Marta Regina de Castro BelfortLabGeM

Ciências Biológicas - UFMA

Introdução

(Childes et al, 2001)

Erros Inatos do Metabolismo (EIM)

Doenças hereditárias;

Autossômicas recessivas;

Mutifatoriais;

Alcaptonúria- 1898 e 1902;

Síntese de uma proteína alterada que ocorre devido a um bloqueio

numa via enzimática com consequente acúmulo de substrato e

diminuição na síntese do produto.

Definição

(Mudd et al, 2001)

Introdução

Classificação

Desordens decorrentes à deficiência na produção de energia ou na sua utilização

pelo fígado, coração, músculo, cérebro e outros tecidos Cadeia respiratória,

oxidação de ácidos graxos, glicólise;

Desordens que levam a intoxicação Acúmulo de compostos tóxicos

(Aminoácidos);

Desordens que levam a alteração da síntese e catabolismo de moléculas

complexasLisossomais, peroximais;

(Saudrubay et al, 2006)

Os EIM são individualmente raros, mas coletivamente numerosos

(Saudrubay et al, 2006)

Introdução

Homocisteína (Hcy)

Aminoácido sulfurado;

Dieta e degradação de proteínas endógenas;

Catabolismo da metionina (Met);

Fórmula estrutural da Homocisteína(Stead et al, 2004)

Introdução

Metionina

S- adenosil Homocisteína

(SAH)

S- adenosilmetionina (SAM)

Homocisteína (Hcy)

Recebe um grupamento adenosil do ATP

Adenosiltransferase

Metiltransferase

Hidrólise- S- adenosil Homocisteína hidrolase

Adenosina

Via da Metionina (Met)

Introdução

Homocisteína (Hcy)

Metionina(Met) Cistationina e Cisteína

Remetilação à Met

-Recebe CH3 do N5-metiltetrahidrofolato-

Metionina sintase;

-Betaína- Betaína Homocisteína

metiltransferase;

-Condensação com Serina catalisada

pela cistationina β-sintase

Transufuração à Sisteína

Via da Metionina (Met)

(Finkelstein,2007)

Introdução

Homocistinúria clássica

Cistationina β-sintase;

McCully- 1969 Homocistina na urina de pacientes com

alterações vasculares;

Bloqueio enzimático Hcy e Met acumulam-se no organismo;

Elevadas concentrações de Hcy e deficiência de vitaminas do

complexo B;(McCully, 1969)

92 diferentes mutações no gene que codifica à CBS;

(Zschocke, 2009)

Introdução

Aspectos bioquímicos

Acúmulo tecidual de Hcy;

Elevação do seu precursor;

Redução na atividade da CBS;

Redução dos produtos da via de Transufuração Cistationina e

Cisteína;

Eliminação da Homocistina;

(Mudd et al, 2001)

Manifestações clínicasAlterações no SNC;

Anormalidades oculares;

Sistema esquelético, renal, hepático e pulmonar comprometido;

Retardo mental;

Deformações ósseas(Jiang et al, 2005)

Introdução

Diagnóstico

Sinais clínicos e avaliações bioquímicas e moleculares;

Identificação da Homocistina na urina;

Identificação da Hcy e seus metabólitos no plasma;

Tratamento

Dieta reduzida em Met;

Suplementação com Vitaminas do complexo B e Cisteína;

(Jiang et al, 2005)

Introdução

Estresse oxidativo e Homocistinúria

Acúmulo de metabólitos tóxicos A produção de ROS e depleção

da capacidade antioxidante;

(Smith et al, 2005)

Objetivo

Investigar o possível papel do estresse oxidativo na

fisiopatologia da Homocistinúria em pacientes antes e

durante o tratamento

Materiais e Métodos

Pacientes e controles

-Serviço de Genética do Hospital das Clínicas;

-9 Pacientes com diagnóstico de Homocistinúria (Idade média:10

anos; Intervalo de 4-27 anos);

-11 Pacientes homocistinúricos em tratamento (Idade média: 12

anos; Intervalo de 12-32 anos); Duração média de 11 anos;

-11 Indivíduos controle (Idade média: 22 anos; Intervalo 5-30 anos);

Tratamento

Vitamina B6 Dose média: 500 mg/dia;

Vitamina B9Dose média: 5 mg/dia;

Vitamina B12Dose média: 1 mg/mês- intramuscular;

Betaína Dose média: 6 g/dia

Materiais e Métodos

Materiais e Métodos

Preparação do Plasma

O plasma foi obtidos de a partir de pacientes e controles;

Mensuração de Carbonil

Níveis de compostos Carbonílicos no plasma;

Quantificação por espectrofotômetro;

Valores do Carbonil foram expressos nmol Carbonil/mg proteína;

Mensuração de Sulfidrila

Níveis de compostos Sulfidrílicos no plasma;

Níveis de sulfidrila são inversamente correlacionada aos danos

oxidativo em proteínas;

Materiais e Métodos

Mensuração de Malondialdeido (MDA)

Níveis de Malondialdeido foram medidos por HPCL (Cromatografia

Líquida de Alta eficiência;

Resultados expressos em μM;

Capacidade Antioxidante Total (TAS)

Níveis de antioxidantes no tecido foram mensurados por Kits-

RANDOX;

Resultados foram expressos nmol/L;

Mensuração de Homocisteína (tHcy)

Níveis de Homocisteína total: Homocisteína livre, Homocisteína ligada

a proteína e Homocistina e outros metabólitos;

Resultados foram expressos pmol/L;

Materiais e Métodos

Mensuração da Metionina (Met)

Níveis de Met foram medidos por HPCL (Cromatografia Líquida de Alta

eficiência;

Resultados foram expressos em log;

Mensuração de Proteína

Concentrações de proteínas foram mensuradas por Kits LabTest

Análise estatística

ANOVA;

Correlação de Pearson;

Software SPSS;

Resultados

Foram analisados os parâmetros in vivo de estresse oxidativo em plasma de

pacientes com diagnóstico de Homocistinúria (Grupo A), sob tratamento (Grupo

B) e Grupo Controles;

Teor de compostos sulfidrílicos, carbonílicos, Malondialdeido (MDA) e

antioxidantes;

Resultados

Pacientes em tratamento apresentaram diminuição nos níveis de MDA;

Dietas restritas às vitaminas do Complexo B impediu danos lipídicos;

Resultados

Formação de compostos sulfidrílicos foram menores no grupo A e grupo B;

ResultadosAssociação entre os níveis de Homocisteína e metionina com o estresse oxidativo

em pacientes homocistinúricos;

Não foram encontrados correlações entre os níveis de metionina e estresse

oxidativo;

Resultados

Correlação positiva entre os níveis de MDA e de Homocisteína;

DiscussãoPoucos estudos sobre os parâmetros de estresse oxidativo em pacientes

homocistinúricos;(Robert et al, 2005)

Aumentos dos compostos carbonílicos e MDA em pacientes homocistinúricos

quando comparados ao grupo em tratamento;

Aumento no dano oxidativo às proteínas e lipídeos;

Diminuição das defesas antioxidantes;

Lesão oxidativa podem diminuir com o tratamento adequado;

Tratamento com vitaminas do complexo B diminui os níveis plasmáticos de Hcy

em pacientes com Homocistinúria clássica;(Jakubowskiet al, 2008; Yap et al, 2001)

DiscussãoMecanismos responsáveis pelo efeito tromboembólicos causados pela Hcy;

Inibição da Transufuração e estresse oxidativo;

(Mudd et al, 2001; Matté et al, 2009)

O uso de marcadores de estresse oxidativo são importantíssimos, uma vez que,

refletem os danos causados pelos ROS e a eficiência das defesas antioxidantes

do organismo;

Avaliam os danos em componentes celulares: proteínas, lipídeos;

SOD, CAT e GPx(Beal, 2003)

Efeitos nocivos da Hcy ao dano endotelial Tromboembolia Mudanças

complexas na parede dos vasos sanguíneos;

(Lentz et al, 2004)

DiscussãoFoi demonstrado que a Hcy sofre oxidação no plasma, gerando Hcy tiolactona;

Este processo produz ROS, iniciando o processo de peroxidação lipídica;

Foram encontrados níveis altos de MDA em plasmas de pacientes

homocistinúricos;(Lentz et al, 2004)

Conclusão

Foi um dos primeiros trabalhos que demonstram que os danos oxidativos e

defesas antioxidantes são alterados em pacientes homocistinúricos;

O tratamento foi capaz de diminuir os níveis de Hcy e dano oxidativo lipídico em

pacientes homocistinúricos;

O estresse oxidativo está envolvido na fisiopatologia da doença;

Novas abordagens dever ser utilizadas para melhorar a terapêuticas nessa

desordem.

Obrigada