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UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE BAJA CALIFORNIA SUR
ÁREA DE CONOCIMENTO DE CIENCIAS DEL MAR
DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE BIOLOGÍA MARINA
TESIS
REVISIÓN TAXONÓMICA DE LOS CAMARONES CARÍDEOS
DEL GÉNERO SANDYELLA (DECAPODA: CARIDEA) CON
EVIDENCIA MORFOLÓGICA Y GENÉTICA
QUE PARA OBTENER EL GRADO DE:
MAESTRA EN CIENCIAS MARINAS Y COSTERA
PRESENTA:
ARIADNA ESMERALDA ÁVILA GARCÍA
DIRECTORES:
DR. CARLOS ARMANDO SÁNCHEZ ORTIZ
DR. JAIME GÓMEZ GUTIÉRREZ
LA PAZ, BCS, MÉXICO, NOVIEMBRE DE 2015
Esta tesis de maestría se realizó dentro del “Programa de Investigación para la
Conservación de la Fauna Arrecifal” de la Universidad Autónoma de Baja California Sur
(PFA-UABCS) bajo la responsabilidad del Dr. Carlos Armando Sánchez Ortiz y del
programa “Biología y Ecología del Sistema Marino Pelágico-Costero” del Centro
Interdisciplinario de Ciencias Marinas (CICIMAR-IPN) bajo la responsabilidad del Dr.
Jaime Gómez Gutiérrez. La investigación fue realizada con los apoyos de los proyectos:
SEMARNAT-CONACyT 2004-01-445 “Biogeografía y sistemática molecular de los
abanicos de mar y corales blandos (Cnidaria: Octocorallia) del Pacífico Mexicano y Golfo
de California”; PROMEP 2006 “Evaluación del efecto de la captura acuarística sobre las
poblaciones naturales de fauna arrecifal, y bases para su manejo en el suroeste del Golfo
de California”; CONABIO 2013-JF190/13 “Inventario sobre la fauna sésil y flora marina en
Islas del Pacífico de Baja California Sur” y el Proyecto de Monitoreo Ecológico
(ProMares) UABCS-SCRIPPS-CBMC (Archipielago de Revillagigedo 2006, archipielago
de Islas Marías, Noviembre 2010 y Golfo de California 1998-2015). También esta tesis
forma parte de los productos del Cuerpo Académico UABCS-CA-43 “Ecosistemas
marinos y sus servicios ambientales”. Ariadna recibió una Beca CONACyT Nacional
para Programa Nacional de Posgrados de Calidad (PNPC) para estudiar maestría en la
Universidad Autónoma de Baja California Sur y recibió apoyo económico de CONACyT
Beca para Estancias Cortas- EUA CONACyT para estancias de Investigación en la
Universidad Texas A&M, USA y en el Museo Nacional de Historia Natral de Paris, Francia
Beca para Estancias Cortas- Francia CONACyT 2015-2016 y los proyectos SIP-IPN 2013-
2015 (20140497 y 20150113), Ciencia Básica CONACyT 2012 Interacciones parasíticas de los
eufáusidos y sus depredadores en el Golfo de California para inferir sus ciclos de vida.
Proyecto: CONACyT CB-2012-178615-01.
PROGRAMA DE INVESTIGACIÓN PARA LA CONSERVACIÓN DE LA FAUNA ARRECIFAL A.P. 19-B, LA PAZ, BCS 23080, MÉXICO, TEL (612) 123-8800 EXT 4130
“Los viajes permiten descubrir que hay en el mundo muchas
personas de corazón excelente, dispuestas siempre a serviros
aun cuando no se les haya visto jamás ni vayan a volverse a
encontrar nunca”.
Charles Darwin
Dedicatoria
A mis preciosas e inteligentes hijas:
Jacqueline mi pequeña mayor, que me demuestra cada día lo grande que es a su corta edad. “Siempre me siento orgullosa de ti, cada día doy gracias a la vida por tenerte y porque la
vida me dio la oportunidad de ser una mamá de una niña no sólo hermosa sino maravillosa, inteligente, creativa y más, te amo y toda mi vida la tendrás disponible para amarte, cuidarte,
procurarte y tratar de hacerte feliz”.
Paula que con su sueño de alcanzar las estrellas y que sé que un día alcanzará, me acerca cada día a ellas en cada una de sus sonrisas y su paciencia de esperar a mami para jugar.
“Gracias por enseñarme desde pequeñita a mantener mis metas y trabajar cada día en ellas, si de algo estoy segura es que alcanzarás tus estrellas y pisaras la luna, siempre daré de mi
parte para que puedas alcanzar tus sueños, te amo mi pequeña astronauta, gracias por tus detalles y todo el amor que me das cada día, son parte fundamental para que mamá pueda seguir
adelante”.
Hypatia mi pequeña viajera acompañante, definitivamente la bebé que más ha soportado las extenuantes jornadas diarias y extraordinarias de su mami,
“Gracias mi pequeña por demostrarme que si se puede contigo a mi lado, gracias por tus sonrisas, tus besos, abrazos y pequeñas palabritas apenas pronunciables de amor, gracias por tu
cansancio y tus desveladas, gracias mi pequeña, que aun cuando eres una bebé de casi dos añitos de vida, has estado presente en numerosas estancias, viajes, congresos y conferencias, te amo y aunque ya tengas tu servicio social liberado desde ahora, sé que lograrás grandes cosas”.
A mi esposo que con el paso de los años no me canso de observarlo y amarlo. “Tú me haces feliz, en este mundo de caos. A tu lado he formado lo mejor de mi vida,
único, te amo mucho más allá de los años, mucho más allá de la distancia, mucho más allá del mundo entero... Gracias mi amor por hacerme dichosa cada segundo, cada hora, cada instante, gracias por tus risas y mis risas y sonrisas que desde que te conocí la mayoría son por ti o debidas a ti, gracias mi amor por amarme tanto y dejarme hacerlo”.
A mi mamá mi ejemplo y mi apoyo que siempre me dice si “Mi madre es la mejor del mundo. Muchas veces de pequeña lo repetía constantemente,
veía a mi mamá trabajar días y noches, fines de semana y días festivos, veía una ´ma´ fuerte, valiente y feliz, ahora también digo que tengo la mejor mamá del mundo, mi mejor ejemplo, porque gracias a ella soy y estoy, te amo mami, gracias por enseñarme tantas cosas, gracias ma por todo” A mis hermanos Cuauhtémoc, Emmanuel y Claudia que cada uno a su forma me ha enseñado algo de la vida y me han acompañado en momentos decisivos en mi vida, gracias porque aun cuando no siempre hablamos o nos vemos, están ahí para mí como yo estoy para ustedes.
“Claus, cada día doy gracias por tener una hermanita como tú, sin ti nada sería igual y sin tu apoyo muy seguramente las cosas serían mucho más complicadas... gracias por estar siempre ahí, siempre escuchándome, apoyándome y alegrándote, te adoro hermanita hermosa preciosa”.
A mi tía Lourdes Portillo, mis primas y primos que aunque no podemos vernos tanto como queremos están presentes en mi vida y desde lejos hacen sentir sus porras y sus buenos ánimos.
A mi mami, que siempre se hizo presente en mi vida y que me enseño muchas cosas, “Aunque no pueda verte más siempre estarás viva en mis recuerdos y mis genes”.
A la familia Rivera Velázquez y todas sus ramificaciones, a la Sra. Clemencia y Don José que siempre han estado presentes y son un ejemplo de vida.
A la Familia Trujillo Narváez Rivera gracias por el tiempo compartido, gracias Sra. María Fátima Rivera Velázquez, por su ánimo, por su apoyo y las innumerables pláticas para que todo salga lo mejor posible en el tiempo adecuado.
A mis amigos y especialmente a Magui, Rosy y Mel ya son 8, sí 8 largos años de compartir experiencias, gracias por sus ánimos, sus porras, sus alegrías y sus múltiples apoyos en muchas cosas que pasan en mi vida.
Agradecimientos
A CONACyT por la beca de posgrado otorgada para realizar la Maestría durante el periodo de dos años (2014-2015).
A la Universidad Autónoma de Baja California Sur y al programa CIMACO por las facilidades prestadas para estudiar la Maestría y la Dirección General de Posgrado de la UABCS para gestionar los apoyos para las estancias en el extranjero en especial a Hyndra, Narda, Abril y el Dr. Jorge Urbán por toda su gestión y apoyo.
A CICIMAR en especial al Laboratorio de Zooplancton que me recibió durante la estancia de morfología y al laboratorio de Microbiología que me recibió para cursar la materia de Métodos en Biología Molecular y realizar los análisis moleculares.
A la Universidad de Texas A&M de Texas, E.U.A. por recibirme durante mi estancia de análisis molecular,
Al Muséum National d’Histoire Naturelle de París Francia por su recibimiento, préstamo de material y la mejor comunicación para la revisión del material de colección.
A mis directores de tesis,
Dr. Carlos Armando Sánchez Ortiz (UABCS) que ha sido promotor en mi carrera en la Biología Marina y que me ha apoyado a conseguir las metas y objetivos planteados durante esta tesis,
Dr. Jaime Gómez Gutiérrez (CICIMAR) por todo su tiempo, paciencia, apoyo, conocimiento, interés, aliento, largas pláticas sobre este proyecto y que ha sido uno de los principales interesados en conocer, ampliar e impulsar el trabajo realizado.
A los integrantes del comité tutorial y asesores
Dr. Rafael Riosmena (UABCS) por siempre estar pendiente del trabajo por sus comentarios, confianza y ayudar a que todos los trámites sean posibles,
Dra. Bárbara González Acosta (CICIMAR) excelente maestra y por su conocimiento compartido sobre la parte práctica de la genética, gracias por su apoyo, paciencia, interés e impulso en esta investigación.
Dra. Elizabeth Borda de la Universidad de Texas A&M por todo su apoyo, ayuda y los medios, antes, durante y después de mi estancia y por su conocimiento compartido, el interés en la investigación, críticas y comentarios que me ayudaron a ir un poco más allá y dar más pruebas objetivas para la investigación.
y al Dr. Gerardo González Barba (UABCS) por su apoyo en los trámites
A la Dra. Maria Pia Miglietta, todo su equipo y estudiantes especialmente a Katie Gillis y Taliese LaVerne por recibirme en el laboratorio, por todo el apoyo, recomendaciones y juntas, realmente han sido de las mejores experiencias profesionales.
A Martin Lefevre, Marie-Catherine Boisselier, Paula Rodríguez Moreno por ayudarme en las gestiones y mantener la comunicación constante para realizar la estancia en el Muséum National d’Histoire Naturelle de París Francia,
… especialmente a Laure Corbari por todo su apoyo y gestión para realizar todos los trámites relacionados con la beca y mi estancia y
a Sébastien Soubzmaigne por su tiempo, paciencia, ayuda, préstamo de los materiales de colección, de material de laboratorio y otorgarme un lugar en tu laboratorio para la revisión.
M. en C. Isabel Vega por su apoyo en el trabajo de muestras y que este trabajo pudiera realizarse.
A Ariel Cruz y CIBNOR por su disposición para el tratamiento de muestras para MEB y enseñarme un poco acerca de la técnica.
IX Reunion Vilallobos, Red Temática MEX-BOL (Código de Barras de México) y Barcode of Wildlife Project por el interés en el tema y ser foro para la presentación de este trabajo, gracias por sus críticas y comentarios.
Al Lic. Alejandro Molina Rangel del consulado de Laredo Texas por todo su apoyo, gestión y ayuda para realizar la estancia en Galveston, Texas
Al Físico Orville Heloín Trujillo Narváez Rivera por su apoyo y mantener siempre comentarios objetivos a lo largo de esta carrera y maestría que fueron el principal aliciente para realizar mis estudios, la investigación y las estancias, gracias por tu tiempo, desveladas y acompañamiento.
A la M. en C. Cecilia García Uriarte y a la Lic. Claudia Ávila García por su interés, apoyo económico, emocional y profesional y ser mis compañeras de viaje durante las estancias.
A Lic. Estela García León del Consulado de Laredo, Texas y a fotógrafo Jon Guido Bertelli por su tiempo y apoyo en ambas estancias.
A mis profesores de maestría
Dr. Roberto Carmona Piña, Dr. J. I. Urciaga, Dr. Guzmán Po, Dr. Arizpe, Dr. Héctor Reyes Bonilla y nuevamente a los miembros de mi comité que fueron mis profesores, gracias por su conocimiento, su tiempo y su alta calidad en la enseñanza.
A la Dra. Mónica Lara Uc y al Dr. Juan Manuel López Vivas por su tiempo y apoyo profesional y anímico, gracias por sus comentarios y críticas y por todo el interés mostrado a lo largo de esta maestría e investigación.
A mis compañeros del posgrado de CIMACO ustedes saben que fueron y son parte elemental en mi crecimiento a lo largo de la maestría, fue un gusto coincidir a lo largo de estos dos años y se que será una amistad a lo largo de la vida, muchas gracias por su apoyo, porras, pláticas, horas compartidas y de estudio, en especial a Lupita, Chucho, Carlos, Paco, Paulina, Edgar, Cinthya, Celene, Saúl y José Manuel.
A mis compañeros en la materia y estancias en CICIMAR, por su apoyo y trabajo en equipo en los laboratorios de microbiología.
y a TODO el Equipo PFA-UABCS por todo su apoyo técnico y anímico.
Resumen
El género Sandyella Marin, 2009 actualmente incluye cinco especies de camarones
simbiontes, cada especie ha sido descrita con uno a tres individuos. La especie tipo
Sandyella tricornuta (Hendrickx, 1990) simbionte del coral negro (Antipathes
galapagensis) se estableció con el criterio de tres protuberancias en el cefalotórax (más
seis protuberancias abdominales). En posteriores descripciones de especies el criterio
taxonómico consideró indistintamente el número de protuberancias del cefalotórax y
abdomen, originando confusión en la designación de los nombres específicos y en la
discriminación de especies del género Sandyella. En este estudio a partir de una extensa
colección de camarones S. tricornuta de 13 islas del Golfo de California, se obtuvieron
2,905 individuos que mostraron un claro dimorfismo sexual (4♀:1♂). En su desarrollo
ontogénico en el coral negro, S. tricornuta mostro cambios morfológicos tanto en hembras
como en machos desde su talla de reclutamiento (2 mm LT) hasta la talla máxima (14 mm
LT), presentando hembras ovígeras a partir de los 4mm. Con microscopia óptica y
electrónica se observó que las protuberancias dorsales y abdominales individuales crecen
y se incrementan en número, particularmente las hembras presentan más protuberancias
que los machos. Cada individuo exhibe protuberancias de distinto tamaño, forma y
orientación que ocasiona una elevada variabilidad individualidad en la población que
facilita el mimetismo en su hábitat. La evaluación de la morfología de S. tricornuta
evidenciaron que sus distintas formas ontogenéticas corresponden claramente con las
descripciones morfológicas e intervalo de tallas de sus conespecíficos S. maclaughlininae.
S. bicornuta, S. quadricornuta y S. sexicornuta. Con base al análisis molecular de
secuencias de ADNmt-CO1 cuyas secuencias son idénticas (<0.5% de variabilidad
intraespecífica). Además, la revisión de holotipos en el Museo Nacional de Historia
Natural de París, Francia se comprobó que los holotipos y paratipos coinciden en la
morfología encontrada en el desarrollo ontogenético de Sandyella tricornuta. Con
evidencia ecológica, biológica, morfológica y genética, se establece por prioridad
taxonómica que todas las especies de Sandyella son sinónimos de S. tricornuta. Más aún,
no se aprecian criterios integrativos para soportar a S. tricornuta como especies
monotípica, por lo que se aquí se considera el restablecimiento del nombre original de la
especie como Chacella tricornuta junto con su especie hermana Ch. Kerstitchi. Esta
investigación demostró que no es recomendable describir nuevas especies con pocos
especímenes y con un virtual desconocimiento de su biología, ecología y genética.
Abstract
The genus Sandyella Marin, 2009 currently includes five shrimp species that are
symbionts of the black coral (Antipathes galapagensis). Each species was described
with less than three specimens considering only morphological criteria. The type
species, Sandyella tricornuta (Hendrickx, 1990), was established based on three
protuberances located on the cephalothorax (plus six protuberances on the trunk).
In the other four most recently described species, this taxonomic criterion for genus
diagnosis was changed to counting the total number of protuberances located in
the carapace and the trunk, causing confusion in the taxonomy of the genus. We
collected Sandyella 2,905 individuals from 13 islands of the Gulf of California, with
total length ranging between 2 and 14 mm, with gravid females from 4mm. Based
on observations of morphology with optical microscopy, Scanning Electron
Microscopy, it was evident that individuals of both sexes vary in morphology,
increasing the number of dorsal protuberances during their ontogeny; as well,
females have more protuberances than males. Each individual has a different size,
shape and orientation of the protuberances enhancing the morphological
individuality in the population that facilitates mimicry in their habitat. These different
morphologies during the ontogeny of Sandyella corresponded to descriptions of
morphology and size range of the species S. bicornuta, S. quadricornuta, S.
sexicornuta, S. maclaughlininae, and S. tricornuta. Therefore, we conclude that all
species are synonymous of S. tricornuta (the first species described for the genus).
Individuals with al morphological forms had CO1 data with variability <0.5%.In
addition, the review of holotypes at the National Museum of Natural History in
Paris, France was found that the holotype and paratype match morphology found
in the ontogenetic development of Sandyella tricornuta. With ecological, biological,
morphological and genetic evidence is established by priority taxonomic all species
are synonymous with S. tricornuta. Furthermore, no conclusive criteria were found
for integrative support to S. tricornuta as monotypic species of the genus
Sandyella, which is here considered restoring the original scientific name of the
species as Chacella tricornuta along with C. kerstitchi as the only species know so
far for the genus Chacella. This research showed that it is not advisable to
describe new species with few specimens and a virtual absence of knowledge of
their biology, ecology, and genetics.
Índice de Figuras
Figura 1. Camarón carideo Sandyella tricornuta sobre su simbionte coral negro
Antipathes galapagensis. Foto tomada por Sánchez (2010)
06
Figura 2. Camarón carideo Dasycaris kerstitchi Wicksten, 1983. 07
Figura 3. Camarón carideo Dasycaris zanzibarica Bruce, 1973. Tomada de
WoRMS Photogallery, foto tomada por Charles Fransen, Indonesia, 2009.
07
Figura 4. Camarón carideo Chacella tricornuta Hendrickx, 1990. 08
Figura 5. Especies nominales del género Sandyella. Los esquemas se presentan
de forma comparada en proporción a su longitud total a la escala respectiva
distinguiendolos por el símbolo de sexo. Los números representan el número de
especímenes utilizados para su descripción morfológica y asignacion como
nuevas especies.
12
Figura 6. Localidades de recolecta en el Golfo de California, México. 16
Figura 7. Frecuencia de longitudes totales por sexos para cada morfotipo de
Sandyella. Número de protuberancias totales, Hebras: a) 2 protuberancias (1
cefalotórax, 1 abdomen); b) 4 protuberancias (3 cefalotórax, 1 abdomen); c) 7
protuberancias (3 cefalotórax, 4 abdomen); d) 9 protuberancias (3 cefalotórax
y 6 abdomen). Machos: e) 2 protuberancias (1 cefalotórax, 1 abdomen); f) 4
protuberancias (3 cefalotórax, 1 abdomen); g) 6 protuberancias (3 cefalotórax,
3 abdomen); h) 10 protuberancias (3 cefalotórax, 7 abdomen; único
espécimen).
24
Figura 8. Espécimen macho de Sandyella tricornuta con 10 protuberancias (5
cefalotórax, 5 abdomen; único espécimen) de 9.5 mm longitud total.
25
Figura 9. Variabilidad morfológica intraespecífica en machos de 2 protuberancias
totales (1 cefalotórax, 1 abdomen) con distinta longitud y orientación.
26
Figura 10. Variabilidad morfológica intraespecífica en machos de 4
protuberancias totales (3 cefalotórax, 1 abdomen) con distinta longitud y
orientación.
26
Figura 11. Variabilidad morfológica intraespecífica en hembras de 7
protuberancias totales (3 cefalotórax, 4 abdomen) con distinta longitud y
orientación.
27
Figura 12. Variabilidad morfológica intraespecífica en hembras de 9
protuberancias totales (3 cefalotórax, 6 abdomen) con distinta longitud y
orientación.
27
Figura 13. Macho de dos protuberancias (1 cefalotórax, 1 abdomen) de 6.86 mm
LT. Además se observan dos protuberancias en desarrollo en el cefalotórax.
a) espécimen completo; b y c) vista dorsal; d y e) vista lateral derecha.
29
Figura 14. Macho de dos protuberancias (1 cefalotórax, 1 abdomen) de 6.86 mm
LT. Además se observan con mayor acercamiento las dos protuberancias en
desarrollo en el cefalotórax. a) espécimen completo; b) vista dorsal, se
observan protuberancias en el cefalotórax en desarrollo; c) vista frontal; e) ojo
con protuberancia superior.
30
Figura 15. Macho de cuatro protuberancias (3 cefalotórax, 1 abdomen) de 12.27
mm LT. a) espécimen completo; b y c) vista dorsal con protuberancias en el
cefalotórax en crecimiento; c) vista lateral derecho.
31
Figura 16. Macho de seis protuberancias (3 cefalotórax, 1 abdomen) de 14.28
mm LT. a) espécimen completo; b) protuberancia central frontal del
cefalotórax bien desarrollada; c) vista dorsal con tres protuberancias en el
cefalotórax bien desarrolladas; d) urópodos.
32
Figura 17. Hembra de siete protuberancias (3 cefalotórax, 4 abdomen) de 8.58 mm LT. a) espécimen completo; b) vista frontal; c) vista doral; d) vista lateral izquierdo; e) vista ventral; f) telson.
33
Figura 18. Hembra de nueve protuberancias (3 cefalotórax, 6 abdomen) de
10.19 mm LT. a) espécimen completo; b) vista dorsal; c) vista lateral izquierdo;
d) vista frontal; e) vista ventral; f) telson; g) acercamiento urópodo externo.
34
FIGURA 19. Comparación de la morfología de los organismos completos
tomados de las publicaciones y del presente trabajo.
42
Figura 20. Comparación de pereiopodos disectados. 43
Figura 21. Comparación de pleópodos disectados. 44
Figura 22. Otros apéndices disectados. 45
Figura 23. Desarrollo ontogenético machos de la especie Sandyella tricornuta. 47
Figura 24. Desarrollo ontogenético hembras de la especie Sandyella tricornuta. 48
Figura 25. Desarrollo ontogenético para machos mostrando las protuberancias
en crecimiento del cefalotórax.
49
Figura 26. Uso de marcadores genéticos en crustáceos del infraorden Caridea. 52
Figura 27. Tipo de estudio de marcadores genéticos en crustáceos del
infraorden Caridea.
52
Figura 28. Alineación hacia adelante de especímenes de la especie Sandyella
tricornuta en sus diferentes etapas de crecimiento recolectadas en el Golfo de
53
California.
Figura 29. Análisis de secuencias COI con el Método de Máxima Verosimilitud.
La historia evolutiva se infiere utilizando el método de máxima verosimilitud
basado en el modelo de Hasegawa-Kishino-Yano,1985. Se muestra el árbol
con la probabilidad de registro más alto (-802.6142). El porcentaje de árboles
en los que se muestra los taxones asociados agrupados junto a las ramas.
Árbol inicial (s) para la búsqueda heurística se obtuvieron de forma automática
mediante la aplicación del enlace del Vecino más cercano y algoritmos BIONJ
a una matriz de distancias por pares calcula utilizando el método de máxima
verosimilitud Composite (MCL). Luego de seleccionar la topología con el valor
de probabilidad de registro superior. El análisis incluyó 31 secuencias de
nucleótidos. Codón posiciones incluidos fueron primero + segundo +
Noncoding. Todas las posiciones que contienen lagunas y los datos faltantes
fueron eliminados. Hubo un total de 310 posiciones en el último conjunto de
datos. Análisis evolutivo se realizaron en el programa MEGA6.
54
Figura 30. Análisis molecular de Inferencia Bayesiana. Cadena de Markov
3,000,000 generaciones, con el muestreo de cada 1000 generaciones.
55
Figura 31. Frasco 1. Chacella quadricornuta. Muestra 1. a) Espécimen 1.
Holotipo macho; b) Espécimen 2. Paratipo hembra (depositado en Museo
Nacional de Historia Natural, Paris, Francia).
57
Figura 32. Frasco 2. Chacella bicornuta. Muestra 1. Espécimen 1. Holotipo
macho (depositado en Museo Nacional de Historia Natural, Paris, Francia).
58
Figura 33. Frasco 3. Chacella mclaughlinae. Muestra 1: a) Espécimen 1.
Holotipo hembra; Muestra 2: b) Espécimen 2. Paratipo macho; Muestra 3:
c) Espécimen 3. Paratipo hembra. Muestra 4: d) Espécimen 4. Paratipo
hembra, e) Espécimen 5. Paratipo torso de hembra ovígera f) Espécimen 6
y 7. Cefalotorax, g) Espécimen 8. Paratipo hembra, h) Espécimen 9.
Paratipo hembra Muestra 5: i) Espécimen 10. Paratipo hembra, j)
Espécimen 11. Paratipo hembra, k) Espécimen 12. Paratipo hembra
(depositado en Museo Nacional de Historia Natural, Paris, Francia).
63
Figura 34. Rango de distribución de Sandyella tricornuta actualizado.
Registros previos: Islas Marías (Hendrickx, 1990), Isla Clipperton (Li, 2006;
Li & Poupin, 2009) y Los Islotes, Golfo de California (Wicksten &
Hernández, 2000). Registros nuevos: Región norte, centro y sur del Golfo
de California (ANEXO III).
92
Figura 35. Modelo conceptual de la distribución de Sandyella tricornuta y Antipathes galapagensis. (ANEXO III)
93
Índice de Tablas
Tabla I. Especies nominales de camarones de los géneros Chacella y
Sandyella.
09
Tabla II. Total de publicaciones taxonómicas de la especie del género Chacella
y Sandyella. Número y sexo de los especímenes utilizados para describir cada
una de las especies.
10
Tabla III. Lista de las Islas del Golfo de California donde se obtuvieron muestras
de crustáceos del género Sandyella.
15
Tabla IV. Especímenes del género Sandyella analizados de la colección del
Museo Nacional de Historia Natural de París, Francia.
21
Tabla V. Comparación de tallas de las especies reportadas y los organismos de
Sandyella tricornuta en el Golfo de California.
25
Tabla VI. Marcadores moleculares empleados en crustáceos del orden
Decapoda, infraorden Caridea entre los años 2000 al 2014.
51
Tabla VII. Características distintivas entre las especies de acuerdo a las claves
de identificación, propuestas ahora como guía para distinguir estadios de
desarrollo ontogenéticos de la especie tipo Sandyella tricornuta
(Hendrickx, 1990).
86
ÍNDICE
INTRODUCCIÓN 1
Antecedentes 6
Planteamiento del problema 11
Justificación 13
HIPÓTESIS
OBJETIVO GENERAL
13
14
Objetivos específicos 14
ÁREA DE ESTUDIO 15
METODOLOGÍA 16
Taxonomía morfológica 17
Taxonomía molecular 18
Revisión de Holotipos 20
RESULTADOS 22
Taxonomía morfológica 22
Distribución de frecuencia de la longitud total (LT) 22
Variabilidad morfológica intraespecífica 23
Microscopía Electrónica de Barrido (MEB) 28
Diagnosis morfológica 35
Particularidades morfológicas en machos 39 Particularidades morfológicas en hembras 40 Desarrollo ontogenético 46
Taxonomía molecular 50
Selección del marcado molecular 50
Análisis molecular del marcador COI 53
Revisión de holotipos 56
DISCUSIÓN 64
CONCLUSIONES 77
LITERATURA CITADA 78
ANEXOS 86
1
INTRODUCCIÓN
Actualmente se han reportado 3,438 especies de crustáceos repartidos en 389
géneros del infraorden Caridea (Orden Decapoda), pertenecientes a 16
superfamilias que habitan en ecosistemas dulceacuícolas y marinos en el mundo
(De Grave et al., 2008; De Grave et al., 2011). De la superfamilia Palaemonoidea
la familia Palaemonidae incluye 981 especies repartidas en dos subfamilias:
Palaemonidae y Pontoniinae, esta última cuenta con 602 especies lo que la
convierte en una de las subfamilias más diversas de este infraorden. Estas
especies están distribuidas alrededor del mundo, aunque la región con mayor
riqueza específica se encuentra en el Indo-Pacífico (De Grave, 2001; De Grave
et al., 2011).
Los miembros del infraorden Caridea son abundantes en las comunidades
epibénticos y contribuyen con la estructura y función de los ecosistemas
acuáticos, estableciendo comúnmente asociaciones temporales o para durante
todo su ciclo de vida con otras especies como cnidarios, esponjas, moluscos,
equinodermos, estomatópodos, peces y otros crustáceos. Estas asociaciones
simbióticas, en ocasiones únicas, hacen que los camarones carideos sean
organismos ideales para el estudio de procesos de simbiosis, ecología, etología
y biología evolutiva (Bracken et al., 2009). Por lo tanto, una de las mayores
características biológicas más interesantes de numerosas especies (subfamilia
Pontoniinae), es la habilidad de tener asociaciones simbióticas con una variedad
de taxones hospederos. Se estima que el 60–70% de las especies de la
subfamilia Pontoniinae tiene una asociación comensal con otras taxones (De
Grave, 2001; De Grave et al., 2011).
Dentro del grupo de los carideos simbiontes, recientemente se incluyeron cinco
especies más pertenecientes a un nuevo género Sandyella (Marin, 2009). Las
especies fueron descritas con escasos especímenes (generalmente de 1 a 3
2
individuos por especie) asumiendo una supuesta relación con corales negros del
orden Antipatharia (Hendrickx, 1990; Li, 2006; Li & Poupin, 2009; Marin, 2009,
2010).
El género Sandyella actualmente incluye cinco especies: Sandyella tricornuta
(Hendrikx, 1990), Sandyella mclaughlinae (Li, 2006), Sandyella bicornuta (Li &
Poupin, 2009), Sandyella quadricornuta (Li & Poupin, 2009) y Sandyella
sexicornuta (Li & Poupin, 2009). Éstas especies han sido caracterizadas por una
coloración y ornamentación dorsal a lo largo del cuerpo que semeja y se
mimetiza con los pólipos verdosos característicos de los corales antipatarios
(Marin, 2009, 2010).
Debido a sus características morfológicas crípticas, su estrecha relación
simbiótica con el coral negro y el bajo número de especímenes recolectados en
el género Sandyella, hace que su biología, morfología y ecología sean
deficientemente conocidas. La especie tipo del género, Sandyella tricornuta
(Hendrickx, 1990) es una especie que se distribuye en el Pacífico Oriental
Tropical (POT) (Hendrickx, 1990, 1993, 1995; Wicksten & Hendrickx, 1992;
Hendrickx & Wicksten, 2003). Sánchez (2010) mencionó el amplio ámbito de
distribución batimétrica que debe tener S. tricornuta debido a su asociación
simbiótica específica con la el coral negro Antipathes galapagensis; el cual se
distribuye desde los 20 a 200 m de profundidad. La localidad tipo de S. tricornuta
es la Isla María Madre (Archipiélago de Islas Marías, Nayarit) recolectada con
red de arrastre entre 30-40 m de profundidad (Hendrickx, 1990).
S. tricornuta fue adicionalmente reportada en Los Islotes, Isla Espíritu Santo
B.C.S., localizada al suroeste del Golfo de California, a 30 metros de profundidad
mediante recolecta manual en “bosques” de coral negro (Wicksten & Hernández,
2000). S. tricornuta se caracteriza por tener nueve protuberancias a lo largo de
su cuerpo, notoriamente tiene tres protuberancias subconicales en superficie
dorsal del cefalotórax que son las que inspiraron su nombre específico tricornuta
3
(Figura 1) (Hendrickx, 1990). Esta peculiar morfología y coloración le confiere
una apariencia críptica que se asemejan a los pólipos del coral negro (Sánchez,
2010). A la fecha se han publicado cinco trabajos sobre taxonomia y cuatro
listados taxonómicos sobre S. tricornuta, todas las publicaciones se basan en
registros de un solo ejemplar (holotipo: hembra ovígera) (Tabla I y II).
Sandyella mclaughlinae (Li, 2006) fue descrita sólo con 3 hembras ovígeras
recolectadas en la isla Clipperton, se diferencia de S. tricornuta, debido a que la
pleura del primero de los tres segmentos del pleón no son muy largos y presenta
4 protuberancias abdominales en vez de seis como S. tricornuta (Li & Poupin,
2009).
Sandyella sexicornuta (Li & Poupin, 2009) fue descrita con solo una hembra; sin
embargo, el esquema muestra la morfología y características de un macho; con
la quela izquierda característicamente más grande que la derecha y asimétricas
que marcan un dimorfismo sexual común en especies del Infraorden Caridea. S.
sexicornuta se diferencia de S. tricornuta y S. mclaughlinae debido a que en la
superficie antero-dorsal del primer segmento del pleón no presenta una
prolongación membranosa (Li & Poupin, 2009).
Sandyella bicornuta (Li & Poupin, 2009) y Sandyella quadricornuta (Li & Poupin,
2009) fueron descritas con un sólo espécimen macho cada una recolectados en
las Isla Clipperton, siendo similares en la mayoría de los caracteres
morfológicos, excepto en la ausencia de dos prolongaciones en la superficie
dorso lateral del cefalotórax en S. bicornuta (especie que tiene aparentemente
sólo dos protuberancias y presenta sólo una protuberancia en el medio del
cefalotórax), mientras que S. quadricornuta presenta tres protuberancias como el
resto de las especies del genero Sandyella y una protuberancia en el tercer
segmento del abdomen (Li & Poupin, 2009).
En las especies descritas hasta ahora del género Sandyella el criterio
4
taxonómico de definición se basó principalmente en el número de protuberancias
del cefalotórax (S. tricornuta) y en el número de protuberancias en el cefalotórax
y el abdomen (en las cuatro especies restantes) (Anexo I). Este cambio de
criterio taxonómico ha creado confusión en la taxonomía del género y los
nombres específicos por que no se ha seguido un criterio homogéneo ni lógico.
Por ejemplo, S. tricornuta tiene nueve protuberancias en todo el cuerpo, mientras
que el resto de las especies si consideran como carácter taxonómico distintivo el
número total de protuberancias encontradas en el cefalotórax y el abdomen.
Implícitamente Li (2006), Li & Poupin (2009) y Marin (2009, 2010) asumieron la
hipótesis de que el número de protuberancias de cada especie no cambia a lo
largo de su respectivo desarrollos ontogenético y asumieron que este es un
carácter taxonómico válido y constante a lo largo de todo su ciclo de vida.
Actualmente, el listado taxonómico World Register of Marine Species considera
a estas cinco especies como especies válidas (Fransen & De Grave, 2011;
webpage World Register of Marine Species (http://www.marinespecies.org,
revisado 6 Octubre, 2015).
Ávila-García (2013) observó en un estudio enfocado en la estructura poblacional,
distribución y abundancia de Sandyella tricornuta en el Golfo de California una
amplia variación morfológica y un incremento progresivo del número de
protuberancias en relación con la longitud total de los individuos, además
presentó un marcado dimorfismo sexual desde individuos pequeños (2-3 mm de
longitud total) cuando se asientan en el coral negro Antipathes galapagensis
después de una fase larvaria planctónica hasta ahora de duración desconocida.
Estos organismos tienen cambios morfológicos ontogenéticos hasta las mayores
tallas de crecimiento corporal (12-14 mm de longitud total) (Ávila-García, 2013).
A partir de la observación de numerosos especímenes (n>2905) se percibió de
que todas las especies incluidas en el género Sandyella posiblemente sea una
sola especie que por prioridad taxonómica, si llegaran a ser un caso esta sería
S. tricornuta.
5
Debido a lo anterior en esta tesis se estudió la morfología externa a lo largo del
desarrollo ontogenético de S. tricornuta desde las tallas más pequeñas de
asentamiento encontradas hasta las tallas máximas de esta especie asociadas
al coral negro, y la genética molecular de especímenes recolectados a lo largo
del Golfo de California. En este estudio taxonómico de S. tricornuta, se revisaron
los caracteres taxonómicos que definen al género Sandyella y a sus cinco
especies para generar evidencias integrativas que relacionen la taxonomía
morfológica, variabilidad génica e información biológica-ecológica, permitiendo
evaluar la diversidad específica, variación morfológica a lo largo de su desarrollo
ontogenético y así comprender de mejor forma sus patrones de distribución y su
posible función en el ecosistema béntico como simbionte del coral negro
Antipathes galapagensis. Esta tesis plantea la hipótesis que los individuos de S.
tricornuta (especie tipo) en su desarrollo ontogenético en el simbionte las
protuberancias del cefalotórax se incrementan en número y crecen conforme
incrementan su talla (longitud total), de ser esto válido las cinco especies
actualmente descritas e incluidas en el género Sandyella sería una sola especie
biológica.
La descripción taxonómica de las especies es una relevante actividad científica
para cuantificar y conceptualizar la diversidad, rangos de distribución y conocer
la estructura de las comunidades de especies en el planeta. Sin embargo,
describir nuevas especies con un número pequeño de especímenes y con
desconocimiento de su desarrollo ontogenético, distribución, abundancia y
demás atributos poblacionales tiene riesgos y son propuestas con poco sustento
científico que eventualmente afecta la comprensión de la estructura de las
comunidades biológicas y la función ecológica de cada una de las especies en el
ecosistema donde habitan.
6
Figura 1. Camarón carideo Sandyella tricornuta (Hendrickx, 1990) sujeto sobre su
simbionte coral negro Antipathes galapagensis. Foto tomada por Sánchez-Ortiz
(2010).
Antecedentes
La especie Dasycaris kerstitchi Wicksten, 1983 (Caridea, Palaemonidae,
Pontoninae) (Figura 2) fue descrita de un espécimen recolectado en el Golfo de
California (San Carlos, Sonora, México) (Figura 2). Ésta especie fue la primera
reportada para el género Dasycaris en el Pacífico Oriental Tropical (POT) debido
a que las restantes cuatro especies se distribuyen en la región del Indo-Pacífico.
La inclusión dentro de Dasycaris se debió a la presencia de un diente
prominente en el cefalotórax semejante a Dasycaris zanzibarica Bruce, 1973
(Figura 3) y se distinguió como otra especie por tener segmentos en el abdomen
más largos, los periopodos no presentan espinas en los propodios y el patrón de
coloración es diferente: D. kerstitchi tienen una coloración rosácea mientras que
D. zanzibarica es transparente (blanco) con bandas marones y amarillas
(Wicksten, 1983). Los patrones de coloración usualmente los ayuda a
mimetizarse con la coloración de su hospedero el coral negro Cirrhipathes
anguina, tal como se muestra en la Figura 3.
7
Figura 2. Camarón carideo Dasycaris kerstitchi Wicksten, 1983.
Figura 3. Camarón carideo Dasycaris zanzibarica Bruce, 1973. Tomada de WoRMS
Photogallery, foto tomada por Charles Fransen, Indonesia, 2009.
El único espécimen de D. kerstitchi (holotipo: hembra) fue recolectado en San
Carlos, Sonora, Golfo de California y fue reportado asociado al coral negro
Antipathes grandis Verrill, 1928. Sin embargo, la identificación actual de esta
especie de coral negro tiene alta incertidumbre, debido a que A. grandis ha sido
reportada únicamente para Nueva Zelanda (EOL, 2015); mientras que en el POT
8
solo se han registrado dos especies someras de coral negro Myriopathes
panamensis y Antipathes galapagensis (Marzia et al., 2012; Ulate, 2015). Bruce
(1986), propuso que D. kerstitchi debía ser incluida en un nuevo género,
Chacella (en honor al Dr. Fenner A. Chace), siendo el principal criterio
taxonómico la ausencia de flagelos sobre los exópodos de los maxilípedos, que
si presentan las cuatro especies del género (D. ceratops, D. doederleini, D.
symbiotes, D. zanzibarica). De esta forma el género fue formado inicialmente
monoespécifico incluyendo únicamente a Chacella kerstitchi endémica del
Pacífico Oriental Tropical (Bruce, 1986).
Cuatro años después fue incluida al género Chacella una segunda nueva
especie nombrada como Chacella tricornuta Hendrickx, 1990 (Figura 4) descrita
a partir de un espécimen hembra ovígera distinguida por la presencia de
protuberancias en forma de dientes a lo largo del cefalotórax y del abdomen.
Esta hembra fue recolectada cerca de la Isla María Madre del Archipiélago de
Islas Marías, Nayarit, México.
Figura 4. Camarón carideo Chacella tricornuta Hendrickx, 1990.
Li (2006) describió una tercera especie Chacella mclauglininae recolectada en la
Isla Clipperton, sin determinar con certeza si el espécimen estaba asociado con
9
coral vivo o no. Li & Poupin (2009) adicionaron otras tres especies: Chacella
bicornuta, Chacella quiadricornuta y Chacella sexicornuta también recolectadas
en la isla Clipperton, sin mencionar tampoco ninguna posible asociación con
algún hospedero.
Marin (2009, 2010) revisó la posición taxonómica de las especies del género
Chacella, asignado a cinco de sus seis especies (excluyendo a C. kerstitchi) en
un nuevo género Sandyella (S. tricornuta, S. mclauglininae, S. bicornuta, S.
quiadricornuta y S. sexicornuta). El nuevo género Sandyella fue nombrado en
honor al Dr. Alexander (Sandy) Bruce (experto taxónomo de camarones
carideos). La justificación taxonómica para este cambio de género fue el patrón
de las ornamentaciones (protuberancias) dorsales del caparazón y de los tres
primeros somitas abdominales, las características particulares sobre los bordes
redondeados en ojos, rostro y pleópodos. En consecuencia el género Chacella
volvió a ser monotípico con la especie Chacella kerstitchi, debido a que no
presenta protuberancias subconicales prominentes en el cefalotórax y en el
abdomen (Figura 2) (Tabla I y II). El valor taxonómico-evolutivo de estos
caracteres morfológicos para el establecimiento de nuevos géneros es
actualmente debatible debido a la falta de información biológica, ecológica y
genética para sustentarlos.
Tabla I. Especies nominales de camarones de los géneros Chacella y Sandyella.
Género Especie
Chacella Bruce, 1986
Chacella kerstitchi (Wicksten, 1983)
Sandyella Marin, 2009
Sandyella tricornuta (Hendrickx, 1990)
Sandyella mclaughlinae (Li, 2006)
Sandyella bicornuta (Li & Poupin, 2009)
Sandyella quadricornuta (Li & Poupin, 2009)
Sandyella sexicornuta (Li & Poupin, 2009)
10
Tabla II. Total de publicaciones taxonómicas de la especie del género Chacella y
Sandyella. Número y sexo de los especímenes utilizados para describir las especies.
Autor Año Ind/
Sexo Especie Localidad Tipo Observaciones
Talla
(mm)
Wicksten 1983 1♀ Dasycaris kerstitchi
San Carlos, Sonora,
Golfo de California
Descripción holotipo 7.10
Bruce 1986 * Chacella kerstitchi Cambio de género 7.10
1989 1♂ Chacella kerstitchi Descripción macho ND
Hendrickx 1990 1♀ Chacella tricornuta
Islas Marías, Nayarit
Descripción holotipo 13.70
Hendrickx 1993 * Chacella tricornuta Listado taxonómico 13.70
Wicksten &
Hernández 2000 7 Chacella tricornuta Los Islotes, BCS Amplia distribución ND
Hendrickx &
Wicksten 2003 * Chacella tricornuta
Islas Marías, Nayarit
Los Islotes, BCS Listado taxonómico 13.70
Li 2006 5♀1♂ Chacella mclaughlinae
Isla Clipperton
Descripción holotipo
9.14
Li & Poupin 2009
1♂ Chacella bicornuta 6.36
1♀1♂ Chacella quadricornuta 7.85
1♀ Chacella sexicornuta 10.60
Marin
2009
* Sandyella mclaughlinae
Cambio de género
9.14
* Sandyella tricornuta 13.70
2010
* Sandyella bicornuta 6.36
* Sandyella quadricornuta 7.85
* Sandyella sexicornuta 10.60
* : Se refieren a los ejemplares de la descripción original, sin adicionar nuevos especímenes. ND= Sin reportado de tala (longitud total) de los especímenes.
11
Planteamiento del problema
De la comparación morfológica derivada de la revisión bibliográfica (Tablas I y II)
se detectó una confusión en los criterios taxonómicos para determinar las
especies incluidas en el género Sandyella. Además considerando que la mayoría
de las especies fueron descritas fueron realizadas con muy pocos individuos
(<7) solo en S. mclaughlinae fueron 6 individuos, lo que en total para todas las
especies de Sandyella (5 spp.) y Chacella (1 sp.) se utilizaron 13 especímenes.
De las cinco especies de Sandyella, S. mclaughlinae y S. quadricornuta han sido
descritas usando especímenes de ambos sexos, con un mayor número de
hembras siendo considerablemente menos conocida la morfología de los
machos e incluso mal identificados. Esto manifiesta un notorio desconocimiento
del dimorfismo sexual de las especies del género Sandyella.
Revisando y analizando las descripciones taxonómicas de cada una de las
especies de Sandyella, el dimorfismo y esquemas morfológicos en función de las
longitudes totales reportadas, se plantea la hipótesis que en conjunto todas las
especies del género Sandyella son en realidad una sola especie que presenta
distintas morfologías a lo largo de su desarrollo ontogénico sobre su hospedero,
en donde el número de protuberancias del cefalotórax y abdomen se
incrementan y crecen en correspondencia con respecto al crecimiento de la
longitud total. Por tanto las especies de Sandyella representan expresiones de
variaciones morfológicas intraespecíficas, en vez de variaciones morfológicas
interespecíficas y en consecuencia por prioridad taxonómica Sandyella tricornuta
sería la única especie nominal del género (Figuras 4 y 5; Anexo I). Esta
perspectiva ha motivado la revisión taxonómica del género Sandyella debido a la
escasa información taxonómica, biológica, ecológica y genética de las especies
que conforman el género y sobre la disposición de numerosos especímenes
(2905) recolectados de S. tricornuta en un estudio previo en el Golfo de
California (Ávila-García, 2013) se pretende hacer la taxonomía integrativa de
este género.
12
Figura 5. Especies nominales del género Sandyella. Los esquemas se presentan de
forma comparada en proporción a su longitud total a la escala respectiva
distinguiéndolos por el símbolo de sexo. Los números el número de especímenes
utilizados para su descripción morfológica morfológica y asignación como nuevas
especies.
2009)
2009)
2009)
13
Justificación
Describir, comparar y distinguir las características morfológicas de las distintas
fases de vida de Sandyella tricornuta y estas fases a su vez comparado la
morfología de sus conespecíficos, se obtendrá información con valor
taxonómico, que sumada a la información de secuencias de ADN mitocondrial,
permitirá categorizar y establecer si esta especie presenta amplia variación
morfológica en el número de protuberancias a lo largo de su ciclo de vida o si el
género Sandyella está integrado por cinco especies que presentan
características morfológicas que no varían a lo largo de su ontogenia y con
secuencias moleculares del gen mitocondrial citocromo oxidasa subunidad I
(COI), lo suficientemente variables para ser especies distintas. Este estudio
pretende comparar la morfología de especímenes recolectados en el Golfo de
California a través de todo el gradiente ontogénico de talla (2–14 mm longitud
total) recolectados en el coral negro y comparar las descripciones realizadas de
las especies previamente descritas del género Sandyella, así como los holotipos
de tres de ellas que se encuentran depositadas en el Museo de Historia Natural
de Paris, Francia. La comparación morfológica permitirá esclarecer de forma
asertiva y fundamentada, una revisión crítica de la validez taxonómica de las
especies nominales incluidas en el género Sandyella.
HIPÓTESIS
Se propone la hipótesis que la especie S. tricornuta incrementa el número de
protuberancias y tamaño de estas en el cefalotórax y abdomen directamente
asociados al crecimiento de los organismos (longitud total). Si esta hipótesis es
validada implicaría que todas las especies actualmente incluidas en el género
Sandyella son en realidad distintas estadios ontogenéticos de S. tricornuta
(variaciones intraespecíficas).
14
OBJETIVO GENERAL
Analizar la variabilidad morfológica intraespecífica de Sandyella tricornuta
durante su desarrollo ontogénico (juvenil a adulto) como hospedero del coral
negro Antipathes galapagensis en el Golfo de California y determinar si sus
cambios morfológicos corresponden a las características morfológicas presentes
en otras especies del género Sandyella, a partir de la integración de evidencias
morfológicas, biológicas, ecológicas y genéticas.
Objetivos específicos
• Analizar los cambios morfológicos ontogenéticos en ambos sexos de S.
tricornuta con el uso de técnicas de microscopia óptica y de microscopía
electrónica de barrido.
• Analizar la estructura de tallas de la población de S. tricornuta en ambos
sexos en función del número y crecimiento de las protuberancias presentes
en el cefalotórax y abdomen.
• Comparar la morfología ontogenética de S. tricornuta con respecto a las
descripciones taxonómicas de S. mclaughlinae, S. bicornuta, S. quadricornuta
y S. sexicornuta.
• Establecer el marcador molecular de ADN para el analizar de la variabilidad
intraespecífica e interespecífica dentro del infrorden Caridea y subfamilia
Pontoniinae.
• Analizar el grado de variación de las secuencias moleculares en S. tricornuta
en función de su ontogenia y sexo en el Golfo de California.
• Determinar las especies válidas para género Sandyella y revisar la validez
taxonómica de este género.
15
ÁREA DE ESTUDIO
El Golfo de California (20º a 32º LN; 105.5º a 114.5º LO) es un mar marginal
semi-cerrado con comunicación con el Océano Pacífico a través de una boca de
222 km de ancho localizada al sur del golfo. Se ubica al noroeste de México,
delimitado por la Península de Baja California y la costa continental de los
estados de Sonora, Sinaloa y Nayarit. El Golfo comprende un área de ~1,500 km
de longitud con ancho variable (92 a 222 km) a lo largo de este. La superficie
marina cubre aproximadamente 247,000 km2 y alcanza profundidades 3,500 m.
El Golfo de California se ha dividido biogeográficamente y oceanográficamente
en tres regiones: norte (>28° N), centro (25-28° N) y sur (<25° N) (Espinoza-
Carreón & Valdez-Holguín, 2007; SEMARNAT, 2011). El presente estudio se re-
analizaron los especímenes recolectados en 12 islas localizadas a lo largo de la
costa peninsular del Golfo de California enlistadas a continuación (Tabla II;
Figura 6).
Tabla III. Islas del Golfo de California donde se recolectaron muestras de especímenes
del género Sandyella.
ID Nombre de la localidad Latitud Longitud
1 Isla Poma 29.555 -113.561
2 Isla Ángel de la Guarda 29.555 -113.561
3 Isla Dátil 28.716 -112.292
4 Isla Salsipuedes 28.719 -112.949
5 Isla San Pedro Mártir 28.371 -112.302
6 Isla Tortuga, Punta Oeste 27.451 -111.902
7 Isla San Marcos, Islotes 27.256 -112.096
8 Isla Coronado, Punta Blanca 26.127 -111.259
9 Isla Carmen, Punta Perico 25.966 -111.069
10 Isla Santa Cruz 25.259 -110.718
11 Isla Las Animas 25.089 -110.567
12 Los Islotes, Espíritu Santo 24.562 -110.366
16
Figura 6. Localidades de recolecta en el Golfo de California, México.
METODOLOGÍA
La colección invertebrados del Proyecto de Fauna Arrecifal de la UABCS, incluye
especímenes de crustáceos Sandyella recolectados del Golfo de California
obtenidos de abril 2009 a marzo 2010. Del total de 2905 especímenes de
Sandyella de la colección, se seleccionaron 20 a 30 especímenes de cada etapa
de crecimiento desde juvenil (2 mm) hasta la longitud total máxima de adulto (14
mm). En cada espécimen se tomó en cuenta el número de protuberancias
dorsales (cefalotórax y abdomen) y el sexo, y de estas se obtuvieron
submuestras de especímenes para los análisis morfológicos y genéticos.
17
Taxonomía morfológica - Comparación de los especímenes recolectados
con las especies descritas del género Sandyella.
Estructura de tallas. Cada espécimen de cada etapa de crecimiento fue medido
tomando como referencia la longitud total (LT) y ancho del cefalotórax (AC). En
los machos se midió la longitud y ancho del quelípedo más grande. Se realizaron
histogramas de frecuencia de la LT de los especímenes con distinto número de
protuberancias (cefalotórax y abdomen) separados por sexo. Las distribuciones
de frecuencia de LT se compararon con las tallas de los especímenes tipos de
las especies del género Sandyella. Todos los datos están reportados en las
publicaciones y también fueron tomados de los holotipos y los paratipos que se
revisaron en el Museo Nacional de Historia Natural, Paris, Francia.
Microscopía óptica. Del material previamente identificado y separado, se
seleccionó un espécimen cada etapa ontogenética basados en el número de
protuberancias (cefalotórax y abdomen). Para cada espécimen se realizó la
disección de sus apéndices torácicos y abdominales. La morfología fue
fotografiada con un estereoscopio Carl Zeiss SV11 (zoom 0.6-6.6x) equipado
con micrómetro calibrado y con una cámara digital Canon PowerShot G11 (10
megapíxeles). La edición de las fotografías digitales se realizó con los
programas Light Room y Photoshop. Las imágenes seleccionadas de cada
apéndice fueron impresas a tamaño de 21.5 27.9 cm (hoja tamaño carta) y los
contornos de los apéndices fueron copiados en una hoja de papel albanene con
plumones de tinta negra con punto fino. Los esquemas fueron comparados con
la descripción y esquemas incluidos en las publicaciones de las cinco especies
de Sandyella (Hendrickx, 1990; Li, 2006; Li & Poupin, 2009). Estas
observaciones permitieron corroborar que el número de protuberancias y el
sexo, coincidiera con las características previamente descritas para cada
especie.
18
Microscopía Electrónica de Barrido (MEB). Del material previamente
identificado y separado, se seleccionó un espécimen cada etapa ontogenética
basados en el número de protuberancias (cefalotórax y abdomen). Estos
especímenes fueron deshidratados en soluciones graduales de alcohol (30%,
50%, 75% y 96%) por media hora para cada una y por duplicado cada una de
estas diluciones. La deshidratación gradual evitó que los especímenes se
encogieran o se arrugaran considerablemente. Los especímenes deshidratados
fueron secados con la técnica de punto crítico. Los especímenes se cubrieron
con oro por proceso de ionización y se montaron con pegamento en una base
metálica para ser observada en un microscopio electrónico de barrido marca
Hitachi modelo S-3000N en el CIBNOR, La Paz, BCS. Se tomaron imágenes
digitales de cada espécimen observando con especial atención las
protuberancias de los Sandyella en distintos intervalos de longitud total.
La información fue integrada en un diagrama conceptual de los cambios
morfológicos ontogenéticos para todos los individuos analizados por grupos de
especímenes con mismo número de protuberancia, intervalos de longitud total y
por sexo.
Taxonomía molecular
Selección del marcador de ADN molecular. Como no existen secuencias de
ADN de especies de Sandyella, se revisaron 36 artículos científicos publicados
entre los años 2000 a 2014 referentes a estudios de taxonomía molecular de
especies de decápodos carideos y así decidir que gen (marcador molecular)
presentan mejor resolución para medir la variabilidad interespecífica e
intraespecífica de los especímenes recolectados del género Sandyella. Las
secuencias de genes de ADN nuclear y mitocondrial se obtuvieron de las
publicaciones (material suplementario) y del banco de datos GenBank
(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/). Particularmente las secuencias del gen de ADN
mitocondrial, Citocromo c Oxidasa I (COI) se obtuvo del banco de datos de
19
BOLDSystems (http://www.boldsystems.org/). Las secuencias fueron analizadas
para determinar que gen y/o genes presentan mejor resolución.
Extracción de ADN, PCR, Electroforesis y Secuenciación. Del material
previamente identificado y separado, se seleccionó cinco especímenes de cada
etapa ontogenética basados en el número de protuberancias (cefalotórax y
abdomen). Se realizaron lavados con Tris EDTA (TE) a cada una de las
muestras. Al tubo se agregó 200 µL del buffer CTAB (2% [w/v] CTAB, 2% PVP,
0.5% β-mercaptoetanol, 1.4 M NaCl, 20 mM EDTA, 100 mM Tris-HCl, pH 8) y el
producto fue incubando a 65°C durante 5 minutos. Al término se
homogeneizaron las muestras en el vórtex a su máxima velocidad por lapsos de
un minuto, durante 10 minutos. Se agregó 600 µL del buffer CTAB y se incubó
65° C por 2 horas. Se agregó un volumen igual (700 µL) de cloroformo:alcohol
isoamílico (24:1), se homogeneizó la mezcla de las dos fases y se centrifugó a
14,000 rpm durante 5 minutos a temperatura ambiente. Se recuperó la fase
acuosa en un tubo nuevo de 1.5 mL. Después, se adicionó 0.6 volumen de
isopropanol frío y 0.1 volumen de acetato de amonio 7.5 M en un tubo nuevo de
2 mL manteniéndolas a -20° C durante toda la noche. Se centrifugó a 14,000
rpm durante 20 min a 4°C y se descartó el sobrenadante. Se agregó 500 µL de
etanol 70% y se centrifugó a 14,000 rpm por 10 min, se hizo un segundo lavado
con 250 µL de etanol y se centrifugó a 14,000 rpm por 10 min. Se descartó el
sobrenadante y se dejó secar al aire. El ADN se re-suspendió en 50 µL de Tris
EDTA. Se almacenó el ADN a -20° C.
Para la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), el ADN se ajustó a una
concentración de 50 ng µL-1. La mezcla de reacción para la amplificación con
volumen final de 50 μL fue: 1 μL de Oligonucleótido F (LCO1490), 1 μL del
Oligonucleótido R (HCO2198) ambos para el gen COI (Folmer et al., 1994); 5 μL
de Buffer PCR 10X, 1.5 μL de MgCl2, 1μL de dNTPs, 0.2 μL de taq polimerasa y
29.3 μL de agua MQ. El ADNm se amplifico con el siguiente programa: 1’ a
94°C, 35 ciclos a 3’ a 94°C, 60’’ a 50°C, 60’’ a 72°C y 1’ a 70°C y 5’ a 72°C. Los
20
productos de PCR fueron visualizados en geles de agarosa al 1% en TBE 1X.
Los geles se observaron en un fotodocumentador. El producto de PCR fue
secuenciado en ambas direcciones por la empresa Macrogen® (Seúl, Corea)
usando mismo oligos de la PCR. La secuenciación se llevó a cabo bajo
condiciones BigDyeTM y los productos fueron secuenciados utilizando un
secuenciador automático ABI3730XL.
Análisis bioinformático. Las secuencias fueron compiladas mediante el uso del
programa Codoncode Aligner versión 2.06. Posteriormente Las secuencias
fueron alineadas por CLUSTAL X 2 (Thompson et al., 1997). La edición fue
manual, recortando los productos de inicio y final que incluyeron los
oligonucleótidos con el software GeneDoc versión 2.7 (Nicholas et al., 1997).
Debido a que no se encontraron diferencias significativas entre las secuencias
se corrieron dos tipos de análisis de mayor precisión: 1) Máxima verosimilitud
(ML) con MEGA 6 (Tamura et al., 2013) y 2) Inferencia Bayesiana (BI) con Mr.
Bayes (Huelsenbeck & Ronquist, 2001). Los modelos de mejor ajuste de
sustitución de ADN para ML y análisis BI fueron seleccionados por el modelo
jModelTest (Posada, 2008). Para el análisis de ML, el nivel de confianza se
estimó en 1000 repeticiones de arranque (Bootstrap BP). Para el análisis de BI,
las cadenas de Markov se corrieron para 3,000,000 generaciones, con el
muestreo de cada 1000 generaciones. Los grupos externos (outgroups)
utilizados fueron: Palaemon elegans, Palaemon suttukusi, Palaemon longirostris,
Palaemon vulgaris, Pereclimenes soror y Pereclimenes imperator.
Revisión de Holotipos en colecciónes científicas
En Junio de 2015 se realizó una estancia en el Museo Nacional de Historia
Natural (París, Francia) para la efectuar la revisión de los holotipos de cuatro
especies depositadas en su colección, pero debido a pérdida o préstamo de S.
sexicornuta, solo se revisaron tres especies: S. mclaughlinae, S. bicornuta y S.
quadricornuta (Tabla IV). Todos los especímenes y material (holotipos,
21
paratipos, disecciones y desechos) fueron observados directamente con un
estereoscopio Leica M28 e iluminador Olympus 2900K, el uso de pinzas
entomológicas suaves fue importante para la manipulación de los tipos sin
provocar daños estructurales a los holotipos. Se tomaron fotografías y se
compararon con la descripción original y con los especímenes analizados en el
presente trabajo.
Tabla IV. Especímenes del género Sandyella analizados de la colección del
Museo Nacional de Historia Natural de París, Francia.
Especie Voucher Muestra
Sandyella mclaughlinae (Li, 2006)
I Clipperton, Stn 1, 10°18.03’N, 109°13.77’W, 54
m, afuera del arrecife, coral vivo, 2005.
MNHN-Na 15991 1♀ holotipo
MNHN-Na 15990 1♂ paratipo;
MNHN-Na 15992 5♀♀ (3 ovígeras)
paratipos
MNHN-Na 15978 1♀ ovígera,
paratipo
Sandyella bicornuta (Li & Poupin, 2009)
I Clipperton, Stn 16, 10u19.229N, 109u13.389W,
55 m, afuera del arrecife, 19 enero 2005.
MNHN-Na 16033 1 macho (cl 1.3
mm), Holotipo
Sandyella quadricornuta (Li & Poupin 2009)
I Clipperton, Stn 16, 10°19.229N, 109°13.389W, 55
m, afuera del arrecife, colector J.-M. Bouchard,
L. Albenga, L. Dugrais, , 19 enero 2005
MNHN-Na 16035 1 macho (cl 1.78
mm), Holotipo
Sandyella quadricornuta (Li & Poupin 2009)
I Clipperton, Stn 1, 10°18.039N, 109°13.77W, 54
m, afuera del arrecife, coral vivo, Collector J.-M.
Bouchard, L. Albenga, L. Dugrais, 6 enero 2005.
MNHN-Na 16030, 1 hembra (cl 1.31
mm Paratipo.
22
RESULTADOS
Taxonomía morfológica
Distribución de frecuencia de la longitud total (LT)
En las distribuciones de frecuencia de las longitudes totales (LT) de
especímenes con semejante número total de protuberancias se observó que el
número total de protuberancias de los especímenes se incrementa de manera
directa con el incremento de la longitud total. Esta relación es considerablemente
más clara en los machos que en hembras (Figura 7). Los rangos de LT de los
machos fueron ligeramente más amplios y grandes en comparación con las
hembras. De manera general, los histogramas de frecuencia muestran que cada
organismo con semejante número de protuberancias tiene aproximadamente
una distribución normal con traslapes en LT entre los especímenes con números
menores y mayores de protuberancias (Figura 7). De tal forma, se encontró que
las LT más pequeñas para las hembras con dos protuberancias oscilaron entre
los 3 y 7 mm y con 7 y 9 protuberancias sus LT variaron entre 6 y 13 mm. En los
especímenes analizados no se encontró ninguna hembra con cuatro
protuberancias totales (Figura 7).
Los machos con dos protuberancias tuvieron LT entre 4 y 10 mm, mientras que
los de 4 y 6 protuberancias se encontraron entre 6 y 14 mm (Figura 7). No se
encontraron machos con presencia de 9 protuberancias, pero se encontró un
espécimen macho de 9.5 mm LT con 10 protuberancias (Figura 8). En general,
las hembras mostraron mayor número de protuberancias que los machos.
Al comparar las tallas presentadas por los individuos con los diferentes números
de protuberancias y los especímenes reportados para los holotipos para las
especies del género Sandyella (de publicaciones y observaciones directas en el
Museo Nacional de Historia Natural, en Paris, Francia), se encontró que
coinciden en los rangos de LT de los individuos encontrados; que de acuerdo
23
con el número de protuberancias correspondieran con las especies descritas en
el género Sandyella (Tabla V). Sin embargo, si el número de protuberancia fuera
una característica diagnóstica para identificar especies, estos histogramas de
frecuencia mostrarían las distribuciones de LT interespecíficas; es decir, sería de
esperar que en cada organismo con número constante de protuberancias llegara
a una talla de primera madurez y también tuvieran tallas en su fase juvenil y
adultas. Los histogramas mostraron que los organismos con pocas
protuberancias no tuvieron individuos con tallas en fases “juveniles y adultas”
más grandes y los organismos con numerosas protuberancias no tuvieron
individuos con tallas en fases más pequeñas “larvales o juveniles”. Por lo tanto,
la progresión en longitudes totales y del número de protuberancias son una clara
evidencia que se está observando el desarrollo ontogenético de una sola
especie demostrando que conforme crecen se van desarrollando nuevas
protuberancias y mostrando una progresión de LT típica de crecimiento
ontogenético de una sola especie.
Variabilidad morfológica intraespecífica
Las observaciones realizadas en los especímenes antes mencionados
mostraron que además de las variaciones en el número de protuberancias a lo
largo del cuerpo (un carácter cuantitativo discreto en las hembras y en machos),
las protuberancias varían en tamaño, forma y orientación, teniendo individuos
diferentes entre ellos dentro de la población. De esta forma se observa
variabilidad de formas con caracteres continuos y conservando los caracteres
discretos que es el número de protuberancias que de acuerdo al desarrollo
ontogenético y por sexo (Figuras 9-12).
De tal forma que observamos que todos los individuos tienen variabilidad de
caracteres morfológicos propios de organismos que se mimetizan con su
ambiente (alta variabilidad morfológica) que hace de cada individuo tenga una
morfología única. Aunque sus protuberancias son esencialmente ubicadas
24
simétricamente, el tamaño, ancho, forma y orientación de cada protuberancia es
distinta entre individuos, confiriéndole una alta variabilidad morfológica
intraespecífica que invalida cualquiera de estas como características
morfológicas de valor como criterio taxonómico.
HEMBRAS MACHOS
Figura 7. Frecuencia de longitudes totales por sexos para cada morfotipo de Sandyella.
Número de protuberancias totales de Hembras: a) 2 protuberancias (1 cefalotórax, 1
abdomen); b) 4 protuberancias (3 cefalotórax, 1 abdomen); c) 7 protuberancias (3
cefalotórax, 4 abdomen); d) 9 protuberancias (3 cefalotórax y 6 abdomen) y Machos:
e) 2 protuberancias (1 cefalotórax, 1 abdomen); f) 4 protuberancias (3 cefalotórax, 1
abdomen); g) 6 protuberancias (3 cefalotórax, 3 abdomen); h) 10 protuberancias (3
cefalotórax, 7 abdomen; único espécimen).
25
Figura 8. Espécimen macho de Sandyella tricornuta con 10 protuberancias (5
cefalotórax, 5 abdomen; único espécimen) de 9.5 mm longitud total.
Tabla V. Comparación de tallas de las especies reportadas y los organismos de
Sandyella ella tricornuta en el Golfo de California.
Publicaciones
Este trabajo
LT (mm) Protuberancias
Totales LT (mm)
Especie Hembra Macho Organismos Hembras Machos
Sandyella bicornuta S/R 6.36 2 4-10 4-10
Sandyella quadricornuta S/R 7.85 4 S/R 6-11
Sandyella sexicornuta S/R 10.6 6 S/R 7-14
Sandyella mclaughlinae 9.14 10* 7 6-12 S/R
Sandyella tricornuta 13.70 S/R 9 6-12 S/R
PR=Protuberancias. S/R=Sin Registro. *Casos de incorrecta identificación de sexo.
26
Figura 9. Variabilidad morfológica intraespecífica en machos de 2 protuberancias
totales (1 cefalotórax, 1 abdomen) con distinta longitud y orientación.
Figura 10. Variabilidad morfológica intraespecífica en machos de 4 protuberancias
totales (3 cefalotórax, 1 abdomen) con distinta longitud y orientación.
9.35 mm
6.86 mm
8.33 mm
12.27 mm
8.80 mm
11.48 mm
27
Figura 11. Variabilidad morfológica intraespecífica en hembras de 7 protuberancias
totales (3 cefalotórax, 4 abdomen) con distinta longitud y orientación.
Figura 12. Variabilidad morfológica intraespecífica en hembras de 9 protuberancias
totales (3 cefalotórax, 6 abdomen) con distinta longitud y orientación.
9.10 mm
9.77 mm
12.60 mm
12.40 mm
11.76 mm
11.05 mm
28
Microscopia Electrónica de Barrido (MEB)
Las imágenes de MEB de los especímenes de cada etapa de desarrollo
ontogénico, ofrecieron adicional evidencia sobre la relación directa entre el sexo,
la talla (LT) y el número de las protuberancias (cefalotórax y abdomen). Se
observó que existe variación morfológica en una especie y esta corresponden a
las etapas del desarrollo ontogenético de la misma. Los organismos más
pequeños que son juveniles (3-4 mm LT) se relacionan a S. bicornuta (2
protuberancias: 1 cefalotórax, 1 abdominal), pero con el MBE además de su
pronunciada protuberancia del cefalotórax, también se observan dos pequeñas
protuberancias postero-laterales en el cefalotórax, las que crecerán en tallas
mayores para formar tres grandes protuberancias como son las descritas para S.
tricornuta. Cabe señala que las dos protuberancias laterales del cefalotórax no
son visibles con estéreo-microscopio óptico únicamente en tallas mayores (6-14
mm). A su vez, las imágenes de MBE en especímenes exponen que de tallas
menores a mayores las protuberancias totales del cefalotórax y abdomen,
progresivamente crecen en tamaño y/o se incremente en número (Figura 13).
De igual forma, un espécimen de Sandyella identificado con cuatro
protuberancias, en la imagen en MEB también mostró pequeño crecimiento de
dos protuberancias lo que indicaría que a esa longitud total realmente ya tiene
seis protuberancias (Figura 15). Las imágenes MEB adicionalmente permitieron
observar con mayor detalle la forma y longitud de las protuberancias entre
machos y hembras. De manera general, las hembras tienen protuberancias más
largas en intervalo de talla que los machos; particularmente en las tres
protuberancias del cefalotórax, que tiene valor diagnóstico taxonómico para la
especie tipo del género Sandyella. Con estas observaciones se propone que el
número de protuberancias en el abdomen (que definían las especies descritas
recientemente) no tienen validez taxonómica diagnóstica para distinguir e
identificar las especies S. mclaughlinae, S. bicornuta, S. quadricornuta y S.
sexicornuta puesto que todas al igual que S. tricornuta muestran evidencia de
29
tres protuberancias en el cefalotórax (Figuras 13-18).
Figura 13. Macho de dos protuberancias (1 cefalotórax, 1 abdomen) de 6.86 mm LT.
Además se observan dos protuberancias en desarrollo en el cefalotórax. a)
espécimen completo; b y c) vista dorsal; d y e) vista lateral derecha.
30
Figura 14. Macho de dos protuberancias (1 cefalotórax, 1 abdomen) de 6.86 mm LT.
Además se observaron con mayor acercamiento las dos protuberancias en desarrollo
en el cefalotórax. a) espécimen completo; b) vista dorsal, se observan protuberancias
en el cefalotórax en desarrollo; c) vista frontal; e) ojo con protuberancia superior.
31
Figura 15. Macho de cuatro protuberancias (3 cefalotórax, 1 abdomen) de 12.27 mm
LT. a) espécimen completo; b y c) vista dorsal con protuberancias en el cefalotórax
en crecimiento; c) vista lateral derecho.
32
Figura 16. Macho de seis protuberancias (3 cefalotórax, 1 abdomen) de 14.28 mm LT.
a) espécimen completo; b) protuberancia central frontal del cefalotórax bien
desarrollada; c) vista dorsal con tres protuberancias en el cefalotórax bien
desarrolladas; d) urópodos.
33
Figura 17. Hembra de siete protuberancias (3 cefalotórax, 4 abdomen) de 8.58 mm LT.
a) espécimen completo; b) vista frontal; c) vista doral; d) vista lateral izquierdo; e)
vista ventral; f) telson.
34
Figura 18. Hembra de nueve protuberancias (3 cefalotórax, 6 abdomen) de 10.19 mm
LT. a) espécimen completo; b) vista dorsal; c) vista lateral izquierdo; d) vista frontal;
e) vista ventral; f) telson; g) acercamiento urópodo externo.
35
Diagnosis morfológica
Las características morfológicas de los especímenes analizados coinciden con la
descripciones realizadas en la especie tipo Sandyella tricornuta (espécimen
hembra ovígera con nueve protuberancias totales; Anexo II, descripción
Holotipo; Hendrickx, 1990) y con las descripciones realizadas para las otras
especies del genero Sandyella (S. bicornuta, S. quadicornuta, S. mclaughlinae y
S. sexicornuta; Anexo I-Tabla VII), ya que como se mencionan en las
publicaciones de las nuevas especies, las variaciones encontradas en los
organismos son principalmente en el número de protuberancias a lo largo del
cuerpo en la región dorsal teniendo todas ellas semejanzas en la estructura de
los apéndices y otras estructuras morfológicas externas.
Se realiza una descripción general y posteriormente se efectúa la descripción
específica de cada etapa de crecimiento por sexo, identificando dos etapas en
hembras y tres en machos coincidentes con la descripción de los otras especies
del género y de esta forma se corroboran características de las otras especies
con las correspondientes a la etapa de desarrollo ontogenético. Esto es debido a
que en el presente trabajo no se encontraron diferencias considerables en la
morfología externa e interna de los especímenes disectados correspondiente a
las presuntas cinco especies analizadas. Estas descripciones de especies
parecen representar a descripciones morfológicas progresivas propias del
desarrollo ontogenético con diferencias notables entre sexos.
La descripción que a continuación se presenta es con base a los organismos
que fueron disectados, siguiendo el orden de la descripción original del holotipo
Sandyella tricornuta.
36
- Diagnosis morfológica
Organismo 2 protuberancias: macho ♂, 9.35 mm LT; Organismo 4
protuberancias: macho ♂, 8.07 mm LT; Organismo 6 protuberancias: macho
♂, 10.16 mm LT; Organismo 7 protuberancias: hembra ovígera ♀, 8.67 mm
LT; 9 protuberancias: hembra ovígera ♀, 10.32 mm LT.
Hábitat. Sandyella tricornuta tiene como único hábitat hasta ahora conocido
al coral negro Antipathes galapagensis. El ámbito de ambas especies en
este trabajo se extiende a todo el Golfo de California, planteando que su
distribución batimétrica es coincidente (Anexo III).
Descripción.- Cefalotórax liso y grueso; la superficie dorsal presenta de una a
tres protuberancias subconicales dependiendo de la etapa de desarrollo en que
se encuentre. La primera protuberancia que aparece en los organismos es la
más prominente, alta y gruesa y se encuentra en la parte anterior media, cerca
de la región frontal y es curveado (típicamente hacia la parte anterior), las otras
dos protuberancias que aparecen a continuación son ligeramente más pequeñas
y se encuentran posteriores y laterales a la protuberancia mayor ubicadas de
forma simétricas una a cada lado y son poco evidente en el estadio con dos
protuberancias pero son un poco más evidentes a partir del estadio con cuatro
protuberancias.
La región orbital pasa debajo del ojo (orbita), los ojos son compuestos, bien
definidos, pedunculados y están desarrollados sobre la superficie dorsal, con
una cornea hemisférica. Ambos ojos también cuentan con una protuberancia
subconical pequeña en la parte superior inclinada hacia la parte anterior del
organismo. Los procesos antenulares son robustos y redondeados y está unido
al piso orbital. La placa frontal es cuadrada, se considera que es sin rostro ya
que no presenta una espina en la parte media pero si presenta una pequeña
elevación en esta región. Los bordes antero-laterales de la superficie frontal del
37
cefalotórax son redondeados.
En el caso de las hembras en la región postero-dorsal del cefalotórax en la
pleura, presenta una protuberancia no quitinosa, rugosa, de la misma forma de
las protuberancias subconicales. En los machos éstas características no están
presentes. La antena presenta en la base un grupo armado de basiceritos, el
flagelo es sumamente largo y delgado. La anténula presenta en la base un
estilocerito más largo que ancho. El flagelo superior es birrámeo con los cinco
segmentos proximales fusionados, la parte suelta de la rama es más corta.
El pleón está conformado por seis segmentos en el abdomen los cuales son
lisos, el segundo y tercer segmento del abdomen son más anchos que el resto.
El segundo segmento de abdomen presenta ensanchamientos en las pleuras
que son redondeadas. El tercer segmento presenta una pleura rectangular, en la
región del tergo del primer. Las extensiones postero-laterales del cuarto y quinto
segmentos del abdomen son redondeadas. En estos segmentos del abdomen se
presentan diferentes números de protuberancias dependiendo de la etapa de
crecimiento y del sexo, siendo las hembras las que presentan mayor número de
protuberancias que los machos.
Otra particularidad de las hembras es que las pleuras del segundo, tercer y
cuarto segmento del abdomen sean alargadas de tal forma que recubren los
pleopodos, cumpliendo la función de formar un saco ovígero donde se
encontraran huevos hasta que eclosionan en forma de larva zoea: El diámetro
de los huevos que contiene cada hembra tienen aproximadamente el mismo
tamaño. En los machos los pleopodos estarán descubiertos y por lo tanto las
pleuras no están tan alargadas como en las hembras.
El telson tiene márgenes laterales casi en línea recta y tiene numerosas espinas
marginales en la parte distal. La punta del telson es redondeada y tiene tres
pares de espinas en las laterales sumamente pequeñas. En la región de los
38
uropodos el exopodo es grueso, ancho y presenta una espina en la región
externa, mientras que en la parte interna presenta espinas largas que
disminuyen de tamaño conforme se observa hacia la región marginal. El
endopodo tiene puntas redondeadas y está cubierta en las porciones laterales
con numerosas espinas que disminuyen de tamaño hacia la región marginal.
En la parte ventral central de la región del cefalotórax se localizan los
pereiopodos, el primer par de pereiopodos es delgado, el mero y el carpo son
aproximadamente de la misma longitud, el carpo presenta algunas setas
alrededor; el isquio es aproximadamente la mitad de la longitud del mero; la
quela y el propodio son delegados de la misma longitud, con la punta en gancho,
en ambas partes presenta numerosas setas terminales cortas. La quela es
aproximadamente dos terceras de la longitud del mero. El segundo par de
pereiopodos presenta dimorfismo sexual, siendo en el caso de los machos
asimétricos, estando más grande el apéndice izquierdo y dependiendo de la
etapa de crecimientos sus proporciones serán más grandes, definiendo a un
macho adulto con un pereiopodo con longitud similar a la longitud de todo su
cuerpo. El pereiopodo de mayor longitud (izquierdo) consta de un propodio largo
y un dáctilo comprimido curveado con grandes dientes, cubierto por numerosos
tubérculos tiene un dedo en la palma que hace un cruce con el dáctilo al cerrarlo,
teniendo tanto el dedo y el dáctilo un enganche, el carpo es pequeño con una
longitud de una tercera parte del mero, éste es robusto; el mero es largo y ancho
disminuyendo hasta el isquio, con longitud similar a la del propodio. En las
hembras el segundo pereiopodo liso y es más robusto que el primero, El dáctilo
y el propodio son del mismo tamaño y ambos son más pequeños que el primero,
son relativamente cuadrado, ligeramente curveados por dentro. El carpo es
largo, del mismo ancho que el mero, el mero es mucho más pequeño en longitud
que el del primer pereiopodo y robusto. Los pereiopodos ambulatorios están
desarrollados normalmente y son similares en tamaño y forma, siendo sólo un
poco más grande el quinto, en general los tres son robustos y ligeramente
comprimidos lateralmente. El mero es abierto y los propodios son curveados y
39
los dáctilos son agudos, el borde ventral es fuerte. El carpo, mero e isquio no
presentan características especiales.
Los pleopodos, todos ambulatorios, son similares en forma y disminuyen en
tamaño del primero al quinto, son comprimidos. El carpo y mero son desarmados
con presencia de algunas setas largas alrededor de ambos lados. El exópodo y
el endópodo son aproximadamente de la misma longitud y anchura; el exopodo
presenta una diminuta espínula en la región disolateral. Ambos presentan setas
largas cubriendo por completo las regiones marginales.
- Particularidades morfológicas en machos
Macho con dos protuberancias totales. En la superficie dorsal presenta una
protuberancia subconical. En región posterodorsal del cefalotórax en la pleura,
no presenta protuberancia. En el tercer segmento del abdomen presenta sólo
una protuberancia subconical en la parte media al final del tergo justo por encima
del margen posterior. Las pleuras del segundo, tercer y cuarto segmento son
cortas, dejando al descubierto los pleopodos. Presenta el segundo pereiopodo
del lado izquierdo con una longitud y grosor mayor al del lado derecho. La
longitud total del pereiopodo es aproximadamente tres cuartas partes de la
longitud total del cuerpo.
Macho con cuatro protuberancias totales. En la superficie dorsal presenta
tres protuberancias subconicales. En región posterodorsal del cefalotórax en la
pleura, no presenta protuberancia. En el tercer segmento del abdomen presenta
sólo una protuberancia subconical en la parte media al final del tergo justo por
encima del margen posterior. Las pleuras del segundo, tercer y cuarto segmento
son cortas, dejando al descubierto los pleopodos. El segundo pereiopodo del
lado izquierdo tiene una longitud y grosor mayor al del lado derecho. La longitud
total del pereiopodo es cuatro quintas partes la longitud total del cuerpo.
40
Macho con seis protuberancias totales. En el cefalotórax presenta tres
protuberancias subconicales. En la región posterior del cefalotórax en la pleura,
no presenta protuberancia. En el segundo y tercer segmento del abdomen
presenta protuberancias subconicales; en el segundo segmento presenta dos
protuberancias simétricas dorso-laterales mientras que en el cuarto segmento
presenta una protuberancia en la parte media al final del tergo justo por encima
del margen posterior. Las pleuras del segundo, tercer y cuarto segmento son
cortas, dejando al descubierto los pleópodos. El segundo pereiopodo del lado
izquierdo tiene una longitud y grosor mayor que del lado derecho. La longitud
total del pereiopodo es aproximadamente la longitud total del cuerpo.
- Particularidades morfológicas en hembras
Hembra con siete protuberancias totales. En la superficie dorsal presenta tres
protuberancias subconicales. En región posterodorsal del cefalotórax en la
pleura, presenta una protuberancia no quitinosa, rugosa, de la misma forma de
las protuberancias subconicales. En el segundo y tercer segmento del abdomen
presenta protuberancias subconicales; en el segundo segmento del abdomen
presenta dos protuberancias simétricas dorso-laterales mientras que en el cuarto
segmento presenta una protuberancia en la parte media al final del tergo justo
por encima del margen posterior. Las pleuras del segundo, tercer y cuarto
segmento son alargadas de tal forma que recubren los pleópodos, cumpliendo la
función de formar un saco ovígero. Los huevos dentro del saco ovígeros
presentan aproximadamente el mismo diámetro.
Hembra con nueve protuberancias totales. En la superficie dorsal presenta
tres protuberancias subconicales. En región posterodorsal del cefalotórax en la
pleura, presenta una protuberancia no quitinosa, rugosa, de la misma forma de
las protuberancias subconicales. En el primer, segundo y tercer segmento del
abdomen presenta protuberancias subconicales. En el primer y segundo
segmento presenta cada segmento dos protuberancias simétricas dorso-
41
laterales mientras que en el cuarto segmento presenta una protuberancia en la
parte media al final del tergo justo por encima del margen posterior. Las pleuras
del segundo, tercer y cuarto segmento del abdomen son alargadas de tal forma
que recubren los pleópodos, cumpliendo la función de formar una bolsa ovígera.
Los huevos dentro del saco ovígero presentan aproximadamente el mismo
diámetro.
42
FIGURA 19. Comparación de la morfología de los organismos completos tomados de las publicaciones y del presente trabajo.
43
Figura 20. Comparación de pereiopodos disectados.
44
Figura 21. Comparación de pleópodos disectados.
45
Figura 22. Otros apéndices disectados.
46
- Desarrollo ontogenético
A continuación se muestra el mapa ontogenético integral para hembras y
machos de acuerdo a su dimorfismo sexual y a su etapa de desarrollo corporal.
En machos se observan menos número de protuberancias en la etapa de mayor
tamaño cuando alcanzan la madurez con un claro aumento de tamaño de la
quela izquierda y un aumento en el número de protuberancias, mostrando que la
protuberancia media del cefalotórax es la que se ve más desarrollada en
machos, aunque el grosor y orientación varía en cada individuo (Figuras 23 y
25).
En el caso de las hembras el aumento de protuberancias es mayor y cada
individuo presentará diferente longitud, tamaño, grosor y orientación. En las
hembras la de mayor tamaño es la protuberancia media del cefalotórax y la
protuberancia siguiente al cefalotórax pueden alcanzar la misma altura (Figura
24).
47
Figura 23. Desarrollo ontogenético machos de la especie Sandyella tricornuta.
48
Figura 24. Desarrollo ontogenético hembras de la especie Sandyella tricornuta.
49
Figura 25. Desarrollo ontogenético para machos mostrando las protuberancias en
crecimiento del cefalotórax.
50
Taxonomía molecular
Selección del marcador molecular
Aproximadamente el 57% de las publicaciones analizadas (N=35) de
marcadores genéticos en crustáceos del infraorden Caridea seleccionaron el
marcador 16S y 43% al marcador COI (Quan et al., 2004; Porter et al., 2005;
Voloch et al., 2005; Anker et al., 2007; Mitsuhashi et al., 2007; Ravaux et al.,
2007; Shen et al., 2007; Page et al., 2008; Wowor et al., 2008; Mathews & Anker,
2008; Baeza et al., 2009; Ma et al., 2009; Shen et al., 2009; Chan et al., 2010;
Reuschel et al., 2010; Bybee et al, 2011; Li et al., 2011; Anker & Baeza, 2012;
Cuesta et al., 2012; Lin et al., 2012; Pascoal et al., 2012; Qiao et al., 2012; Shen
et al., 2012; Terossi & Mantelatto, 2012; Von Rintelen et al., 2012; Almeida et al.,
2013; Baeza, 2013; Baeza & Fuentes, 2013; Nye et al., 2013; Kou et al., 2013;
Kou et al., 2013; Mashiko & Shy, 2014; Li et al., 2014). En años recientes se han
realizado análisis moleculares con genes nucleares NAK, PECK y Enolasa de
decápodos carideos proveyendo una perspectiva con mayor resolución al grupo
de la subfamilia Pontoniinae (Tabla V, Figura 26).
La mayor parte de las publicaciones (60%) investigan aspectos filogenéticos y el
resto están enfocados en la identificación de especies (Figura 27). Estos últimos
fueron útiles para seleccionar el marcador molecular para investigar variabilidad
intra e interespecífica de las especies del género Sandyella. Los genes con
mayor resolución y significancia para distinguir especies en el Infraorden Caridea
son el 16S y el COI (variabilidad intraespecífica) debido a la variabilidad que
presentan, sin dejar de lado el análisis genes nucleares, que puede mostrar una
tasa de mutación más alta y por lo tanto éstas también proveer información de
valor taxonómico para identificar especies.
Tomando en cuenta lo anterior y analizando las secuencias para el gen COI de
las bases de datos disponibles en el sistema Bold System (www.boldsystems.org/)
se encontró que la variabilidad para una misma especie es típicamente <2%,
51
mientras que para comparaciones de especies de distintos géneros o familias el
porcentaje de variabilidad es usualmente mayor al 2%.
De numerosos marcadores moleculares (genes nucleares NAK, PECK y
Enolasa, 16S y mitocondriales COI) analizados en el presente estudio se
seleccionó el Citocromo I Oxidasa (COI) para definir a nivel de especie en la
subfamilia con la finalidad de probar la hipótesis de que las distintas formas
morfológicas del crustáceos del genero Sandyella son de la misma especie o
son distintas especies como actualmente está conceptualizado.
Tabla VI. Marcadores moleculares empleados en crustáceos del orden Decapoda,
infraorden Caridea entre los años 2000 al 2014.
16s COI 28S 18s H3 NAK PECK Enolasa MHC 12S
ADN
mitocondrial
Completo
Artículos
2000
1
1
2004 1 1
1
2005 2 1 1 1 1
2
2006
1
2007 1
2 2 1
1 3
2008 3 3 1 1 1 1 1 2 1
6
2009
1 1
1 2
2010 2 1
1 1
2
2011 3 1 2 1 1 1 1 1
2
4
2012 3 2
2 7
2013 3 1 1 1 1 1 1 2
5
2014 1 1
1
TOTAL 19 12 7 7 6 4 4 5 1 2 4 35
% 54 34 20 20 17 11 11 14 3 6 11 100
52
Figura 26. Uso de marcadores genéticos en crustáceos del infraorden Caridea.
Figura 27. Tipo de estudio de marcadores genéticos en crustáceos del infraorden
Caridea.
0
20
40
60
80
100
% e
stu
dio
s q
ue u
san
cad
a m
arc
ad
or
Marcador molecular
Filogenético 60%
Especies 24%
Poblacional 16%
53
- Análisis molecular con el marcador COI
Las secuencias de Macrogen (Corea del Sur) hacia delante (forward) y hacia
atrás (reverse), presentaron una alineación similar en cuanto a la igualdad en
las bases. Tomando como referencia a la alineación hacia adelante, se encontró
que de 590 bases totales de extensión sólo existían 13 sitios variables. De estos
sólo del 0.1 al 0.5 % fue variable entre ellas. Es decir, la variabilidad fue
considerablemente < 2% (entre 1 a 3 sitios variables) que provee contundente
evidencia que los organismos analizados pertenecen a una sola especie
biológica (Figura 28).
Figura 28. Alineación hacia adelante de especímenes de la especie Sandyella tricornuta
en sus diferentes etapas de crecimiento recolectadas en el Golfo de California.
Tanto en el análisis de Máxima Verosimilitud (MV) (Figura 29) como en el de
Inferencia Bayesiana (IB) (Figura 30) se observó que los individuos con diferente
número de protuberancias a lo largo del cuerpo y especímenes recolectados en
la misma área geográfica en años previos pertenecientes a la colección de la
Universidad de Texas tienen una elevada similitud entre ellos (diferencias <2%),
colocándolos en una misma rama del dendrograma, con un nivel de boostrap
para MV y de probabilidad posterior para IB del 100%. Este análisis estadístico
demostró la pertenencia a la misma especie a pesar de que morfológicamente
difieran en características que de acuerdo a las comparaciones con las especies
54
del género pudieron hacer que las reportaran como especies distintas.
Figura 29. Análisis de secuencias COI con el Método de Máxima Verosimilitud. La
historia evolutiva se infiere utilizando el método de máxima verosimilitud basado en el
modelo de Hasegawa-Kishino-Yano, 1985. Se muestra el árbol con la probabilidad
de registro más alto (-802.6142). El porcentaje de árboles en los que se muestra los
taxones asociados agrupados junto a las ramas. Árbol inicial (s) para la búsqueda
heurística se obtuvieron de forma automática mediante la aplicación del enlace del
Vecino más cercano y algoritmos BIONJ a una matriz de distancias por pares calcula
utilizando el método de máxima verosimilitud Composite (MCL). Luego de
55
seleccionar la topología con el valor de probabilidad de registro superior. El análisis
incluyó 31 secuencias de nucleótidos. Codón posiciones incluidos fueron primero +
segundo + Noncoding. Todas las posiciones que contienen lagunas y los datos
faltantes fueron eliminados. Hubo un total de 310 posiciones en el último conjunto de
datos. Análisis evolutivo se realizaron en el programa MEGA6.
Figura 30. Análisis molecular de Inferencia Bayesiana. Cadena de Markov 3,000,000
generaciones, con el muestreo de cada 1000 generaciones.
56
Revisión de Holotipos
Se observaron tres de las cinco especies del género Sandyella (originalmente
descritas como especies del género Chacella): S. mclaughinae, S. bicornuta y S.
quadricornuta (el espécimen de S. sexicornuta estaba extraviado o en préstamo
y no fue posible observarlos): Estos especímenes holotipos fueron similares a
los organismos recolectados en el Golfo de California (Ávila-García 2013, este
estudio), en forma, tamaño y características morfológicas. Por lo tanto, las
comparaciones se realizaron con base en las etapas ontogenéticas de Sandyella
tricornuta en el Golfo de California, lo reportado con las publicaciones de las
especies y los organismos del Museo Nacional de Historia Natural en París,
Francia.
Frasco 1: 10/03/2006; Holotipo 1 macho; Paratipo 1 hembra
Muestra 1: Chacella quadricornuta; Voucher: NMHN-Na 16035; Holotipo
Macho; Expedición Clipperton 55m 10º09.23N 109º13.38W Estación 16;
Fecha de colecta 19/01/2006; Investigador a cargo Li, 200?. Colectores: J.M.
Bouchard, L.A. Albenga y L.D. Dugrare
Espécimen 1: Características: Se observó un organismo parcialmente
disectado, ya que sólo tenía disectado un pleópodo, un pereiopodo y el
telson. Se observó una que la izquierda de mayor tamaño con pleopodos
descubiertos. En general, se observa las características similares a lo
reportado con los organismos de Sandyella tricornuta macho con cuatro
protuberancias y similar al paratipo de la especie reportada.
Muestra 2: Nombre de la especie: Chacella quadricornuta; Voucher: NMHN-
Na 16030; Paratipo Hembra; Expedición Clipperton 54 m 10º18.03N
109º13.77W pente extreme, coral viviant. Estación 1; Fecha de colecta:
06/01/2006 Investigador a cargo Li, 200?; Colectores: J.M. Bouchard, L.A.
Albenga y L.D. Dugrare.
Espécimen 2: Características: Se observó un organismo completo sin
evidencia de disección, aun cuando el organismo estaba identificado y
57
etiquetado como hembra, no se observó presencia de protuberancia
posterior al cefalotórax no quitinoso (que sí se encuentra presente en las
hembras del género). Presencia de quela izquierda de mayor tamaño
(característico de machos). No presenta saco ovígero y se observaron los
pleópodos descubiertos. Reportando características similares a lo
reportado con los organismos de Sandyella tricornuta macho con cuatro
protuberancias (Figura 31).
Figura 31. Frasco 1. Chacella quadricornuta. Muestra 1. a) Espécimen 1. Holotipo
macho; b) Espécimen 2. Paratipo hembra (depositado en Museo Nacional de
Historia Natural, Paris, Francia).
Frasco 2: 10/03/2006; Holotipo 1 macho; Caridea; Palaemonidae; Sf.
Pontoniinae.
Muestra 1: Nombre de la especie: Chacella bicornuta; Voucher: NMHN-Na
16030; Paratipo Hembra; Expedición Clipperton 55 m 10º09.23N 109º13.38W
Estación 16; Fecha de colecta: 19/01/2006; Colectores: J.M. Bouchard, L.A.
Albenga y L.D. Dugrare; Investigador a cargo Li & Poupin, 2005.
Espécimen 1: Características: Se observó un organismo sin evidencia de
haber sido disectado; no presentó protuberancia posterior al cefalotórax no
quitinoso. Se observó una quela izquierda de mayor tamaño (evidencia de
tratarse de un macho), moderadamente grande, en desarrollo, presentó
pleópodos descubiertos ni se observó la presencia de un saco ovígero. Se
58
observaron sólo dos protuberancias a lo largo del cuerpo, siendo la más
prominente la de la región del cefalotórax en la parte media. En general, se
observa las características similares a lo reportado con los organismos de
Sandyella tricornuta macho con dos protuberancias (Figura 32).
Figura 32. Frasco 2. Chacella bicornuta. Muestra 1. Espécimen 1. Holotipo macho
(depositado en Museo Nacional de Historia Natural, Paris, Francia).
Frasco 3: 29/10/2005; Holotipo 1; 4 Paratipos y 1 no-tipo.
Muestra 1: Nombre de la especie: Chacella mclaughlinae. Investigador a
cargo Li, 2005. Voucher: NMHN-Na 15990. Holotipo hembra. Expedición
Clipperton 55m 10º19.22N 109º13.38W Estación 16. Fecha de recolección:
19/01/2005. Colectores: J.M. Bouchard, L.A. Albenga y L.D. Dugrare.
Espécimen 1: Características: Organismo completamente disectado.
Presencia de protuberancia posterior al cefalotórax no quitinoso. Presentó
saco ovígero, con presencia de huevos. Presencia de siete protuberancias
a lo largo del cuerpo. Organismo similar a los especímenes de Sandyella
tricornuta hembra con siete protuberancias, tres en el cefalotórax y cuatro
en la región abdominal.
Muestra 2: Nombre de la especie: Chacella mclaughlinae. Investigador a
59
cargo Li, 2005. Voucher: NMHN-Na 15991. Paratipo macho. Expedición
Clipperton 55 m 10º19.22N 109º13.38W Estación 16. Fecha de recolección:
19/01/2005. Colectores: J.M. Bouchard, L.A. Albenga y L.D. Dugrare.
Espécimen 2: Características: Organismo sin evidencia de haber sido
disectado. Sin presencia de protuberancia posterior al cefalotórax no
quitinoso. Presenta la quela mayor izquierda, no presenta saco ovígero, se
observaron pleópodos descubiertos (evidencias de ser un macho).
Características similares a lo reportado con los organismos de Sandyella
tricornuta macho con cuatro protuberancias, tres en el cefalotórax y uno en
la región del tercer segmento del abdomen y características similares a
Chacella quadricornuta.
Muestra 3: Nombre de la especie: Chacella mclaughlinae. Investigador a
cargo Li, 2005. Voucher: NMHN-Na 15978. Paratipo hembra ovígera.
Expedición Clipperton 54 m 10º18.03N 109º13.77W pente extreme, coral
viviant. Estación 1. Fecha de recolección: 06/01/2005. Colectores: J.M.
Bouchard, L.A. Albenga y L.D. Dugrare.
Espécimen 3: Características: Organismo sin evidencia de haber sido
disectado. Presencia de protuberancia posterior al cefalotórax no quitinoso.
Presentó saco ovígero, el cual cubría los pleópodos, con presencia de
huevos. Presencia de nueve protuberancias a lo largo del cuerpo, se
observaron dos protuberancias en crecimiento en la primer somita
abdominal. Organismo similar a los especímenes de Sandyella tricornuta
hembra con nueve protuberancias, tres en el cefalotórax y seis en la región
abdominal.
Muestra 4: Nombre de la especie: Chacella mclaughlinae. Investigador a
cargo Li, 2005. Voucher: NMHN-Na 15992. Paratipos 5 hembras (3 ovígeras);
1 macho. Expedición Clipperton 55 m 10º18.03N 109º13.77W pente extreme,
coral viviant. Estación 16. Fecha 19/01/2005. Colectores: J.M. Bouchard, L.A.
Albenga y L.D. Dugrare. Muestra lastimada, sólo dos organismos completos.
Espécimen 4: Características: Organismo incompleto, no disectado.
Presencia de cuerno posterior al cefalotórax no quitinoso. Presento saco
60
ovígero, el cual cubría los pleópodos, ya sin presencia de huevos
(posiblemente perdidos durante la manipulación). Presencia de siete
protuberancias a lo largo del cuerpo. Organismo similar a los especímenes
de Sandyella tricornuta hembra con siete protuberancias, tres en el
cefalotórax y cuatro en la región del abdomen.
Espécimen 5: Características: Organismo incompleto, no disectado. Sólo
se observa torso ovígero, con pleópodos cubiertos y presencia de huevos,
con cuatro protuberancias en el abdomen que corresponden a
especímenes de Sandyella tricornuta hembra con siete protuberancias, tres
en el cefalotórax y cuatro en la región del abdomen.
Espécimen 6: Características: Organismo incompleto, pero sin evidencia
de haber sido disectado. Sólo se observa cefalotórax, con tres
protuberancias.
Espécimen 7: Características: Organismo incompleto, pero sin evidencia
de haber sido disectado. Sólo se observa cefalotórax, con tres
protuberancias. Sin pereiopodos.
Espécimen 8: Características: Organismo incompleto pero sin evidencia de
haber sido disectado. Presencia de protuberancia posterior al cefalotórax
no quitinoso delgado y dos terceras partes más pequeño que la
protuberancia media del cefalotórax. Presento saco ovígero, el cual cubría
los pleópodos, con presencia de huevos. Presencia de siete protuberancias
a lo largo del cuerpo. Organismo similar a los especímenes de Sandyella
tricornuta hembra con siete protuberancias, tres en el cefalotórax y cuatro
en la región del abdomen.
Espécimen 9: Características: Muestra en mal estado de conservación,
exosesqueleto transparente. Se observó un organismo sin evidencia de
haber sido disectado. Presencia de protuberancia posterior al cefalotórax
no quitinoso grueso y la mitad más pequeño que la protuberancia media del
cefalotórax. Presento saco ovígero, el cual cubría los pleópodos, con
presencia de huevos. Presencia de siete protuberancias a lo largo del
cuerpo. Organismo similar a los especímenes de Sandyella tricornuta
61
hembra con siete protuberancias, tres en el cefalotórax y cuatro en la
región abdominal.
Muestra 5: Nombre de la especie: Chacella mclaughlinae. Investigador a
cargo Li, 2005. Voucher: NMHN-Na 16029. Paratipos 3 hembras (3 ovígeras).
Expedición Clipperton 55 m 10º19.22N 109º13.38W récolte á vue. Estación
16. Fecha de recolección 19/01/2005. Colectores: J.M. Bouchard, L.A.
Albenga y L.D. Dugrare.
Espécimen 10: Características: Organismo sin evidencia de haber sido
disectado. Presencia de protuberancia posterior al cefalotórax no quitinoso.
Presento saco ovígero, el cual cubría los pleópodos, con presencia de
huevos. Presencia de siete protuberancias a lo largo del cuerpo.
Organismo similar a los especímenes de Sandyella tricornuta hembra con
siete protuberancias, tres en el cefalotórax y cuatro en la región del
abdomen y similar a la especie reportada como Sandyella mclaughlinae.
Espécimen 11: Características: Organismo no disectado. Presencia de
protuberancia posterior al cefalotórax no quitinoso. Presento saco ovígero,
el cual cubría los pleópodos, sin presencia de huevos. Presencia de siete
protuberancias a lo largo del cuerpo, todas de tamaño reducido. Organismo
similar a los especímenes de Sandyella tricornuta hembra con siete
protuberancias, tres en el cefalotórax y cuatro en la región del abdomen.
Espécimen 12: Características: Organismo sin evidencia de haber sido
disectado. Presencia de protuberancia posterior al cefalotórax no quitinoso,
de gran tamaño del mismo alto que la protuberancia media del cefalotórax.
Presento saco ovígero, el cual cubría los pleópodos, con presencia de
huevos. Presencia de siete protuberancias a lo largo del cuerpo.
Organismo similar a los especímenes de Sandyella tricornuta hembra con
siete protuberancias, tres en el cefalotórax y cuatro en la región de
abdomen y similar a la especie reportada como Sandyella mclaughlinae.
62
En general, se observó que no existió una identificación correcta de sexos en
muchos especímenes y no se observó correctamente a los organismos para
separarlos por tipo de especie, ya que algunos de los organismos machos de
Sandyella mclaughlinae eran similares a los especímenes de Sandyella
quadricornuta. Además, los organismos al igual que como los especímenes
revisados en este trabajo, las protuberancias variaban en altura, grosor y
orientación de las protuberancias con gran variabilidad individual.
Nota: En el caso de Sandyella sexicornuta que en la publicación sólo se reporta
un solo individuo (Considerado como holotipo) y por lo tanto el Museo Nacional
de Historia Natural, Paris, Francia tiene la política en estos casos de no ofrecerlo
disponible para préstamo fuera de sus instalaciones. Por lo tanto al no encontrar
este espécimen en la colección del museo, existe alta probabilidad que este
espécimen está perdido.
63
Figura 33. Frasco 3. Chacella mclaughlinae. Muestra 1: a) Espécimen 1. Holotipo
hembra; Muestra 2: b) Espécimen 2. Paratipo macho; Muestra 3: c) Espécimen 3.
Paratipo hembra. Muestra 4: d) Espécimen 4. Paratipo hembra, e) Espécimen 5.
Paratipo torso de hembra ovígera f) Espécimen 6 y 7. Cefalotorax, g) Espécimen
8. Paratipo hembra, h) Espécimen 9. Paratipo hembra Muestra 5: i) Espécimen 10.
Paratipo hembra, j) Espécimen 11. Paratipo hembra, k) Espécimen 12. Paratipo
hembra (depositado en Museo Nacional de Historia Natural, Paris, Francia).
64
DISCUSIÓN
En la presente investigación se presenta evidencias de estructura de tallas,
morfología (con microscopía óptica y de MEB) y genética de especímenes
recolectados en toda la costa peninsular del Golfo de California que
conclusivamente demuestra que las cinco especies actualmente incluidas en el
género Sandyella son distintos estadios del desarrollo ontogenético de una
misma especie que por prioridad taxonómica correspondería a Sandyella
tricornuta (Hendrickx, 1990). De esta forma se concluye que las especies S.
mclaughlinae (Li, 2006), S. bicornuta (Li & Poupin, 2008), S. quadricornuta (Li &
Poupin, 2008) y S. sexicornuta (Li & Poupin, 2008) son sinonimias de S.
tricornuta (Hendrickx, 1990). Esto implica que en el coral Antipathes
galapagensis Deichmann, 1941 (antozoos colonial sin esqueleto calcáreo) no es
el hábitat de un género multi-específico; sino el hábitat de una sola especie que
posiblemente ha evolucionado en una co-especiación altamente especializada y
posiblemente en una interacción simbiótica obligada. En la actualidad se
conocen 66 especies de corales negros del género Antipathes y aún es
desconocido la fauna epibionte de éstas especies; por lo que por el momento no
existe evidencia si Sandyella tricornuta puede interaccionar con alguna otra
especie de Antipathes.
Las seis evidencias que respaldan la conclusión de múltiples sinonimias de
cuatro de las cinco especies actualmente incluidas en el género Sandyella son
las siguientes:
1) Estructura de tallas (longitud total) de Sandyella tricornuta abarca con
considerable traslape progresivamente todos los intervalos de tallas de la
distintas especies previamente incluidas en el género Sandyella, las
cuales muestran una asociación directa de incremento en la longitud total
con un mayor número de protuberancias en el cefalotórax y el abdomen.
2) Las imágenes de microscopía electrónica de barrido (MEB)
65
convincentemente demostraron el desarrollo progresivo de todas las
protuberancias que inician como pequeños abultamientos en los
especímenes más pequeños que crecen conforme cada individuo
adquiere mayor longitud total de un estadio a otro. Una de las evidencias
más cruciales fue la observación con MEB de tres protuberancias en el
cefalotórax desde una etapa temprana (previamente considerada S.
bicornuta) donde con microscopio óptico sólo se observaba en la
descripción original de S. bicornuta una sola protuberancia central en el
cefalotórax. De esta forma, independientemente de la longitud total los
especímenes siempre se muestra evidencia de tres protuberancias en el
cefalotórax, que es la principal característica taxonómica diagnóstica de
S. tricornuta (Hendrickx, 1990).
3) Similitud y traslape de los intervalos de longitud total, número de
protuberancias y morfología externa de los apéndices y los detalles
morfológicos de distintos organismos recolectados en coral negro (A.
galapagensis) en el Golfo de California con los especímenes descritos de
las Islas Marías (Hendricxk, 1990) e Islas Cliperton (Li, 2006 & Li &
Poupin, 2009).
4) La observación y análisis de los holotipos depositados en el Museo
Nacional de Historia Natural de Paris (Francia) demostró que presentaron
las mismas características morfológicas y tallas de los organismos
observados recolectados en el Golfo de California y además que se
corroboró que los investigadores que describieron esas especies no
realizaron una identificación adecuada del sexo de los especímenes
descritos de cada una de las especies erróneamente asignadas al género
Sandyella.
5) Todos los organismos con morfología distinta correspondientes a las
cinco especies previamente consideradas dentro del género Sandyella
(con distintos números de protuberancias en el cuerpo) mostraron
diferencias de secuencias de nucleótidos menores al 1% de variación en
el marcador molecular COI. Ésta evidencia molecular indica
66
contundentemente que todas las formas de distinto tamaño y número de
protuberancias son estadios ontogenéticos de la misma especie (S.
tricornuta) al presentar una insignificante variación en las secuencias.
6) En la presente investigación todas las formas previamente consideradas
especies distintas fueron recolectadas de forma abundante en la misma
especie de coral negro Antipathes galapagensis en numerosas colonias
ubicadas en distintas latitudes a lo largo de la costa peninsular dentro del
Golfo de California, pudiendo encontrar en un mismo espécimen de coral
negro las diferentes formas y el espectro completo de tallas que permite
evidenciar que no se trata de un complejo multiespecífico sino de la
estructura de tallas de una sola especie que demuestra un reclutamiento
continuo a lo largo de todo el año evidenciado por la presencia de
hembras ovígeras y un amplio espectro de tallas en cada colonia de coral
negro.
De tal manera, que en el presente estudio, mediante diferentes líneas de
evidencia contundentemente permiten concluir y aceptar la hipótesis que todas
las distintas morfologías son en realidad una sola especie. Debido a presiones
causadas por los humanos (captura de coral negro para fines medicinales y
ornamentales, pesca de arrastre en la cual el coral, y su fauna asociada, son
capturados incidentalmente, especies invasoras) y cambios ecosistémicos
asociados al cambio climático en el Golfo de California (Robinson et al., en
prensa) pueden ocasionar cambios considerables de la biodiversidad implicando
posiblemente la pérdida de la fauna epibionte incluida a sólo una especie del
género, Sandyella tricornuta altamente especializada como simbionte del coral
negro. Debido a que desde el comienzo de la taxonomía se ha impulsado el
encontrar y describir nuevas especies, desafortunadamente se ha hecho habitual
describir nuevas especies analizando casi exclusivamente sólo características
morfológicas (típicamente de pocos individuos, frecuentemente de un solo
individuo); e incluso en la actualidad aún no se utiliza en todos los estudios la
identificación molecular (Watling, 1989; Hebert et al., 2004). En contraste, al
67
comprobar el estatus de las especies mediante taxonomía molecular se
muestran escenarios distintos, ya sea la correspondencia de caracteres
morfológicos y moleculares en una especie o en observaciones en que la
clasificación taxonómica muestra poca contundencia, se proponen numerosos
casos de sinonimias (Pérez-Barros et al., 2008). Por tal motivo, para describir
una especie se debe considerar además conocer aspectos de su biología y
ecología (desarrollo ontogenético, variabilidad morfológica intraespecífica,
presencia o ausencia de dimorfismo sexual, estructura de tallas, distribución y
abundancia, entre otros) para complementar los criterios morfológicos y
genéticos que sustenten la elección de una nueva especie o cualquier otra
categoría taxonómica como género.
Éste es el caso de la mariposa Astrapes fulgerator (Walch, 1775) que está
ampliamente distribuida en el Continente Americano. Esta especie presenta
diferente coloración intraespecífica en su etapa de oruga dependiendo de la
región donde se desarrolla y aunque previamente se consideraban como
distintas especies se comprobó por métodos genéticos que en realidad era una
sola especie, asociando información de su hábitat y sus predadores que
interaccionan en procesos evolutivos con subsecuentes consecuencias
ecológicas (Hebert et al., 2004). Los crustáceos Callinectes bocourti Edwards,
1879 y Callinectes maracaiboensis Taissoun, 1969 fueron inicialmente
separados como especies distintas por caracteres morfológicos como la
coloración del tegumento, que está influenciado por el tipo de hábitat en que se
desarrollan y que al presentar poca variación molecular del COI (<2%) se
sinonimizó a la especie con prioridad taxonómica, en este caso C. bocourti
(Schubart et al., 2001; Pérez-Barros et al., 2008).
Los ejemplos de sinonimias son comunes también en los crustáceos
palemonidos, definiendo numerosas especies nuevas únicamente con el criterio
de nuevas ubicaciones geográficas (lo correcto posiblemente sería reportar
extensiones de ámbito en vez de nuevas especies). Estas descripciones de
68
nuevas especies sin fundamento contundente han sido frecuentes en especies
de consumo humano y por lo cual la investigación ha sido más exhaustiva. La
Organización de las Naciones Unidas para la Alimentación y la Agricultura en el
Departamento de Acuacultura y Pesquerías actualiza anualmente las especies
válidas y sus sinonimias (en los últimos dos siglos) alertando casos de especies
con problemas taxonómicos significativos. Por ejemplo, Penaeus kerathurus
(Forsskål, 1775) actualmente tiene asignado 15 especies sinonimizadas:
(Palaemon sulcatus Olivier, 1811; Alpheus trisulcatus Leach, 1814;
Melicertus tigrinus Rafinesque, 1814; Penaeus trisulcatus Leach, 1815;
Alpheus caramote Kisso, 1816; Peneus mars Risso, 1616; Penaeus caramote
Latreille,1317, Penaeus sulcatus LaMarck, 1818;
Alpheus punctulatus Risso, 1822; Peneus cristatus Risso, 1827;
Pandalus punctulatus Risso, 1827; Pelias punctulata Roux, 1831;
Ephyra punctulata H. Milne Edwards, 1837; Penaeus fasciatus Hope, 1851 y
Miersia punctulata Carus, 1885).
De esta forma es necesario enfatizar la relevancia de considerar
simultáneamente aspectos morfológicos, moleculares, biológicos, ecológicos,
biogeográficos y de comportamiento (taxonomía integrativa) para describir una
nueva especie con alta certidumbre de no ser sinonimizada en el futuro. En la
presente investigación fue crucial realizar un estudio biológico y ecológico previo
(Ávila-García, 2013) donde se muestreó y analizó un tamaño de muestra
elevado (>2905 individuos) en el cual se pudo inferir información ecológica,
biológica y ontogenética de la especie que resultó relevante para proponer la
hipótesis de que las especies del genero Sandyella posiblemente eran distintos
estadios de desarrollo de una sola especie.
En el caso particular de los crustáceos, el crecimiento ocurre como un proceso
discontinuo separado por eventos de muda en el que puede existir un aumento
de talla, peso y adquiriendo características morfológicas distintas de un estadio
de desarrollo a otro después de cada evento de muda (Petriella & Boschi, 1997).
Cada especie tiene un grado distinto de desarrollo individual (variabilidad
69
intraespecífica) que es la adición de cambios con incrementos temporales,
considerando la influencia de las variables ambientales, energéticas y biológicas
que involucran el desarrollo ontogenético (Batenson & Klopfer, 1982). S.
tricornuta tiene una enorme variabilidad individual en forma, tamaño y ángulo de
inclinación de las protuberancias que acentúan la individualidad de cada
espécimen, esta amplia variablidad morfológica favorece el mimetismo de este
crustáceo en el coral negro. En los crustáceos decápodos es común que los
organismos pasen por pronunciados cambios morfológicos a lo largo de su
ontogenia, particularmente en etapas larvales (Martin et al., 2014) y la transición
de juvenil a adulto, así como en otros grupos taxonómicos (por ejemplo arañas,
anfibios, gasterópodos y hexápodos) (Werner & Gilliam, 1984; Giribet, 2005).
Particularmente en especies que tienen una estrategia de vida simbionte, es
esencial estudiar su nicho ecológico a lo largo de su ontogenia (Werner &
Gilliam, 1984). Sandyella tricornuta, tiene una relación simbiótica obligada con el
coral negro Antipathes galagensis (hasta ahora nunca observada viva en otro
microhábitat distinto). La selección natural a lo largo de la evolución de esta
especie ha favorecido al característico camuflaje con la especie huésped
(sumamente frecuente y espectacular en especies del infraorden Caridea),
mostrando protuberancias con morfología semejante a los pólipos del hexacoral,
que al igual que otros antipatarios, los pólipos pueden tener distinta morfología
intra e interespecífica (Barrio et al., 2012). Sandyella tricornuta presenta
protuberancias con diferente forma, tamaño, orientación y con una coloración
verdosa similar in vivo al coral negro (Figs. 9–12). Esta extraordinaria semejanza
los mimetiza favoreciendo que los individuos de S. tricornuta pasen
desapercibidos incrementando su probabilidad de supervivencia en este
microhábitat (Werner & Gilliam, 1984; Batenson & Klopfer, 1982).
Otras especies de palemonidae como Dasycaris zanzibarica Bruce, 1973
también tiene una extraordinaria semejanza morfológica con su hexacoral
simbionte de típica coloración heterogénea de blanco con café. Actualmente se
70
desconoce cuáles son los depredadores y parásitos naturales de S. tricornuta,
sus tasas de mortalidad y sobrevivencia, así como algunos aspectos básicos de
su biología y dinámica poblacional.
En general, la población tiene una mayor proporción promedio de hembras
(81%) que machos (19%) en cada colonia de coral negro y por consiguiente una
ventaja de tener mayor número de progenie. Este sesgo en proporción de sexo
sugiere un proceso de mortalidad diferencial entre sexo donde los machos
parecen tener menor tasa de supervivencia como ha sido observado en krill
donde los machos parecen crecer más rápido y morir más rápido que las
hembras causando un sesgo poblacional de más machos que hembras
conforme crecen (Kawaguchi et al., 2007). Otra posibilidad es que inicialmente
se produzca un mayor número de hembras que machos pero esta explicación
parece ser menos probable y requieren estudios específicos de etología y
dinámica poblacional. Las hembras Sandyella tricornuta tienen un mayor número
de protuberancias y tienen quelas simétricas (la quela izquierda de los machos
es siempre más grande que la quela opuesta). Esta condición parece favorecer
un más eficiente efecto de camuflaje que posiblemente favorece a las hembras
ovígeras hasta el desove.
Es un tanto paradójico que los machos de Sandyella tricornuta al encontrar
numerosas hembras en la colonia de hexacorales no debieran tener necesidad
de competir por hembras facilitando una estrategia de reproducción promiscua
(panmixia) y reproducción continua (reproducción en todo el año con traslape de
cohortes) pudiera explicar la baja proporción de machos. Sin embargo, existe un
evidente dimorfismo sexual de los machos con un quelípedo prominente
posiblemente asociado a comportamiento agonístico no letal pero los aspectos
etológicos y estrategias reproductivas de esta especie aún son desconocidos
(Ávila-García, 2013). Considerando las características propias del dimorfismo
sexual y la información ecológica de la proporción de sexos sugieren una
estrecha interacción simbiótica con las colonias de coral negro haciendo de esta
71
especie altamente especializada, asociada a una reproducción con competencia
entre machos, determinando así la interacción y la intensidad de esta
competencia interespecífica (Correa & Thiel, 2003; Dennenmoser & Thiel, 2007;
Pérez & Alegría, 2009).
La comparación de cada apéndice torácico y del abdomen en cada una de las
diferentes etapas ontogenéticas de Sandyella tricornuta confirmó las morfologías
descritas en cada una de las especies ahora sinonimizadas del género
Sandyella (S. bicornuta, S. mclaughlinae, S. quadricornuta y S. sexicornuta).
Recordando que la hipotética diferenciación entre especies se fundamentaba
únicamente en el número de protuberancias encontradas en el cefalotorax y
abdomen en distintos intervalos de tallas que se traslapaban unos con otros. De
hecho estas diferencias morfológicas fueron enfatizadas en las claves de
identificación propuestas para esta especie (Li, 2006; Li & Poupin, 2009) y que lo
reconfirmó Marin (2009; 2010) al mover la especie Chacella tricornuta a un
nuevo género Sandyella que el mismo propuso. En esta tesis se concluye que
estas claves de identificación son válidas bajo la perspectiva que ahora son
claves de identificación de distintas etapas de desarrollo ontogenéticos de S.
tricornuta aunque la descripción de los huevos y larvas de esta especie aún no
han sido formalmente descritas.
La especie Chacella kerstitchi originalmente formaba parte del género Dasycaris.
Bruce (1989) propuso mover la entonces Dasycaris kerstitchi Wicksten, 1983 a
un nuevo género que nombró Chacella con el único argumento que la especies
previamente incluidas en Dasycaris se distribuían en el Pacífico Oeste y D.
kerstitchi había sido colectada únicamente en el Golfo de California (Pacífico
Oriental) y la presencia o ausencia del rostro (presente en Chacella y ausente en
Dasycaris), argumentando la semejanza morfológica con otras especies por
ejemplo como Veleronia laevifrons Holthuis, 1951, se debía principalmente a la
asociación simbiótica con el hospedero y no con una relación filogenética común
entre las especies. Aún está en debate si este cambio de género es justificado y
72
se requiere análisis genéticos de ambas especies para evidenciar si realmente
existen o no diferencias sustanciales para considerarlas especies de géneros
distintos.
Posteriormente Marin (2009) propuso un nuevo género llamado Sandyella para
incluir a las especies recientemente descritas Chacella tricornuta, C.
mclaughlinae, Chacella bicornuta, C. quadricornuta y C. sexicornuta,
proponiendo dejar sólo a Chacella kerstitchi en el género Chacella (actualmente
considerado monoespecífico) y Sandyella entonces como un género con 5
especies. Marin (2009) propuso que Chacella tiene una mayor afinidad con el
género Pseudoveleronia Marin, 2008 argumentando semejanzas en la presencia
de un diente lateral en el margen lateral exterior del segmento basal de la
anténula (como el observado en Pseudoveleronia laevifrons) y la ausencia de un
diente disto lateral en el escafocerito de la antena, además considera posible
esperar que la morfología de los quelípedos actualmente desconocidos de C.
kerstitchi puedan ser más similares a los quelípedos lisos comprimidos de P.
laevifrons que a los quelípedos oblongos de V. serratifrons o V. sympathes y
Sandyella entonces propuesto éste último como un género nuevo. Con la
evidencia del presente estudio se debe realizar una revisión exhaustiva de las
especies de estos géneros para realizar una conceptualización adecuada de la
diversidad y relaciones filogenéticas entre estas especies.
Sin embargo, Hendrickx, 1990, aunque propuso que existían diferencias entre
Chacella kerstitchi y Chacella tricornuta debido a las prolongaciones a lo largo
del cuerpo, mencionó que ambas especies comparten numerosas características
con C. kerstitchi por lo cual no ameritaría suponer que son géneros distintos.
Entre las características más significativas compartidas son: la ausencia de
rostro, la presencia de dientes prominentes dorsales en el caparazón, la
presencia de orbita bien desarrollada, con tubérculo postorbital romo y un ángulo
orbital inferior reducido y la muesca pterygostomial, la presencia de un proceso
antenal producido fuertemente, la presencia de un proceso anterodorsal grande
73
en el pedúnculo ocular, la presencia de pleura alargado en el cuarto y quinto
segmento abdominal, la similitud de pereiópodos 1, 3, 4 y 5 (aunque el segundo
pereiópodo de C. kerstitchi son aún desconocido). Dejando claro que las
diferencias adicionales se encuentran en el estructura de la anténula y de la
antena; además que posee características similares en las partes bucales
similares a especies de ochos géneros del continente americano de dos géneros
(Miopontonia y Pontonides) que se encuentran en el Indo-Pacífico. Por lo tanto
no existen evidencias contundentemente suficientes para validar el más reciente
género Sandyella, además de compartir la región de distribución de C. kerstitchi
con C. tricornuta en el Golfo de California. Como se argumenta aquí existen
mayor número de similitudes que disimilitudes entre ambas especies por lo cual
la propuesta de elección del género Sandyella de Marin (2009) no presenta un
argumento contundente que máxime que todas las especies previamente
incluidas en este reciente género, por lo que han sido sinonimizadas en la
presente tesis. Actualmente interpreto que Chacella kerstitchi es una especie
distinta que Sandyella tricornuta pero existe incertidumbre si estas son especies
de un mismo género (filogenéticamente cercanas) o realmente son especies de
distintos géneros. Por simplicidad y parsimonia, se propone mantenerlas en el
mismo género Chacella hasta encontrar evidencia biológica, genética, y
ecológica suficiente para separarlas en géneros monoespecíficos y evaluar si
estas características morfológicas realmente sustentan mantenerlas como
géneros distintos.
Por lo que, la decisión actualmente de este género tiene poco sustento por lo
que la evidencia recolectada por la ahora propuesta única especie S. tricornuta
es que se sugiere regresar a esta especie a su género original Chacella
propuesto por Hendrickx (1990).
Por lo previamente argumentado en el presente trabajo se recomienda
enfáticamente redefinir estrategias de investigación para describir nuevas
especies, realizando un estudio multidisciplinario integral (morfología, genética,
74
biología, ecología, biogeografía) de la población antes de arriesgarse a proponer
una nueva especie con poca evidencia. Es posible que se encuentren otros
casos similares que se esté sobreestimando la diversidad específica de ciertos
géneros en especies con alta variabilidad intraespecífica a lo largo de su
ontogenia. Aun cuando la diversidad funcional es limitada, la eventualidad de
encontrar y definir especies ha resultado ser sumamente compleja, es claro que
las técnicas para definirlas aún no pueden ser únicas ni estandarizadas para
todas las especies (Boero, 2010) bajo el concepto fundamental de especie
biológica (Mayr, 1982) y especie ecológica (Campbell & Reece, 2007).
La oportunidad de observar los holotipos de tres de las cinco especies en el
Museo de Historia Natural de París (Francia) previamente descritas en el género
Sandyella permitió establecer sin ambigüedad diferentes inferencias que
confirmaron previas evidencias demográficas, morfológicas y genéticas
obtenidas en este estudio. La comparación morfológica de cada uno de los
holotipos correspondieron con especímenes recolectados en el Golfo de
California despejando cualquier posible duda de que todos estas putativas
especies son en realidad estadios de desarrollo de la especie tipo Sandyella
tricornuta ahora sinonimizada a su vez a Chacella tricornuta.
Se ha propuesto que en algunos grupos taxonómicos, como los octocorales, el
marcador COI no tiene la resolución para identificar especies (muy poca
variabilidad o demasiada variabilidad intraespecífica). En la presente tesis se
comprobó que en crustáceos y otros artrópodos es un método eficiente para
separar especies debido a la relativamente poca divergencia genética. Este
segmento del genoma es relativamente conservado y no presenta elevadas
diferencias de aminoácidos entre las secuencias, una misma especie biológica
en promedio tiene variaciones no mayores al 3% (Hebert et al., 2003, 2004;
Fransen & De Grave, 2009; Pérez-Barros et al., 2008).
La taxonomía apoyada en técnicas moleculares como el gen COI promovido por
75
el Programa Internacional Código de Barras de la Vida son nuevas herramientas
para el estudio de la biodiversidad, evolución biológica y ecológica, agregando
evidencias para definir mejor las especies mediante divergencia molecular
(Lefébure et al., 2006). Este análisis mostró claramente que los individuos con
diferente número de protuberancias tuvieron secuencias de nucleótidos
altamente similares (> 99%), usando de calibración a otras especies de
simbiontes de la subfamilia Pontoniidae.
Mediante la conclusión de que S. bicornuta, S. mclaughlinae, S. quadricornuta y
S. sexicornuta son etapas ontogenéticas de la especie Sandyella tricornuta
(Hendrickx, 1990) y por parsimonía debe ser considerada como originalmente
fue descrita Chacella tricornuta Hendrickx, 1990, la localidad en la cual fueron
recolectados cada uno de los estadios de desarrollo [C. tricornuta registrada en
las Islas Marías (Hendrickx, 1990) y en el Golfo de California (Wicksten &
Hernández, 2000), así como el resto de las ahora sinonimizadas especies del
género Sandyella en isla Clipperton (Li, 2006; Li & Poupin, 2009) con rango de
distribución vertical de 20–55 m] proveen evidencia que C. tricornuta tiene una
amplia distribución zoogeográfica en el Pacífico Oriental Tropical y Golfo de
California. Es posible que su distribución zoogeográfica se extienda al ámbito de
distribución de A. galapagensis que actualmente se conoce que se extiende
entre 20–100 m de profundidad de regiones tropicales y subtropicales existiendo
sólo en ciertas condiciones fisicoquímicas de aguas frías, sustratos rocosos o
coralinos, con bajos niveles de luminosidad, sedimentación y con velocidad de
corrientes moderadas (Montgomery, 2002; Montgomery, 2006; Wills, 2008).
Antipathes galapagensis tiene una distribución en las costas del Pacífico en los
países de México (incluyendo el Golfo de California), Panamá, Colombia y
Ecuador (incluyendo las Islas Galápagos); compartiendo hábitat béntico sólo con
la especie Myriopathes panamensis (Verril, 1869). Ambas especies de
hexacorales tienen su mayor abundancia a los 50 m pero se tiene evidencia que
A. galapagensis puede encontrarse hasta 90 m de profundidad en Islas Cliperton
76
y tampoco se conoce si C. tricornuta puede habitar en otra especie de coral
negro. El coral negro tiene una función relevante en la estructuración de las
comunidades bénticas, en particular debido a su morfología ramificada, que
puede albergar en muchas ocasiones una rica fauna asociada de epibiones
(Marzia et al., 2012). Chacella tricornuta y Antipathes galapagensis
probablemente habitan en la eco-región del Pacífico Oriental Tropical (Briggs,
1995; Spalding, 2007; Briggs & Bowen, 2012). Esta región ha sido reconocida
por albergar asociaciones de especies únicas (con alta proporción de
endemismo) que representan regiones de innovación evolutiva o refugios donde
habita una biota diversa. La Provincia Cortez se ha propuesto cubre del Golfo de
California hasta Ecuador y Perú, colindando con otras provincias biogeográficas
cercanas (Briggs, 1974). Debido a la relativamente larga proporción de especies
endémicas en las zonas con fuertes afinidades faunísticas con la provincia de
Panamá (incluyendo Revillagigedo y Clipperton), ahora es un área mejor
reconocida como Galápagos (Briggs & Bowen 2012; Spalding, 2007).
Por lo tanto, conforme a las condiciones fisicoquímicas y las propuestas
biogeográficas marinas anteriores y actualizadas, se infiere que C. tricornuta y
junto con su hospedero se distribuyen ampliamente en el Pacífico Oriental
Tropical extendiéndose hasta aguas subtropicales del Golfo de California y a
aguas oceánicas de islas Clipperton y Revillagigedo.
La conclusión más relevante de este estudio es que se acepta la hipótesis de
que todas las cinco especies previamente descritas en el género Sandyella son
diferentes etapas ontogenéticas de la especie tipo Sandyella tricornuta y la
propuesta de regresar a esta especie a su género original como Chacella
tricornuta. Esta confusión y enorme sobreestimación de la diversidad especifica
de este género fue causada por la descripción de especies con un mínimo
número de especímenes y por la falta de información de la estructura
poblacional, abundancia, biogeografía, morfología e información molecular de la
especie, por lo que se definieron como especies distintas, sin embargo, una de
77
las propuestas es que se cree un antecedente en especie simbiontes con alta
co-especiación para que se analicen datos multidisciplinarios para tener una
mejor interpretación y valoración de la biodiversidad.
CONCLUSIONES
Se acepta la hipótesis de esta tesis que las cinco especies actualmente
incluidas en el género Sandyella son distintos estadios ontogenéticos de la
misma especie; concluyendo que Sandyella mcaughlinae (Li, 2006),
Sandyella bicornuta (Li & Poupin, 2009), Sandyella quadricornuta (Li &
Poupin, 2009) y Sandyella sexicornuta (Li & Poupin, 2009) son sinonimias de
la especie tipo con prioridad taxonómica Sandyella tricornuta (Hendrickx,
1990) que se caracteriza por tener 3 protuberancias en el cefalotórax como
criterio diagnóstico presente en todos los estadios ontogenéticos analizados
aunque en etapas tempranas estas protuberancias son pequeñas y poco
desarrolladas (visibles solo con MEB).
El género Sandyella Marin 2009 no es contundentemente justificado (movido
de Chacella a Sandyella por el único criterio de distinta distribución
biogeográfica) y por ende por parsimonia Sandyella tricornuta debe ser
regresado al género originalmente asignado Chacella. De esta forma aquí se
confirma que la especie nominal válida con evidencia de taxonomía
integrativa es Chacella tricornuta como originalmente fue descrita por
Hendrickx (1990).
Chacella tricornuta tiene una alta variabilidad morfológica intra-específica a lo
largo de su desarrollo ontogenético que posiblemente sea una estrategia
adaptativa a lo largo de su evolución en respuesta al mimetismo que tiene en
su relación simbiótica con el coral negro donde a pesar de tener un número
discreto de protuberancias en distintos intervalos de longitud total (aunque
con traslape en tallas) cada individuo tiene variabilidad en la longitud, forma y
orientación de sus protuberancias siendo organismos con morfologías
prácticamente únicas.
78
Chacella tricornuta tiene un notorio dimorfismo sexual evidente desde tallas
con longitud total de 3 mm (juveniles), su crecimiento ontogenético es
progresivamente asociado con el número y longitud de las protuberancias.
Las hembras tienden a tener más protuberancias que los machos cuando
alcanzan sus mayores tallas.
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phylogenetic analysis. Mol. Phylogenet. Evol. 52, 340–350 (2009).
86
87
88
Anexo II.
Descripción original del holotipo Sandyella tricornuta (Hendrickx, 1990)
correspondiente al único espécimen de esta descripción (hembra con 9
protuberancias en todo el cuerpo).
89
90
91
92
Anexo III. Mapas de distribución de Sandyella tricornuta y Antipathes
galapagensis.
Figura 34. Rango de distribución de Sandyella tricornuta actualizado. Registros
previos: Islas Marías (Hendrickx, 1990), Isla Clipperton (Li, 2006; Li & Poupin,
2009) y Los Islotes, Golfo de California (Wicksten & Hernández, 2000). Registros
nuevos: Región norte, centro y sur del Golfo de California.
93
Figura 35. Modelo conceptual de distribución de Sandyella tricornuta y Antipathes
galapagensis.
94
Anexo IV. Secuencias
CLUSTAL W(1.60) multiple sequence alignment
>Sandyella_quadicornuta1 .
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>Sandyella_quadicornuta2 .
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>Sandyella_sexicornuta1 .
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95
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96
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>Sandyella_bicornuta5 .
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>Sandyella_juvenil_h .
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ATTCTTTATCAACATTTATTC
>Sandyella_tricornuta .
ACCAGGAAGTTTAATCGGAAACGATCAAATTTATAATGTAATTGTCACAGCCCATGCTTTTGTAATAATTTTTTTCATAG
TTATGCCAATTATAATTGGAGGATTTGGAAACTGGCTAGTTCCTCTTATATTAGGAGCTCCAGATATAGCTTTTCCACG
TATAAATAACATAAGATTTTGACTTTTACCACCTTCTTTAACTTTATTATTATCAAGAGGGATAGTAGAAAGTGGAGTGG
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CTCTACATTTAGCAGGTGTATCTTCAATTTTAGGGGCTATTAATTTCATTACAACTGTTATCAATATACGGTCTCCAGGT
ATAACTATAGACCAAATACCTTTATTTGTATGGTCAGTTTATATTACTGCTATTCTACTTCTTTTATCTTTACCCGTATTG
GCGGGAGCTATTACTATATTATTAACAGACCGTAACATCAACACCTCATTTTTNGATCCTGCTGGAGGTGGAGATCCT
ATTC-----------------
>Sandyella_tricornuta2 .
ACCAGGAAGTTTAATCGGAAACGATCAAATTTATAATGTAATTGTCACAGCCCATGCTTTTGTAATAATTTTTTTCATAG
TTATACCAATTATAATTGGAGGATTTGGAAACTGGCTAGTTCCTCTTATATTAGGAGCTCCAGATATAGCTTTTCCACG
TATAAATAACATAAGATTTTGACTTTTACCACCTTCTTTAACTTTATTATTATCAAGAGGGATGGTAGAAAGTGGAGTGG
GCACAGGATGAACAGTTTATCCTCCACTTGCAAGAACTATTGCCCACCCAGGAGCATCAGTTGATTTAGGTATTTTTT
CTCTACATTTAGCAGGTGTATCTTCAATTTTAGGGGCTATTAATTTCATTACAACTGTTATCAATATACGGTCTCCAGGT
ATAACTATAGACCAAATACCTTTATTTGTATGGTCAGTTTATATTACTGCTATTCTACTTCTTTTATCTTTACCCGTATTG
GCGGGAGCTATTACTATATTATTAACAGACCGTAACATCAACACCTCATTTTTCGATCC----------------------------------------
>Sandyella_tricornuta3 .
ACCAGGAAGTTTAATCGGAAACGATCAAATTTATAATGTAATTGTCACAGCCCATGCTTTTGTAATAATTTTTTTCATAG
TTATACCAATTATAATTGGAGGATTTGGAAACTGGCTAGTTCCTCTTATATTAGGAGCTCCAGATATAGCTTTTCCACG
TATAAATAACATAAGATTTTGACTTTTACCACCTTCTTTAACTTTATTATTATCAAGAGGGATGGTAGAAAGTGGAGTGG
GCACAGGATGAACAGTTTATCCTCCACTTGCAAGAACTATTGCCCACCCAGGAGCATCAGTTGATTTAGGTATTTTTT
CTCTACATTTAGCAGGTGTATCTTCAATTTTAGGGGCTATTAATTTCATTACAACTGTTATCAATATACGGTCTCCAGGT
ATAACTATAGACCAAATACCTTTATTTGTATGGTCAGTTTATATTACTGCTATTCTACTTCTTTTATCTTTACCCGTATTG
GCGGGAGCTATTACTATATTATTAACAGACCGTAACATCAACACCTCATTTTTCGATCCTGCTGGAGGTGGAGATCCT
ATTCTTTATCAACATTTATTC
>Sandyella_tricornuta4 .
ACCAGGAAGTTTAATCGGAAACGATCAAATTTATAATGTAATTGTCACAGCCCATGCTTTTGTAATAATTTTTTTCATAG
TTATACCAATTATAATTGGAGGATTTGGAAACTGGCTAGTTCCTCTTATATTAGGAGCTCCAGATATAGCTTTTCCACG
TATAAATAACATAAGATTTTGACTTTTACCACCTTCTTTAACTTTATTATTATCAAGAGGGATGGTAGAAAGTGGAGTGG
GTACAGGATGAACAGTTTATCCTCCACTTGCAAGAACTATTGCCCACCCAGGAGCATCAGTTGATTTAGGTATTTTTTC
TCTACATTTAGCAGGTGTATCTTCAATTTTAGGGGCTATTAATTTCATTACAACTGTTATCAATATACGGTCTCCAGGTA
TAACTATAGACCAAATACCTTTATTTGTATGGTCAGTTTATATTACTGCTATTCTACTTCTTTTATCTTTACCCGTATTGG
CGGGAGCTATTACTATATTATTAACAGACCGTAACATCAACACCTCATTTTTCGATCCTGCTGGAGGTGGAGATCCTAT
TCTTTATCAACATTTATTC
>gi_116613985_gb_DQ882102_Palae .
ACCTGGTAGGTTAATCGGAAATGACCAAATTTATAATGTTATTGTTACCGCCCACGCTTTCGTTATAATCTTTTTTATGG
TTATGCCAATTATAATTGGCGGGTTTGGAAATTGACTGGTACCATTAATGCTAGGAGCCCCTGATATGGCTTTTCCAC
GAATAAATAATATAAGGTTTTGACTTTTACCCCCTTCCTTAACTCTCCTTCTTTCTAGAGGGATGGTTGAAAGGGGAGT
GGGAACAGGATGAACTGTTTACCCTCCTCTAGCGAGAGGATTAGGACATGCTGGCGCTTCTGTAGATCTTGGTATTTT
97
CTCCCTTCATTTAGCAGGAATCTCTTCCATCCTAGGAGCAGTTAACTTTATTACTACTGTAATCAATATACGAGCTCCA
GGTATAACTATAGATCGAACTCCTCTTTTCGTGTGGGCTGTTTTTCTAACAGCTATTCTTCTTTTACTATCCTTACCAGT
TTTAGCAGGAGCTATCACCATGCTCCTTACTGACCGTAATTTAAATACTTCATTCTTTGATCCTGCTGGAGGGGGTGA
CCCAATTCTTTATCAACACTTATTT
>gi_116613989_gb_DQ882104_Palae .
ACCTGGTAGGTTAATCGGAAATGACCAAATTTATAATGTTATTGTTACCGCCCACGCTTTCGTTATAATCTTTTTTATGG
TTATGCCAATTATAATTGGCGGGTTTGGAAATTGACTGGTACCATTAATGCTAGGAGCCCCTGATATGGCTTTTCCAC
GAATAAATAATATAAGGTTTTGACTTTTACCCCCTTCCTTAACTCTCCTTCTTTCTAGAGGGATGGTTGAAAGGGGAGT
GGGAACAGGATGAACTGTTTACCCTCCTCTAGCGAGAGGATTAGGACATGCTGGCGCTTCTGTAGATCTTGGTATTTT
CTCCCTTCATTTAGCAGGAATCTCTTCCATCCTAGGAGCAGTTAACTTTATTACTACTGTAATCAATATACGAGCTCCA
GGTATAACTATAGATCGAACTCCTCTTTTCGTGTGGGCTGTTTTTCTAACAGCTATTCTTCTTTTACTATCCTTACCAGT
TTTAGCAGGAGCTATCACCATGCTCCTTACTGACCGTAATTTAAATACTTCATTCTTTGATCCTGCTGGAGGGGGTGA
CCCAATTCTTTATCAACACTTATTT
>gi_62686666_emb_AJ640121_Palae .
ACCTGGCACGTTAATTGGCAACGATCAGATTTATAATGTGATCGTAACTGCTCATGCCTTTGTAATAATTTTTTTTATAG
TTATACCTATTATAATTGGAGGATTTGGAAACTGACTAGTTCCTCTAATATTAGGAGCCCCTGATATAGCTTTTCCACG
AATAAATAACATAAGATTCTGACTATTACCTCCTTCTTTAACCCTTCTTCTTTCTAGAGGGATAGTAGAAAGAGGTGTA
GGTACTGGGTGAACAGTTTATCCACCCCTAGCAAGAGGCTTGGGGCATGCCGGTGCTTCTGTAGATTTAGGTATTTT
CTCTTTACATTTAGCAGGTGTATCTTCTATTCTAGGAGCTGTTAATTTTATTACTACTGTAATTAATATACGAACCCCCG
GTATAACTATAGACCGAACTCCACTATTCGTATGGGCCGTATTTTTAACTGCAATTCTTCTTTTACTTTCTTTACCTGTT
CTAGCTGGAGCTATTACTATACTCCTTACTGATCGTAATTTAAACACTTCATTCTTTGACCCAGCAGGGGGAGGTGAT
CCTATTCTCTATCAACACTTATTC
>gi_62686674_emb_AJ640123_Palae .
ACCTGGCACGTTAATTGGCAACGATCAGATTTATAATGTGGTCGTAACTGCTCATGCCTTTGTAATAATTTTTTTTATAG
TTATACCTATTATAATTGGAGGATTTGGAAACTGACTAGTTCCTCTAATATTAGGAGCCCCTGATATAGCTTTTCCACG
AATAAATAACATAAGATTCTGACTGTTACCTCCTTCTTTAACCCTTCTTCTTTCTAGAGGGATAGTAGAAAGAGGTGTG
GGTACTGGGTGAACAGTTTATCCACCCCTAGCAAGAGGCTTGGGGCATGCCGGTGCTTCTGTAGATTTAGGTATTTT
CTCTTTACATTTAGCAGGTGTATCTTCTATTCTAGGAGCTGTTAATTTTATTACTACTGTAATTAATATACGAACCCCCG
GTATAACTATAGACCGTACTCCACTATTCGTATGGGCCGTATTTTTAACTGCAATTCTTCTTTTACTTTCTTTACCTGTT
CTAGCT------------------------------------------------------------------------------------------------
>gi_319736240_gb_HQ324536_Palae .
ACCAGGAACTTTAATTGGAAATGATCAAATTTATAATGTAATTGTAACTGCTCATGCTTTTGTTATAATTTTTTTCATGGT
AATACCTATTATGATTGGAGGTTTTGGAAATTGGCTTATCCCATTAATACTAGGAGCACCCGATATAGCTTTTCCACGT
ATGAATAACATAGGATTTTGACTACTTCCCCCATCGTTAACTCTACTATTATCTAGAGGAATAGTGGAAAGAGGAGTAG
GTACAGGCTGAACTGTTTATCCTCCTTTAGCTAGAGGATTAGGTCATGCAGGAGCTTCTGTAGATCTTAGTATTTTTTC
CCTCCATTTAGCAGGCGTTTCTTCAGTTTTAGGAGCAGTAAATTTTATTACTACTGTAATTAACATACGAACACCAGGA
ATAACTTTAGATCGAACTCCATTATTTGTTTGAGCAGTCTTTTTAACTGCTATTCTACTGTTACTATCTTTACCTGTTTTG
GCTGGAGCTATTACTATACTATTAACAGATCGTAATTTAAATACATCATTCTTTGATCCTGCAGGAGGGGGAGACCCTA
TTTTATACCAGCACTTATTT
>gi_319736244_gb_HQ324538_Palae.
ACCAGGAACTTTAATTGGAAATGATCAAATTTATAATGTAATTGTAACTGCTCATGCTTTTGTTATAATTTTTTTCATGGT
AATACCTATTATGATTGGAGGTTTTGGAAATTGGCTTATCCCATTAATACTAGGAGCACCCGATATAGCTTTTCCACGT
ATGAATAACATAGGATTTTGACTACTTCCCCCATCGTTAACTCTACTATTATCTAGAGGAATAGTGGAAAGAGGAGTAG
GTACAGGCTGAACTGTTTATCCTCCTTTAGCTAGAGGATTAGGTCATGCAGGAGCTTCTGTAGATCTTAGTATTTTTTC
CCTCCATTTAGCAGGCGTTTCTTCAGTTTTAGGAGCAGTAAATTTTATTACTACTGTAATTAACATACGAACACCAGGA
ATAACTTTAGATCGAACTCCATTATTTGTTTGAGCAGTCTTTTTAACTGCTATTCTACTGTTACTATCTTTACCTGTTTTG
GCTGGAGCTATTACTATACTATTAACAGATCGTAATTTAAATACATCATTCTTTGATCCTGCAGGAGGGGGAGACCCTA
TTTTATACCAGCACTTATTT
>gi_220030437_gb_FJ581832_Palae .
ACCGGGAACTTTAATCGGTAACGATCAAATTTACAACGTAATTGTAACAGCACATGCTTTTGTCATAATTTTCTTTATGG
TAATACCAATTATAATCGGAGGATTTGGAAACTGGCTTGTACCTCTAATATTAGGAGCTCCTGATATGGCTTTTCCTCG
AATAAATAATATAAGATTCTGGCTTCTCCCTCCATCTCTCACCCTTCTTCTATCTAGAGGTATAGTAGAAAGTGGCGTA
GGTACAGGATGAACTGTTTACCCACCTCTAGCTAGAGGATTAGGGCACGCCGGGGCATCGGTAGATCTAGGTATTTT
CTCTCTTCACCTAGCAGGGGTGTCTTCTATTTTAGGAGCCGTAAATTTCATCACTACAGTAATCAACATGCGAGCCCC
GGGAATAACTATAGACCGAACTCCCTTATTTGTATGAGCAGTGTTTTTAACTGCTATCTTACTTTTGCTTTCTCTCCCA
GTACTAGCTGGGGCTATCACTATACTTTTAACAGACCGTAATCTAAATACTTCCTTTTTCGATCCAGCTGGAGGGGGT
GATCCTATTCTTTACCAACACTTATTT
>gi_220030441_gb_FJ581834_Palae .
ACCGGGAACTTTAATCGGTAACGATCAAATTTACAACGTAATTGTAACAGCACATGCTTTTGTCATAATTTTCTTTATGG
TAATACCAATTATAATCGGAGGATTTGGAAACTGGCTTGTACCTCTAATATTAGGAGCCCCTGATATGGCTTTTCCTCG
98
AATAAATAATATAAGATTCTGGCTTCTCCCTCCATCTCTCACCCTTCTTCTATCTAGAGGTATAGTAGAAAGTGGCGTA
GGTACAGGATGAACTGTTTACCCACCTCTAGCTAGAGGATTAGGGCACGCCGGGGCATCAGTAGATCTAGGTATTTT
CTCTCTTCACCTAGCAGGGGTGTCTTCTATTTTAGGAGCCGTAAATTTCATCACTACAGTAATCAACATGCGAGCCCC
GGGAATAACTATAGACCGAACTCCCTTATTTGTATGAGCAGTGTTTTTAACTGCTATCTTACTTTTGCTTTCTCTCCCA
GTACTAGCTGGGGCTATCACTATACTTTTAACAGACCGTAATCTAAATACTTCCTTTTTCGATCCAGCTGGAGGGGGT
GATCCTATTCTTTACCAACACTTATTT
>gi_304420841_gb_GQ415630_Peric .
ACCTGGTAGATTGATTGGAAATGACCAAATCTACAACGTAATTGTTACTGCTCATGCTTTTGTTATGATTTTCTTTATAG
TWATACCTATTATAATTGGGGGRTTCGGAAATTGACTAGTTCCTTTAATATTAGGCGCTCCTGATATGGCTTTYCCCC
GAATAAATAATATAAGATTCTGGCTACTTCCGCCCTCACTTACCCTTTTATTATCTAGAGGAATAGTAGAAAGAGGGGT
AGGTACGGGCTGAACTGTTTACCCTCCTCTAGCAGGAGGGGTCGCCCATGCTGGAGCTTCCGTAGATATAGGAATTT
TTTCTCTTCATCTTGCAGGAGTTTCATCAATCTTAGGAGCAGTAAATTTTATTACAACTGTRATTAATATACGAGCCACT
GGAATACCATTTGACCGAATACCTTTATTTGTTTGAGCTGTRTTTTTAACTGCCATCCTGKTACTTCTTTCTCTACCTGT
ATTAGCAGGAGCTATTACTATWTTATTAACAGACCGAAATTTAAATACTTCCTTTTTTGACCCAAGAGGAGGAGGAAAT
CCAATTCTTTATCAACATTTATTC
>gi_304420845_gb_GQ415632_Peric .
ACCTGGTAGATTGATTGGAAATGACCAAATCTACAACGTAATTGTTACTGCTCATGCTTTGTTATGATTTTCTTTATAGT
TATACCTATTATAATTGGAGGGTTCGGAAATTGACTAGTTCCTTTAATATTAGGCGCTCCTGATATGGCTTTTCCCCGA
ATAAATAATATAAGATTCTGGCTACTTCCGCCCTCACTTACCCTTTTATTATCTAGAGGAATAGTAGAAAGAGGGGTAG
GTACGGGCTGAACTGTTTACCCTCCTCTGGCAGGAGGGGTCGCCCATGCTGGAGCTTCCGTAGATATAGGAATTTTT
TCTCTTCATCTTGCAGGAGTTTCATCAATCTTAGGAGCAGTAAATTTTATTACAACTGTGATTAATATACGAGCCACTG
GAATAACATTTGACCGAATACCTTTATTTGTTTGAGCTGTATTTTTAACTGCCATCTTGTTACTTCTTTCTCTACCTGTAT
TAGCAGGAGCTATTACTATATTATTAACAGACCGAAATTTAAATACTTCCTTTTTTGACCCAAGAGGAGGAGGAGATCC
AATTCTTTATCAACATTTATTC
>gi_304420849_gb_GQ415634_Peric .
ACCAGGAAGATTAATCGGAAATGACCRGATCTATAATGTAATTGTTACRGCCCATGCTTTTGTTATAATTTTTTTTATAG
TAATACCAATCATAATTGGGGGATTTGGAAACTGATTAGTTCCTTTAATATTAGGAGCCCCTGATATAGCTTTCCCCCG
TATAAATAATATAAGATTTTGACTCCTCCCTCCCGCTCTTACTTTACTTCTTTCTAGAGGAATAGTTGAAAGAGGAGTA
GGAACAGGATGAACTGTTTATCCTCCTTTAGCAGGAGGGGTTGCCCACGCAGGAGCTTCAGTAGATATAGGAATCTT
CTCTCTTCATCTAGCAGGAGTCTCTTCTATTTTAGGAGCTGTAAATTTTATTACTACRGTAATTAATATACGTCCCAGAG
GTATAACAATAGACCGAATGCCTCTTTTTGTTTGAGCCGTATTTTTAACTGCCATTCTTCTTCTTCTTTCTTTACCTGTTT
TAGCAGGAGCTATTACTATGTTATTAACAGACCGAAATTTAAATACTTCWTTCTTTGAYCCTAGAGGAGGAGGAGACC
CTATTTTATATCAACATTTATNT
>gi_304420853_gb_GQ415636_Peric .
ACCAGGAAGATTAATCGGAAATGACCAGATCTATAATGTAATTGTTACAGCCCATGCTTTTGTTATAATTTTTTTTATAG
TAATACCAATCATAATTGGGGGATTTGGAAACTGATTAGTTCCTTTAATATTAGGAGCCCCTGATATAGCTTTCCCCCG
TATAAATAATATAAGATTTTGACTCCTCCCTCCCGCTCTTACTTTACTTCTTTCTAGAGGAATAGTTGAAAGAGGAGTA
GGAACAGGATGAACTGTTTATCCTCCTTTAGCAGGAGGGGTTGCCCACGCAGGAGCTTCAGTAGATATAGGAATCTT
CTCTCTTCATCTAGCAGGAGTCTCTTCTATTTTAGGAGCTGTAAATTTTATTACTACAGTAATTAATATACGTCCCAGGG
GTATAACAATAGACCGAATGCCTCTTTTTGTTTGAGCCGTATTTTTAACTGCCATTCTTCTTCTTCTTTCTTTACCTGTTT
TAGCAGGAGCTATTACTATATTATTAACAGACCGAAATTTAAATACTTCTTTCTTTGATCCTAGAGGAGGAGGAGACCC
TATTTTATATCAACATTTATTT
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