1
DIAGNÓSTICO
?Clínico
?Directo=Etiológico=Morfológico
?Indirecto
Coprológico
Coprocultivos
Hemático
Genitourinarios
Biopsias
Inmunodiagnóstico
Genético
Precipitación
Aglutinación
Complemento
Anticuerpos marcados
Principales parasitosis diagnosticadas coprologicamenteHelmintos (huevos)
2
Principales parasitosis diagnosticadas coprologicamenteProtozoos (trofozoitos de amebas)
Principales parasitosis diagnosticadas coprologicamenteProtozoos (quistes)
3
Principales parasitosis diagnosticadas coprologicamenteProtozoos (flagelados)
Principales parásitos notificados al Sistema de Información Microbiológica (SIM)
Total anual
2002 2001 2000 1999
Anisakis 3 5 1 2
Ascaris lumbricoides 64 37 37 10
Blastocystis hominis 409 378 308 213
Chilomastix mesnili 4 2 1 1
Cryptosporidium sp 121 88 54 97
Cyclospora cayetanensis 30 0 1 0
Echinococcus granulosus 5 10 38 29
Entamoeba coli 20 37 32 31
Entamoeba histolytica 33 15 3 6
Entamoeba sp 5 2 0 3
Enterobius vermicularis 262 197 243 232
Fasciola hepatica 0 2 1 2
Giardia lamblia 730 561 508 523
Leishmania donovani 2 3 4 1
Leishmania sp 24 26 16 7
Plasmodium falciparum 120 114 100 84
Plasmodium malariae 2 8 3 2
Plasmodium ovale 8 7 10 3
Plasmodium sp 3 10 18 16
Plasmodium vivax 23 38 29 22
Schistosoma haematobium 2 1 0 1
Schistosoma mansoni 0 2 1 0
Taenia saginata 39 29 19 19
Taenia sp 1 39 29 47
Toxocara canis 37 1 4 1
Toxoplasma gondii 78 58 61 45
Trichomonas vaginalis 198 168 164 165
Trichuris trichiura 86 72 35 11
Otros 146 122 92 88
Número de laboratorios
declarantes 35 35 36 37
4
Artefactos o pseudoparásitos-I
HuevoTrichuris
Polen
PolenPolen
MacrófagosEritrocitosCel. sanguíneas
Cristal Charcot-Leyden
Pelo vegetalCélula vegetal
Polen
Espiral vegetal
Levaduras
Huevos insectos
Cuerpos grasos
Parásito vegetal
Artefactos o pseudoparásitos-II
5
TOMA DE MUESTRAS
?Recomendaciones al paciente
?Número de muestras
?Cantidad
?Recipientes y seguridad
?Examen y consistencia de las heces
CONSERVACIÓN DE LAS HECES-I
?Fijador de Schaudinn
HgCl2, etanol, glicerina y acéticoQuistes y trofozoitosTincionesNo concentración
?Alcohol polivinilico
Schaudinn+PVAQuistes y trofozoitos (óptimo)TincionesConcentraciónLaborioso
?SAF
Acetato sódico, acético y formolConserva la mayoría de las formas parasitariasConcentraciónNo HgPreparación fácil y vida media muy alta
6
?Formol
5% (quistes) y 10% (huevos helmintos)No valido para trofozoitosConcentraciónNo tinciónPreparación sencilla
?MYFMertiolato, yodo y formol¿Permite concentración?Preserva y tiñe
?Azida sódicaConserva casi todas las formasMuy tóxica
CONSERVACIÓN DE LAS HECES-II
EXAMEN MACROSCÓPICO
?Consistencia de las heces
?Presencia de mucus y sangre
?Formas parasitarias macroscópicas
FormesSemiformesBlandasLíquidas
LimpiezaMontaje
7
EXAMEN MICROSCÓPICO DIRECTO
?Heces muco-sanguinolentas (rápido o fijar en PVA)
?Líquidas o semilíquidas (pocas horas)
?Formes o semiformes (hasta 24h)
?¿Cómo realizarlo?Toma de muestraTinción opcionalObservación
Heces
Soluciónfisiológica
Cubreobjetos
Métodos de observación
Frotis fecal para tinción permanente
Toma de muestra
Aplicación de lamuestra
Extensión de lamuestra
8
EXAMEN MICROSCÓPICO PREVIA CONCENTRACIÓN
?Operaciones previas
?Métodos
HomogeneizarRestos voluminososRestos pesados
Físicos SedimentaciónFlotación
Físico-químicos (difásicos)
Efectividad del diagnostico en función delmétodo seleccionado
Homogeneización Eliminación restosvoluminosos
Eliminación restospesados
Operaciones previas
9
MÉTODOS DE SEDIMENTACIÓN-I
?Faust e Ingalls
?Jahnes y Hodges
1. Agua glicerinada2. Tamizar3. Sedimentar (1h)4. Decantar sobrenadante5. Repetir el proceso dos veces (45 y 30 min)6. Observar sedimento
?Baroody y Most
1. Agua glicerinada o alcoholizada2. Tamizar3. Sedimentar 30 s4. Centrifugar sobrenadante (1500rpm, 1-2 min)5. Resuspender y centrifugar de nuevo6. Repetir el ultimo proceso hasta clarificar7. Observar sedimento
?Van Someren(Modificado por Gregoire)
1. Tween-80 al1%2. Tamizar3. Llenar tubo con pinza abierta (2 m aprox)4. Sedimentar (20 min)5. Cerrar pinza y abrir llave6. Observar
MÉTODOS DE SEDIMENTACIÓN-II
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MÉTODOS DE FLOTACIÓN-I
?Fulleborn (salmuera)
1. Homogeneizar2. Reposar 45 min3. Observar capa superior
?Willis (salmuera)1. Homogeneizar2. Llenar tubo Borrel hasta formar menisco3. Cubreobjetos sobre menisco4. Reposar 15 min5. Observar
Toma de muestra en un método basado en la flotación
Capas obtenidas- flotación
?Faust (sulfato de zinc)
1. Homogeneizar en agua2. Tamizar y recoger tamizado en tubo3. Centrifugar 1500 rpm, 5 min4. Decantar y repetir hasta clarificar5. Resuspender sedimento en SO4Zn6. Centrifugar 1500 rpm, 2min7. Observar
?Faust simplificado
1. Homogeneizar directamente en SO4Zn2. Tamizar3. Seguir pasos 6 y 7.
MÉTODOS DE FLOTACIÓN-II
11
?Janeckso y Urbanyi
1. Homogeneizar (Biyoduro-yoduro)2. Tamizar3. Centrifugar 2500 rpm, 3min4. Observar
?Sheather
1. Homogeneizar en sacarosa2. Centrifugar 500 g, 5 min3. Observar
MÉTODOS DE FLOTACIÓN-III
MÉTODOS DIFASICOS-I
?Rivas1. Homogeneizar (ácido acético 5%)2. Tamizar3. Tubo ensayo (tamizado+eter)4. Emulsionar5. Centrifugar 1500rpm, 1min6. Observar sedimento
?Ritchie1. Homogeneizar (solución salina)2. Tamizar3. Centrifugar 1500rpm, 1min4. Decantar, resuspender y repetir hasta clarificar5. Resuspender en formol 10% y añadir eter6. Emulsionar7. Centrifugar 1500rpm, 2min8. Observar sedimento
Capas obtenidas
12
?Ritchie simple
1. Homogeneizar en formol 10%2. Tamizar3. Tubo ensayo (tamizado+eter)4. Emulsionar5. Centrifugar 1500rpm, 2min6. Observar sedimento
?Bailenger 1. Homogeneizar (aceto-acetico)2. Sedimentar 60 s3. Tamizar el sobrenadante4. Tubo ensayo (tamizado+eter)5. Emulsionar6. Centrifugar 1500rpm, 1min7. Observar sedimento
MÉTODOS DIFASICOS-II
1. Homogeneizar en MYF2. Tamizar3. Tubo ensayo (tamizado+eter)4. Emulsión estable5. Centrifugar 1500rpm, 1min6. Observar sedimento
1. Homogeneizar (TCA+formol)2. Tamizar y sedimentar 1min3. Ampolla decantación (tamizado+eter)4. Emulsionar y reposar 2min5. Tomar el liquido claro del fondo6. Centrifugar 1500rpm, 1min7. Resuspender en solución densa (NaBr)8. Centrifugar 1500rpm, 1min9. Observar película superficial
?Blagg y col.
?Thebauld
MÉTODOS DIFASICOS-III
13
1. Homogeneizar (sulfato sodico)2. Añadir gota de Triton3. Tamizar4. Tubo ensayo (tamizado+eter)5. Emulsionar6. Centrifugar 1500rpm, 1min7. Observar sedimento
?Faust e Ingalls
MÉTODOS DIFASICOS-IV
PARASEP (método comercial patentado)
14
PARASEP (método comercial patentado)
METODOS ESPECIALES COPROLOGICOS-IDiagnóstico de Enterobius vermicularis
?Técnica de Markey (torunda vaselinada)
?Técnica de Graham (cinta adhesiva)
Modalidad 1 Modalidad 2
15
METODOS ESPECIALES COPROLOGICOS-IIMétodos migratorios (Strongyloides stercoralis)
?Metodo de Baermann y Brugg?Metodo de Baermann y Lee
?Metodo de la placa de agar (S. stercoralis)
METODOS COPROLOGICOS CUANTITAVIVOS-I
?Útiles para pocas especies?Intensidad / encuesta epidemiológica?Orientación tratamiento?Seguimiento eficacia
?Metodo de Kato-Katz
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METODOS COPROLOGICOS CUANTITAVIVOS-II
?Método de Stoll 1. 4g heces + Erlenmeyer2. 60ml NaOH 0.1M3. 10 bolas vidrio4. Homogeneizar5. 0.15ml en porta + cubre6. Huevos contados x 100 = huevos/g
?Método de Cadwell1. 4g heces + Erlenmeyer2. 4ml antiformina, mezclar y reposar 1h3. Solución sacarosa hasta 40ml4. Tomar 0.1ml en porta + cubre5. Huevos contados x 100 = huevos/g
?Método de la cámaraMcMaster
1. 3g heces + Erlenmeyer2. Añadir liquido hasta 45ml3. Homogeneizar4. Llenar cámara5. Huevos contados x 100=huevos/g
DIAGNOSTICO PARASITOS GENITOURINARIOS-I
Schistosoma haematobium
?Sedimentación1. Tomar la orina2. Depositarla en copa sedimentación3. Sedimentación 1-2h4. Centrifugar 2000g, 2min5. Observar sedimento
?Filtración
1. Filtrar la orina y extraer filtro2. Colocarlo en un portaobjetos3. Añadir 1 gota de Lugol4. Contar huevos en 10 ml de orina
Infección leve: 1-49 h/10mlInfección grave: mas de 50 h/10ml
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Filtración
Toma de orina y filtración Pase de aire
Tinción con Lugol
S. haematobium
DIAGNOSTICO PARASITOS GENITOURINARIOS-II
Microfilarias
?Triple concentración
1. Añadir timerosal al 1% en la orina2. Dejar reposar toda la noche (Baermann)3. Recoger 10-30ml4. Centrifugar 400g, 3-5 min5. Resuspender sedimento en solución salina6. Centrifugar y examinar
?Filtración
Igual que para Schistosoma
Loa loa
Dispositivo Baermann
18
DIAGNOSTICO PARASITOS GENITOURINARIOS-III
Trichomonas vaginalis
?Muestras
1. Exudado vaginal2. Exudado uretral3. Semen4. Orina
?Métodos1. Examen directo:
Diluir con solución salinaCentrifugar si es orina
2. Tinción3. Cultivo
Trichomonasvaginalis
DIAGNOSTICO HEMATICO-I
Parásitos 1. Plasmodium sp2. Babesia sp3. Trypanosoma sp4. Microfilarias5. Leishmania sp
Muestra 1. Sangre2. ¿Cuándo tomarla?
Métodos 1. Examen directo2. Gota gruesa3. Frotis fino4. Previa concentración
Gota gruesa
Frotis fino
19
Plasmodium
Amastigotes
Trypanosoma
Tripomastigotes
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DIAGNOSTICO HEMATICO-II
Tinciones 1. Giemsa2. Wright
Examen preparaciones 1. Gota gruesa (100 campos; inmersión)2. Frotis (200-300 campos; inmersión)
Recomendaciones 1. Fijar frotis o hemolizar gota gruesaantes de 48h
2. Conservación larga (resina de montaje)
Métodos de concentración 1. Capa opalina=Buffy Coat2. QBC; 3. Knott4. Filtración; 5. Gradiente6. Triple centrifugación7. PHA
DIAGNOSTICO HEMATICO-III
Extensión de la capa opalina (buffycoat)
1. Llenar un capilar de hematocrito (Wintrobe)2. Centrifugar 100g, 30min3. Examinar buffycoatCapas: plasma, células blancas (buffycoat) y eritrocitos
Concentración de Knott
1. Sangre citratada (1ml) +formol 2% (10ml)
2. Centrifugar 500g, 2min3. Observar sedimento
Filtración
1. Sangre citratada (1ml)+agua 10ml2. Agitar (hemolisis) y filtrar (5 micras)3. Pasar 10ml agua destilada4. Pasar aire por el filtro5. Pasar 3ml de metanol6. Retirar filtro, secar y teñir
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DIAGNOSTICO HEMATICO-IV
Centrifugación en gradiente
1. Ficoll-Hypaque (4ml)+Sangre heparinizada (4ml)2. Centrifugar 400g, 40minCapas: plasma, cel.blancas, parásitos, cel.rojas
Triple centrifugación
1. Centrifugar la sangre heparinizada 300g, 10min2. Recoger sobrenadante y centrifugar 500g, 10min3. Recoger sobrenadante y centrifugar 900g, 10min4. Examinar sedimento
Método fitohemaglutinina (PHA)
1. Sangre heparinizada+PHA (0.1mg/ml final)2. Mezclar suavemente3. Centrifugar 150g, 10min4. Centrifugar sobrenadante 700g, 10min5. Examinar sedimento
Metodo “Quantitative Buffy Coat” (QBC)
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ANALISIS DE MUESTRAS ESPECIALES
?Esputo
Paragonimus spQuiste hidatidicoAmebosis pulmonarLarvas Ascaris, Ancylostoma, Necator o StrongyloidesCryptosporidium
?Líquido cefalorraquídeoTripanosomiosis africanaMeningoencefalitis amebianaAngiostrongylus cantonensis
?Aspirados
DuodenalesSigmoidoscopiaGastroscopiaAbscesos pulmonares o hepáticosGanglios linfáticos, medula y bazoUlceras cutáneas
CULTIVO DE PARASITOS
?Coprocultivos de helmintos
?Coprocultivos de protozoos
?Inoculación animal
?Xenodiagnóstico
Cultivo fecal entira de papel
Cultivo en placa Petri