Haemopoetikus sejt alapúHaemopoetikus sejt alapúhaematologiai immuntherapiahaematologiai immuntherapia
DEOEC Belgyógyászati Intézet II. sz. Belgyógyászati Klinika DEOEC Belgyógyászati Intézet II. sz. Belgyógyászati Klinika Hematológiai Tanszék, DebrecenHematológiai Tanszék, Debrecen
Prof. Dr. Udvardy MiklósProf. Dr. Udvardy Miklóstanszékvezető egyetemi tanár, tanszékvezető egyetemi tanár,
Belgyógyászati Intézet igazgatójaBelgyógyászati Intézet igazgatója
Onko-haematologia aranykorszak Célzott therapia: monoklonális antitestek,
jelátvitel gátlók (pl. imatinib), ATRA, proteaszóma gátlás sok kórkép megoldás felé halad
Vannak nehéz helyzetek, pl. időskori AML, indolens lymphomák ahol nincs áttörés
Sejtes vaccinatio ekkor indokolt, a részleges remissio (nem a nagy tumortömeg) mellett
ŐSSEJTEK….ŐSSEJTEK….
1. Embryonális blastocysta totipotens2. Embryonalis csira sejt pluripotens3. Köldökzsinór pluripotens4. Felnőtt őssejt multipotens(5. Embryonális cc. őssejt)
Haemopoetikus őssejt Multipotens szomatikus őssejt, tipusai:
1. CD133+, CD34-: pluripotensebb, long-term HSC (haemopoesis, máj?, izom?, angiogenesis?, neuron?) 2.CD34+, CD133+: HSC és haemangioblast
3. CD34+, CD133-, zöm, short term HSC Adheziv fehérjék (VLA -4-5) Cytokin receptorok (c-kit, flt-3)
Haemopetikus őssejttel végzett immun therapia Allogen transplantatio utáni és graft versus
host és graft versus tumor effektus Redukált, mini-, mikro- allotransplantatio
nem myeloablativ, hanem jelentős immun effektus (pl. időskori AML)
Donor lymphocyta infusio (CML, AML), további immnmodulatio (pl. Kepivance)
Aktiv immunizáció Releváns betegség (egyéb th. nem jelent
megoldást) Legalább részleges remissio állapotában
alkalmazható Hagyományos antigen ellenanyag képzés az
onkohaematologiában limitált hatékonyságu Sejtes alapu vakcina (pl. dendritikus sejt) a
jelen és jövő utja
Immunisatiós lehetőségek A beteg tumor sejtjeinek extractuma
pontatlan, részben túlhaladott, de mégis jó lehet (colorectalis, myeloma)
Több betegtől származó keverék, kultura Idiotypus (myeloma, lymphoma) fehérje,
körülményes izolálás Molecular rescue, Peptid lymphomában a hibás gén
szekvencia klónozása, amplifikációja vagy géntechnika (pl. tobamovirus nicotinia)
Más antigen, pl. CEA, 10 kD colon tumor
Beviteli utak Monocyta eredetű dendritikus sejt
döntően cellularis, erőteljes válasz másodlagos humoralis válasz változatos válasz arány (immun és klinikai)
Adjuváns (kulcslyuk csiga hemocianin, KLH) döntően humorális, jó válasz arány lymphomában is „Naked DNA” injectio
nem elég a tapasztalat Tumor-DC fusiós technika (myeloma, kisérletes) Géntechnologia-géntherapia (AML) DC + KLH (Id alapu, NHL, myeloma)
Dendritikus sejt Folliculáris dendritikus sejt
nyirokcsomó – integritas
vakcinációs célra invaziv Monocyta (CD14) eredetü
dendritikus sejt in vitro cytokin hatás
Bőr, Langerhans sejtek Lymphoid prekurzor eredetü
A dendritikus sejtes vakcináció alapjai Dendritikus sejt felveszi a tumor antigent Intracellularis fázis Antigen felszini expressio, döntően
MHC II presentatio A gazdaszervezetbe visszajuttatva főként
CD4, de további helper/suppressor sejt aktiválás, majd humoralis válasz is
T sejt proliferatio, cytokin válasz, antigen specifikus tumor lysis
B sejt válasz
Monocyta eredetü dendritikus sejt („Cologne model”)
Teljes vér (60-80 ml) vagy Apheresis, CD14 selectio (adherentia, poz. selectio)
dendritikus sejtté alakitás In vitro cytokin inkubáció (GM-CSF, IL-4) + tumor antigen/peptid
CD14 -, nincs T és B sejt marker MHC I, II (CD1+, 81+)
Aktiváció: LPS, TNF, CD40-ligand Immunsuppressio, tolerancia is kiváltható
inkubáció flt-3 (ligand) Legalább 2-8 M sejt, iv. (is) beadható
Keyhole limpet, kulcslyuk csiga•Immunstimultor és adjuváns•„B Immunostimulator” (AIDS), NHL tanulmányok (1993)•Döntően cellularis, de CD4 és 8 is•Idegen fehérje, mellékhatások•DC és KLH (myeloma, foll. NHL)•KLH – kulcslyukcsiga hemocyanin, kb. 1000 kD nagy fehérje
Lymphoma vakcinációs tanulmányok, folliculáris NHL
Első Stanford-tanulmány: 41 beteg, CVP utáni remissio, Id-KLH vaccinatio 14 immunválasz alakult ki, a responderek tulélése 12 évvel a diagnózis után100%, több molekuláris remissio, főleg CR-ben adott vakcina esetén
Bendandi tanulmány: 20 beteg, kemoth. utáni remissio, Id-GM-CSF vakcina cellularis válasz 2/3-ban, humoralis felében a 11 responderből 8 bcl-2 negativ lett
Naked DNA Fázis III tanulmány (USA, multicentrikus), eredmények inkább előzetesek Timmermann tanulmány, 35 folliculáris lymphoma
35 Id-DC folliculáris lymphoma (Stanford) kemotherapia után (első CR) első 10: 8 immunválasz 4 klinikai regressio
további 25 Id-DC+KLH booster injectio regressio (Id DC) 22%, progressio hiánya (Id DC+KLH) 70% (43 hónap %), részben molekuláris remissio jó eredmények a CR idején végzett vakcináció
Idiotype-pulsed dendritic cell vaccination
Pre-vaccine 11 months post-vaccine
0
20
40
60
80
100
0 2 4 6 8 10
PRO
BA
BIL
ITY
(%)
TIME (YEARS)
Responders (n=14)
non-Responders (n=18)p<0.0001
Freedom From Progression
Follicular Lymphoma first remission (Timmermann tanulmány)
DC vakcináció, myeloma Eisen, állatkisérlet,
izolált Id ellenes T (CD4) sejt, regressio Id-ellenes humoralis immunválasz th. értéke kicsi, keringő
PP-re hat Döntően Id-DC, ujabban KLH kombinációval Id-DC alapu hatékonyságot is korlátozza a jelentős
paraproteinaemia Mégis cytolysatum?? Uj tanulmányok: peptid alapu vakcináció, ill. Id alapu
DC+KLH, van válasz (30-40%) Autolog BMT után 3 hónappal (Stanford)
Id izolálás Paraproteinaemia legalább 0,4 g/l Izotípus és (al)osztály analízis Eltérő M, A, G-1, G-2, G-4, G-3 Affinitas chromatographia, kicsapás 95% tisztaság Alkalmas DC és KLH vakcina készitésre A hatás limitje - paraproteinaemia
Figyelemreméltó kazuisztika Maliander V et al. Leukemia, 1:165, 2004 Egyetlen AML-es beteg esete, akinek WT-1
elleni vakcinával – monotherapiaként -komplett remissioja alakul ki
Wilms tumor antigen (1), WT-1 Wilms tumorral
összefüggésben ismerték fel először
Zinc-finger transzkripciós faktor, sejt növekedés és proliferáció szabályozása, telomerease funkciók
AML, ALL, CLL, számos nem- Hodgkin lymphoma
WT-1 RT-PCR és haematologia AML-ben rossz prognosztikai jel, de ez vitatott MDS-ben diagnosztikus lehet CML-ben ugyancsak jellemző, a szint csökkenése jól
jelzi a tirozinkináz gátló kezelés várható hatékonyságát
Jó MRD marker Tumor antigen peptidszekvenciák, HLA
asszociációkkal
Gvax WT-1, fázis I-II tanulmány WT-1 peptid, a beteg saját in vitro irradiált
tumor sejtjéval 54 AML eset, parciális remissioban 70%-ban esett a WT1 szint Az igy válaszolók 2 éves tulélése jelentősen
javult Lényegesebb szövődmény, mellékhatás nem
volt
February 2007 | 26! Peptide immunotherapy with a validated target: WT1! AML known to be immune responsive! Activity already demonstrated with analogous products• 66% immune response; 57% durable clinical response in AML! Short development path with indication of AML patients in first CR• 12 month PFS endpoint! Off the shelf approach addressing most immune haplotypes• Four synthetic and natural peptides for CD8 and CD4 response! Inexpensive to produce
Vaccine Therapy and GM-CSF in Treating Patients With Acute Myeloid Leukemia, Myelodysplastic Syndromes, Non-Small Cell Lung Cancer, or MesotheliomaThis study is currently recruiting patients.
Sponsored by: Memorial Sloan-Kettering Cancer Center
Information provided: National Cancer Institute (NCI)
ClinicalTrials.gov Identifier: NCT00398138
Condition Intervention PhaseLeukemiaLung CancerMalignant MesotheliomaPeritoneal Cavity Cancer
Drug: WT-1 analog peptide vaccineDrug: incomplete Freund's adjuvantDrug: sargramostimProcedure: biological therapyProcedure: diagnostic testProcedure: flow cytometryProcedure: immunoenzyme techniquesProcedure: non-specific immune-modulator therapyProcedure: non-tumor cell derivative vaccineProcedure: polymerase chain reactionProcedure: vaccine therapy
Phase 1
1 47 F 0 Breast cancer Surgery, chemotherapy Weekly 12 SD
2 63 M 2 Glioblastoma Surgery, radiotherapy, chemotherapy, INF-ß Weekly 12 SD
3 68 M 0 Malignant fibrous histiocytoma None Weekly 12 PD
4 33 M 2 Glioblastoma Surgery, radiotherapy Weekly 12 PR
5 45 M 0 Glioblastoma Surgery, chemotherapy, radiotherapy, INF-ß Weekly 12 SD
6 21 M 0 Primary neuroectodermal tumor Surgery, chemotherapy, radiotherapy Weekly 6 PD
7 29 F 0 Glioblastoma Surgery, chemotherapy, radiotherapy, INF-ß Weekly 12 SD
8 69 M 1 Glioblastoma Surgery, radiotherapy, INF-ß Weekly 12 SD
9 52 M 0 Rectal cancer Surgery, chemotherapy Weekly 12 PD
10 48 F 0 Breast cancer Surgery, chemotherapy, hormonal-therapy Weekly 12 PD
Saját eddigi WT-1 eredményeink Peptid keverék vagy módositott peptidek
előállitása indul mRNS mérés beállitása vérből és csontvelői
mintákból (WT-1 splice varánsok mérésére is alkalmas), az erőteljes expresszióval járó esetek azonositására (Biró Sándor, Human Genetika), RT-PCR (Taqman, G6PDH)
Mérések AML, MDS, CML-ben, ill. nyitás a lymphoma vonalra
A GAPDH gén expressziója egészséges (1, 2, 3)és AML betegben (4, 5, 6)
Rn=normalizált fluoreszcencia szignál
1
2
3
4
5
6
A WT1 gén expressziója egészséges (1, 2, 3,) és AML betegben (4, 5, 6)
Rn=normalizált fluoreszcencia szignál
12 3
4
5
6
DEOEC program
Klinikai Sejttherapiás központ colorectális cc DC sejtes- CEA, Fázis I., melanoma, haematologia
HAEMATOLOGIA -auto PBSCT 100 eset,, allogen 2007 II. félév? - AML, adjuváns, DC alapu WT-1, 65 év feletti esetek
- haemangioblast-angiogenesis program, Fázis I, ETT 5 eset
- myocardium, fázis I. ETT, 8 eset
Dendritikus sejtek
Antigen presentatio, aktivált állapot