TESIS

Elaborado por:

Bach. KATHERINE ROSMERY BALDEON OSORIO

Huancayo – Perú2015

“ACTIVIDAD ANTIMICÓTICA IN VITRO DEL ACEITE ESENCIAL DE LAS HOJAS DE Schinus molle L. “Molle” FRENTE A Trichophyton

rubrum Y Trichophyton mentagrophytes”

INTRODUCCIÓNDesde tiempos muy antiguos los pobladores del distrito de Chinchihuasi (Churcampa - Huancavelica) usan las hojas y tallos del “Molle” en infusión para poder curar las micosis de los pies, las cuales generalmente son causadas por hongos dermatofitos.

Es por ello que la presente investigación se planteó como problema: ¿Existe actividad antimicótica in vitro del aceite esencial de las hojas de Schinus molle L. “Molle” frente a Trichophyton rubrum y Trichophyton mentagrophytes?

• Determinar la actividad antimicótica In vitro del aceite esencial de las hojas de Schinus molle L. “Molle” frente a Trichophyton rubrum y Trichophyton mentagrophytes.

General.-

Específicos.-

• Obtener aceite esencial de las hojas de Schinus molle L. “Molle” mediante la Técnica de destilación por arrastre con vapor.

 • Evaluar la actividad In vitro del aceite esencial obtenido frente a

cepas de Trichophyton rubrum y Trichophyton mentagrophytes mediante la Técnica de Kirby-Bauer.

OBJETIVOS

A. Antecedentes de estudio.-

• Rivero y col. (1997), evaluaron la actividad anti fúngica In vitro del extracto alcohólico de hojas de Pinus caribaea sobre hongos como Trichophyton mentagrophytes, T. rubrum y Microsporum canis.

• Shin y Lim (2004), determinaron que el aceite esencial de Pelargonium graveolens inhibe significativamente a Trichophyton spp.

• Huamaní y Ruiz (2005), evaluaron la actividad antifúngica de 10 extractos etanólicos de plantas medicinales, incluyendo a Schinus molle L. contra levaduras y mohos.

• Cano (2008), estudio los metabolitos del aceite esencial de hojas de Minthostachys molli y demostró que no ejerce actividad antimicótica frente a dermatofitos como: T. mentagrophytes, T. rubrum y M. canis.

MARCO TEÓRICO

B.- Bases teóricas.-

1. Schinus molle.-a) Ubicación taxonómica.-

REINO Vegetal

DIVISIÓN Fanerógama

CLASE Dicotiledónea

ORDEN Sapindales

FAMILIA Anacardiácea

GÉNERO Schinus

ESPECIE Schinus molle L.

NOMBRE COMÚN «Molle»

b) Características morfológicas.-

c) Distribución geográfica.-

d) Estudios fitoquímicos.-

e) Propiedades farmacológicas.-

MARCO TEÓRICO

B.- Bases teóricas.-

2. Hongos dermatofitos.-a) Trichophyton rubrum.-

b) Trichophyton mentagrophytes.-

MARCO TEÓRICO

c) Epidemrophyton floccosum.-

d) Patogenicidad.- «Tiñas»• Del cuero cabelludo • De la barba• Del cuerpo• Inguinal• De los pies• De las uñas

B.- Bases teóricas.- 3.- Aceite esencial.-

a) Definición.-

b) Métodos de extracción.-• Destilación por arrastre con vapor• Extracción con solventes volátiles• Dilución• Estrujado

MARCO TEÓRICO

4.- Actividad antimicótica.-a) Fungicida y fungistático.-

b) Métodos de evaluación.-• Dilución en agar• Difusión en placa• Dilución en caldo• Pozo en difusión

A. Método científico.- Observacional

B. Tipo y nivel de investigación.- Básico, prospectivo, transversal y de Nivel descriptivo.

C. Diseño de investigación.- Descriptivo correlacional.

D. Población.- Aceite esencial de las hojas de S. molle L. “Molle” de arbustos procedentes de las chacras del distrito de Chinchihuasi (Churcampa – Huancavelica).

E. Muestra.- Cinco extractos de aceite esencial obtenidos mediante la Técnica de destilación por arrastre con vapor.

MÉTODO

F. Técnicas de Recolección de datos.-a) Obtención de muestras.-

• Hojas de S. molle L. “Molle” colectadas de la flora silvestre de Chinchihuasi (Churcampa – Huancavelica).)

• Cultivos de T. rubrum y T. mentagrophytes obtenidos del Laboratorio Corporación YLV S.A.C. (Lima)

MÉTODO

F. Técnicas de Recolección de datos.-a) Obtención del aceite esencial.-

MÉTODO

5 kg. de hojas frescas de “Molle”

Agua y aceite esencial, en estado

líquido

Desecación y filtración del aceite esencial obtenido

Cinco muestras de aceite esencial

F. Técnicas de Recolección de datos.-b) Determinación de la sensibilidad antifúngica.-

• Método de Difusión en Placa (Técnica de Kirby-Bauer).-

• Método de Pozo en difusión.-

MÉTODO

Dermatofitos incubados a 25°C x

7 días

Colocación de discos de sensibilidad

Observación de halos de sensibilidad

Esporas en el agar

licuado (45-50°C)Perforaciones de 0.6

mm de diámetroColocación de 30

µl/pocillo

NÚMERO DE ENSAYO

PESO DE HOJAS DE Schinus molle L. (Kg)

VOLUMEN DE AGUA (L)

TIEMPO DE

OBTENCIÓN (H)

ACEITE ESENCIAL

OBTENIDO (mL)

1 5.0 10.0 3.5 12.0

2 5.0 10.0 3.5 11.0

3 5.0 10.0 3.5 10.0

4 5.0 10.0 3.5 12.0

5 5.0 10.0 3.5 12.0

PROMEDIO 5.0 10.0 3.5 11.4

A.- OBTENCIÓN DEL ACEITE ESENCIAL.-

RESULTADOS

Cuadro N°1.- Volumen de aceite esencial de Schinus molle L. obtenido mediante la Técnica de destilación de arrastre con vapor

Fuente: Elaboración propia, junio 2013

No se evidenció formación de halo de inhibición

No se evidenció formación de halo de inhibición

Fotografía N°1.- Evaluación de la actividad antimicótica del aceite esencial de S. molle L. frente a Trichophyton rubrum mediante la

Técnica de Kirby-Bauer

Fotografía N°2.- Evaluación de la actividad antimicótica del aceite esencial de S. molle

L. frente a Trichophyton mentagrophytes mediante la Técnica de Kirby-Bauer

B.- EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIMICÓTICA IN VITRO.-

RESULTADOS

Fuente: Elaboración propia, junio 2013

B.- EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIMICÓTICA IN VITRO.-

RESULTADOS

Fuente: Elaboración propia, junio 2013

Concentración

Problema Control positivo

Control negativo

Aceite esencial de Schinus molle L. Terbinafina Aceite vegetal

M1 M2 M3 M4 M5

30 µl/pocillo(150 µl/placa)

NC NC NC NC NC NC CNC NC NC NC NC NC CNC NC NC NC NC NC C

Cuadro N°2.- Evaluación de la actividad antimicótica del aceite esencial de S. molle L. frente a Trichophyton rubrum

mediante la Técnica de pozo en difusión

Fotografía N°3.- Evaluación de la actividad antimicótica del aceite esencial de S. molle L. frente a Trichophyton rubrum mediante la Técnica de pozo en difusión (30 µl/pocillo)

No creció

Control positivo:Pocillos con Terbinafina

(30 µL/pocillo)

No creció

Problema:Pocillos con aceite esencial

(30 µL/pocillo)

Creció

Control negativo:Pocillos con Aceite vegetal

(30 µL/pocillo)

B.- EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIMICÓTICA IN VITRO.-

RESULTADOS

Fuente: Elaboración propia, junio 2013

Cuadro N°3.- Evaluación de la actividad antimicótica del aceite esencial de S. molle L. frente a Trichophyton

mentagrphytes mediante la Técnica de pozo en difusión

Fotografía N°4.- Evaluación de la actividad antimicótica del aceite esencial de S. molle L. frente a Trichophyton mentagrophytes

mediante la Técnica de pozo en difusión (30 µl/pocillo)

Concentración

Problema Control positivo

Control negativo

Aceite esencial de Schinus molle L. Terbinafina Aceite vegetal

M1 M2 M3 M4 M5

30 µl/pocillo(150 µl/placa)

NC NC NC NC NC NC CNC NC NC NC NC NC CNC NC NC NC NC NC C

No creció

Control positivo:Pocillos con Terbinafina

(30 µL/pocillo)

No creció

Problema:Pocillos con aceite esencial

(30 µL/pocillo)

Creció

Control negativo:Pocillos con Aceite vegetal

(30 µL/pocillo)

En este estudio se ha verificado la actividad antimicótica del aceite esencial obtenido, probablemente debido a que los monoterpenos (β-felandreno, α-felandreno y carvacrol) serían responsables del efecto fungicida.

Por otro lado, el mecanismo de acción específico del aceite esencial aún no ha sido dilucidado, pero Llanos (2012) lo atribuyó a la gran variedad de compuestos químicos presentes y posiblemente su actividad antimicótica sea atribuible a la acción combinada de varios de ellos.

Es posible que la mezcla y concentración de los componentes volátiles del aceite alteren la permeabilidad de la membrana plasmática de la célula fúngica. Así mismo, los aceites esenciales provocan la modificación del pH del medio, impidiendo el normal desarrollo del micelio.

Para explicar esta actividad biológica es necesario considerar la gran variedad de compuestos químicos presentes dichos aceites; lo cual quedó en evidencia en esta investigación, ya que no se observó desarrollo micelial en ninguna de las especies de dermatofitos expuestas al contacto con los aceites obtenidos.

ANÁLISIS Y DISCUSIÓN

Ante la dificultad de la Técnica de Kirby-Bauer, se empleó el Método de pozos en difusión, que evalúa la actividad antimicótica cualitativamente, ya que para los dermatofitos es imposible evaluar la susceptibilidad antimicótica cuantitativamente.

Esta técnica trabajó con tres grupos de ensayo: control negativo (aceite vegetal), control positivo (terbinafina) y prueba (aceite esencial); para cada una de las especies de hongos.

Tras el vertido de las distintas sustancias en los pocillos se notó que aquellas especies en contacto con el aceite esencial, así como las que estuvieron en contacto con la terbinafina no desarrollaron absolutamente; lo cual demostró una vez más que existe un efecto fungicida del aceite esencial de S. molle semejante al efecto que ejerció el control negativo (terbinafina).

La evaluación del efecto antimicótico del aceite esencial pudo verse influenciada por diversos factores, (Colella, 1997) como tipo y tamaño del inoculo, manejo, recuento, dilución y transferencia de hifas. Fernández y Gehrt señalan que la estandarización de la técnica se ve dificultada por otros factores como temperatura de crecimiento, composición del medio, pH y tiempo de incubación.

ANÁLISIS Y DISCUSIÓN

 1. Se determinó que existe actividad antimicótica In vitro del aceite

esencial de las hojas de Schinus molle L. “Molle” frente a Trichophyton rubrum y Trichophyton mentagrophytes.

2. Se obtuvo un promedio de 11.4 mL de aceite esencial a partir de 5:0 Kg de hojas de Schinus molle L. “Molle” mediante la Técnica de destilación por arrastre con vapor trabajando con 10.0 L de agua durante 3.3 horas.

3. Se evaluó cualitativamente la actividad In vitro del aceite esencial obtenido frente a cepas de Trichophyton rubrum y Trichophyton mentagrophytes mediante las Técnicas de Kirby-Bauer y Pozo en difusión.

CONCLUSIONES

 1. A los estudiantes de ciencias de la salud, deben valorar la actividad

antimicótica del aceite esencial de Schinus molle L. “Molle” frente a otros hongos de importancia médica.

2. Relacionar los resultados obtenidos con las dosis tolerables en futuras pruebas biológicas, lo que podría permitir formular un producto de uso comercial que se encuentre al alcance de la población.

3. Realizar estudios sobre los principios activos y concentración mínima inhibitoria de aceites esenciales de plantas de las diferentes regiones del Perú.

RECOMENDACIONES

GRACIAS