View
32
Download
0
Category
Preview:
DESCRIPTION
Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel. Chankvetadze, B., Capillary Electrophoresis in Chiral Analysis, John Wiley & Sons, Chichester 1997 . Lammerhofer, M., J. Chromatogr. A , 2005, 1068 , 31–57. Gáspár. A. Kapilláris elektroforézis, 2000. - PowerPoint PPT Presentation
Citation preview
Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel
Chankvetadze, B., Capillary Electrophoresis in Chiral Analysis, John Wiley & Sons, Chichester 1997.
Lammerhofer, M., J. Chromatogr. A, 2005, 1068, 31–57. Gáspár. A. Kapilláris elektroforézis, 2000
Kapilláriselektroforézises készülék diagramja
Paraméterek: V, 0-30 kV; oszlop, 5-70 cm x 0,025 -0,100 mm, kvarc
Kapilláriselektroforézis alapelve
A vándorlás hajtóereje az elektroozmotikus (EOF) áramlás,és az elektromos vonzás az ionok és az elektródok között.
Kapilláris előnyei az elektroforézisben
EOF és kromatográfiás áramlási profilok
Kvarc oszlopon az EOF nagysága függ pH-tól. Az EOF falra tapadó kationos detergennsel megfordítható.
CE előnyei a királis analízisben
Királis elválasztás feltételei CE-ben
Semleges szelektorral nem lehet semleges enantiomert elválasztani.Ellentétes töltésű szelektor és minta között nagy elválasztás várható.Az elválasztásnak maximuma van a szelektor koncent-rációjának függényében.
Királis elválasztás β-PMMACD szelektorral
Ellentétes töltésű szelektor és minta párosítások nagy elválasztást adnak.
Végtelen elválasztás is elérhető a szelektor koncentrációjának hangolásával ellentétes
töltetű minta és szelektor esetén
S. Rudaz et al., Electrophoresis 24 (2003) 2633.
Királis CE gyors módszer
Az oszlop regenerálási időt is figyelembe kell venni.
CE alkalmas nyomnyi enantiomer szennyezés kimutatására
Királis CE nyomelemzésre is alkalmas
Nyomnyi királis szennyezés kimutatása CE-vel
Nem-vizes közegű királ CE
T.F. Wang et al. J. Chromatogr. A 817 (1998) 121.
Elektrodiszperzió leronthatja az elválasztás hatékonyságát
A probléma főleg ellentétes töltésű szelektor és minta esetén jelentkezik.A helyzetet rontja a többszörös töltés és a statisztikus szubsztitúció.
CE-ben használt királis szelektorok
Ciklodextrinek használata királis CE-ben
• Széles szelektivitási spektrum• Származékok széles köre• Olcsó ár• Csekély UV adszorpció
• Statisztikusan szubsztituált származékok: szélesebb szelektívitási spektrum, batch to batch eltérések, alacsonyabb szelektivitás bizonyos enetiomerekre, elektrodiszperzió kiküszöbölése nehezebb.
• Single izomer származékok: jó reprodukálható eredmények, szűkebb szelektivitási spektrum, nehezebb szintézis
Statisztikusan szubsztítuált CD molekulasúly eloszlása
CD szubsztitúciójának változása a migrációs sorrend megfordulását eredményezheti
A szelektivitás változik a CD szubsztituáltság fokával és elrendezésével
Disopyramide királis elválasztása
A két szelektor azonos fokban, de más elrendeződésben metilezett β-CD.
METOPROLOL ENANTIOMEREK ELVÁLASZTÁSA -PhoCD-val
pH függés
Oszlop: 37 cm x 0,05 mm
Puffer: 100 mM foszfát
Szelektor: 15 mM -PhoCD
Feszültség: 25 kV
Hőm.: 20C
METOPROLOL ENANTIOMEREK ELVÁLASZTÁSA -PhoCD-val
szelektor koncentráció függés
Oszlop: 37 cm x 0,05 mm
Puffer: 100 mM foszfátpH: 6,8Szelektor: -PhoCDFeszültség: 25 kVHőm.: 20C
METOPROLOL ENANTIOMEREK ELVÁLASZTÁSA -PhoCD-val
metanol tartalom függés
Oszlop: 37 cm x 0,05 mmPuffer: 100 mM foszfátpH: 4,9Szelektor: 15 Mm -PhoCDFeszültség: 25 kVHőm.: 20C
METOPROLOL GYŰRŰIZOMEREK ELVÁLASZTÁSA
Oszlop: 37 cm x 0,05 mm
Puffer: 100 mM foszfátpH: 4,9Szelektor: 15 Mm -CMCDFeszültség: 25 kV
Hőm.: 20C
Az ionizálható CD-k ionizáltságuktól függően változtathatják szelektivitásukat
Single-isomeric octa(6-O-sulfo)-γ-cyclodextrin szelektor
W.Zhu,G.Vigh, J.Chromatogr.A 987 (2003) 459–466
Elválasztás singleisomeric CD additivvel
Piretroid savak elválasztása
Semleges enantiomerek elválasztása β-PMMACD szelektorral
Néha a pozitív szelektorral is lehet pozitív enantiomereket elválasztani
Többszörös pozitív töltetű szelektorok az EOF megfordulását eredményezhetik
A szelektor feltapad az oszlop falára, ezért az pozitív töltetű lesz.
Királis elválasztás β-HDMACD szelektorral
Már 0,5 mMol szelektor elég az alapvonal elválasztáshoz.EOF fordított
Single isomer CD szelektor
A hétszeri pozitív töltés miatt az EOF fordított
Duál szelektor rendszerek
N. Matthijs etal., Analytica Chimica Acta525 (2004) 247.
Duál CD szelektor CE-ben
min2 4 6 8 10 12 14
mAU
-20
-10
0
10
20
30
min2 4 6 8 10 12 14
mAU
-20
-10
0
10
20
30
min2 4 6 8 10 12 14
mAU
-20
-10
0
10
20
30
min 5 10 15 20 25
mAU
-10 -5 0 5
10 15 20
50 mM acetic acid / TRIS; pH 5.0
+ 1 mM MACD50 mM acetic acid / TRIS; pH 5.0
50 mM acetic acid / TRIS; pH 5.0
+ 10 mM PMMACD
50 mM acetic acid / TRIS; pH 5.0 + 1 mM MACD + 10 mM PMMACD
Kass : 100 – 370 M-1
Kass : 1.3 – 70 M-1
mecoprop, 2,4-DP, 3ClPPA
Fenoprop
4MePPA
PPA
R. Iványi et al.
Két CD kombinációja hatásos szelektor
M. Beofur, J. Sep. Sci. 28 (2005) 529
Migrációs sorrend a szelektor ionizáltságától függően
Tocainide királis elválasztásai
γ-PhoCD fordított migrációs sorrend mint TRIMEB
DDT és metabolitjainak királis CE analízise
CE-ben használt makrociklusos antibiotikum CMA
T.J. Ward et al. J. Chromatogr. A 606 (2001) 73.
Macrociklusos antibiotikum CMA-k
Az antibiotikumok intenzív UV adszorpciója zavarhat
Ellenáramú, részben feltöltött ( partially filling) technika
Nincs EOF (borított oszlop).Amire a minta a detektor az ablakhoz ér addigra onnan az UV aktív szelektor már távozik.
Vancomicine szelektor részben feltöltött technikával
Királ CE celluláz fehérje szelektorral
A fehérje szelektorok jobbak CMA-ként mint CSP-ként, mert az oldott állapot miatt gyorsabb az anyagátadás
Királis CE epesav szelektorral
Optimalizálás a királis CE-ben
Királis CE módszer fejlesztés
Chipek, mint kromatográfiás oszlopok
Mars szondán használt elektrokinetikus kromatográf
EKC
CEC alapjai
Nyomás nélküli, EOF gerjesztette áramlás
CEC oszlop vázlata
A töltet 1µm átmérőjű is lehet.
CEC előnyei
Avidinnel borított CEC
Z. Liu et al. Electrophoresis 23 (2002) 2973
Nem vizes közegű királis CEC
A monolit CSP szelektora
Királ CEC monolit CD alapú CSP-vel
J.Kang etal. Electrophoresis 23 (2002) 1116.
Királ CEC monolit oszlopon
Ionpár kulcskölcsönhatások, nem vizes közeg
Üres cső CEC
Recommended