ELECTROFORESIS

ÍNDICE

DEFINICIÓN ELECTROFORESIS

APLICACIÓN BIOQUIMICA

METODOS ELECTROFORETICOS

ZONALESTIPOS DE

ELECTROFORESIS

DEFINICIÓN DE ELECTROFORESIS

es un método de laboratorio en el que se utiliza una corriente eléctrica controlada con la finalidad de separar biomoleculas según su tamaño y carga eléctrica a través de una matriz gelatinosa.

APLICACIÓN EN BIOQUÍMICA

se aplica en el campo de la Bioquímica a la separación de compuestos que poseen grupos ionizables (aminoácidos, péptidos, proteínas, ácidos nucleídos) teniendo en cuenta que la carga neta de estas sustancias depende del pH del medio en que se encuentren. Si la molécula tiene carga positiva migrará hacia el cátodo y si tiene carga negativa, hacia el ánodo. 

MÉTODOS ELECTROFORÉTICOS ZONALES Son los más comunes, dada su alta

aplicabilidad en diferentes campos. Son útiles para lograr la separación de mezclas complejas. Se aplican pequeñas cantidades de la disolución de proteínas a un soporte sólido, que se impregna con una solución tampón.

TIPOS DE ELECTROFORESIS

En la electroforesis hay distintos tipos de electroforesis

Electroforesis en gel de

poliacrilamida

Electroforesis en geles de gradientes

Electroforesis en geles de

agarosa

Electroforesis bidimensiona

l

Electroforesis capilar

ELECTROFORESIS EN GEL DE POLIACRILAMIDA

Los geles de poliacrilamida se forman por  polimerización de la acrilamida por acción de un agente entrecruzado, es químicamente inerte, de propiedades uniformes, capaz de ser preparado de forma rápida y reproducible. Forma, además, geles transparentes con estabilidad mecánica, insolubles en agua, relativamente no iónicos y que permiten buena visualización de las bandas durante un tiempo prolongado. 

ELECTROFORESIS EN GELES DE GRADIENTES

 El uso de geles de poliacrilamida que tienen un gradiente creciente de concentración de archilamida + bisacrilamida, y en consecuencia un gradiente decreciente en el tamaño del poro, pueden tener ventajas sobre los geles de concentraciones uniformes de acrilamida.

ELECTROFORESIS EN GELES DE AGAROSA La agarosa es un polisacárido (originalmente

obtenido de algas, como el agar-agar, pero de composición homogénea), cuyas disoluciones (típicamente de 0.5 a 2 %) poseen la propiedad de permanecer liquidas por encima de 50 grados C y formar un gel, semisólido al enfriarse. Este gel esta constituido por una matriz o trama tridimensional de fibras poliméricas embebida en gran cantidad de medio líquido, que retarda el paso de las moléculas, se usa usualmente para separar moléculas grandes de alrededor 20.000 nucleótidos.

ELECTROFORESIS CAPILAR

La electroforesis capilar se basa en los mismos principios de las técnicas electroforéticas convencionales, pero utiliza condiciones y tecnología distinta que nos permiten obtener una serie de ventajas al respecto, Esta separación de péptidos realizada sobre un capilar de silica fundida a potenciales elevados 20 a 30 Kv en un campo de 400 a 500 v/cm refrigerados por aire. 

ELECTROFORESIS BIDIMENSIONAL

La electroforesis bidimensional se basa en separar las proteínas en una mezcla según sus dos propiedades moleculares, una en cada dimensión. El procedimiento más usado se basa en la separación en una primera dimensión mediante isoelectroenfoque y la segunda dimensión según peso molecular mediante electroforesis en poliacrilamida.