DIARREA AGUDA

MTODOS DIAGNSTICOSTRYPASONOMIASISBlgo. Carlos A. Fernndez MiopeFernandezC4@gmail.com Marzo, 2014Segunda Especialidad en Microbiologa ClnicaHospital Regional LambayequeUniversidad Nacional Pedro Ruz Gallo

CICLO BIOLGICO

FORMAS DE TRANSMISIN

TRIATOMINOS VECTORES

TCNICAS PARASITOLGICAS PARA LA DEMOSTRACIN DIRECTA DE LA PRESENCIA DEL PARSITOGota frescaGota gruesa-frotisMicroconcentracinConcentracin de StroutHemocultivoXenodiagnsticoPCRBiopsiaTCNICAS INMUNOLGICAS PARA LA DETECCIN DE ANTICUERPOSCONTRA Trypanosoma cruziHemaglutinacin indirecta (HAI).Inmunofluorescencia indirecta (IFI).Tcnicas inmunoenzimticas: ELISA.MUESTRAS DE ACUERDO AL TIPO DE EXAMEN

EXAMEN DE SANGRE EN FRESCOConsiste en examinar directamente una gota de sangre, entre lmina y laminilla, con el microscopio.El rendimiento del examen es bueno, y la prueba es til cuando la parasitemia es elevada (Formas agudas).GOTA GRUESA - FROTISLa gota gruesa consiste en concentrar y defibrinar la gota de sangre de la muestra, la que posteriormente ser deshemoglobinizada y teida con Giemsa durante 30 minutos.El frotis es el extendido de una gota de sangre en una lmina portaobjetos seguida de la fijacin de la muestra y posterior tincin con Giemsa

MICROCONCENTRACINLa tcnica consiste en concentrar los parsitos de una muestra de sangre colectada en tubos capilares heparinizados por centrifugacin

Es posible, adems, realizar una lectura en fresco entre lmina y laminilla.CONCENTRACIN DE STROUTEsta tcnica se basa en la concentracin de los parsitos en la muestra sangunea por centrifugacin y examen del sedimento al microscopio en busca de trypomastigotes mviles.Extraer 5-10 mL de sangre venosa en un tubo sin anticoagulanteDejar a temperatura ambiente hasta que se coagule y separar el suero.Centrifugar este suero a 160g (800 rpm) durante dos minutos para descartar los glbulos rojos.Centrifugar nuevamente el sobrenadante a 300-600 g (2000-2500 rpm), durante diez minutos.Separar el sobrenadante (suero) y conservarlo a 4 C para el anlisis serolgico. portaobjetos.Colocar una alcuota del sedimento obtenido en una lminaportaobjetos.Cubrir la muestra con una laminilla y proceder a la lectura.

CONCENTRACIN DE STROUT

HEMOCULTIVOConsiste en sembrar una muestra de sangre en medio de cultivo artificial o celular, con la finalidad de amplificar el nmero de parsitos presentes y confirmar el diagnstico. La limitacin: Tiempo de incubacin (2 meses).

EPIMASTIGOTES DE TRYPANOSOMA

XENODIAGNSTICOEs una tcnica que permite la multiplicacin del parsito in vivo y consiste en hacer picar a la persona sospechosa de infeccin por el vector libre de infeccin.til en formas agudas, crnicas y de portador.

XENODIAGNSTICO

Utiliza ninfas de triatominos del III y IV estadio, en ayuno por lo menos 15 das..Se les deja alimentarse del sospechoso por 20 minutos o hasta observar que las ninfas hayan aumentado su volumen.A los 30 das, se examina en el microscopio una muestra de heces de los triatominos. De ser negativo, examinar otra alcuota del contenido digestivo del triatomino a los 60 dasHEMAGLUTINACIN INDIRECTALa hemaglutinacin indirecta emplea glbulos rojos de carnero, previamente tratados con cido tnico, como soporte de extractos solubles del parsito (antgeno). Es una prueba altamente sensible y especfica

TAMIZAJE EN DILUCIN DIAGNSTICA 1/4ELISALa tcnica ELISA emplea antgenos solubles de Tripanosoma cruzi, adheridos a soportes inertes (placa de microtitulacin) y antiglobulinas humanas conjugadas con enzimas, como detectores de la reaccin antgeno-anticuerpo.

Reactivo: OD 0,384.No reactivo: OD 0,256.INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA (IFI)La tcnica de inmunofluorescencia indirecta (IFI), emplea como antgeno epimastigotes de Trypanosoma, obtenidos de cultivo y fijados en lminas sobre las que se realiza la reaccin antgeno-anticuerpo. La formacin de este complejo es evidenciada por una antiglobulina humana marcada con fluorescena.Los kits comerciales proporcionan la lmina preparada y los reactivos.Prueba altamente sensible y especfica.INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA

INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA (VD 1/32)

SENSIBILIDAD DE LOS MTODOS PARA DETECCIN DIRECTA DEL PARSITOTechniqueSensitivityFresh blood preparation (10 l)6000 trypanosomes/mlThick drop (10 l)2000 trypanosomes/mlBuffy coat (70 l) 600 trypanosomes/mlPCR (Polymerase Chain Reaction)10 trypanosomes/ml (depends upon gene target and specific technique)KIVI1 trypanosome per 5 ml.MTODOS DX DE ACUERDO A LA FORMA CLNICA

ALGORITMO PARA EL DIAGNSTICO DE LABORATORIO