សាកលវទិ្យាល័យភូមិន្ទភ្នំពេ�ញ ពេ�ប៉ា� �ឺម�ង់ គីមី

 ឯកពេទស គីមីជីវៈ  អ្នកស្រសីសាស្រសា# ចារ្យ ងិន �ុទ្ធា) រ ី

កិច្ចការស្រសាវស្រ.វ ប្ធានបទៈ Pepsin Enzyme

ពេរ2បពេរ2ងពេ3យ ថុង បូរ៉ា6ន

មាតិកា១.ពេសចក#ីពេ:;ីម២.ប្ភ�៣.ការញែញក៤.ការបន្សុត

៤. ១ AmmoniaSulfateFraction

៤. ២ Chromatography

៥.ការពេស្របីស្រប៉ាស់៦.ឯកសារពេCង

១.ពេសចក;ីពេ:;ីម• Pepsin គឺ.អង់សីុមញែ�លពេDក្នងុស្រកមុស្រគសួារនៃន proteaseនិងប៉ានយកមក�ី

សារធាតុអន)ិលនៃនក្�ះរបស់មនុស្ស សត្វ ញែ�លវាមានតួនាទីសំរ៉ាប់បំញែបកស្របពូេតអីុន ញែ�លមានពេDក្នងុចំណីអាហារ �ូច. សាច់ �ង ស្រQប់ធញ្ញ.តិ និង:លិត:លញែ�ល

ពេធ្វី�ីទឹកពេ3ះពេQ។• Pepsinស្រតវូប៉ានញែចកពេចញ.បី�ូច.:pepsinA,B,C

• វា.អង់សុីមមួយញែ�លស្ថិតពេDក្នងុប្�័ន)រលំាយអាហារពេZីយក៍មានអង់សីុម២ពេទ2ត ញែ�លវាស្ថិតពេDក្នងុប្�័ន)រលំាយអាហារញែ�រ គឺ Chymotrypsin និង trypsin

• វាមានសកម្មភា�ល្អពេDសីតុណ្ហ ភា� ៣៧ºC ពេa ៤២ºCញែ�លវាពេធ្វីការសំពេCគឬ ស្រសបូពេDក្នងុក្�ះញែ�លពេDក្នងុពេនាះវាមាន pH=1.5 ពេa pH=2។

• ពេZីយវា.អង់សីុម�ំបូងញែ�លស្រតវូប៉ានពេគរកពេDក្នងុឆ្នា្ន ំ ១៨៣៦ ពេ3យពេលាកTheodorSchwann ពេZីយQត់ប៉ានពេអាយពេe្ម ះអង់សីុមពេនះញែបបស្រកិកថា pepsisញែ�ល

មានន័យថា digest

• ពេZីយក្នងុឆ្នា្ន ំ ១៩២៨ វា.អង់សីុម�ំបូងប៉ានញែញកវាក្នងុទម្ង់. crystalline

ពេ3យពេលាក JohnHNorthrop

២.ប្ភ�• Pepsin គឺ.អង់សីុមញែ�លស្រតវូប៉ាន.ទូពេaពេគរកពេhីញពេDក្នងុ gastricjuicePepsin

ofthestomachlumen ពេZីយស្រតវូប៉ានពេគញែញកពេចញ�ី�ូជអំបូរ:្ងៗ �ូច. មនុស្ស សត្វ បក្ីស និង ស្រតី។

• មនុស្ស: មានពេDក្នងុសាច់�ំុ eម ទឹកពេនាម។• សត្វ: ពេQ ក្បី ស្រជកូ និង ពេច2ម .�ិពេសសពេDក្នងុសត្វញែ�លចិញ្ចឹមកូនពេ3យទឹកពេ3ះ

ពេZីយអង់សីុមពេនះពេយីងយក�ីក្�ះរបស់វា។• បក្ីស: មាន�ូច.សត្វ មាន់ ទ្ធា .ពេ�ីម ញែ�លពេគយកអង់សីុមពេចញ�ីក្�ះ។• ស្រតី: មានក្នងុក�្ះ និង មានក្នងុtheovariesនៃនbrooktuoutរក៏ឺស្កនៃនpufffish។

៣.ការញែញករ៉ាល់វធីិសាស្រស#ក្នងុការពេធ្វីញែញកអង់សីុមមក�ីពេកាសិការអន)ិលញែ�លមានពេDក្នងុក្�ះគឺវាអាស្រស័យពេaពេលី�ំណាក់កាល៣• Dissectionនិងក្ឡុករកិឺនភាគសំណាក(ក្�ះ)ពេអាយពេa.បំញែណកពេកាសិការតូច

ពេ�ីម្ីបបញ្ញ PGs(pepsinogen)

• SolubilizationនៃនPGs ពេDក្នងុ bufferញែ�លស្រតឹមស្រតវូពេ�ីម្បីជួយរក្សាតំនៃលpH

និងរក្សាទុកPGsពេអាយមានលំនឹង។• រង្វិលចាក់:្ចិត(centrifugation)នៃនសារធាតុញែ�លលាយចូលQ្ន ពេ�ីម្ីបយកកាកនៃន

ពេកាសិកាញែ�លប៉ានមក�ីPGsពេចញ។

• សីតុណ្ហ ភា�ប៉ានពេ�ីរតួរC� ងសំខាន់ក្នងុការទ្ធាញយកអង់សីុម�្(crudeenzyme)

ពេZីយនិងការញែញកយកទម្ង់ស្រតវូប៉ាន�ឹកនាពំេDសីតុណ្ហ ភា�ទ្ធាប�ី(០-៤ºC)• សមាសធាតុញែ�លពេយីងពេស្របី:• Buffersolution,SodiumphosphatebufferpH�ី7.0-7.5,Tris-HCLbufferpH:7.5,anddistilledwater(DI) ញែ�លពេគពេស្របី. (Solvent)

៤.ការបន្សុត• ក្នងុការបន្ុសទអង់សីុមញែ�លពេយីងប៉ានញែញកពេចញ�ីក្�ះគឺពេយីងប៉ានពេធ្វីតាមវធីិសាស្រស#

�ូច.:

• Ammoniasulfatefraction

• Chromatography: Ion-exchangechromatography(IEC)

Gelfiltrationchromatography(GFC)

៤. ១ AmmoniaSulfateFraction• .ពេQលការណ៏ពេ�ីម្បីបន្ុសទអង់សីុមពេ3យពេគចាក់បញ្ចូលQ្ន នៃនស្របពូេតអីុនពេDក្នងុ

សារធាតុរ៉ាវ(supernatant)។• .ធម្មតាការឆ្តនៃនសូលុយស្យុងអម�ូញ�ូ ស៊ុលផាតមាន�ីរញែ�លពេឆvីយតបពេaនិងកាប

ន្ុសទពេអាយប៉ានសំពេរច: ភា�ឆ្តទី១គឺទ្ធាបបំ:ុតពេD(20-30%) ញែ�លពេស្របីពេ�ីម្បីយកស្របពូេតអីុនញែ�លពេយីងមិនចង់ប៉ាន

ពេZីយអាចពេចាលប៉ានតាមរយ:រង្វិលចាក់:្ចិត។ ភា�ឆ្តទី២គឺខ្ពស់ពេD(60-70%) ពេ�ីម្បីទទួលអង់សីុមញែ�លពេយីងចង់ប៉ាន ញែ�លមានពេDក្នងុ

សារធាតុរ៉ាវ។

៤. ២ Chromatography• Chromatography:គឺ.វធីិសាស្រស#ញែ�លពេគពេស្របីសំរ៉ាប់ញែញកម�ូពេលគុលរក៏ឺបន្ុសត

ស្របពូេតអីុនញែ�លអាស្រស័យពេaពេលីទំZំនិងបន្ទុករបស់ម�ូពេលគុល។ញែ�លក្នងុការបន្ុសតពេនះពេគមានវធីិសាស្រស#�ីរ:

• Ion-exchangechromatography(IEC):សំរ៉ាប់បន្ុសទ)ស្របពូេតអីុនញែ�លរមួបញ្ចូលទ្ធាងំPGs(Pepsinogen) ស្រតវូប៉ានស្រសបួពេDក្នងុ�ំណាក់កាលផាសនឹង (Stationary

phase).មួយនិងម�ូពេលគុលញែ�លមានបន្ទុក:្ងQ្ន រ:ឺ្ទុយQ្ន មានសម្ថភា�ស្រសបូយក:្ងៗQ្ន ។• Bufferស្រតវូប៉ានពេស្របី.សារធាតុរលំាយពេDក្នងុ�ំណាក់កាលញែញកយកអង់សីុម�្គឺប៉ានអនុវត#

ពេ�ីម្បីequilibraetនិងលាងសំអាតcolumn និង Nacl

• Gelfiltrationchromatography(GFC):គឹប៉ានពេស្របីស្រប៉ាស់សស្រមាប់ការបន្ុសទ)បន្មពេទ2តពេ3យ:្កពេaពេលីទំZំ:្ងៗQ្ន នៃនម�ូពេលគុល។

• ពេZីយមានបព្េភទញែជលខុសៗ�ូច.:Sephacryls-200,SeogadexG-50and

SephadexG-75ញែ�លមានអាស្រតាលំZូរខុសQ្ន 10ml/h,20ml/h,30ml/h សំរ៉ាប់gelmediaពេរ2ងQ្ន ។

• GFCស្រតវូប៉ានពេស្របីពេ3យពេ.គជ័យសំរ៉ាប់បន្ុសទ)pepsinogenស្រតី។

ការបំញែលង�ីpepsinogen to pepsin

• ការបំញែលង�ី PGs ពេa Pepsinវាមានចលនការស្មគុសា្ម ញ។• PGsស្រតវូប៉ានផា្អ កការបន្ុសទ)ក្នងុលក្ខខណអាសីុតពេ�ីម្ីបបំញែលងPGs ពេa. pepsin

ពេ3យ autolysis ។• ពេD pH2-3ពេZីយបន្ម0.1MHCl ពេDសីតុណ្ហ ភា�មួយគឺ�ី 25-35ºCពេ�ីម្បីរក្សា

សកម្មភា�អង់សីុមពេអាយប៉ានល្អ

៥.ការពេស្របីស្រប៉ាស់អង់សីុមpepsinវា.បព្េភទអង់សុីមញែ�លអាចយកពេaពេស្របីស្រប៉ាស់ប៉ានC� ងពេស្រចីន�ូច.:

• ការញែញកយក collagen

• ការស្រសាវស្រ.វខាងវជិ្ជសាស្រស#ពេ�ទ្យ• ការពេធ្វីCheese• ការពេធ្វីចំណីសត្វ• ការពេវចខ្ចប់អាហារញែ�លពេធ្វីមកស្រតី ( ស្រតីខ .ពេ�ីម)• ពេDក្នងុឧស្សាZកម្មស្កសត្វពេ�ីម្បី�កយកពេរ៉ាមសត្វពេចញ

• ពេDក្នងុឧស្សាZកម្មញែកច្.លិកាសត្វញែ�លពេDពេសសសល់ប៉ានមក�ីស្កសត្វធំៗ

ពេគអាចពេស្របីវាក្នងុការទ្ធាញយករបូភា�ញែ�លមានពេDក្នងុZ្វីលរបូថត។

• ស្រតវូប៉ានពេស្របីពេ�ីម្ីបបំញែបក antigenantibodyពេa.បំញែណកធម្មតាងាយស្រសលួ

សំរ៉ាប់ការស្រសាវស្រ.វជីវសាស្រស# និង ពេវជ្ជសាស្រស#[5]។

៦.ឯកសារពេCង• 1.https://en.wikipedia.org/wiki/Pepsin

• 2.file:///C:/Users/Nhem%20Srors/Documents/extraction-purification-and-characterization-of-fish-pepsin-a-critical-review-2157-7110.1000126.pdf3.http://www.britannica.com/science/pepsin

• 4.http://www.drugs.com/dict/pepsin.html

• 5.http://healthy-tips-1.blogspot.com/2013/11/tips-enzyme-pepsin-uses-for-industry.html

• 52.WuT,SunL,DuC,CaiQ,ZhangQ,etal.(2009)IdentificationofpepsinogensandpepsinsfromthestomachofEuropeaneel(Anguillaanguilla).FoodChem115:137-142.

• 51.ZhouQ,FuX,ZhangL,SuW,CaoMPurificationandcharacterizationofseabream(SparuslatusHouttuyn)pepsinogensandpepsins.FoodChem103:795-801.

• 65.NalinanonS,BenjakulS,KishimuraH(2010)Biochemicalpropertiesofpepsinogenandpepsinfromthestomachofalbacoretuna(Thunnusalalunga).FoodChem121:49-67.TanjiM,KageyamaT,TakahashiK(1988)Tunapepsinogensandpepsins.Purification,characterizationandamino–terminalsequence.EurJBiochem177:251-259.

• 109.MarshakDR,KadonagaJT,BurgessRR,KnuthMW,BrennanWA(1996)StrategiesforProteinPurificationandCharacterization:ALaboratoryCourseManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,NewYork,127-201.

• 49.TanjiM,YakabeE,KageyamaT,YokoboriS,IchinoseM,etal.(2007)PurificationandcharacterizationofpepsinogensfromthegastricmucosaofAfricancoelacanth,Latimeriachalumnae,andpropertiesofthemajorpepsins.CompBiochemPhysiolBBiochemMolBiol146:412-420.

• 96.JoakimssonKG(1984)Enzymaticdeskinningofherring(Clupeaharengus),Ph.D.thesis,InstituteofFisheries,UniversityofTromsø,Tromsø,Norway,54.

• 100.StellwagenE(1990)Gelfiltration.InMethodsinEnzymology.GuidetoProteinPurification,DeutscherMP,Ed,AcademicPressInc,SanDiego,California182:317-328.

• 108.YamamotoS,NakanishiK,MatsunoR(1988)Ion–exchangechromatographyofproteins,M.Dekker,NewYork,13-16.

Thank you for our attention!