SciELO Books / SciELO Livros / SciELO Libros JORGE, TCA., and CASTRO, SL., orgs. Doença de chagas: manual para experimentação animal [online]. Rio de Janeiro: Editora FIOCRUZ, 2000. 368 p. Antropologia e Saúde collection. ISBN 85-85676-75-2. Available from SciELO Books <http://books.scielo.org>.
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Front Matter / Elementos Pré-textuais / Páginas Iniciales
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FUNDAÇÃO OSWALDO CRUZPresidente
Eloi de Souza Garcia
Vice-Presidente de Ambiente, Comunicação e InformaçãoMaria Cecília de Souza Minayo
EDITORA FIOCRUZCoordenadora
Maria Cecília de Souza Minayo
Conselho EditorialCarlos E. A. Coimbra Jr.Carolina M. BoriCharles PessanhaHooman MomenJaime L. BenchimolJosé da Rocha CarvalheiroLuiz Fernando FerreiraLuiz David CastielMiriam StruchinerPaulo AmarantePaulo GadelhaPaulo Marchiori BussVanize MacêdoZigman Brener
Coordenador ExecutivoJoão Carlos Canossa P. Mendes
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Tania C. Araújo-Jorge & Solange L. de Castro
Edição comemorat iva aos 90 anos d a descobertad a doença de Ch ag as (1909-1999)
organizadoras
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Copyright © 2000 dos autoresTodos os direitos desta edição reservados àFUNDAÇÃO OSWALDO CRUZ / EDITORA
ISBN: 85-85676-75-2
Capa, projeto gráfico e tratamento de imagens Angélica Mello
Editoração eletrônica Beatriz de Moraes Vieira
Preparação de originais e copidesque Solange L. de Castro
Revisão Marly Willcox
Revisão final Marcionílio Cavalcanti de Paiva
Catalogação-na-fonteCentro de Informação Científica e TecnológicaBiblioteca Lincoln de Freitas Filho
2000EDITORA FIOCRUZRua Leopoldo Bulhões, 1480, térreo – Manguinhos21041-210 – Rio de Janeiro – RJTels.: (21) 598-2701 e 598-2702Telfax: (21) 598-2509
Jorge, Tania C. de Araújo (org.)Doença de chagas: manual para experimentação animal. / Organizado por Tania C. de Ara-
újo-Jorge e Solange Lisboa de Castro. – Rio de Janeiro : Editora Fiocruz / Instituto OswaldoCruz, 2000.
368p., il., tab.
1. Doença de Chagas-induzido quimicamente 2. Animais de Laboratório 3. Manuais de La-boratório [tipo de publicação] I. Castro, Solange Lisboa de (org.)
CDD - 20.ed. – 616.9363
J82d
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Para
Carlos Chagas, o pai, o desbravador de um caminhoque hoje muitos pesquisadores brasileiros estão seguindo,
mirando-se no seu exemplo único e admirávelde cientista, médico e formador
de investigadores para lidar comproblemas que atingem a gente brasileira.
Carlos Chagas, o filho, que nos conduziu pelos caminhos da ciência,da filosofia e da ética, através de suas aulas, conselhos
e apoio para atividades de divulgação e popularização científicas,além das muitas “caronas” na volta para casa após o dia-a-dia
da rotina com que nos formamos cientistas noInstituto de Biofísica que leva seu nome.
O prazer do convívio com este grande mestre só não suplanta o privilégio de termos podido estar e aprender com ele.
Maria P. Deane, a cientista brilhante, a mulher de fibra,ousada na vida e na ciência,
a voz dos pesquisadores em tantas lutas, questionadora de paradigmas,
e sobretudo a grande mestra na experimentação animal,que nos ensinou a ter um profundo respeito pelos animais de laboratório.
Sentimos sua ausência.
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AgrAgrAgrAgrAgraaaaa dec imen tosdec imen tosdec imen tosdec imen tosdec imen tos
Este trabalho foi realizado com o estímulo de muitos colegas, a quem
agradecemos. Gostaríamos de apresentar agradecimentos especiais
• aos nossos alunos, que nos vêm desafiando para uma postura mais ativa e criativa no ensino da parasitologia,biologia celular e imunologia, e que testaram, na prática, cada um dos protocolos apresentados neste manual,por vezes assinando a co-autoria de alguns capítulos;
• aos nossos primeiros orientadores, professores Wanderley de Souza, Maria de Nazareth Meirelles e Mécia M.Oliveira, que além de nos apresentarem ao Trypanosoma cruzi e aos camundongos infectados, nos brindamcom sua amizade firme e constante;
• ao professor José Rodrigues Coura, incansável mestre e batalhador, que está sempre pronto a nos ajudar, sejacom aulas, textos, conselhos, sugestões e, sobretudo, pelo empenho para a edição final desta publicação;
• ao professor Zigman Brener, que vem acompanhando e influenciando, continuamente, nosso trabalho desdeos tempos de estudantes, até nossa atuação profissional, sempre com sugestões oportunas e com inestimávelajuda cada vez que solicitamos. Não é sem razão que ele vem participando, sistematicamente, das diversasbancas de teses que doutoraram os pesquisadores do nosso departamento;
• aos colegas do Departamento de Ultra-estrutura e Biologia Celular do IOC que nos deram “coberturalogística”, dividindo muitas das atribuições que deixamos acumular por conta do tempo necessário para aconclusão deste trabalho;
• aos nossos colaboradores para a redação dos diferentes capítulos, não só pela qualidade das contribuições,como pela paciência até a publicação final;
• aos nossos filhos Julia, Pedro, Luiza e Bruno, e aos nossos companheiros, Luiz e Alexandre, além da Lúcia, quepacientemente nos aguardaram chegar tarde, dias seguidos, para que concluíssemos o preparo destes originais.
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A u t o rA u t o rA u t o rA u t o rA u t o reeeee sssss
Ana Maria Jansen - Depto de Protozoologia, IOC/Fiocruz - [email protected] Paula S. Pinho - Depto de Protozoologia, IOC/Fiocruz - [email protected] Henriques Pons - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz - [email protected] Pereira de Souza - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz - [email protected] C. V. Junqueira - Depto de Medicina Tropical, IOC/Fiocruz - [email protected] Perdigão Olivieri - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz - [email protected] V. P. Cardoso - Centro de Criação de Animais de Laboratório/Fiocruz - [email protected] Pirmez - Depto de Bioquímica e Biologia Celular, IOC/Fiocruz -/Fiocruz - [email protected] M. L. M. Coutinho - Instituto de Ciências Biológicas/UFF - [email protected] V. Lisboa - Depto de Protozoologia, IOC/Fiocruz - [email protected] A. Campbell - School of Medicine/Universidade da Califórnia/LA/EUA - [email protected] Chapadeiro - Disciplina de Parasitologia/Faculdade de Medicina do Triângulo MineiroElen Mello de Souza - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz - [email protected]
Eliane Lages-Silva - Disciplina de Parasitologia/Faculdade de Medicina do Triângulo MineiroElisa Cupolillo - Depto de Imunologia, IOC/Fiocruz - [email protected] A. dos Reis - Lab. de Biologia Imunitária, Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho/UFRJ - [email protected]âine A. Martins - Depto de Parasitologia, Microbiologia e Imunologia, Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto/USP
- [email protected] Santos Barbosa - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz - [email protected] S. Mallet - Depto de Entomologia, IOC/Fiocruz - [email protected]ão Santana Silva - Depto de Parasitologia, Microbiologia e Imunologia, Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto/USP
- [email protected]é Rodrigues Coura - Depto de Medicina Tropical, IOC/Fiocruz - [email protected] C. S. Aliberti - Depto de Parasitologia, Microbiologia e Imunologia, Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto/USP
- [email protected] S. Calabrese - Depto de Protozoologia, IOC/Fiocruz - [email protected] Eduardo Ramírez - Disciplina de Parasitologia/Faculdade de Medicina do Triângulo Mineiro -
[email protected] Einicker-Lamas - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz - [email protected] Antonio P. Marques - Centro de Criação de Animais de Laboratório/Fiocruz - [email protected] da Glória Boneceni-Almeida - Depto de Microbiologia, Imunologia e Parasitologia, CPHEC/Fiocruz -
[email protected] de Nazareth Meirelles - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz - [email protected] Nazaré Soeiro - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz - [email protected] Teresa Rivera - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz - [email protected]
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Mecia M. Oliveira - Lab. de Biomembranas, Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho/UFRJ - [email protected] C. Pereira - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz - [email protected] Fernandes - Depto de Medicina Tropical, IOC/Fiocruz - [email protected] Renato Antas - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz - [email protected] H. Cabello - Depto de Genética, IOC/Fiocruz - [email protected] Helena Mangia - Depto de Medicina Tropical, IOC/FiocruzRenato Marchewsky - Lab. de Neurovirulência, Biomanguinhos/FiocruzRicardo de Mattos Santa-Rita - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz [email protected]ão Enes R. Couto - Centro de Criação de Animais de Laboratório/Fiocruz - [email protected] Marques Araújo - Depto Análises Clínicas/Universidade Estadual de Maringá - [email protected] Lisboa de Castro - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz - [email protected] G. Andrade - Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz/Fiocruz - [email protected] Corte-Real Faria - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz - [email protected] Celso G. Costa - Depto de Protozoologia, IOC/Fiocruz - [email protected] C. Araújo-Jorge - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz - [email protected] Zaverucha do Vale - Depto de Protozoologia, IOC/Fiocruz - [email protected] D. Silva - Disciplina de Fisiologia/Faculdade de Medicina do Triângulo MineiroVinicius Cotta-de-Almeida - Depto de Ultra-estrutura e Biologia Celular, IOC/Fiocruz - [email protected] Savino - Depto de Imunologia, IOC/Fiocruz - [email protected]
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SSSSS u m á r i ou m á r i ou m á r i ou m á r i ou m á r i o
Apresentação ...................................................................................................................................................................................... 13
Parte I – Conceitos atuais em doença de Chagas humana e experimental1. Desafios da pesquisa científica após 90 anos da descoberta da doença de Chagas
1.1 Questões da doença humana para trabalho em modelos animaisTania C. Araújo-Jorge & Solange L. de Castro ...................................................................................................................... 17
1.2 A doença de Chagas humana e seus modelos de estudoJosé Rodrigues Coura ............................................................................................................................................................... 19
2. Vetores da doença de Chagas e sua relação com o hospedeiro vertebrado e o parasitaJacenir R. dos Santos Mallet .................................................................................................................................................... 25
3. A ecologia e a complexidade dos ciclos de transmissão do Trypanosoma cruzi na naturezaAna Maria Jansen, Cristiane V. Lisboa, Ana Paula S. Pinho, Renato Sergio Marchewsky,Regina H. R. Mangia, Elisa Cupolillo & Octavio Fernandes .................................................................................................. 33
4. Resposta do hospedeiro à infecção4.1 Respostas imune inata, inflamatória e de fase aguda na doença de Chagas
Tania C. Araújo-Jorge ............................................................................................................................................................ 394.2 A resposta imune celular na infecção experimental por Trypanosoma cruzi
George A. Dos Reis ................................................................................................................................................................ 484.3 A resposta imune humoral e as funções do linfócitos B na infecção por Trypanosoma cruzi
Maria Teresa Rivera ................................................................................................................................................................ 514.4 Participação de citocinas no determinismo de resistência ou susceptibilidade à infecção
experimental por Trypanosoma cruziGislâine A. Martins, Julio C. S. Aliberti & João S. Silva ...................................................................................................... 55
4.5 O timo como órgão-alvo na infecção pelo Trypanosoma cruziVinícius Cotta-de-Almeida & Wilson Savino ......................................................................................................................... 60
4.6 Imunomodulação da resposta T-dependente na doença de Chagas experimentalSylvio Celso G. da Costa, Katia S. Calabrese & Tania Zaverucha do Vale .............................................................................. 65
5. Hormônios na doença de Chagas5.1 Sistema adrenérgico
Mecia M. Oliveira ................................................................................................................................................................... 875.2 Hormônios sexuais
Solange L. de Castro & Elen Mello de Souza ........................................................................................................................ 905.3 Prolactina
Maria Teresa Rivera ................................................................................................................................................................ 936. Relação materno-fetal na infecção chagásica experimental
Maria Teresa Rivera & Silvana Marques de Araújo .............................................................................................................. 1037. Quimioterapia experimental
Solange L. de Castro, Ricardo de Mattos Santa-Rita & Marcelo Einicker-Lamas ................................................................. 111
Parte II – Protocolos e métodos de trabalho em doença de Chagas experimental8. Normas de segurança para o trabalho com Trypanosoma cruzi
Tania C. Araújo-Jorge & Claude Pirmez .............................................................................................................................. 125
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9. Modelos animais para o estudo in vivo da doença de Chagas9.1 Camundongo
Tania C. Araújo-Jorge .......................................................................................................................................................... 1349.2 Rato
Luis Eduardo Ramírez, Valdo D. Silva, Eliane Lages-Silva & Edmundo Chapadeiro ........................................................... 1409.3 Calomys callosus
Sonia G. Andrade ................................................................................................................................................................. 1439.4 Hamster
Luis Eduardo Ramírez, Eliane Lages-Silva & Edmundo Chapadeiro .................................................................................... 1459.5 Coelho
Luis Eduardo Ramírez, Eliane Lages-Silva & Edmundo Chapadeiro ................................................................................... 1499.6 Cão
Sonia G. Andrade ................................................................................................................................................................. 1579.7 Macaco
Maria da Glória Boneceni-Almeida ........................................................................................................................................ 16010. Planejamento de experimentos e escolha dos modelos: hospedeiro e parasita
10.1 Critério de escolha para o modelo de hospedeiro animal e da cepa do parasitaSolange L. de Castro & Tania C. Araújo-Jorge .................................................................................................................... 175
10.2 Trypanosoma cruzi: cepas de eleiçãoOctavio Fernandes & David A. Campbell .............................................................................................................................. 178
10.3 Planejamento de um experimento com infecção in vivo pelo Trypanosoma cruziTania C. Araújo-Jorge .......................................................................................................................................................... 182
10.4 Manutenção e obtenção dos diferentes estágios evolutivos em laboratórioHelene Santos Barbosa .......................................................................................................................................................... 184
11. Cuidados especiais com animais no biotério de experimentaçãoTania C. Araújo-Jorge, Maria Teresa Rivera, Celia V. P. Cardoso & Sebastião E. R. Couto ................................................ 197
12. Controle da qualidade dos animais antes da infecção experimentalCelia V. P. Cardoso, Marcos Antonio P. Marques, Tania C. Araújo-Jorge, Solange L. deCastro & Maria Teresa Rivera .............................................................................................................................................. 203
13. Sangria de animais e preparo de inóculos para infecção experimentalTania C. Araújo-Jorge, Maria Teresa Rivera, Solange L. de Castro & Marcos AntonioP. Marques ............................................................................................................................................................................ 215
14. Avaliação de parâmetros parasitológicos e de mortalidadeSolange L. de Castro, Tania C. Araújo-Jorge, Maria Teresa Rivera & Angela C. V.Junqueira .............................................................................................................................................................................. 219
15. Quantificação de marcadores humorais de inflamação, de resposta imune e de lesão tissular nos animais infectados
Tania C. Araújo-Jorge, Paulo R. Z. Antas & Solange Lisboa de Castro ............................................................................... 23716. Preparo de células para avaliação de parâmetros inflamatórios e imunológicos
Tania C. Araújo-Jorge, Vinícius Cotta-de-Almeida, Bianca P. Olivieri & Andrea Henriques-Pons ....................................... 25117. Coleta e processamento de órgãos e tecidos para avaliação da infecção
Andréa Pereira de Souza, Suzana Côrte-Real Faria, Claudia M. L. M. Coutinho, MariaNazaré C. Soeiro & Claude Pirmez ..................................................................................................................................... 265
18. Obtenção de células de camundongo para estudos in vitro em cultivo primário18.1 Interação do Trypanosoma cruzi com as células hospedeiras: estudos in vitro
Maria de Nazareth L. Meirelles & Tania C. Araújo-Jorge ................................................................................................... 28918.2 Protocolos de cultura primária
Helene S. Barbosa, Mirian C. S. Pereira & Maria de Nazareth S. L. Meirelles .................................................................... 29719. Sistematização e análise de resultados: confecção de planilhas, tabelas, gráficos e análises estatísticas
Solange L. de Castro, Tania C. Araújo-Jorge & Pedro H. Cabello ........................................................................................ 31520. Anexos ....................................................................................................................................................................................... 331