View
217
Download
2
Category
Preview:
Citation preview
1
The world leader in serving science
サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社
- LC/MSの基礎 -
イオン化の選択
2
イオン化とは
試料導入
+ + + +
+ +
-
- -
- - -
電場や磁場等を用いて 質量ごとに分離
+ +
+
- -
-
全ての化合物を等しくイオン化する方法は存在しない
スペクトル ESI, APCI, APPI, MALDI, EI, CI, etc
イオン化
イオン化の特徴を学び、使い分ける必要がある
3
大気圧イオン化:ESI
高電圧 (4~5 kV)
ソフトなイオン化
M+H+もしくはM-H-、溶媒由来の付加イオンを形成
極性化合物に適している
高質量化合物(タンパク質等)に適している
移動相組成の影響を受けやすい
溶媒の揮発 と微細化
帯電液滴を形成
ESI エレクトロスプレーイオン化 (Electro Spray Ionization)
HESI-Ⅱ
4
大気圧イオン化:APCI
コロナ放電電極(5 uA)
ヒーター(~500度)
APCI 大気圧化学イオン化 (Atmospheric Pressure Chemical Ionization)
ESIでイオン化しにくい低極性化合物もイオン化可能
LC移動相に100%水の極性溶媒からヘキサン等の
無極性溶媒まで幅広く対応
高質量物質(タンパク質など)には不向き
熱不安定化合物には不向き
移動相の影響を受けにくい
5
大気圧イオン化:APPI
プローブから噴霧した気体状試料に
Kryptonの光(イオン化ポテンシャル
10.6 eV、波長:116 nm)を照射し、
試料をイオン化
Ref.) A. P. Bruins et al., Anal. Chem., 2000, 72, 3653-3659
M + h M+
M+ + S MH+ + S[-H] * S =
solvent
ESI・APCIでイオン化しにくい非極性化合物もイオン化可能
複素環化合物などπ電子を有する化合物向き
熱不安定化合物には不向き
APPI 大気圧光イオン化 (Atmospheric Pressure Photo Ionization)
6
極性
分子質量
低
高
小(50Da~) 大(~150000Da)
単糖 オリゴ糖 多糖
DNA RNA
ペプチド
代謝物
医薬
農薬
複合脂質
合成ポリマー 化成品 脂質
アミノ酸 タンパク質
イオン化の適用範囲
7
極性
分子質量
低
高
小(50Da~) 大(~150000Da)
単糖 オリゴ糖 多糖
DNA RNA
ペプチド
代謝物
医薬
農薬
複合脂質
合成ポリマー 化成品 脂質
アミノ酸 タンパク質
イオン化の適用範囲
ESI
APPI
APCI
8
Liquid Flow rate (µL/min)
Spray voltage(V) Vaporizer temp.(℃)
Ion transfer tube temp.(℃)
Sheath Gas pressure(psi)
Aux Gas pressure(psi) Pos Neg
5 3000 -2500 0 240 5 0
200 3000 -2500 250-350 350 35 10
500 3000 -2500 300-500 380 60 20
1000 3000 -2500 500 400 75 30
最適化範囲 100-4500 0-550 150-400 30-70 5-40
LCの流速によって 最適な設定値が異なります。条件にあった設定値を入力 することが大切です。
イオン化の最適条件(HESI 2)
高感度化
低流速で分析することで 脱溶媒が効率化され高感度化させることが可能です。 また、内径の小さいカラムを利用しても同様に高感度化が可能です。
※使用するプローブにより最適値が異なります。上写真のプローブの推奨値です。
9
プローブ位置の調整(HESI2)
*プローブを近づけた場合、
ESIニードル先端で放電する危険があります。
先端が青く光らないことを確認してください。
深さ設定
前後設定
移動相流速 (μL/min)
前後設定 深さ設定
HESI ESI HESI ESI
1-50 1.75 0.5 B B
50-1000 1.75 0.5~1.0 C or D C or D
LCの流速に合わせて、 位置を調節します。近すぎて放電してしまうとイオンが 検出できなくなります。
※スイープキャップに右側のタイプを使用している場合
10
イオンサプレッション(マトリックス効果)
試薬標準品
試薬標準品
マトリックス
+ 感度低下
イオン化 +
+
+
+
+
+ +
+ +
+
+
+
+
+
+
+ +
+ +
+
+
+
+
+
+
+
+ +
+ +
気化
イオン化の際、目的化合物以外のマトリックスと競合することにより
本来の感度が得られない現象を示します。
イオンサプレッションのイメージ(例) + ×5
+ ×2
*装置の納入直後は汚れの影響で感度が低下します。必ず既定の洗浄Methodで洗浄をお願いいたします。
Recommended