(19) 한민 특허청(KR)
(12) 등 특허공보(B1)
(45) 공고 2014 12월22
(11) 등 10-1475260
(24) 등 2014 12월16
(51) 특허 (Int. Cl.)
C12N 1/20 (2006.01) A01N 63/02 (2006.01)
C05F 11/08 (2006.01)(21) 원 10-2012-0095838
(22) 원 2012 08월30
심사청 2013 07월22
(65) 공개 10-2014-0028777
(43) 공개 2014 03월10
(56) 행 술 사 헌
Int. J. Agric & Biol. Eng., Vol.2,pp.55-61(2009.12.)*
KR100769360 B1
KR100457275 B1
KR100478016 B1
*는 심사 에 하여 헌
(73) 특허
울시립 학 산학 단
울특별시 동 울시립 163 ( 동,울시립 학 )
(72)
경 도 남양주시 남 양지 281 16 남스 닷 아 트 204동 503
상규
울특별시 동 망우 14 14, 2층
(뒷 에 계 )
(74) 리
규
체 청 항 수 : 5 항 심사 : 지연
(54) 칭 억새 근 양 리한 식 생 진하는 실러스 브틸리스 ＪＳ 균주 도
(57) 약
본 식 생 진하는 실러스 브틸리스(Bacillus subtilis) JS 균주, 상 균주 또는 양액
포함하는 식 생 진 미생 생 비료, 상 균주 양하여 생 비료 하
는 상 균주 식 또는 식 에 침지 또는 주 처리하여 식 생 진하는 공
한다.
도 - 도2
등록특허 10-1475260
- 1 -
(72)
지
울특별시 동 망우 10 60, 303
한만해
강원도 원주시 남산 48 26 진 아 트 102동601
지원한 가연 개 사업
과 고 S211212L030000
처 산림청
연 리 산림청
연 사업 업특 연 ( 과 ) 산림과학 연 지원
연 과 건 / 건 지역 사막 지 연 사업단
여 1/1
주 동 학
연 간 2012.04.15 ~ 2018.04.14
등록특허 10-1475260
- 2 -
특허청
청 항 1
담 , 상 또는 고 마 식 지상 생 진하는 실러스 브틸리스(Bacillus subtilis) JS 균주(KCTC
12264BP).
청 항 2
1항 균주 또는 양액 포함하는 담 , 상 또는 고 마 식 지상 생 진
미생 .
청 항 3
삭
청 항 4
삭
청 항 5
1항 균주 또는 양액 포함하는 담 , 상 또는 고 마 식 지상 생 진
생 비료.
청 항 6
1항 균주 양하는 단계 포함하는 생 비료 하는 .
청 항 7
1항 균주 담 , 상 또는 고 마 식 또는 상 식 에 침지 또는 주 처리하는 단계 포함하
는 담 , 상 또는 고 마 식 지상 생 진하는 .
청 항 8
삭
청 항 9
삭
술 야
본 억새 근 양 리한 식 생 진하는 실러스 브틸리스 JS 균주 도[0001]
에 한 것 , 욱 상 하게는 식 생 진하는 실러스 브틸리스(Bacillus subtilis) JS 균주, 상
균주 또는 양액 포함하는 식 생 진 미생 생 비료, 상 생 비료
하는 상 균주 식 또는 식 에 침지 또는 주 처리하여 식 생 진하는
에 한 것 다.
경 술
가에 고 득 재 , 비닐하우스 실 한 연 재 가능 그 수 량[0002]
시키 하여 학비료 약 다량 사 한 결과, 양 각 염 집 , 약 , 양 산
또는 양 단 등 그 리 학 질 극도 악 어 는 거 고 질 재 하 어
운 시 지 도달하 , 근에는 차원에 학비료 약 사 량 규 하고 는 실
다. 또한, 근 에는 약 사 하지 않고 재 공해 들 비 들 사 에 각 시 하
등록특허 10-1475260
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천 하거나 재 에 한 재 가 고 어 앞 는 욱 학비료 약
사 에 한 규 가 강 것 사료 다. 그러나, 상 같 약 사 하지 않고 천 하거나
재 들 는 아직 지 상 지가 어 고, 생산비 많 들 량생산 어 운
하여 그에 한 연 가 필 한 실 , 같 안 근에는 양 한
미생 하여 재 하는 들 시 고 다.
보통 비 한 양 1g에는 수천에 수억 마리 미생 식하고 고, 들 미생 업 할 수[0003]
는 미생 가운 특 우수한 균주 식 생 진 근 균(Plant Growth-Promoting
Rhizobacteria, PGPR) 하 , 들 양한 후 진 또는 비료 하고 다. 식
근 지역(rhizosphere) 식 뿌리 주 특별한 경 말하 , 상 근 지역에 생 하 식 생
진시키는 미생 에는 균 곰 등 포함 는 , PGPR 균주 별 는 미생 는 신 또는 지
린과 같 생 진시킬 수 는 질 생 하는 미생 각 에 병 하는 병원 미생
생 억 시키거나 항생 질 비하여 병원균 사 시킬 수 는 능 갖는 항 미생 들 주
고 다(Glick et al., 1995 Can. J. Microbiol. 41, 533-536).
에도 나 리그닌과 같 해 곤 한 각 비하여 신 하게 해시켜 주는 미[0004]
생 또는 산 해시켜 산비료 시비 거나 , 콩, 등 뿌리에 공생하 공
질 고 하는 미생 들 , 타 과 같 해생 포식하는 미생 들 주 상
고 다. 상 미생 식 생 에 필 한 각 , 생리 질, 아미 산 핵산
등 비하여 식 뿌리에 직 또는 간 수 어 다수 에 여함과 동시에 수 맛, 향 , 색
, 등 질향상과 양 함량에도 크게 공헌하고 는 것 알 다.
같 미생 에 한 식 생 진 과는 다수가 검 었 나, 들 나타내는 식 에 한 생 진[0005]
질병 억 에 해 는 지지 않았다. 상 에 한 가지 가 시 고 는 하
나는 식 생 진 미생 식 근 에 생 하 식 생 에 해 운 미생 과 생 경쟁 함 식
질병 생 억 하여 생 진 과 킨다는 가 고, 다 하나는 식 생 진 미생 생
진 질 직 비하여 식 생 진한다는 가 다.
러한 질들 업에 함과 동시에 새 운 식 생 진 질 찾 한 도 병행 었는 , 연[0006]
결과 식 내 에 생산 는 몬과 사한 질들 식 아닌 다 미생 들에 해 도 생산 다는 것
알 수 었다. 특 식 근 (rhizosphere community) 하는 여러 미생 가 식
생 에 어 진 과 나타내는 식 생 진 질들 생산한다는 것 보고 었다. 그 식 병
원 곰 헬민 스포리움 사티 (Helminthosporium sativum) 양액에 리 질 헬민 스포
(Helminthosporal) 볍씨 아시 생 진하 , 그 에도 식 병원 곰 스탈 티아 크립
리에콜 (Pestalotia cryptomeriaecola) 양액에 리 스타 틴(Pestalotin), 곰 클 도스프
리움 클 도스포 스(Cladosprium cladospoiioides) FI-113에 리 클 도스포 드 (Caldospolide)
스트 마 스(Streptomycetes)균 양액에 리한 티 돌린(Thienodolin) 등 리아, 곰 ,
균, 해양 미 등 다양한 미생 에 식 씨앗 아 또는 생 진 나타내는 질
들 리 어 연 고 다(I. Kubo, 1989 Pure and Appl. Chem. 61, 373-375).
한편, 한 공개특허 2010-0053743 에는 '근 양 리한 식 생 진하는 리아 균주 [0007]
한 식 생 진 ' 개시 어 고, 한 공개특허 2005-0111367 에는 ' 양 미생
한 생 진 그 생 진 한 재 ' 개시 어 나, 본 억새 근 양
리한 식 생 진하는 실러스 브틸리스(Bacillus subtilis) JS 균주 도에 해
는 개시 가 없다.
내
해결하 는 과
본 상 같 에 해 도 것 , 본 들 억새(Miscanthus) 근 양 식[0008]
생 진 근 균(plant growth promoting rhizobacteria, PGPR) 리하 고, 식 생 진시키
는 실러스 브틸리스(Bacillus subtilis) JS 균주 학 동 하 다. 상 균주 식 체에 처리한
경우 식 지상 생체 가 뿌리 생 진 는 과 함 본 하 다.
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과 해결 수단
상 과 해결하 해, 본 식 생 진하는 실러스 브틸리스(Bacillus subtilis) JS 균주[0009]
공한다.
또한, 본 상 균주 또는 양액 포함하는 식 생 진 미생 공한[0010]
다.
또한, 본 상 균주 또는 양액 포함하는 식 생 진 생 비료 공한다.[0011]
또한, 본 상 균주 양하여 생 비료 하는 공한다.[0012]
또한, 본 상 균주 식 또는 식 에 침지 또는 주 처리하여 식 생 진하는 [0013]
공한다.
과
본 억새(Miscanthus) 근 양에 리한 실러스 브틸리스(Bacillus subtilis) JS 균주는 식[0014]
생 진 근 균(Plant Growth-Promoting Rhizobacteria, PGPR) 특 가지 , 식 체 지상 생체
가 뿌리 생 진시키는 것 하 다. 본 실러스 브틸리스(Bacillus subtilis) JS 균
주 한 식 생 진 통하여 생 진 생산량 과 가 수 , 산업
하게 수 것 단 다.
도 간단한
도 1 실러스 브틸리스(Bacillus subtilis) JS 균주 16S rRNA 염 열 비 한 계통수[0015]
(phylogenetic tree) 나타낸다.
도 2는 내에 실러스 브틸리스(Bacillus subtilis) JS 균주가 담 생 진시키는 것 나타낸다.
(A)는 담 식 실러스 브틸리스 JS 균주 처리 후 8 째 생 결과에 티칼 스퀘어 플 트
(vertical square plate)상 처리 간 생 차 나타내 , (B)는 I-플 트(I-plate)에
처리 간 식 생 차 나타낸다. 각각 는 평균 ± 차 하 별 는 수
0.01에 독립 본 t- 스트 결과에 시하 다.
도 3 실러스 브틸리스(Bacillus subtilis) JS 균주 처리 간 담 식 생 차 나타낸
다. (A)는 실러스 브틸리스 JS 균주 처리 후 21 째 생 나타내 , (B)는 처리 5 째 4 간격
지상 생체 나타낸 것 다. 각각 는 평균 ± 차 하 , 각각 알 벳 수
0.01에 차 나타낸다.
도 4는 실러스 브틸리스(Bacillus subtilis) JS 균주에 한 상 생 진 과 비 나타낸다. (A)
는 실러스 브틸리스 JS 균주 처리 후 25 35 째 생 나타낸 것 , 실러스 브틸리스 JS 균
주 처리에 해 상 생 진 것 안 할 수 다. (B)는 실러스 브틸리스 JS 균주 처리
후 25 35 째에 수 한 상 지상 생체 나타낸 것 , 각각 는 평균 ± 차 하
수 0.01에 독립 본 t- 스트에 알 벳 시하 다.
도 5는 고 마에 실러스 브틸리스(Bacillus subtilis) JS 균주 처리 과 나타낸 것 다. 실러스
브틸리스 JS 균주 처리에 해 고 마 지상 생체 지상 가 가한 것 할 수 다. 각각
는 평균 ± 차 하 , 각각 알 벳 수 0.01에 차 나타낸다.
도 6 고 마 지상 에 한 생체 비 우량 생산에 한 실러스 브틸리스(Bacillus
subtilis) JS 균주 향 나타낸 것 다. (A)는 지상 에 한 생체 비 , (B)는 생산한 고 마
생체 별 비 나타낸다. 각각 는 평균 ± 차 하 , 각각 알 벳 수 0.01에
차 나타낸다.
도 7 내 상태에 실러스 브틸리스(Bacillus subtilis) JS 균주 병원균 어 과 나타낸다. (A)는
사리움 시스포럼(Fusarium oxysporum), (B)는 스클 티니아 스클 티 럼(Sclerotinia
sclerotiorum), (C)는 프 캡시시(Phytophthora capsici), (D)는 프 니코티아
(Phytophthora nicotianae, KACC No. 40906), (E)는 리 니아 니(Rhizoctonia solani) AG-1(IB. KACC
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No. 40110) 나타낸다. 3개 스크(paper disk) 상단 스크에는 실러스 브틸
리스 JS 균주 처리하 고, 측 하단 처리, 우측 하단에는 DH5α 처리하 다.
도 8 실러스 브틸리스(Bacillus subtilis) JS 균주가 식 체 병 항 가시키는 것 나타낸다.
(A)는 실러스 브틸리스 JS 균주 질 처리한 후, 각 에 리 니아 니 AG-1(원
) 프 니코티아 (사각 ) 하여 병 크 사한 것 나타낸다. (B)는 리 니아
니 AG-1(IB) 에 한 병 생 도 나타내 , (C)는 프 니코티아 에 한 병 크
나타낸 것 다. 각각 는 평균 ± 차 하 별 는 수 0.05에 독립 본 t- 스트
결과에 시하 다.
실시하 한 체 내
본 달 하 하여, 본 식 생 진하는 실러스 브틸리스(Bacillus subtilis)[0016]
JS 균주 공한다.
상 식 생 진 근 균(Plant Growth-Promoting Rhizobacteria, PGPR) 실러스 브틸리스(Bacillus[0017]
subtilis) JS 균주는 억새(Miscanthus) 근 양 리하 , 식 체 뿌리 지상 생체
가시키는 식 생 진 균주 하 다. 상 실러스 브틸리스(Bacillus subtilis) JS 균주
한 생 공학연 원 생 원 에 2012 8월 20 탁하 다 ( 탁 : KCTC 12264BP).
본 또한, 본 식 생 진하는 실러스 브틸리스(Bacillus subtilis) JS 균주 또는 [0018]
양액 포함하는 식 생 진 미생 생 비료 공한다.
본 에 미생 에 , 상 균주는 식 지상 뿌리 생 진시킬 수[0019]
나, 에 한 지 않는다.
본 에 미생 에 , 상 생 진시키는 식 식 포함 수 [0020]
, 직하게는 담 , 상 또는 고 마 수 나, 에 한 지 않는다.
상 미생 는 억새 근 (rhizosphere) 양 리 식 생 진하는 리아 균주 [0021]
실러스 브틸리스(Bacillus subtilis) JS 균주 포함할 수 다. 본 에 한 미생 는
액상 비료 태 수 에 량 첨가하여 가루 말 태 하거나 하여 과
립 시킬 수도 다. 그러나 그 에 특별 한 지는 않는다. 학비료 공 한 친 경 업
에 극복하 한 생 비료 가 가능하다. 또한, 실러스 브틸리스(Bacillus subtilis) JS 균
주 하여 생 진시키는 생 비료 공한다. 상 균주 양한 양액
하여 액체 상태 그 주하거나 에 침지 또는 하거나 에 코 하여 할 수
다.
본 또한, 본 실러스 브틸리스(Bacillus subtilis) JS 균주 양하는 단계 포함하는 생[0022]
비료 하는 공한다. 상 실러스 브틸리스 JS 균주 양 생 비료
당업계에 공지 할 수 , 특 에 특별 한 는 것 아니다.
본 또한, 본 실러스 브틸리스(Bacillus subtilis) JS 균주 식 또는 식 에 침지[0023]
또는 주 처리하는 단계 포함하는 식 생 진하는 공한다. 상 식 생 진하는
는 상 실러스 브틸리스 JS 균주 양한 양액 상 균주 한 미생 나
식 에 침지하거나 주, , 하여 수행할 수 다. 침지하는 경우, 양액 식 체 주변
양에 거나 또는 양액 에 담가 수 다.
본 에 해 생 진할 수 는 식 는 식 포함 수 , 직하게는[0024]
담 , 상 또는 고 마 수 나, 에 한 지 않는다.
본 에 에 , 상 식 생 진 직하게는 식 지상 뿌리 생[0025]
진하는 것 수 , 상 식 지상 생 진 고 마 지상 에 한 생체 비 가
시키는 것 수 나, 에 한 지 않는다.
하, 본 실시 에 해 상 한다. 단, 하 실시 는 본 시하는 것 뿐, 본 [0026]
등록특허 10-1475260
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내 하 실시 에 한 는 것 아니다.
[0027]
재료 [0028]
실러스 브틸리스(Bacillus subtilis) JS 균주 리 동[0029]
실러스 브틸리스(Bacillus subtilis) JS 균주는 울시립 학 실에 포트 재 억새[0030]
(Miscanthus) 근 양에 리하 , 리아 16s rRNA 염 열 하여 균주 동 하 다.
리아 16s rRNA 염 열 트사(Solgent Co., Ltd)에 뢰하여 수행하 다. 리아에
얻 16s rRNA 염 열 1407bp blastn 검색 알고리 (search algorithm,
http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi) 사 하여 Genebank 스 16s rRNA 염 열과 비
하 , 그 결과 실러스 브틸리스(Bacillus subtilis) BVC20(Genebank 등 JQ407797) 실러
스 브틸리스(Bacillus subtilis) JHDC68(Genebank 등 HM585063)과 100% 상동 보 다. 상
근 양에 리한 균주 실러스 브틸리스(Bacillus subtilis) JS 균주 하 다.
실러스 브틸리스(Bacillus subtilis) JS 균주 양[0031]
사 한 실러스 브틸리스 JS 균주 양 양한천 지(nutrient agar, NA, Difco, USA)에 도말하여 28℃[0032]
에 암 양하 다. 양 단 콜 니 30ml 양 지(nutrient broth, NB, Difco, USA)에 후, 수
양 하여 28℃에 110rpm 진탕 양하 다. 리아 도는 1 x 107cfu/ml 상태 실험에
하 , 보 할 는 -80℃에 20% 리 에 보 하 다.
실러스 브틸리스 JS 균주 식 생 진 과 ( 내실험)[0033]
실러스 브틸리스 JS 균주 식 생 진 과 사하 한 내 실험 담 (Nicotiana tabacum cv.[0034]
Xanthi) 사 하여 수행하 다. 담 70% 에탄 에 30 , 1% 차아염 산나트 (sodium
hypochlorite)에 2 간 균 처리한 후, 수 하여 4 척하 다. 균 담 는 1/2 강도(
half strength) MS 지가 들어 는 I-플 트( 할 플 트) 또는 티칼 플 트(vertical
plate) 한쪽 에 하 다. I-플 트 경우 한지 7 후, 담 가 없는 편 지에 실러
스 브틸리스 JS 균주 50㎕ 하 , 수 또는 균 DH5α 균주 동량 처리하 다.
티칼 플 트 한 경우에는 플 트 상단 에 하 , 후 7 째에 플 트 하
단 에 균주 처리하 다. 균주 처리한 플 트는 하여 26℃에 16시간 건 8시간 암 건하
에 양하 담 생 찰하 다.
실러스 브틸리스 JS 균주 식 생 진 과 (포 실험)[0035]
실러스 브틸리스 JS 균주 식 생 진 과 사하 한 포 실험 상 고 마 상[0036]
수행하 다. 실험에 한 상 는 50공 플러그 에 하여 본엽 나 직 10
사 하 다. 실러스 브틸리스 JS 균주 처리는 1 x 108cfu/ml 도 양 리아 양액 250ml 1:3
비 하여 사 하 다. 양액 1L 플 스틱 상 에 고, 10 상 플러
그 리아 양액과 직 하지 않도 상 닥에 5cm 가 도 치하 다. 리아
양액 5 간격 체하 , 1/2 강도 NB 지 사 하 다. 후 25 35 째에 상
지상 생체 측 하여, 생 지 하 다.
고 마 상 한 실러스 브틸리스 JS 균주 실험 고 마 에 수행하 다. 고 마 [0037]
는 4m2
에 약 400개 순 고 마 심었 , 2개 복 간 수행하 다. 각 처리 간 처리에
상 향 없애 해 2m 거리 우고 었다. 실러스 브틸리스 JS 균주 처리는 1 x
108cfu/ml 도 양 리아 양액 1:100(JS100) 1:500(JS500) 한 후, 고 마
식 직후 식 후 20 째에 2 처리하 다. , 키 산 + 리고당( 1:200)
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Excalibur gold(Advanced Biological Marketing, USA, 1:10,000) 사 하 다. 고 마 식 후 33
째에 고 마 순 수 하여 지상 생체 지상 등 사하여 생 지 하 다.
실러스 브틸리스 JS 균주 병원균 어 과 [0038]
실러스 브틸리스 JS 균주 항균 트리 쉬 내에 JS 균주 병원균 동시에 양하여 병[0039]
원균 생 사한 내실험 담 식 체에 병원균 하여 병 생 도 사한 시험 통
해 수행하 다.
내실험에 실러스 브틸리스 JS 균주 항균 사리움 시스포럼(Fusarium oxysporum), 스클[0040]
티니아 스클 티 럼(Sclerotinia sclerotiorum), 프 캡시시(Phytophthora capsici), 리 니아
니(Rhizoctonia solani) AG-1(IB. KACC No. 40110) 프 니코티아 (Phytophthora nicotianae,
KACC No. 40906) 균주 상 수행하 다. 해 사리움 시스포럼, 스클 티니아 스클 티
럼, 프 캡시시 리 니아 니 AG-1 균주는 감 한천 지(potato dextrose agar, PDA,
Difco, USA)에 25℃에 12시간 건 12시간 암 건하에 양하 고, 프 니코티아 균주는
V8 주스 아가(juice agar) 지(200ml V8 juice, 15g agar, 1.5g CaCO3 in 1L dH2O)에 25℃에 12시간
건 12시간 암 건하에 양하 다.
양한 다 곰 병원 균주는 각각 PDA가 들어 는 100mm 지 트리 쉬 앙에 하 고, 25[0041]
℃에 균사 하게 하 다. 6시간 후에 3개 스크(8mm 지 ) 트리 쉬 가 리에 1cm
어진 곳에 치시켜 실러스 브틸리스 JS 균주 DH5α 탁액 30㎕씩 각각 스크 에
었다. 나 지 하나 스크는 처리하지 않 상태 지하여 사 하 다. 트리 쉬는
25℃에 12시간 건 12시간 암 건 하에 7 동안 트리 쉬 가 리에 병원균 균사가 닿
지 양하 다.
담 식 체 실험 담 병원균 곰 리 니아 니 AG-1 프 니코티아 [0042]
상 수행하 , 각각 PDA 지 V8 주스 아가 지에 양한 후 담 에 하 다. 병원균
하 에 담 식 체(Nicotiana tabacum ‘Xanthi') 실러스 브틸리스 JS 균주가 담 트리 쉬
36L 크 플 스틱 에 고, 26℃에 16시간 건 8시간 암 건하에 4 간 공동 양하
다. 그 후, 3mm 지 균사가 포함 지 블럭 에 치하여 하 다. 3 후, 병 병도는
병 크 평가하 다.
실시 1. 실러스 브틸리스(Bacillus subtilis) JS 균주 리 동[0043]
실러스 브틸리스(Bacillus subtilis) JS 균주는 억새(Miscanthus) 근 양에 리하 , 리아[0044]
16s rRNA 염 열 하여 균주 동 하 다. 리아 16s rRNA 염 열 결과 실러스
브틸리스(Bacillus subtilis) BVC20(Genebank 등 JQ407797) 실러스 브틸리스(Bacillus subtilis)
JHDC68(Genebank 등 HM585063)과 100% 상동 보 다. 상 근 양에 리한 균주 실
러스 브틸리스(Bacillus subtilis) JS 균주 하 다(도 1).
실시 2. 실러스 브틸리스 JS 균주 식 생 진 과 ( 내실험)[0045]
실러스 브틸리스 JS 균주 식 생 진 실험 티칼 스퀘어 플 트 I-플 트 사 하여 수행[0046]
하 다.
도 2A에 나타낸 같 , 티칼 스퀘어 플 트 한 실험에 , 실러스 브틸리스 JS 균주는 뚜 한[0047]
생 진 과 나타냈다. 실러스 브틸리스 JS 균주가 처리 담 는 처리 8 째에 에 비해
약 2.6 가 지상 생체 보 , 뿌리 생 역시 진 어 측근 근 가가 찰 었다. 주
근 는 에 비해 약 20% 가한 것 나타나, 실러스 브틸리스 JS 균주가 지상 지하
생 진하는 것 하 다.
I-플 트 한 실험에 도 담 지상 생 실러스 브틸리스 JS 균주 처리 후 8 째에 MS 지[0048]
만 사 한 경우에 비해 약 2 도 생 진시키는 습 나타냈다(도 2B). 특 I-플 트는 간 막
등록특허 10-1475260
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고 식 과 리아 사 에 는 질만 동할 수 에 실러스 브틸리스 JS 균주 식
생 진 과는 JS 균주가 생시키는 질과 것 단 다. 도 3A에 나타낸 같 I-
플 트 하여 실러스 브틸리스 JS 균주 처리 후 생 찰한 결과, 수 균 DH5α 처리
에 비해 실러스 브틸리스 JS 균주 처리 에 약 2 도 생 가 것 하 다. 또한, I-플
트 하여 실러스 브틸리스 JS 균주 처리 후 5 째 4 간격 담 생 사한 실
험에 , 실러스 브틸리스 JS 균주 생 진 과는 처리 5 째 나타났 , 처리 13 째에는
사 한 수 균 DH5α 처리 비 해 3.5 생체 보여 뛰어난 생 진 과
하 다(도 3B).
실시 3. 실러스 브틸리스 JS 균주 식 생 진 과 (포 실험)[0049]
플러그 에 생 시킨 상 에 실러스 브틸리스 JS 균주 처리하고, 처리 후 25 , 35 째에 수 하여[0050]
지상 게 측 하 다. 도 4A는 실러스 브틸리스 JS 균주 처리 후 25 35 째 생 나타낸
것 고, 도 4B는 실러스 브틸리스 JS 균주 처리 후 25 35 째에 수 한 상 지상 생체 나타
낸다. 도 4에 나타낸 같 , 처리 25 35 째 생체 비 한 결과, 실러스 브틸리스 JS 균주
처리하지 않 에 비하여 처리한 상 에 생 크게 진 었 할 수 었다.
실러스 브틸리스 JS 균주 처리한 고 마 지상 는 수, 키 산 Excalibur gold 사 한 처[0051]
리 에 비해 가 보 고, 고 마 지상 게 역시 실러스 브틸리스 JS 균주 처리하지 않 식 에
비해 26% 도 가 것 나타났다(도 5). 특 실러스 브틸리스 JS 균주 처리한 고 마 에 지
상 에 비해 생체 가가 눈에 게 나타났 , 에 지상 에 한 생체 비
식 에 비 하여 약 25% 도 았다(도 6). 도 6A는 지상 에 한 생체 비 , 도 6B는 생산한
고 마 생체 별 비 나타낸다. 고 마 에 실러스 브틸리스 JS 균주 처리는 우량 생산
에도 여 하 , 특 약하고 ( 게 10g 하) 생산 비 46%에 28% 감 하 , 비
큰 ( 게 15g 상) 생산 비 21%에 32% 가하 다.
실시 4. 실러스 브틸리스 JS 균주 병원균 어 과 [0052]
다 양 병원균 리 니아 니(Rhizoctonia solani) AG-1, 프 니코티아[0053]
(Phytophthora nicotianae, KACC No.40906), 스클 티니아 스클 티 럼(Sclerotinia sclerotiorum),
프 캡시시(Phytophthora capsici), 사리움 시스포럼(Fusarium oxysporum)에 한 실러스 브틸
리스 JS 균주 항균 사하 다. 내 실험에 실러스 브틸리스 JS 균주는 병원 곰 균사
해하는 과 보 다. 그러나 처리하지 않 간 DH5a 처리 간에 는 억 역 나타나지 않
았다. 특 , 실러스 브틸리스 JS 균주는 프 캡시시 스클 티니아 스클 티 럼 균주 생
억 에 과 었 , 리 니아 니 AG-1 사리움 시스포럼 균사는 실러스 브틸리스 JS
균주에 해 생 지연 었다. 상 결과는 실러스 브틸리스 JS 균주 생산 질에 하여 병원균
생 억 다는 것 나타낸다(도 7).
실러스 브틸리스 JS 균주에 한 식 체 병 항 과는 담 식 체에 하여 수행하 , 역[0054]
병 하는 프 니코티아 담 뿌리 병 하는 리 니아 니 AG-1 상 실
험 수행하 다. 담 식 체는 실러스 브틸리스 JS 질 4 동안 처리하고 2 병원균
하 다. 병도는 3 후 했 병 크 평가하 다. 도 8A에 나타낸
같 , 프 니코티아 리 니아 니 실러스 브틸리스 JS 균주 처리한 담 에
에 비해 병 크 가 았다. 병 크 는 리 니아 니 AG-1 에 실러스 브틸리스
JS 균주 처리에 해 약 30% 도 감 하 (도 8B), 프 니코티아 에 는 약 25% 도 감
한 것 보아(도 8C), 실러스 브틸리스 JS 균주 처리에 해 식 병 항 가 것 하
다.
수탁
[0055]
탁 : 한 생 공학연 원
등록특허 10-1475260
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수탁 : KCTC12264BP
수탁 : 20120820
도
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도 2
등록특허 10-1475260
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도 3
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도 7
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도 8
등록특허 10-1475260
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