ការអនុវត្តន៍គ្លីនិកមីក្រកបុវទិ្យាវេវជ្ជសាក្រ�្ត�ត្វ

Clinical Veterinary Microbiology

Lecturers: Mr. Chea Rortana,FacultyofVeterinaryMedicine,RoyalUniversityofAgriculture,

bookzz.org

Method 3. Biochemical Tests

• PrimaryBiochemicaltest• SecondaryBiochemicaltest

Content of this section1-Catalase2-Oxidasetest3-Oxidation-fermentationtest(O-F)4-Motilitytest

វធីិសាក្រ�្តវេ�ីម្ប ីរកក្របវេ ទបាក់វេតរ ី១. ក្របវត្ត�ំណាក ឬការ�ង្ស័យ ក្របវេ ទបាក់វេតរ ី២. បណ្តុ ះបាក់វេតរ ី៣. ការពិនិត្យ Bacteria staining (gram stain…)៤. វេត�្ត Biochemical test (20 reactions) ៥. វេត�្ត វេ�រ ៉មូ (HA, HI, ELISA…) ៦. វេត�្ត មូវេ8គុ8 (PCR, DNA sequencing…)

១. អ្វីវេ9គឺជា វេត�្ត គីមីជីវៈ(Biochemicaltest)?

• គឺជាវេត�្តវេ8ីការវេ=្លីយបត និងបំរែរបំរ8ួ គីមីជីវៈ រប�់បាក់វេតរ ីវេ�ីម្បីឈាន�8់ការ�ន្និដ្ឋាC ននក្របវេ ទ រប�់វា។

• វេត�្តគីមីជីវៈ មានពីរតំណាក់កា8ធំៗ៖ • ១. Primary biochemical • ២. Secondary biochemical

1-Catalase Test1-Catalase Test

Why do catalase test?Why do catalase test?

• វេត�្តវេនះ វេធ្វីវេIងីវេដ្ឋាយវេ�ីម្បចីាប់អង់�ីុម Catalase រែ�8មាននាទីបំរែ8ង H2O2 វេLយកា្ល យជាទឹក និងអុក�ីុរែ�ន ។

• �ូ8ុ�្យុងក្រតវូការមាន H2O2 3% • H2O2 ក្រតវូរែតរក្សាទូកក្នងុទូទឹកកក មិនប៉ះពន្លឺ • ក្រតវូក្របងុក្របយ័ត្នក្រប�ិនវេបី បាក់វេតរ ីបណ្តុ ះ វេ8ីBlood

agarវេក្រQះវាLចវេធ្វីវេLយ8ទ្ធផ8ខុ�

Catalase TestCatalase Test Method 1

១.=្កឹះបាក់វេតរ ីដ្ឋាក់វេWវេ8ី Microscopeslide

២.បន្តក់ H2O2(3%)ក្របមាណ ២�ំណក់

៣.វេបីមាន ពពុះអុក�ីុរែ�ន បង្ហាY ញថា មានក្របតិកម្ម

Catalase TestCatalase Test Method 2Method 2១. បន្តក់ H2O2 ៣ % វេ9វេ8ី�ំណាកបណ្តុំ បាក់វេតររីែ�8វេWវេ8ីចានបណ្តុ ះ២. និងមួយករែន្លវេទ]តរែ�8មិនមានបណ្តុ ះបាក់វេតរ ី៣. នឹងមានពពុះ�ូចគ្នា្ន រែត 8ទ្ធផ8វេ8ី�បាក់វេតរ ីមានកក្រមិតខ្ព�់ជាង រែ�8បង្ហាY ញថា positive

2-Oxidase test

Why do Oxidase test?Why do Oxidase test?• វេត�្តវេនះវេធ្វីវេIងីវេ�ីម្ប ីរកវត្តមាន Cytochrome oxidase

វេWក្នងុវេកា�ិកាបាក់វេតរ ី• Anaerobes គឺមិនមាន Oxidase វេIយី (negative) • �ូ8ុ�្ុយងរែ�8វេក្របីក្រតវូរក្សាទុកក្នងុ ទូទឹកកក 4 អង្សារ និងមិនវេLយ

ក្រតវូពន្លឺ

• មិនក្រតវូវេក្របីដ្ឋាច់ខាតវេWវេព8�ូ8ុ�្យុង�ូព័ណវេ9 វេខ]វចា�់

• ក្របតិកម្មវេដ្ឋាយឯកឯងនៃន�ូ8ុ�្យុងLចវេកីតមាន វេបីមានការបរែនcម ១% cent ascorbic acid.

• ចង្កឹះរែ�8វេក្របីក្រតវូរែតសាd ត មិនមានកំណរធ្ូយង

Oxidation test Method 1Oxidation test Method 1• ១. ដ្ឋាកក្រកដ្ឋា�់វេ�ីម រែ�8មាន�ូ8ុ�្ុយង tetramethy

1-p-phenylenediam inedihydro chloride (1%).

• លាប បាក់វេតររីែ�8ក្រតវុវេធ្វីវេត�្តវេ8ីក្រកដ្ឋា�់• ក្រប�ិនវេបីមានវេ8ចវេចញព័ណសា្វ យចា�់ (dark

purple) ក្នងុអំIុងវេព8 ១០វនិាទី បង្ហាY ញថា Positive oxidase .

• Pseudomonas ael'llgillosa can be used as a positive-control organism.

វេត�្តវេWវេ8ីក្រកដ្ឋា�់តំរង

Oxidation test Method 2Oxidation test Method 2• �ូ8ុ�្យុងរែ�8វេក្របីគឺ• ១- 1% alpha-naphthol in

95% ethanol • ២-1% aqueous solution of

p-aminodimethylaniline oxalate (1:1 ចំណុះវេ�្មីគ្នា្ន )

• បន្តក់�ូ8ុ�្យុងខាងវេ8ី វេ8ីបណ្តុ ះ Colony វេ8ី Blood agar

• ក្រប�ិនវេបី បណ្តុ ះ colony ប្តូរព័ណវេ9វេខ]វ ក្នងុរយៈវេព8 ១០-៣០ វនិាទី បង្ហាY ញថា �ំនាក Positive oxidation ។ (Fig. 2.35).

Weak reactions occurring after two minutes are discounted. The colonies giving a positive reaction are viable, if subcultured within a few minutes of reading the test.

Oxidation test Oxidation test Method 3Method 3

• មានក្រកដ្ឋា�់ Commercial oxidase paper strips និង oxidase sticks

• ការវេធ្វីវេត�្តក្រតវូវេធ្វីវេIងីតាមការែណនារំប�់ផ8ិតផ8រែ�8វេក្របី ឬអ្នកផ8ិត

3-Oxidation-fermentation (O-F) test• វេត�្តវេនះ គឺរែ�្វងរក អុក�ីុតកម្ម ឬ

ការវេIងីវេម (oxidative or fermentative metabolism) វេដ្ឋាយសារវត្តមាន carbohydrate រែ�8មានវេWក្នងុបាក់វេតរ។ី

• ចំណីបណ្តុ ះរែ�8វេក្របីក្រតវូរែត Qក់ កណា្ត 8រាវនឹង ចាហួយ (semi-solid)។

-ចំណីបណ្តុ ះមានព័ណនៃបតង (pH 7.1) -វេបីមានក្របតិកម្មជាមួយL�ីុត ផ8ិតវេដ្ឋាយបាក់វេតរ ីវានិងរែក្របព័ណវេ9ជា វេ8lង (pH 6.0)។

HughandLeifson’sOFmedia

• Sodiumchloride:5.0g• Di-potassiumphosphate:0.3g• Peptone:2.0g• Bromthymolblue:0.03g• Agar:3.0g• Glucose:10g• Water:1000ml

ចំណីបណ្តុ ះ O-F ផ8ិតសា្ត ប់• OFBaseMedium(control),3ml,13x100mmtube,opticallyclear,shatterresistant,polycarbonatetube,orderbythepackageof20,byHardyDiagnostics

ប្រ�តិ�ត្តការ Procedure១. =្កឹះ បាក់វេតរ ីជាមួយនឹង loop ក្រតង់ (straight wire) ដ្ឋាក់វេ9ក្នងុ ទីប វេដ្ឋាយរក្សាវេWចំគណា្ត 8។២. ទីបមួយដ្ឋាក់បាងំក្រគបពីវេ8ីចំណីបណ្តុ ះ វេដ្ឋាយ sterile mineral oil or liquid paraffin វេ�ីម្បបីវេង្កីត anaerobic condition ៣. ដ្ឋាក់ Incubate វេW 35 C រយ់វេព8 48 ម (�ក្រមាប់បាក់វេតរ ីមួយចំនួន ក្រតវូការយៈវេព8 ៣-៤នៃopវេ�ីម្បី8ូតលា�់

ធាតុផ្តុំចំណីបន្តុះ�ក្រមាប់ O-F test វេ8ី Staphylococci and 

micrococci1-Pancreaticdigestofcasein(tryptone) 10.0 g2-Yeastextract 1.0g3-Agar2.0 g4-Bromocresolpurple0.001g5-Distilledwater1000 mL

8ទ្ធផ8 នៃនការវេធ្វីវេត�្ត O-F

4-Motility tests4-Motility tests

Motility tests• បាក់វេតរភីាគវេក្រចីនមានច8នា

(Motile) វេដ្ឋាយសា កន្ទុយ (flagella)។

• វេត�្តវេនះ LចLក្រ�័យវេ9វេ8ី �ីតុណY ភាព និងកតា្ត ភាពរ�់រប�់បាក់វេតរ ីវេWក្នងុ�ីតុណY ភាព�មក្រ�បណាមួយ.

• 8ទ្ធផ8គឺ ៖ • បាក់វេតរ ីMotile • ឬ non-motile

ដ្ឋាក់ loop វេLយវេWចំកណា្ត 8