Faculdade de Medicina daUniversidade de Coimbra
Seminário Orientado nº3
7-10-2009
Mestrado Integrado em Medicina – Bioquímica I
Ana SousaFilipa Sousa
Filipa CarvalhoFilipa Sotero
Filipa ReisAna Lopes
Ana MoreiraAna Augusto
Filipa Figueiredo
1. Analisar diferentes métodos para extracção de lípidos em amostras biológicas;
2. Discutir diferentes métodos de análise de lípidos, incluindo a sua identificação;
3. Explicar exemplos do estudo de lípidos para o diagnóstico em Medicina.
Aspectos a ter em conta: As características dos lípidos facilitam a separação de proteínas e açúcares;
A polaridade dos grupos químicos do lípido condiciona a polaridade do solvente; lípidos com grupos polares são mais solúveis em álcoois do que em hexano.
Pode ser necessário quebrar ligações com outros componentes da molécula.
Preparação das amostras para extracção: Evitar as condições oxidantes no armazenamento (oxigénio, luz e temperatura);
Pré-secagem;
Moagem;
Hidrólise ácida.
Extracção contínua: Método de Goldfish
Extracção semicontínua: Método de Soxhlet
Extracção descontínua: Método de Mojonnier e Método de Roese-Gottlib
Extracção de alta pressão:
Extracção acelerada com solventes
Extracção com fluidos supercríticos
Método de Bligh-Dyer e Método Reed et al.
Solventes mais comuns
éter etílico;
éter de petróleo;
hexano;
pentano;
clorofórmio;
acetona;
benzeno.
Lípidos apolares solventes apolares (hexano, éteres)
Lípidos polares misturas de solventes polares e apolares (metanol, clorofórmio)
Características ideais do solvente:- Grande poder solvente;
- Não solubilizar proteínas, aminoácidos e hidratos de carbono;
- Evaporar rapidamente;
- Penetrar rapidamente nas partículas da amostra;
- Não inflamável;
- Atóxico;
- Baixo custo;
- Não higroscópico (sem capacidade de reter água).
MÉTODO DE GOLDFISH Utiliza refluxo de solvente para extracção;
Processo de extracção contínuo, logo, mais rápido;
Pode ser utilizado somente com amostras sólidas.
Vantagem: utiliza menos solvente e é mais rápido,
pois, sendo contínuo, faz com que a amostra esteja
permanentemente em contacto com o solvente.
Desvantagem: o contacto do solvente muito quente
com a amostra pode levar à degradação da gordura.
% Lípidos = peso final balão – peso inicial balão x 100 peso amostra
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MÉTODO DE SOXHLET Utiliza refluxo de solvente para extracção;
Processo de extracção intermitente;
Só pode ser utilizado com amostras sólidas;
A quantidade de solvente é maior para que o volume
total seja suficiente para atingir o sifão do equipamento.
Vantagem: a amostra não fica em contacto directo com o
solvente em ebulição, evitando-se a decomposição dos
lípidos.
Desvantagem: possível saturação do solvente o que
dificulta a extracção.
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Legenda:
(1) recipiente do solvente
(2) recipiente de extracção
(3) funil
(4) condensador
MÉTODO DE BLIGH-DYER
Utiliza uma mistura a frio de três solventes: clorofórmio, metanol e água;
As amostras são avaliadas quanto ao nível de peroxidação e perfil de ácidos gordos;
Pode ser usada para qualquer tipo de amostra (seca ou húmida).
Procedimento:
Adaptado de Inar Castro, 2006 (Fac. Ciências Farm, Universidade São Paulo).
Métodos de Babcock e de Gerber:
Digestão com ácido
Adição de álcool isoamílico (Gerber)
Colocação em recipiente de medida
Centrifugação e leitura
Métodos instrumentais:
Ressonância magnética nuclear
Medida da constante dieléctrica
Espectroscopia de infravermelho
Medidas de densidade
Medidas da velocidade do som
Método colorimétrico (reacção com o ácido hidroxâmico)
MÉTODO DE GERBER
Apenas utilizado em leite e produtos lácteos.
Estrutura do leiteEmulsão
x1
x1000
X10000
Filme proteico
Digestão proteica(libertar gordura)
Ácido sulfúrico / álcool isoamílico
Centrifugação directa no butirómetro a 71ºC
Leitura final no butirómetro
Método físico-químico de separação baseado na migração diferencial dos componentes
de uma mistura devido a diferentes interacções entre uma fase móvel e outra
estacionária.
Cromatografia Gasosa
Cromatografia Líquida de Alta Eficiência
Cromatografia em Camada Fina
Crom. gás-sólido ou de partição
Crom. gás-líquido ou de
absorção
Crom. Gasosa de alta resolução
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Permite fazer a análise do teor lipídico de amostras biológicas, incluindo alimentos:
Padrões de identificação e rotulagem;
Investigação e diagnóstico.
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ESTUDO DOS LÍPIDOS E DIAGNÓSTICO EM MEDICINA
Hipo ou Hipertiroidismo a glândula da tiróide exerce controlo sobra a concentração de
lípidos no plasma sanguíneo. Hipotiroidismo – lipaemia; Hipertiroidismo – lipopenia;
Doenças do sistema nervoso central a desregulação do metabolismo dos lípidos pode
influenciar distúrbios neurológicos: bipolaridade e esquizofrenia, e doenças neurodegenerativas:
Alzheimer, Parkinson e Niemann Pick;
Fibrose cística relacionada com dislipidemia hipertrigliceridemia, diminuição da ácidos
gordos essencias (hipocolesterolemia normalmente) ;
Hipercolesterolemia familiar deficiência do metabolismo lipídico, nomeadamente o
transporte e metabolismo do colesterol .
NELSON, David L.. COX, Michael M.. Lehninger: Principles of Biochemistry. Nova Iorque: W. H. Freeman and Company. Fifth Edition.
SILVA, Ana. (2008). Notas de campo. Disciplina de Bioquímica. (Não publicado)
MURRAY, Robert K.. GRANNER, Daryl K. et all.(1998). Bioquímica de Harper. México: El Manual Moderno. 11ª edição.
Suporte informático
http://www.uac.pt/~barreto/bqm_prat/prot04aExt_lipidos_introd.pdf
http://www.gipescado.com.br/arquivos/met_fis-qui_ial/cap25.pdf
http://www.sitebiomedico.hpg.ig.com.br/proteinas.htm
http://ojs.c3sl.ufpr.br/ojs2/index.php/alimentos/article/view/7489/5359
http://www.aapsj.org/view.asp?art=aapsj080236
Suporte escrito