View
8
Download
0
Category
Preview:
Citation preview
Metody pro monitorování terapie
Drahomíra SpringerÚKBLD VFN a 1.LF UK Praha
Toxikologie
• Kvalitativní a kvantitativní identifikace léků a chemických jedů v biologických tekutinách a tkáních k právním účelům.
• Studium jedů, jejich původu a vlastností
• Léčivo –substance s farmakologickým účinkem na organismus
• Zneužívání –– Výškou dávky– Mimo nutnou potřebu – Jiné než původně zamýšlené užití
• Závislost – nedostatek (psychický nebo fyzický)
Farmakologie
je vědní obor studující
• účinky látek (farmak) na živé organizmy a jejich osud v organizmu
• interakci látek a organizmu na všech úrovních složitosti (molekulární, buněčné, orgánové, celého organizmu)
Klinická farmakologie
• Farmakokinetika - zabývá se osudem léčiv v organizmu a jejich účinkem z hlediska časového průběhu – vliv organizmu na léčivo
• Farmakodynamika - nauka o mechanizmu účinku léčiv – vliv léčiva na organizmus
• Farmakoepidemiologie - sleduje chování léku ve společnosti a epidemiologickými metodami zjišťuje rizika a prospěšnost terapie.
» vedle faktorů jako je chemická podstata léčiva a interakce léčiva se somatickými strukturami, je nutné brát v úvahu i faktory vnějšího prostředí jako je chování zdravotníka, chování samotného pacienta - compliance a chování společnosti k léku - marketing, konkurence, způsob úhrady
Farmakologie jako předpoklad racionální farmakoterapie
• Racionální FT = správný lék, správnému pacientovi, ve správné dávce a formě, ve vhodnou dobu, za rozumnou cenu
Podávané léčivo• znalost
–mechanizmus účinku ( !! duplicita)
–farmakokinetika (lékové interakce)
–nežádoucí účinky• NÚ léčiv jsou příčinou 6,5% hospitalizací (minimálně
třetině lze předejít)
–účinnost
–cena (nákladová efektivita)
Postup racionální FT• určení pravděpodobné diagnózy
• pochopení patofyziologie a možností farmakoterapie
• pochopení farmakologie (PK/PD) vybraného léku
• výběr nejvhodnějšího léku (účinnost, NÚ, cena)
• výběr cílů léčby..účinnost, snášenlivost (risk/benefit)
• vytvoření terapeutické aliance s pacientem (compliance)
• zpětná vazba…optimalizace
Farmakokinetika
• Farmakologický receptor - působení na buněčné úrovni
– kovalentní vazba - ireverzibilní účinky, alkyl. cytostatika, ihibitory cholinesterázy
– elektrostatická vazba - náboj na léčivu, rychlejší přenos
– dipól-dipól, H2 můstky, hydrofobní vazby -nejčastější, působí na krátkou vzdálenost
• Konformace léčiva - vedlejší účinky nepreferované
formy při vysoké koncentraci léčiva
Biologický účinek
• Je ovlivňován
– aktivitou na farmakologických receptorech
– koncentrací v cílové tkáni
– věkem, pohlavím, nemocemi
– změnami při vazbě na transportní bílkoviny
– rychlostí eliminace léčiva
Terapeutická koncentrace
• Zvyšování koncentrace léku nevede ke zvyšování účinku– distribuční prostor léčiva je omezen biologickými
bariérami– rozdělení na kompartmenty -koncentrace se mění
skokem
• Průnik bariérami– prostá difuse - hnací silou je konc. gradient– usnadněná difuse - na nosiči– aktivní transport - hormony, vitaminy– pinocytóza - vysokomolekulární látky, dextran
Pohyb léčiva v organismu
• ABSORPCE– cesta podání– charakter léčiva– biologická dostupnost
• DISTRIBUCE– tělesná hmotnost– prokrvení tkání– rozpustnost v tuku– místní rozdíly v pH– vazba na bílkoviny
• METABOLISMUS -BIOTRANSFORMACE– játra, ale i ledviny, plíce a RBC– změna terapeutického účinku– eliminace je dána rychlostí
metabolických procesů i průtokem krve játry a vazbou na bílkoviny
• EXKRECE– močí -léčivo rozpustné ve vodě– žlučí - v tuku rozpustná léčiva
Farmakokinetická teorie
Matematické vyjádření pohybu léčiva
– Přímé podání léku
• injekce
• infuze
– Jednokompartmentový model
• homogenní rozptýlení molekul v distribučním prostoru
Farmakokinetická teorie
• Extravaskulární podání léku - stejné pro jedno- i dvoukompartmentový model
– perorální, podkožní, nitrosvalové
– nástup maxima nezávisí na koncentraci léku, ale na rychlosti přestupu
– maximální koncentrace závisí na podané koncentraci
Farmakokinetická teorie
• Dvoukompartmentový model
– injekce - fáze distribuční a eliminační
– infuze - dojde k ustálenému stavu
Dosažení rovnovážného stavu
Opakované podání léku
• Biologický poločas– vliv na kumulaci léčiva v
distribučním prostoru
• 1.dávka - nárazová
další jsou udržovací
• Nepravidelné dávkování
Poměr odbourávání léků dle věku
Metody stanovení lékových hladin• SEPARAČNÍ
– TLC
– HPLC
– GC
• IMUNOCHEMICKÉ– RIA
– FIA
– FPIA
– EMIT
– NIIA
– DELFIA
– ELISA
Vyšetřované typy léčiv
• ANTIEPILEPTIKA ANTIKONVULSIVA– CARBAMAZEPIN
– ETHOSUXIMID
– PHENOBARBITAL
– PHENYTOIN
– PRIMIDON
– VALPROOVÁ KYS.
– CLONAZEPAM
ANTIBIOTIKAAMINOGLYKOSIDY
AMIKACIN
DIBEKACIN
GENTAMICIN
KANAMYCIN
NETILMYCIN
STREPTOMYCIN
TOBRAMYCIN
OSTATNÍ
CHLORAMPHENICOL
VANCOMYCIN
Vyšetřované typy léčiv• KARDIOTONICKÉ
GLYKOSIDY– DIGOXIN– DIGITOXIN
• ANTIARYTMIKA– CHINIDIN– LIDOCAIN– DISOPYRAMID– PROCAINAMID– PROPRANOLOL
• ANTIASTMATIKA –BRONCHODILATANCIA– THEOPHYLLIN
• ANALGETIKA, ANTIPYRETIKA– ACETAMINOPHEN– ACETYLSALICYLOVÁ KYSELINA
• ANTINEOPLASTIKA (CYTOSTATIKA)– METHOTREXAT
Vyšetřované typy léčiv
• IMUNOSUPRESIVA– CYKLOSPORIN
• ANTIDEPRESIVA– TRICYKLICKÁ
• AMITRIPTYLIN• DESIPRAMIN• IMIPRAMIN• NORTRIPTYLIN
– SOLI Li+ (PROFYLAKTIKA)• LITHIUM
• DROGY– ETHANOL– KOKAIN– OPIÁTY– BENZODIAZEPINY– BARBITURÁTY– AMFETAMIN– CANABINOIDY– METHADON
Testování na drogyKdo a kdy testuje
• Přijímání do zaměstnání
• Důvodné podezření
• Rutinní lékaři
• Rehabilitační monitorování
• Náhodné testování (bezpečnost)
• Veřejná doprava
• Testování sportovců
Typy vzorků
• Moč – léky, drogy
• Slzy, sliny – drogy a alkohol
• Krev – alkohol speciální odběrové zkumavky
• Tkáně (játra, slezina a pod.)
• Žaludeční obsah - léky
Detekční okno
• Většina drog - 3 až4 dny (cocaine, heroin, methamphetamine)
• Marihuana - 10 dní a víc, závisí na užití
• Pokud se vzorek odbírá příliš brzy, nemusí se hladina léku odrazit v tělních tekutinách
• Moč se odebírá 3-5 hodin po požití léku nebo drogy
Analýza ve vlasech• Použití vlasů
– nelze zajistit tělní tekutiny
– časová linie expozice
– falešně pozitivní výsledky z krve a moče
• Analýza– odběr vzorku
– sekční analýza (0,45mm/den)
– promytí, homogenizace, extrakce
• Nevýhody– neexistují shodné podmínky
ukládání drogy
– pro malý počet NL
– užití jen u malého procenta vzorků
– dražší než běžné metody
Rozdělení vyšetřovacích metod
• Orientační
– testovací proužky, kazety, nádobky pro moč
– zvláštní kazety pro sliny
• Semikvantitativní
– imunochemické stanovení
• Konfirmační
– GC/MS, náročné a drahé
– nezbytná úprava vzorku před analýzou
Testovací proužky
• Rychlá detekce pro
– Amphetaminy
– Benzodiazepiny
– Kokain
– Konopí
– Opiáty
Test v odběrové nádobce• Detekce následujících
drog
– Amphetaminy
– Barbituráty
– Benzodiazepiny
– Kokain
– Morfin
– PCP
– THC
Monotesty
• jednoduché provedení
• možnost uchování výsledku
• nutnost číst dobře návod
Vyšetření ve slinách
Stanovení alkoholu ve slinách
Citlivost od 0,02% alkoholu
v krvi
Preanalytická část
• odběrová zkumavka, dříve nepoužitá
– detergenty, chlornany - ruší stanovení
• skladovat při 2-8oC do 48 h, pak mrazit
• vzorek minimálně 1 ml moče
– pro analýzu stačí 100-150 l moče
• označení vzorku a odeslání do laboratoře
Imunochemické stanovení na automatickém analyzátoru
• FPIA - fluorescenční polarizační imunoanalýza
• provádí 60 vyšetření za hodinu
• pracuje po pacientech
• připojení do LISu
• IQC a EQC - certifikát od SEKK, DGKC a INSTAND
Výsledky imunoanalytických vyšetření• Hladina léku
– terapeutické rozmezí
– program TDM
• Hladina návykové látky v moči
– nekoreluje s její hladinou v krevním oběhu, ani se stupněm odbourávání.
– indikuje požití drogy v nedávné minulosti
– výsledek určený pro soudní účely potvrdit konfirmační analýzou v toxikologické laboratoři
Chromatografie• kvantitativní informace
• s příslušnou koncovkou i kvalitativní informace
• distribuce složek směsi mezi mobilní a stacionární fází
• doba zdržení složky závisí na velikosti její interakce se stacionární fází
• základní dělení podle mobilní fáze:
plynová (GC)
kapalinová (LC)
Dělení chromatografie podle uspořádání
CHROMATOGRAFIE V PLOŠNÉM USPOŘÁDÁNÍ
• sorbent v tenké vrstvě
• papírová chromatografie (PC)
• chromatografie na tenké vrstvě (TLC)
• detekce složek – často specifické barevné reakce
• základní údaje – vzdálenost skvrny od startu a vzdálenost mobilní fáze od startu
• možná další analýza skvrn
Dělení chromatografie podle uspořádání
SLOUPCOVÁ CHROMATOGRAFIE
• stacionární fáze v koloně
• za kolonou detektor (spektrofotometr, refraktometr, vodivostní detektor, ...)
• základní údaje – doba zdržení v koloně (retenční čas) a intenzita signálu
• vysokovýkonná kapalinová chromatografie (HPLC) zavedení nových sorbentů s menšími částicemi a vyšší mechanickou odolností + práce za zvýšeného tlaku
Plynový chromatograf
Chromatogram
• B – Amphetamine
• D – Extáze
• E – EDDP
(metabolite of methadone)
• F – Methadone
• G – Cocaine
• H – Cocaethylene
• L – THC
•B – Amphetamine
•D – Extasy
•E – EDDP
(metabolite of methadone)
•F – Methadone
•G – Cocaine
•H – Cocaethylene
•L – THC
Typy MS
• GC-MS - Gas Chromatography MS– rozdělení těkavých látek v plynovém chrom. a
identifikace podle hmotnosti
• LC-MS - Liquid Chromatography MS– oddělení nestabilních látek v HPLC koloně a
identifikace podle hmotnosti
• MS-MS - Tandem Mass Spectrometry– oddělení složek v magnetickém poli a identifikace
podle hmotnosti
GC-MS
Typický hmotnostní spektrometr
Typické hmotnostní spektrum
aspirin
Recommended