������ �! �6* ������������ �������� ��� ��9�����

��5�� ��� ������� � ������������� �������������� ���

��������� )����� ���� !������ ���� �� �� ���������

�5�� �� ������ �� ��������������� �� �� ��� �! ��

������� ������ ������ ������� �� �������� '()

���� ��� �� �! �� ��������� ����� �������

�������� �� ���� ������� ��� ���� �� "���������

�! '() ��� ��"����� �7: 70��

) ���������� �! ��������� ��� ��������� ����

��� !�� ������ �������� ������� �! �� �������� ��

���� ���� �� ;� &������������ ���� �� �����

���� ;����� ����� 3���� �7�� ��� ���� �6*�

����� ������ �����"�� ��� ������������ �� ���

������

<� ������ ��� �� ��� �! )���6* �������������

��� ���������� �� ����� ��!������ ������� �! �� ��!�

!����� �� �������� ��������� ��� �������� ��������

!��� ��������5�� �������� �� ������ ;� ��� ���

�� ��������� �� ������� ��������� ����� ��� ����

����� �� ����� �� ������ '() ������������ ���

��� �������� �! ���� ���� ��� ������ ������ �����

���������� ��� �� �������� ��!������� �� : �����

���� �� �� =������� ���� ��� �� �������� �� �������

�������� ����� �! ��� ������ ������ !�� !�����

��������������� ��������

�� �������� �� ��� ��

���� ��������� ����� ��� ������� �������

) ����� �! -7 ������� �! �� �������� ���� ���� ��

��� ������ 1������ ��!������ ������� ��������� ��

���� ������ �� �������� (6;6 /8::7� ������������

��9����� ��������� ���� �������� !��� �� (6;6

+(������� 6��������� �! ;��� 6������� �����

>?,� ;���� / �������� ��!�������� ����� ���� ������

������� ��������� ��� )���6* �������� ;� ���

������� $0 ������� ���� �������� �� /--/ ��� /--7

!��� �������� �� : �������� +��!����� �� �� ) @

��� 6, �� =������� +�����,� ;���� 7 ���� �� ����

��� �! �������� !��� ��� ������� ��� ���� ������

�������� ;��� ��� �� �������� �������� �� �������� ��

�������� ���� ���������� �� ��� ������ ������� ���

!������ ������� �� ;� !�������� ���� ������� �! ���

���� ������� ���� ���� �������� !�� ����������� ����

;���� /

�� �������� ��!������ ������� ������� ��� ������ �������

������ �������� )���6* �������

(6;6 //008 �/ �/

(6;6 //00/ �7 �7

(6;6 //007 �: �:

(6;6 //00: �0 �0

(6;6 //000 �� ��

(6;6 //00� �� ��

(6;6 //00� �$ �$

(6;6 //00$ �% �/

(6;6 //00% �- �%

(6;6 //00- �/8 �-

(6;6 //0�8 �// �/8

(6;6 //0�/ �/7 �//

(6;6 //0�7 �/: �/7

(6;6 //0�: �/0 �/:

(6;6 //��: �/� �$

(6;6 //0�� �/� �7

(6;6 //0�� �/$ �/0

(6;6 /8::7� �� �/�

�)���6* ����� ���� ������ ��������� �� �� ������� �! �� ������

���� ���������

�� ���������� �� ��� � ���� � ����� ��� ������� ��������� � !�"" # $ %& :%

������ �� ��������� ���� ���� �� ��� �

���� � ��� ��� ������� ���� ����� ������ ���

���� ���� ������

��� �������� ���� ���������� �� ��� ��� ! " ��

���� ����� �#�� ���� $%&��� �'(( )� ���" �����

����� �*� ������+��� $%&��� ,-� .) ���*

������# �����+��� $ +#/�) ��� �����+ ������&���

$�( +#/�)� ,������ ���� ��������� �� ���� �� #����

����� �� �������� ����" ��� $%&��� �'��) ���*

������# �0 $�/�) #�1������

���� ��������� ��������������� �����

�"� �������1 �� ��� �������� �������� ���� ���2�+��

���������1 �� � ���#� �� �������� ������������ ���*

�������#���� ������ #��+ ������ #����" �� ! ��� �&�*

���� ����������� 3�� "1����1���� ��#+��� $�1��1�*

��� ��� �1�������) ����������� "��+��1��� �������1�

��� �"� #������ �&�������*���+�������� $%*4) �����

�"� �������� ���� ������2�� �1 �"� �56 �. �1���+

$���'�7����&)�

���� ��������

��� ������� ���� �����1��� ��������# �� �"� ��"�+�

�������� �1 �"� 6������������ ����#���� �1���# ,1�*

��+ 89� :���������� ����� �##���������� �� ���" ������

��� ���� ���" ���������� ����� $� �� ��� +��)

��� ��++������ �������� $,���2 3��#������� 5�������

'������ ,����)� ��� �##����������� ���� ��������

��+�� �� ������ ��������������1�

,������ �"����# �##���������� ���" �������� ������

���� ����� �� �����##���������� ,������ �������# ���"

� � ��������+ ���� �������� �� ���1�##����������

���*�1������ ������� ���� �"��� �"��" ��� ��� �����

���" ��1 ��������+�

4�#� �� ����������1 ���+�� ���1+����� �"��� �������� $�5*5�-) �������� �� ���� ����� ��������� ������� �����������# ��� �����1��� ��

�"� ��"�+� �������� �1 6��,� ;���+�� 3�� ��� �+���2�� ����# � �*+�� ���+�� ���" ��<����� (�*�;;;;����;*� ��� �������*

�"������ �� � �� 0 �#����� #��� =���� �>�� ������� ��������� ������� �� �����1��� %�*%�� $��� ����� � ��� ���� ������ ��+����)� ,�?��

$�� @�) �� �"������������ ���#+���� ��� ��������� �� �"� ��#"��

�����

�������� ������� ������� ��� �1���# �������

,������ ,������ $) % �����1���� �5*5�- ���2����

A������� � � �� �> � ��� 5� ��> �

A������� B � �>�� �>� � ��� 5� �� �> � � � �>!

A������� � ! �� � (>�� �>�� ��� ��� 5�� �� �� �� �(� �� �� � ! >��

��� A������� =� 4�C B� A������� ;������ D������������C �� A������� ��EF���� D������������ $G�������� ,����)����� �����##���������C ��� ���*�##���������C 5�� ���1�##������������5*5�- �1��� ���� ��2��� ��������# �� �"� ������� �� �"� ��+������ ����1����

�� ���! �" �� ��� # $%&� '�������� � &� ���� &����������� () �(**)� �)+,)

���� ������ ���� �

��������� ����� ��� ��������� �� ��� ��� �� � ��

����� ���� ���� ������� ��� �������� �� ��� �� ��

������� ����� ���� ��������� �� ����� ��� !�

"�� ��� ���������� ��� # "��� $�� ������������� ��

%&' �� ��� ���������� �� ��(���� �� !�# ��)"�

����� *��� �� %&' �"���+������ �� ������"��

���� �� ��,����� ���"��� ��-' !.��/ 0�� '1 ������

$�����������/ '��"���/ �'/ 23'� ��������� �� ���

4��� �� '-8-�9 �������� �� �������������� ���������� ����� ��� ������� ���" �������� ��������� :���� !.# ������� ������� ���" ��������

'1 ����� ;.!! ������� ������� ���" �������� �1 ����� !�.!� ������� ������� ���" �������� �� 3�<�� ��� 0 � �� �������������� ����"���� ���

��������� �� ��� ������

$� ��

9������� ����� �����=��� ��� ��� ������ �� �������

3������ �� ���">

3����=��� &�$� ?������� ' ?������� � ?������� � $����

�! ! # � !

�� ! ! � �

� ! �

�� ! ! �

�# ! ! � �

�; � ! � @

�� ! ! ! ;

�@ ! � ! �

�7 ! ! �

�!� ! � ;

�!! ! � @ !;

�!� ! � ! �

�! ! ! �

�!� ! !

�!# ! !

�!; ! �

�!� ! !

'' ! !

&' � !

-' ! # ! �

�''/ ����������� ��1 &'/ ���8�������� ��1 -'/ ���=�������� ���

�� �������� �� �� � ���� �������� �� ��� � � ��! ���� "# $"%%#& '#(�#��

������������ ����������

� �������� ������ �� ��� �� ��������� � � � ��

��� ��������� ��������� ����������� ���

���������� ���!���" ������#" �� �$ %��&

'(�" �' ) )" �� ��*(" �� �$ +(�" � � �$ $,(��"

� �- %�����&.���" ��� �$ �� ���� ���/�����������

�����������" � ) �$ �� ��� ������" �� �� �� ��� ����

������� ��� �, �� ���# ��� ������ ��������

0���� � ��,����� ������� �� 0���� ��� 0� ��&

������ 0��� ������ �������� 0���� 0� ��� ��������

%�� ������� 0��� �������� 0��� ��� �� �� ����1�

��� ��� ������ �����,� ��� �����0��, �����������

���2��3 �� ������� ������������ ��� �� 4�*( ���

� ���" 5� ����� �� 4�*( ��� � ��� �������������#"

67*( ��� 6 ��� ���������,# ��� 7�*( ��� 7 ���

���� ����� �/������#" ��� � 2��� ����,����� ���

�� 7�*( ��� �� ��� 8��������� 0� ��������� �� �

������������ �9'(&6 %������ (�����" %����� (��&

��������" (������,�" �+# :������� ���������

0��� ������� �� ��������� ������������� ;�<= �����&

����� �9&9(> ������ 0� ��������� ��� ����

����� �� �� ��������������� %�� �����2�� ���

������� 0��� �������������� �� � �- �0?�# �,����

,�� ���������� ������������� ,����" @����&A>B# ��

4� C ��� 6 � ��� ������ �� �������� ������� � ��6

�� ��� ������ �@����&A>B# 0� ��� � � �����&

���� 0��,�� ���D�� %0� ���� ������� ���� ���

��,��# ���������, ��� ���D�� 0��� �������� ��

���� ,�� �� ������� ��� 0����� ��� ���0��� ,�� ��&

�������

���� ������ �� �������

$�������� �!� �� ���,���� 0� �������� ��

��������� 0��� ��� ��������� 0��,�� ���D�� ���,

��� �������� ���,��� 'EFA8@ ;�7=" ���� �� ���

���������� ����������� �� �!� �� ��,������ ������� ��

��� %� ������� ��� �����������" ��� ���,���

���� ��� 6 ���D�� ���� ��,�����, ����� �� ���

��� ����" � �������, ��� ����� �� � � �-

���� ���������� �� ����� ��������

%� ������� �9&9(> ������� ���� ��G����� ,��"

��� ���� 0��� ����� ��������, �� �!� �� ������!�

����� 0��� ����������, ���������� �� ��������&

����� ������ �� ������ %�� �����2������ ���&

���� 0��� ������� ��� ���� 0����� �< ��G����� �!�

���,� ���� � 6 �� � 5 D� ��� ������� ��������# ��

��,����� �������# ����� 0��� �������� (�������

���������� ����, ����� 0��� �������� �� ����

�� ��� ���� ���1����� ���,����� ������ �/������#

��� ��������, �� ����� 0� ���� �� ��� ��&

0��,���� �����,� ���� ,���� ������ ��9@$�# ��

���������� ��� �������, �� � ������,��� ;�)= ��� ���&

�������� 0��� ��������� ���, ��� �%:H:&9( ���&

,��� ;�4=

���� �� ���������� ����

%�� ������������� ��0�� �� �9&9(> ������

0� ���������� �� ����������� �� :����� ���������

����/ �� �������� ;6�=

�� �������

���� ���������� ��� ��������������

%� �� ������ �1������ ��� �������������" ��

������� �������, 0��� ��� �� ������ ������ 0�

%���� 5

������ �� � ������� � ����� �� ��G����� ������� �� ����

,���� ���� �� ��������� ������ �� �9&9(> ���2��

�9&9(> ,����

:������� 8 88 888 8C C C8 C88

E� � � � 6 � �

E� 6 �

E6 5

E5 � �

E� � �

E< � 6

E7 � � � � �

E) � � �

E4 � �

E�� <

E�� 4 � � � �

E�� � � �

E�6 �

E�5 �

E�� �

E�< � �

E�7 �

�� �

�� � �

9� � �

%���� �6 5 �4 ) � 5 6

!� "���#��� � ��� $ �%&' (������� ��� &����� &����������� �� )�**�+ ��,-� 5�

�� ��������� � ��� � ��� ���������� ��� ������� ������������ �� ������ �� !��

��������� �� �������� �������� ����� � ���

������ �� �������� ������� �� ������ ����� ����

����� ������ ��� ��� ����� �� � � ����� ��

��������� �� �����! "�������# �� ��� �������� ���

��� � ��������� � �������� ��� �$� %& ��������

������ �� �$� '( ������� �������� �� )����� �� ���

��! ���*��� *������ �����"����� �������� ��*���

� ����* �� %++,�� -� ������� ��� �������� � �*

����� � ���������� ������ ������� �� �$��. �$� ���

������� ����* �� �$� ���$��# /-� �� ���$ �����

��� ������ � �� ����� 0 ������ �� ��������� 1���

����� �����! ���� ������� ������� � ������� ��

������* �� ���� ���� � ��� ��� ���$���$ �������

������� ���� � ����� ��� ���� �������� �� ��������

�� �$� ���� �����# ���� ���� �������� ���� � �

��� �� � �$� ������ � ������ �� ������ ��������#

�� ���� ����* � �$� ������� �� ���� ���� �$����

����# ��* �$� ��)�� �����"����� �������� �$��

�������� � ��$ ���*��� ���� ���� � �$� ��������

���*���� �$� ��������� ����* �� �$� ���$�� ��� ����

����������� * �$� ���� �$�� �������� ������� ����

� ����� ���$ ����������������* ������� �������

���� ��������� � ������

�� �� � ����� �$� �����*��� �� ��� �������� ��

������� ������ �� �$� ������ ���� �������� �$���

������ 2�� � ������ �%0,� ����� �� � �������

�� �* ���������� �����*�� �� ���� ����� ��

������������ �� �% ������# ���������� �� ��

�������# �� ���*�������� �� �' �������� �$� ���� ���

����� �� �$� �������*��� �� ������ ���� �$��.��

��� �����$ �� (%3�# �4������ �� ��������# �� ��

����� ��������# �� ��"�� �$� ������* �� �*����� ��

��������� �$� ������������ ���4 �� �����*���

���*��� �������� �� ������� �������� ��� +�&&5� � ���

���# �$� ��������� �����*��� ���� �%% �� �%#

���������� 0( �� %6,# �������� ��*# �� �����*���

� �� ������� �$��� �����*��� ��%(# �%�# �� �%'�

���� �� ���� ���� �$� ������ �������� ���� ��

������ �������� �$� �*�� ����� �� �� ��������

�-��� %+��0� ��� �����*�� �5� -� ����������

��� � ��� �� ����� ����� �����*�� �� $��������

���� ������ ������� � �������� ����� ���

��������� �����

�$� 60 ������ ������ �� �� �������� ������ �

�� ��� % �� 0 ���� �� )����� �� �����! ���*���

���� ������ ������ 24������ �� �����! �������

�� �������� ������ ���� ��� %' �����*��� �� �$� 1��7

��$���# �� �� ����������� � ������ ���� �������

������� ��� �$�� ���������������* � 8���� % ��

0# �������� ��*� �$� �� �� �� �����"�� /-� �����

���� �������� * ��������$������ ����� ����� 0

�� '# ���$ ���� $� �� ������ ��* ������ ������

����� �$� �����! ������� �� �$� �������� ������ ��

� ������ ������� ��� ������� -��� %++�&�# �� ���

���� -��� %+6�5�# �� �� ������� -��� %+55%��

���� ������ ���� ���$ ��$�� �� ���� ��� �$�

������ �� �� �������� ����� �� �$����

���� ������ � ������ �������

� ����� %5 ������ /-� �������� ���� ��������

���� �$� ������� ���� �� ��������� �$� �����

����� ��9�� ����� ���� +�� �� 0�( . � �$� %�(& .

������� ��� ���� � �����! ������� �� ��� ����

������ ��� ��������� �������� �� +�65 �� %�'% .

���� ���� � &6 �� 5�, �� ������# �������� ��*�

�$� �����"����� �������� �� %�(& �� %�'% .

���� �� �������� � ������� �� �$� �*�� ������ ��

� ������ ������� �������# �� �$� +�65 . �����

��� ����� � � ��� �� � �$� �*�� ����� �� �� ���

������

:���� � �$� �����! �������# � ����� �� 5% ����

����� ���"��� ���� � ������ �$� ���"�� ������� ��

���$ ����� �� ������ � �� ��� % �� 0� ;��� ���"���

�(�<5%� ���� �����# �� %5 ���"��� ���� �����

��� 0 �� ���� ������ �$�� ���� �� ���������*

���� �$� ���� $�������� �$� 5% ������ �����!

���"��� ���� �������� * �������� ���$��� ��

�$� �������� ��������� �8��� �� ���� � �$� ����

������ ���������* ����� ��������# �$��� � $��$ ���

���� �� ������ �� �����*� �$� �������� ���4 �� ����

��������� ��� $��$ � =+�6&(�� 7� � ��)��

������ ���� ��"�� �� �$� ��, ���������* �� ��# ��

8��� �� /�������� �� �$� �������� ���*��� ���� � �$� �����! ������� �� ������� �$� �� ��� � �$� $���9���� �4�� ������� �$�

��������� ������������ �� ��������� * �$� /��� ���>����� �$� ������� �4�� �$��� �$� ��� ������ ��"�� �� �$� ��, ���������* �� ���

�# �����! ���"���

�� ����� ���! �� ��� " #$%& '������� ��� %������ %�������� () *(++), �)-�) (�

��� ������� �� �� �������� � ����� �� � ���

������� ����

����� �� � ������ ���������� ������� ����

����� �� �� �! ��"��� ������� ��������� ��

��#�! ����� $%�%&' ���(��� ����� �� � #��

���������� ���� )� ������ ������� �� *������ �����

��� $ ��� �� � �� ������ + ��� ��,��� �������

������� � -.. �/ �������! ��� -.� �# �������!�

-��� ������ -� �� ��� ��������

����� ��� �(�� �� � 0�� ���������� ���� ��

�������� ��� �������� ���� � ���! ��������

������� ������� �� � � ��������� 1������ -.� -0

��� -.. � ������� ����� � ��������

����� ��� �� �(�� �� � ��� ���������� ���

��� �������� ./ �2.�! ������� ���� ��� ������ ����

��� ��� �������� �������!� �� .� �2.�! ��"���

$%�%&' ���(��� + ��� ������ �� �� ��������

�)&+& .���2! �� ������� �� � �� ������� )� �����

������ ���������� ����� � ��������

������ �* � �������� � $%�%&' ���(��!� *

�. ������!� *� �� �������� � $%�%&' ���(��!� ���

*�� �� �������� 2 $%�%&' ���(��!� � ��������

��������� ���������� . ����� ������ ��� .�

��"��� ������� ���� ������� �� �������� $ ��� 3�

4�� ��� ������� &�

+ ��������� �� � ����� �� ����� ������� ��

�������� ��� ������������ ������� ����� �� ��

������� �� 4�� $%�%&' ���(�� ��� ��������

1�� ������� ������� �� � ��� $%�%&' ���(�

�� ��"��� ���������� ��� ��������� ���

������� �� � ��� �������� �� ��"��� $%�

%&' ���(���

���� ��������� � ����� ����

+ ������4����� �� � ��"��� ������� ��� $%�

%&' ���� �� �� ��� 4�� �� ������� ��

� �� �� +�4� �� + ���4� �� ������� �� ��

����� 4������� �� ��"��� ��������� �� � �� ��

+�4� �� + ������ � � � �� $%�%&' (���������

��� ������� �����(������ ������� ��������������

�� �� ����� �������5 ��� 6����� � �������

-.� -0 ��� -..�

�� ����������

+����� �� ������ � ���4�4����� �� ������������

������� �� �������� ������ �� ������������� ���

������������ ��� � �� �� ��� �������������� ����

��� �� ��� �� �������� ��� ��"���������

��������������� ������� �������� �� �� ���� ���

���� � �� ����������� � ������� �� ��� �� ������

������� �� �� �������� 7��0� 8 �� ��� ����� �����

��� ������������ �� ���������� ��������� 4����

� ������� ������ �� �������� �����4�� �� ����

������ �������� ��4������ �� ��� �"� �� ����

�4����� ��� ��������4������ ��� �(� ������ ��������

� ��� 4�� �������� ��� �� ������4���

�����(������ �� � 4��� ������������ �� � ����

������� �� �� �������� ��������� 7/9. �2.�22�2��

�.8�

�� ��� ������ � �� ��� �� �� ����� �������

��4����� �� �� ��� 4� 4�� ������ �� ���� 4��

$%�%&' (����������� ������� �� � ����4�����

�.���! ��� �������������� ��� ���/ �!� ��� �����

,������ �� ��� ����� ��� ������������� �����

���������� $%�%&'������� :)$ �������� �

�������� ��� �� ������� 4���� �� � �� ����

4� �� 4����� $���� ������ ����������� �� ��� �

���������� 4� � ����� �� ������ 4���� � ��

����� 4 ��� �� ������� ������ �� ���� �������

�;����� �� ���� � �������� ����������� -�� $%�%&'

(����������� ������ � � ��������4� ������ ���

������ ����� � �� �������� ������� ���� �����

���� �� *������ �1����!� ��� ���� ������� �� ����

����� ��������

+ �� ��� �� �������������� ��������� ��

:)$�4��� ������ �� ��� �� ������ ���� ��

����������� ����� ������� ������� ���� �����

���������� ��������� �� ������� �� � ���������

:)$� ��� �� ��� ������ ����� ���� ����� ���

,����� �� � ������� � �������4����� �� � � �� ���

���� 4 ������ 7�2���8� + � ������ �� ���

������ ������ ��� ������ �� �������� ������� ��

����� ����������� ��������� �� � ���;���

��� ������� �� ����� ����� ���� �4����� ��

4� ���������� 7��8� �� ����� ������������ ��

������ ������� ����� ������� ��� ����������

� ��������� :)$ ���������� ������� ������

4� �������� �� ��� 7��8�

'�4������� �� ������� �������4� �����������

������ � ������������ �� ���� ���������� �����

������ 4�� ��� ��������� �� ���������� ��� � �����

�� �� �������� ������� ��� � 4 ����� �� �� ������

(���� ���� ��� � ���� ���������� ����������

�� ���������� �� ��� � ���� �������� ��� ���� �� �� ������ !" #!$$"% �"&'"��

������������ �� ���������� ��� ��� �� ������ ���

����� ������� ���� �������������� �� ���� �������

�� ����� ���������� ������� ������� � !��������

����� "��� ��� ������������� ��� ������� �������� ���

���� ��� ������� ����������������� �� �� ��� ����������

���� �� ������� ���� � ��������� �������#�� �$���

�������������� ���� �� �������� �� ��������� ����

���� ������� ������������� ���� %���� &���� �� ��

� ���������� �������� ��� ������������ ���������������

��� �������������� ��"�� �� ���������� ������� ��

����������������� ��������� �� �������� �������� ��

'"��������� ��� ��������� ��� ������ �������� "���

"��� ���������� (��� ���� ���� ������ �������

�������� � �������������� ����$ �� �� ) "�� ���

������� "���� ����� �� ��������� �� � � * "��� ����

����� ���� �� � �������

+� � ����� �� �� �� �������� �������� ���������

�, -. �������� �� .����� ��� � ���������� "��

���� �� ������� ���� �������� ��������������� ���

�������� ������������ ��� , ������� !�� �������

"��� �������� "��� ���� ��������� ��������� "������

���� )/ �� ��� �������� ����� �� ��������� ! �����

�� 0 ��������� ��� � ��������� "��� ��1�����

������� ��� �� "�� ������������ ���� �� ���������

��� � ��������� �������� ������� ����������������

�� �� �������� ����� �� �������� !� ����$ �� ����

����������� "�� ��� ����������

2��������������� �������� �� �������� 34! ��

������5��� ��� ���������������� �� � ��������� ���

������ �� �������� �� �������� ������������� "��

����� �� �� ���� �������������� ���� ����������

0�� ��� �� "�� �6����� �1������ "��� �������� ��

!7�7-8 5������������ )� +� � ������ "��#� 8���

���� �� �� *�� ������������ ��� �������� ����������

�� !7�7-8 ��� 7.�9 "��� �������� �� ��������

��� ��� ������������� &��� 34! ������ ������6���

��������� ���������� �������� �������� ��1������� ��

���������� : /; ��� ��������

<���� ������������� ���� !7�7-8 �������� �� ���"

������� ��������� ����� ��������� ������� �� ������

��� ������������� ��� ���� �� ����� �� ���� �� ��1���

������� ���� ������� ���� ����� �������� �� ��� ����

�������� ������ �� �������# ����� 7��� �� �� � �����

���������� ��� ��� ���������������� �� ��������������

<� �� �������� �������� �������� �������� �� �

������ ������ �� 9����� ,�

+� ��� ������� "��#� ����� "��� �� ������ ������

!7�7-8 ����� �������� �� ��� , ��������� �� ��� =��

������ ����� "������ ��� ��>����� �� ����� "��� ����

���������� "��� �������� .�� ��������� >��� � !7�

7-8 ���5��� :7� ��� 7�0; "��� ����� �� ���������

! ��� &� "������ 0 ��1����� ���5��� :7� 7)� 7�)�

7�*� 7,,� ��� 7��; "��� ���������� "��� ��������� &

��� - &������ �� ��� ���������� ����� ������ ���� ��

���� ��������� �� �� ��?���� �� ���" ��� ������� ����

�������� ����� ��� �����5����� �� ��� ������ ���� ����

���������� ����� ��� ��������� +� ��� ����� ����

������ �� �� ���������� "��� �������� �������� ���

������� ���������� @�"����� �� �� ��������� ����

����� ���� �� ������� �� ������� ������ �� �� �������

�� "��� ��� ���� ���� �������� ������� ���� ������

����� "��� ����� ������������� �� � ���������� ���

�� �������� �������#� "��� �������� 4������������

��� ����������� ������� �� ��� !7�7-8������� �������

���"� �� .�� , �� ���� �� ������� ���� �������� ��

�������� ! "��� �� ����� +� ���� ������ �� "�� ���

����������� ����� "��� � �/ �� ������� +� �����

����� ������ +=A=++ "��� ���� ���������� �������

������ ������������ ���� ������� �������� ���� ���

������ �� ��������� ! ��� &

'������ ���������� ��� ����� !7�7-8 ���5��� ���

���� �� ���������� ������������ �� ����� �� ������

������������ ������� '�������� �� �� �����������

������� ��� ��������� ������������ ��� �����������

����� ������������� ������ ��� ��������� ����������

����� ��� ��� ���� �� ������������ ���� ����

�������� �� ������� ���������� �� ��� ���5���

,0�,)�� ��� ��� �� ����� ���������� ��� ��$�������

��� �������������� ��"�� �� !7�7-8 �������� .��

��� ������� �������������� ��� ������5������ �� ��1���

��� ��� ����� ������� ���5���� � ��� �� ��>�� �����

���� �� ���������� ��5���� ��� ������� "��� �������

���5��� ���� �� �� �������� �� ��� ���� ��� +� ��

�������� �� �������� ��� �������������� ��"�� �� !7�

7-8 �������� �� ����� � ������� �������� ,*�,��

�������� "� �������� ���� �������������� "��� >���

������

%��� ����� ���"� ���� !7�7-8 �������� �� � ����

������ ������ ���� �������� � ������ ��� ���������

����� �� ������ �� �������� ������� !7�7-8 ����

����� �� ������� ���� �������������� ��� �1��� ������

����������� ���� ���������� +� ���� ��� ��� ������

����� �� ��������� ��������� ����������� ��� ��������

���� �� 5��������� �������������� �������� "���

����� ��������� �������� ���� �� ���������� ���

7.�9 +� ��������� "���� ��������� ����� ��� ��

�� ��������� �� ��� � ���� �������� ��� ������� ��������� �� �� �! "�#$� �

���� ������� ��� �������� � ��� ����������

��� ���� �� �� ���� � �������� ���� ����� ������

��� � ��� ��������� �� ����������� ������� ��

�������� ������� ������������ ������ �� �� ���

������� ������� ������ �������� ���������� ����

���� ������ � ������ ���� �������� �������

!���� ��"����������� �� ������#� �� ������ ��

"������� ������ �� �������� ��"������������ �"�� ��

�� ����� �������� ��� ��� �� ���$������� ����

��������� � ����"��� ������������� �� ��� ������

���������� ��"�������� � �� ���������

�������������

%� �� ���� �� �� ��� �������� � ��"�����

������& �� '� (������� )������ *������� +�

!�,- �� �� +������ ).������� (����� /��"������

��,- ��� �� 0� (��12� �� +���� ).������� ��12����

/��"�������� 3�������� *����,�

���������

456 (������ (�+� )5775, ������� ��� ������ ������ 8�&

'����� � �������� '���������� )9������ ��� .������

%�0�� .������ :�+�� 8������� .��� ��� *������� .�0��

;���,� ��� <=7�<<5� ������� *������ � '����������� %����

������� ��� /*��

4=6 !����� '�%�� ��"���� .�9� ��� (������#� !�0� )57>7, ���

���������� ������ � ������� �������� ����� ��

�������"� ��������� 0� 9�������� 7?� ?@AB?@>�

4@6 +��� ��3�� '��������� .�� :������ .� ��� 9����� C� )57?@,

*�"�� � ������������ ��$� ������� �������� � �������

��������� 8��� 0� *���� 9�������� @@� =A>B=><�

4<6 +��� ��3� ��� %���� *� )577D, C��� ��� ��$� ������� �����

���� � ������� ��������� 0� ����� '�������� =?� 7==B

7=A�

4A6 .�����#� ��;�%�� '������� +�'�� ����� +�� ��"���� �����

*����� ���� ��� ���� (�9� )57?@, ������� ��������

�������� �� �������� ���� ������ �����& � ����� � �����

�������"� ����������� ������ �� ����� �� ����������������� E

������������ 8� ���� 8����� <=� 5FDB5FF�

4>6 *����� ���� ��� ��������� '�;� )57?F, .������� ����������

��� � ������� �������� �� �������� ���� ������ �

������ 0� .���� 8� ���� 7� 55B=5�

4F6 ����� C�+� )57??, ;�������������� ������ � �������

��������� ;�� 0� ����� '�������� 8� ���� ���� F� =@?B=<F�

4?6 *������� 9�� E����� ���� ��� *����� ��9� )57?>, 8���"��

���������������� ������ � ������ ������ � �������

��������� 0� ����� '�������� =<� 5D5FB5D==�

476 9����#�"� C�� �������� .�� E$������ 9�� 9���G��� '�%� ���

.����� �� )577>, ��������� � ��������� ��� ������ ��

��������� � ������� �������� �������� �� ������

����� ��������� 0� ����� '�������� @<� =D=B=D<�

45D6 9������ ;�.�� ������� ;� ��� ;����� 0� )577<, /�� � ����

������ �� ��������������� ��"�������� � ���������� ����

���#�� ����� '�������� ��"� F� @55B@=F�

4556 9����� ��*�� *������� .�.�� *����� �� ��� !�������� �� )577@,

���������� � ������� �������� & ������������ ����

��� ��� ������ �� � ���� � ��������������� �������� 0� �����

'�������� @5� F5BFF�

45=6 ������� ;�� ������ 9�� (������� ��� 9������ ;�� +������ ��

��� ;����� 0� )5775, ���������� � ������� ��������

�� ������ �� ������ �����& �������� ������ �� �������

������������� ��� ��� ��������� ������ ������ �����

������� ��������� ;��������� 8� ���� 5D>� A@5BA@7�

45@6 (������ !�� ��GG����� 9�� ���� �� ��� (������ E�(� )577<,

������������� � ������� �������� ������ �� �������

���& ���� ������������ ���� �� ����� � ������ ���������

������������� 0� '��� '�������� <D� =FAB=?5�

45<6 (�������� .�� *�������� ��� .������ ��� �������� !���

��� ����� C�+� )577A, ������������ ���� � ���� ����

����� ������ ��������� � ������� ��������� 0� �����

'�������� @@� A=?BA@<�

45A6 '���� %�;�� :���� '� ��� !���� ��0� )577@, ����������

������������ �������� � �������� ������� ��������

������& ��� �� ������������� ���� �� � ������ ��� ����

������� 0� ����� '�������� @5� 5<=>B5<=7�

45>6 .��� *�%�� .��� :���� C��� %��� ��� .�� 9� )577>, (�����

������������� �������� � ��������� ������� �������

� �������� �� ������������� �������� ������� ������ ������

0� ����� '�������� @<� AFABAF?�

45F6 :�������� ��� *�������� '�0�� �������� �� ��� 9��� ��;�

)577A, ��������� � �������� ����� ��� ��� �������

������� )������ ��� ��� �������������, ������ � �������

�������� ������ �� ������ ����� ��������� 0� ����� '����

����� @@� ==5>B==57�

45?6 ������� ��� "�� 9��#��� ��� 9���� ��� (�������� %�� '���

���� 0� ��� 3������ .� )577>, C����� � �������

�������� ������ �� �������� ���� ������ �����& ���������

��� "���� ����������� ����� '�������� 8� ���� 5� =>5B=>A�

4576 E���� ��0� ��� .������G� 0� )577@, ���������� ��� ����

�������� ��� ���������� � �������������� 8�& ���

C�������� �� !��� ��� 9�"���� '���������� ):���� ��(��

(������ �� ��� *������� '�� ;���,� ��� =>AB=?A� *�9 C����

*�� @5� 9���#����� E� ��� /:�

4=D6 "�� 9��#��� �� )577<, ��� ���������� � ��������� ���

������ ������������ �� ��� � ���� ����� '�������� ��"�

F� 5F<B5?<�

4=56 ;���������� ��� 3���������� (�� ������� (��

��"����������� '�� (����� �� ��� 3������������ '�

)577<, ������� �������� ������� E5= ������# �������

�� ������ ���� ���� 0� ����� '�������� @=� >>>B>F5�

4==6 '��������������� ;�� ��������� '�;�� !����� 0�� +��� 0�*�

��� *����� ���� )577>, ������ ����� �� ���������� ���

������ � ������� �������� �������� ���"��� �� ���

������ ���� ������ ������ 0� ����� '�������� @<� 55=7B55@A�

4=@6 %����� 0� ��� '���������� '� )577D, !����������� �������

�� ���������� �� ��� � ���� �������� ��� ������� ��������� �� �� �! "�#$�<>

����� ��� �� �� ����� �������� ������� ����� ���� ���

����������

�� ! "�������� #�$�%�� %� ���&� ����� '�(�&� %�#�� ��)���&�� #���

��� *������ +�,� -�../0 1�� �2���2������ �����3�� �

�� ����� ������� ��� ���)�� �� ������ ���&���� ������� �����

���� ��� 45���45�5�

��5! 6������2��� ����������� �������� *����� +��� $�2��

-�.. 0 � ��������� �2������2� 2) ��2�� )2� ����� ������

2) ����������� �������� ����2������� )�2� ������ ��

����� 3 �2���� #� 6�)��� 1��� �4.� �� �� ��

��4! %�2&� +� ��� 7������ �� -�.�.0 �(2����� )���� �2���(�� ��

���� ����� -'2��2�0 ��.� ��������

���! $�� ���� 8� ��� 72) ����� �� -�..�0 � �2����� ��2����

)2� �2������� ���� ���������2� 2) 1�� )�������

-79":6$0� ��:69+ �� ������.�

���! +���� ��7��� ��� +2&��� ���� -�.��0 ��������� *�;2�2���

"�7� <������� +�� <�������2� ��� =+��

��.! �2�)� #� -�.��0 ��������� *�;2�2�� ��� 8���(����� ���>

����� +���� )2� � 6:8 �� 8���2�2������ ��� ���4� ��>

����� :�2�������� +���&�� �?� =+��

��/! 7����� ���� ��� $��2�� 8��� -�.��0 ��������� ����; 2) �

�����������2� � ���� 2) ����� ������@ �� ��������2� 2)

+����2�A� ����; 2) ��(������ #� ����� 8���2 �2�� �4� � 45�

� 44�

���! ��� *�'�� '�(���2��� 1�8�� ������ 1�� ,�2�2��2�� ����

��� '���&��� ��#� -�.�.0 8���������� ���2��� 9�� �������

����� �������� @ �(������ )2� � �2��2� ����� �� B��2���

B������2�� 6�)��� �/�� 545�5�4�

���! 8���2�� 8���� 8�������� 8�B� ��� �� ��� ��1� -�..�0 82>

������� �������2�2��@ ��������2� 2) �2����2���� ����C���

2 � ����� 2) ����22��������� ����� 6�)��� 1��� ��� �5��

�4 �

���! 7���� '�8��� -�.. 0 ��� �2�� ����2�� 2� 1�� ���������>

���� ����2��� �� )2� � �������2� )������ ���� �2��>

�2������ � ��� ���� 2 ��� ������D� 8���2 �2�2��

� /� �.���/ �

�� ! +2&2�� ����� '���� 8�� +2���� 1�$� ��� *���&&������� ��

-�.. 0 $����� ������������ ���2����� �� �� (�(2 ���2��

�2�(����2� 2) ����������� �������� ��9 �� ��� 2 �����>

�2� �������� #� :�����2�� ��4� 55��54��

��5! *��2(��� <���� �� ��� ��1�� $2������ ��,�� 8��&������ �����

8������ :�B�� �������� 1�7� ��� +��������� :� -�..50 6�>

�������� ��2�2�2��� 1�� �������2� ������ ��2�����

� ������>3��� ��� �����2�2�����@ ������� )2� ������� �����

������ #� ����� 8���2 �2�� ��� ��������.�

��4! B����2�� 1�'�� ����2���� %�1� ��� 72������ ��'�

-�..�0 ���)����� (�����2� �� ����2��� �����3�� �2��>

�2���� 1�� ������ ������� :�2*����C��� � � �� �����

���! ������� $���� :��� ��� "���� ��� %��� "�� 12����� '��

%���� %�� '��2��� ��� +�2���� $�� 82����� +�#� ��� <���&�

$� -�..�0 ����2���� ���� 2) ����2� �����3�� �2���2����

1�� -���10 �������� ��2�� �� 2��2����� ��� 8�2��

��������2�� �� � ��� 5�

���! 8������ 8���� :2(�� ��� ��������2� �� ��� 1A�� �2��2� B�

-�..�0 ����2��� �����3�� �2���2���� 1�� 3�����������

����� �2� ����2�� 2) 2���2�����2��� �������� :�2*����C���

�5� �����./�

��.! "���� #� ��� 8���������� 8� -�..�0 $��2��� 3�����������

����� �� ������� ������ ��� ��� � ����; 2) �������� �2�>

����2�� 2) �������� ������� ����� ���� �.� 5��5�5��.�

� ��������� �� ��� � ���� ��������� ��� ������� ���������� �� �� �! "�#$� �