Mesap e Msre Pcr 6 1

METILAZIONE DEL DNA

IN ARTRITE REUMATOIDE

Fabio Caradonna, Giulia Sciandrello, Maurizio Mauro e Giusi Barbata

Gruppo di Citogenetica e Mutagenesi

L’Artrite Reumatoide (AR) è una malattia cronica, autoimmune, caratterizata da sinovite erosiva a carico delle articolazioni maggiori.

L’ARTRITE REUMATOIDE

L’AR, spesso, evolve verso lo sviluppo di tumori ematologici, specie linfomi maligni.

AR è anche associata alla over-espressione del gene Parathormon-related Protein (PTHrP) che provoca forte riassorbimento osseo con conseguente rilascio di Calcio nel plasma ed ipercalcemia

L’ARTRITE REUMATOIDE

Ca2+

E’ noto che la deregolazione dell’espressione genica può essere dovuta anche ad alterazioni epigenetiche.

L’alterato livello di metilazione del DNA, in particolare, riveste un ruolo critico nello sviluppo delle malattie neoplastiche visto che i normali pattern di metilazione del DNA genomico sono spesso disturbati nelle cellule tumorali.

Qui riportiamo i risultati di uno studio preliminare condotto con tecniche molecolari e citogenetiche su pazienti AR, allo scopo di valutare lo stato di metilazione del DNA.

Sono stati esaminati 19 pazienti AR (16 donne e 3 uomini) di età compresa tra 30 e 72 anni, e 17 soggetti di controllo (9 donne e 8 uomini) di età compresa tra 22 e 71 anni.

?

Il DNA genomico da sangue periferico è stato utilizzato in reazioni di Methylation-Sensitive Arbitrarily Primed Polymerase Chain Reaction (MeS-AP-PCR).

Studi a livello genomico

HpaII HpaII HpaII

RsaIRsaI RsaI

Cm5CGG Cm5CGG CCGG TGm5CTA

Cm5CGG Cm5CGG CCGG TGm5CTADNA monodigerito (R)

TGm5CTACm5CGG Cm5CGGDNA bidigerito (RH)

MESAP - PCR

HpaII HpaII HpaII

Cm5CGG Cm5CGG CCGG TGm5CTA

10 bp 15 bp 20 bp

DNA monodigerito (R)

TGm5CTACm5CGG

10 bp

Cm5CGG

15 bp 5 bp 15 bp

DNA bidigerito (RH)

MESAP - PCR

bp R20

15

10

5

RHIl pattern di bande del DNA tagliato con entrambi gli enzimi (DNA bidigerito) risulterà uguale a quello del DNA tagliato con RsaI (DNA monodigerito) solo nelle condizioni di ipermetilazione delle sequenze ricche in CpG. Al contrario, il pattern risulterà differente in condizioni di ipometilazione.

Le lumigrafie sono state sottoposte a scansione densitometrica e successiva

analisi di immagine per ottenere, da ogni campione, un grafico

corrispondente all’intensità ed alla posizione delle bande di DNA.

I profili sono stati calcolati prendendo come riferimento la scansione densitometrica del marker utilizzato.

Le variazioni dei pattern di bande sono state quantificate contando sia il numero di picchi relativi a comparsa e/o scomparsa di bande, che quello dei picchi di altezza diversa che rappresentano bande affievolite e/o intensificate.

Come si puo’ notare dai dati riportati il numero di variazioni riscontrate per ogni singolo paziente e’ elevato e significativamente maggiore rispetto a quello osservato nella media dei soggetti di controllo.

Questo risultato dimostra che l’artrite reumatoide e’ fortemente associata a ipometilazione globale del DNA, in accordo a quanto riportato da altri autori. Ed inoltre……