Le Virus de l’Hépatite Delta:Virus et Marqueurs

Dr. Elyanne Gault

Laboratoire de MicrobiologieHôpital Ambroise ParéBoulogne-Billancourt

elyanne.gault@apr.aphp.fr

Virus satellite du Virus de l’Hépatite B

Maladies graves du foie, aiguës ou chroniques

Diagnostic difficile

Traitement par l’Interféron- partiellement efficace

Le Virus de l’Hépatite Delta

Le virus de l’Hépatite Delta

(Bonino, J Virol, 1986; Wang, Nature, 1986; Ryu, J Virol 1993)

Ag HBs(Virus de l’hépatite B)

HDVVirus défectif

Satellite d’HBV

sHD LHD

1977: Mario Rizzetto

1-1679

sens génomique

ARN 1679 ntcirculaire - polarité négative

Le génome viral

Homologie 70%

1679-1

sens antigénomique

ARN antigénomique

1598 1012

ORF

ARNm sHD

ARNm LHD

LHD

sHD

aa30 51

site de

polymérisation

torsadé

8866

signal de

localisation

nucléaire

riche en aabasiques

14697

site de

fixation

à l’ARN

riche enarginines

214195

signal

d’assemblage

sited’isoprénylation

DOMAINES

FONCTIONS

Les protéines du VHD

Transcription

Réplication

NOYAU

R

CYTOPLASME

Le cycle de réplication HDV

AgHBs

Hépatocyte

ADN cccHBV

AgHBs

GOLGI/RE

Le cycle de réplication HDV

Récepteur hépatocyte idem HBV…?

HBV (AgHBs) est indispensable à la réplication de HDVMAIS la réplication de HBV est inhibée par la réplication de HDV

In vivo - modèles animaux et patients)In vitro - sHD et LHD répriment les gènes des promoteurs

Enh1 et Enh2 de HBV- LHD active le gène de d’inhibition de réplication de HBV MxA

Rôle différencié des protéines deltasHD active la réplication viraleLHD inhibe la réplication virale mais permet la maturation

des virions et la production de particules infectieuses

Le cycle de réplication HDV

Réplication via enzymes cellulaires (RNA pol)Pas d’action des inhibiteurs d’enzymes virales

Inhibition de la réplication de HBV (LHD)Pas d’action des inhibiteurs du HBV (Lamivudine)

Nécessité d’un niveau suffisant d’AgHBs Rôle potentiel des inhibiteurs de l’ADN ccc de HBV(Toxicité mitochondriale de la Clévudine)

Etape finale clé (isoprénylation, interaction Ag HBs)Rôle potentiel des inhibiteurs de l’isoprénylation

Intérêt du Ténofovir à définir

Diversité génétique du virus de l’hépatite delta

Répartition géographique de l’infection chronique par HBV

2 à 7% - moyenne

> 8% - forte

< 2% - faible

Prévalence de l’AgHBs

Prévalence de l’infection par HDV

Faible endémie Endémie Moyenne Forte endémieTrès faible endémie< 10% 10 à 20% 20 à 60% > 60%

Abbas 2010

HDV-5

HDV-6

HDV-7HDV-8

Variabilité génétique de HDV

0.1

PERU

VNZD8349

VNZD8624

VNZD8375

SOMALIA

ETHIOPIA

LEBANON

NAURU

TK6HDV

TK5HDV

US2

CAGLIARI

HDViran

ITALY

W5

W15

US1

TK7HDV

TK3HDV

TAIWCHAO

TWD2667

CHINA

DFR45dFr1986dFr2158dFR2072DFR644

dFr2005DFR73DFR47DFR910DFR48dFr2139

TAIWU

AF209859

MIYAKO

L215

JAPAN

TAIWLEE

TW2476

PT26

PT62

YAKOUSK6

HDV-3

HDV-1

HDV-2b

HDV-2a

SOMALIA

ETHIOPIA LEBANON

NAURU TK6HDVTK5HDVUS2CAGLIARI

HDViranITALYW5W15

US1TK7HDV

TK3HDVTAIWCHAOTWD2667

CHINA

PERU

VNZD8349VNZD8624VNZD8375

DFR45dFr1986dFr2158

dFR2072DFR644

dFr2005

DFR73

DFR47

DFR910

DFR48

dFr2139 TAIWUAF209859

MIYAKOL215

JAPAN TAIWLEETW2476

PT26YAKOUSK6PT62

Distance : Kimura-2

100

100

9069100

95

100

Maximum de parcimonie

100100

9989

100

100

100

95

100100

100

100

100

100 100

100

100

100

100

100

100

99

100100

100

HDV-4HDV-2

HDV-1

HDV-3

NIGERIA

NIGER

CHAD

CENTRAL AFRICAN REPUBLIC

S U D A N

CAMEROON

SÃO

TO

MÉ

GABON

C O

N G

O

Z A I R E

BURKINA FASO

BE

NIN

TO

GO

GH

ANA

IVORYCOAST

LIBERIA

SIERRALEONE

GUINEAGUINEA- BISSAU

MAURITANIA

SENEGALGAMBIA

M A L IWESTERN S

AHARA MOROCCO

A L G E R I A

TU

NIS

IA

L I B Y AEGYPT

ETHIOPIA

S O

M A

L I

A

KENYA

UGANDA

MA

LA

WI

M O

Z A

M B

I Q

U E

M A

D A

G A

S C

A R

ZIMBABWE

BOTSWANA

SWAZILAND

LESOTHO

SOUTH AFRICA

NAMIBIA

ANGOLA

Z A M B I A

EQU.GUINEA

RWANDA

TANZANIA

COMOROS

DJIBOUTI

MAOTTE

MAURITIUS

RÉUNION

NORTHATLANTIC

OCEAN

MEDITERRANEAN SEA

GULF OF

ADEN

BURUNDIINDIAN

OCEAN

dFr48dFr45 dFr1986dFr2066

dFr910dFr489dFr2180

dFr73dFr2055dFr2204dFr2301dFr2154

dFr47dFr2317

dFr1843dFr2458

dFr2005 dFr2401

dFr1972dFr69

dFr1953

dFr1594SOUTH

ATLANTICOCEAN

dFr48

dFr2020dFr2502

dFr2072

dFr644

HDV-5

HDV-7HDV-6

HDV-8

100% des isolats HDV-5, -6, -7 et -8 correspondent à des patients nés en Afrique

Variabilité génétique de HDV

Variabilité génétique de HDV

NIGERIA

NIGER

CHAD

CENTRAL AFRICAN REPUBLIC

S U D A N

CAMEROON

GABON

C O

N G

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Z A I R E

BURKINA FASO

BE

NIN

TO

GO

GH

ANA

IVORYCOAST

LIBERIA

SIERRALEONE

GUINEAGUINEA- BISSAU

MAURITANIA

SENEGALGAMBIA

M A L IWESTERN S

AHARA MOROCCO

A L G E R I A

TU

NIS

IA

L I B Y AEGYPT

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M A

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G A

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ZIMBABWE

BOTSWANA

SWAZILAND

LESOTHO

SOUTH AFRICA

NAMIBIA

ANGOLA

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RWANDA

TANZANIA

COMOROS

DJIBOUTI

MAOTTE

MAURITIUS

RÉUNION

NORTHATLANTIC

OCEAN

MEDITERRANEAN SEA

GULF OF

ADEN

BURUNDIINDIAN

OCEAN

SOUTHATLANTIC

OCEAN

GABON

EQU.GUINEA

Makuwa et al, J Clin Microbiol 2008

16% femmes enceintes AgHBs+sont infectées par HDVHDV-8 plus fréquent que HDV-1

I

Janvier 2003 - Août 2006 650 échantillons

HDV-8 (0.5%)HDV-6 (2%)

HDV-5 (15.5%)

HDV-7 (3.5%)

HDV-1 (78.5%)

Epidémiologie de HDV en France (CNR)

Afrique du Sud (n=1)Algérie (n=7)Angola (n=1)

Bénin (n=1)Burkina Faso (n=3)

Cameroun (n=74)Cap Vert (n=1)Comores (n=1)

Congo Brazzaville (n=10)Cote d’Ivoire (n=46)

Égypte (n=8)Gabon (n=6)

Gambie (n=1)Ghana (n=2)

Guinée / Guinée Bissau (n=17)Madagascar (n=4)

Mali (n=45)Maroc (n=9)

Mauritanie (n=14)Mayotte (n=3)

Niger (n=1)Nigeria (n=2)

République de Centre Afrique (n=32)République Démocratique du Congo (n=4)

Sénégal (n=18)Sierra Léone (n=1)

Tchad (n=5)Togo (n=4)

Tunisie (n=7)

54,2% Afrique (n=328)

Albanie (n=1)Bulgarie (n=1)Georgie (n=8)Grèce (n=1)Kosovo (n=1)Moldavie (n=4)Roumanie (n=18)Russie (n=7)Serbie (n=2)Turquie (n=16)

9,8% Europe de l’Est (n=59)

Espagne (n=7)France (n=146)Italie (n=21)Portugal (n=6)Suisse (n=2)

30,1% Europe de l’Ouest (n=182)

Mongolie (n=3)Vietnam (n=9)

1,9% Asie (n=12)

Antilles (n=2)Colombie(n=1)Australie (n=1)

Inconnue (n=20)

4% Autres (n=24)

Caractéristiques des patients suivis en France (2001-2006)n=605

- Homme (70,6%) - Age médian: 40 ans (14ans à 83ans)- Pays de naissance:

Europe de l’Ouest :FranceItalieEspagneSuissePortugal

Inconnu

Asie :MongolieVietnam

Europe de l’Est :RoumanieRussieMoldavieTurquieSerbieBulgarieGeorgieKosovo

Afrique :Afrique du SudAlgérieAngolaBéninBurkina FasoCamerounCap VertComoresCongo (Brazzaville)Cote d’IvoireÉgypteGabonGambieGhanaGuinéeMadagascarMaliMarocMauritanieMayotteNigerNigeriaRépub.CentrafriqueRépub. D. CongoSénégalTchadTunisie

Evolution de l’origine géographique des patients infectés par HDV entre 2001 et 2006

2001n=127

2002n=101

2003n=43

2004n=65

2005n=171

2006n=110

10%

20%

30%

40%

50%

60%

70%

80%

HDV-1

HDV-5

2001n=127

2002n=101

2003n=43

2004n=65

2005n=171

2006n=110

10%

20%

30%

40%

50%

60%

70%

80%

90%

HDV-6, -7, -8

Evolution des génotypes HDV entre 2001 et 2006

Epidémiologie de HDV en France

Circulation de virus d’origine africaineEmergence de nouveaux génotypes en France

Pouvoir pathogène des variants par rapport aux virus HDV-1

Diagnostic moléculaire des variants

Association des variants HDV avec certains génotypes HBV (co-spéciations?)

Origine géographique de HDV?

Marqueurs diagnostics de l’infection par HDV

Diagnostic de l’Hépatite delta

MARQUEURS DISPONIBLES

SérologieAg delta sérique (pas de valeur diagnostique)Ac anti-delta totaux (dépistage)IgM anti-delta (infection aiguë, réplication)

Marqueurs moléculaires (techniques « maison »)Recherche qualitative de l’ARN delta (sérum)Quantification de l’ARN delta (sérum)

Marqueurs moléculaires (techniques commerciales)Génotypes? Evaluations en cours

Infection aiguë résolutive

IgM anti-Delta

Ac Anti-HD

Hépatite aiguë

ARN Delta

Ag Delta

Primo-infection

IgM anti-Delta

Hépatite aiguë

IgG Anti-HD

ARN Delta

Primo-infection Hépatite chronique

Infection chronique

Indications: dépistage

PORTEURS CHRONIQUES de l’ Ag HBs :PENSER AU DEPISTAGE DU DELTA

(Ac anti-delta totaux)

IgG Anti-HD

Hépatite chronique

Dépistage positif: Bilan

IgG Anti-HD

ARN Delta: Attention aux variabilité génétique

IgM anti-Delta

Marqueurs du suivi thérapeutique

PCR Qualitative (à Avicenne) :Technique maison « consensus » pour tous les génotypes connusSeuil de sensibilité 100 copies/mL

PCR Quantitative:Technique maison « consensus » pour tous les génotypes connusSeuil de sensibilité 100 copies/mL - Linéarité: 103 à 109 copies/mL

Apport essentiel des techniques moléculaires

Intérêt secondaire des IgMMoins sensible que la PCR (faux négatifs) et moins spécifique de la réplication virale (faux positifs)Kits ELISA commerciaux

Suivi quantitatif de l’Ag HBsZachou et al, Liver Int, 2009; Manesis et al, Antiviral Therapy, 2007

Recherche de l’ARN viral intra-hépatique

Cible: Ag deltaNon conservé entre les génotypes

Plateforme Cobas

Profil virologique de 25 patients

L’outil moléculaire

Suivi longitudinal de 25 patients (1 pvt / 6 mois; durée de suivi 4-8 ans)

Efficacy of Peginterferon alpha-2b in Chronic Hepatitis delta: Relevance of Quantitative RT-PCR for Follow-Up. C. Castelnau, F. Le Gal, M.P. Ripault, E. Gordien, M. Martinot, N. Boyer, B. Pham , P. Bedossa, P. Dény, P. Marcellin, E. Gault. Hepatology, 2006, 4: 728-735

L’outil moléculaire

- Evaluer l’efficacité et la tolérance d’un traitement de 12 mois par Interferon-PEG -2b chez 14 patients porteurs d’une hépatite chronique B-D.

- Evaluer l’intérêt de la quantification de l’ARN-VHD dans le suivi et la réponse virologique

Suivi PCR HDV qualitative et quantitative

n=14 - 12 mois PEG-Interferon 2b

43% non répondeurs

43% répondeurs

14% répondeurs-rechuteurs

RESULTATS

M41T0 M6 M18M12 M24

7

2

3

4

5

6

8

Suivi PCR HDV qualitative et quantitative

n=14 - 12 mois PEG-Interferon 2b

43% non répondeurs

14% répondeurs-rechuteurs

RESULTATS

M30T0 M6 M18M12 M24

7

2

3

4

5

6

8

ARN intra-hépatique?

Suivi PCR HDV qualitative et quantitative

n=14 - 12 mois PEG-Interferon 2b

43% non répondeurs

RESULTATS

M30T0 M6 M18M12 M24

Treatment of chronic delta hepatitis with lamivudine vs lamivudine+interferon vs interferonC. Yurdaydin, et alJ Viral Hep, 2008, 15: 314-321

Etude multicentrique (Turquie)C. Yurdaydin

Protocoles thérapeutiques

39 patients (17 LAM, 14 LAM-IFN, 8 IFN)Suivi par PCR semi-quantitative (seuil de

détection 100000copies/mL)

Aucun intérêt à utiliser la lamivudine, même en association avec IFN

Resolution of chronic hepatitis delta after 1 year of combined therapy with PEG-IFN, tenofovir and emtricitabineMansour W, Ducancelle A, Le Gal F, Le Guillou-Guillemette H, Abgueguen P, Pivert A, Calès P, Gordien E, Lunel F

J Clin Virol 2009

Case report

Protocoles thérapeutiques

Homme 47 ans DagestanCV HBV >9 log UI/mL

CV HDV 5.6 log copies/mLAssociation PEG-IFN + tenofovir + emcitrabine (Viread)

Clairance virale + séroconversion HBs après 10 mois de traitement

Protocoles thérapeutiquesHomme 47 ans Dagestan

CV HBV >9 log UI/mLCV HDV 5.6 log copies/mL

Association PEG-IFN + tenofovir + emcitrabine (Viread)

Clairance virale + séroconversion HBs après 10 mois de traitement

Conclusions

Hépatite delta n’est pas une maladie en voie de disparitionAttention aux populations migrantes :Afrique, Asie centrale, Europe de l’Est

Utiliser le diagnostic moléculairePour détecter les infections actives (tests qualitatifs)Pour suivre l’efficacité d’un traitement (Test quantitatif)

Variabilité génétique de HDV20% des patients suivis en France ont génotype 5 à 8Les tests moléculaires qui ne tiennent pas compte de la

variabilité génétique risquent de rendre des « faux négatifs »

Traitement de l’hépatite deltaIFN-alfaPlace du Ténofovir si réplication de HBV