Universidad Nacional Autónoma de MéxicoFacultad de Odontología
Laboratorio de Genética Molecular
CURSO DEMICROBIOLOGÍA BÁSICA
Dra. Laurie Ann Ximénez-FyvieMtra. Adriana Patricia Rodríguez Hernández
Diapositivas 3
Técnicas microscópicas en microbiología
Campo claro•Bacterias fijadas y teñidas•Confirmación de la presencia de bacterias•Determinación del Gram•Definición de la morfología celular
Campo obscuro•Bacterias vivas•Confirmación de la presencia de bacterias•Observación de la motilidad•Definición de la morfología celular
Contraste de fases•Bacterias vivas•Confirmación de la presencia de bacterias•Observación de la motilidad•Definición de la morfología celular
I.D. de Nomarski•Bacterias vivas en 3D (aparente)•Visualización de estructuras internas•Observación de la motilidad•Definición de la morfología celular
Trayectoria óptica
Diafragma de campo
Diafragma del condensador
Alineación de diafragmas
Fondo
Contraste
Secciones con I.D. y C.F.
Comparación C.C./C.O. /I.D.
Fluorescencia•Bacterias vivas o fijadas•Utilización de tinciones fluorescentes (fluorochromos)•Observación de bacterias individuales en mezclas•Identificación de especies definidas
Confocal•Bacterias vivas o fijadas•Utilización de tinciones fluorescentes (fluorochromos)•Definición de la organización e interacción entre células•Estudio de biopelículas en diferentes planos focales
Electrónica de barrido•Bacterias fijadas en 3D (real)•Estudio de componentes superficiales finos•Observación de la organización entre células•Definición precisa de la morfología celular
Estereoscópica (magnificación)•Bacterias en cultivo en 3D•Observación de organización macroscópica entre células•Determinación presuntiva de la pureza de los cultivos•Estudio de la morfología de colonia
Multifotones
Combinaciones fluorescencia
Técnicas microscópicas en microbiología
Métodos para el cultivo bacteriano
Curva de crecimiento bacteriano (in vitro)10
9
8
7
6
5
4
Cuen
tas v
iabl
es/m
l (10
log )
Tiempo (hrs)
Fase exponencial
Fase estacionaria Fase dedeclinación
Fase delatencia
Perio
do d
e ac
eler
ació
n
0 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30 33 36 39 42 45 48
Perio
do
de re
tard
o
Medios de cultivo
Medios generales y enriquecidos•Nutricionalmente complejos favoreciendo el crecimiento de un gran número de especies•Pueden ser semi-selectivos variando su composición, pH y condiciones de cultivo (O2, C°, etc.)•USO: aislamiento primario para recuperación amplia de microorganismos y mantenimiento de cepas•EJEMPLOS: agar nutritivo, infusión cerebro-corazón, soya-tripticasa, agar sangre, agar chocolate, NHK, etc.
Medios selectivo•Nutricionalmente pobres con componentes que estimulan e inhiben el crecimiento de cepas específicas•Inhiben el crecimiento de la mayoría de especies y favorecen el de un número reducido de microorganismos•USO: aislamiento primario de microorganismos específicos•EJEMPLOS: agar mitis-salivarius, agar Salmonella-Shigella, medio Thayer-Martin, etc.
Medios diferenciales•Por definición son también selectivos•Permiten la identificación de actividades metabólicas específicas•USO: aislamiento primario de microorganismos específicos•EJEMPLOS: agar MacConkey, agar manitol salado, agar eosina-azul de metileno, etc.
Técnicas de sembrado
Estría simple
Estría triple
Estría cuádruple
Aislamiento de cepas
10-1
4.5 ml
500 µl
4.5 ml
10-2
500 µl
4.5 ml
10-3
500 µl
4.5 ml
10-4
500 µl
4.5 ml
10-5
500 µl
100 µl
5 ml
Obtención de la muestra
Dispersión y dilución
Sembrado
Cultivo
100 µl 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl
Conteo Confluyente Confluyente >300 UFCs ÷ 30-300 UFCs(≈150 UFCs)
÷ 30-300 UFCs(≈ 50 UFCs)
<30 UFCs
XXX X
Propagación de cepas
Medio Enriquecido
Medio Selectivo
Aislamiento
Propagación