Embed Size (px)
Citation preview
V Y P R A C O V A L I
T E R E Z A D V O Ř Aacute K O V Aacute J I N D Ř I C H Š M Iacute D
Zkouška inhibice růstu řas
Porovnaacutevaacuteme
ČSN EN 28692 Zkouška inhibice růstu
sladkovodniacutech řas Scenedesmus subspicatus a Senastrum capricornutum
NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008 sekce C3 Zkouška inhibice růstu řas
Popis zkoušky
Ciacutel stanovit uacutečinky laacutetky na růst jednobuněčnyacutech
zelenyacutech řas Podstata zkoušky Exponenciaacutelně rostouciacute kultury
vybranyacutech zelenyacutech řas jsou po několik generaciacute vystaveny za definovanyacutech podmiacutenek různyacutem koncentraciacutem zkoušeneacute laacutetky
Kultivace 72 hodin Měřeniacute hustoty buněk minimaacutelně každyacutech 24 hodin
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Neprovaacutediacute se Koncentrace 100 mgl nebo odpoviacutedajiacuteciacute rozpustnosti laacutetky
Ciacutel prokaacutezat že EC50 je vyššiacute než tato koncentrace
Minimaacutelně 3x se stejnyacutem počtem kontrol
Stanoveniacute biomasy i růstoveacute rychlosti
Pokles oproti kontrole o 25 a viacutece rarr provedeniacute uacuteplneacute zkoušky
Limitniacute zkouška
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Doporučeneacute organismy Selenastrum
capricornutum např 8681 SAG ATCC 22662 nebo CCAP 2784
Scenedesmus subspicatus např 8681 SAG ATCC 22662 nebo CCAP 2784
Rychle rostouciacute druhy přednostně Selenastrum
capricornutum např ATCC 22662 nebo CCAP 2784
Scenedesmus subspicatus např 8681 SAG
Jineacute musiacute byacutet uvedeny ve zpraacutevě
Testovaciacute organismy
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Kvalitniacute destilovanaacute nebo deionizovanaacute
Destilačniacute přiacutestroj bez měděnyacutech čaacutestiacute
4 zaacutesobniacute roztoky
Kvalitniacute destilovanaacute nebo deionizovanaacute voda s vodivostiacute menšiacute než 5 μScm
Destilačniacute přiacutestroj bez měděnyacutech čaacutestiacute
4 zaacutesobniacute roztoky Sterilizace membraacutenovou
filtraciacute nebo v autoklaacutevu pH přibližně 8
Zkušebniacute meacutedium
Zaacutesobniacute roztoky
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Teplota 23degC plusmn 2degC Staacuteleacute a rovnoměrneacute
osvětleniacute - 400-700 nm
bull Intenzita 60-120 μE mndash2s (35 ndash 70 times 1018 fotonů mndash2s) při měřeniacute v rozsahu 400ndash700 nm
bull 6 000ndash10 000 lx
Teplota 21-25degC plusmn 2degC Staacuteleacute a rovnoměrneacute
osvětleniacute - 400-700 nm
bull Intenzita 60-120 μE mndash2s (35 ndash 70 times 1018 fotonů mndash2s) při měřeniacute v rozsahu 400ndash700 nm
bull 6 000ndash10 000 lx
Kultivačniacute zařiacutezeniacute
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Zaacutesobniacute roztoky přiacuteprava rozpuštěniacutem laacutetky v deionizovaneacute vodě nebo kvalitniacute destilovaneacute
Sterilizace zaacutesobniacutech roztoků přes membraacutenovyacute filtr (02 microm) nebo v autoklaacutevu při 120degC po 15 minut
Uacuteprava pH (při jeho vyacuteraznyacutech změnaacutech) na pH řediacuteciacute vody pomociacute HCl a NaOH
Zaacutesobniacute roztoky přiacuteprava rozpuštěniacutem laacutetky v deionizovaneacute vodě nebo kvalitniacute destilovaneacute s vodivostiacute menšiacute než 5 μScm
Koncentrace pomocnyacutech laacutetek (org rozpouštědla emulgaacutetory dispergaacutetory) minimaacutelniacute ne viacutec než 100 mgl meacutedia
Uacuteprava pH (při jeho vyacuteraznyacutech změnaacutech) na pH řediacuteciacute vody pomociacute HCl a NaOH
Činidla
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Přiacutemeacute počiacutetaacuteniacute pomociacute počiacutetače čaacutestic nebo mikroskopem s počiacutetaciacute komůrkou
Nepřiacutemeacute počiacutetaacuteniacute za předpokladu dostatečneacute citlivosti (10000 buněk na 1 ml) a prokaacutezaneacute dobreacute korelaci s hustotou buněk mohou byacutet použity i jineacute postupy (fotometrie turbidimetrie spektrofotometrie)
Přiacutemeacute počiacutetaacuteniacute živyacutech buněk např pod mikroskopem s počiacutetaciacutemi komůrkami
bull Za předpokladu dostatečneacute citlivosti a prokaacutezaneacute dobreacute korelace s buněčnou hustotou mohou byacutet použity i jineacute postupy (fotometrie turbidimetriehellip)
Měřeniacute hustoty
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Orientačniacute zkoušky rarr koncentračniacute rozmeziacute
Objem inokula by měl byacutet takovyacute aby hustota buněk byla cca 104 buněkml
Koncentračniacute řada by měla obsahovat 4 ndash 5 koncentraciacute od 10 ndash 90 inhibice růstu
Orientačniacute zkoušky rarr koncentračniacute rozmeziacute
Počaacutetečniacute hustota cca 104 buněkml
Geometrickaacute řada nejmeacuteně 5 koncentraciacute Nejnižšiacute žaacutednyacute
pozorovatelnyacute činek Nejvyššiacute omezeniacute růstu
nejmeacuteně o 50
Zkušebniacute postup
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
3 opakovaacuteniacute pro každou koncentraci
6 stejnyacutech kontrolniacutech vzorků bez laacutetky
3 opakovaacuteniacute pro každou koncentraci
3 kontroly bez laacutetky 3 kontroly s pomocnou
laacutetkou
Zkušebniacute postup
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Přidaacuteniacute zkoušeneacute laacutetky k prekultuře řas
V kultivačniacutem zařiacutezeniacute třepaacuteniacute miacutechaacuteniacute nebo probublaacutevaacuteniacute
Stanoveniacute hustoty po 24 48 a 72 hodinaacutech
Měřeniacute pH na začaacutetku a po 72 hodinaacutech nemaacute se měnit o viacutec než 15
Přidaacuteniacute zkoušeneacute laacutetky k prekultuře řas
V kultivačniacutem zařiacutezeniacute třepaacuteniacute miacutechaacuteniacute nebo probublaacutevaacuteniacute
Stanoveniacute hustoty po 24 48 a 72 hodinaacutech
Jako blank filtrovaneacute meacutedium
Měřeniacute pH na začaacutetku a po 72 hodinaacutech nemaacute se měnit o viacutec než 15
Provedeniacute zkoušky
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Pro každou zkoušenou koncentraci a růstovyacute vzorek se sestrojiacute růstovaacute křivka v podobě grafu logaritmu středniacute hodnoty buněk v zaacutevislosti na čase
Vypočte se inhibice v procentech Vyacutepočtem plochy pod růstovou křivkou
(integraacutel biomasy) Vyacutepočtem růstoveacute rychlosti
EC50 se určiacute sestaveniacutem tabulky a sestrojeniacutem růstoveacuteho grafu a od oka proloženiacutem přiacutemky
NOEC
EC50 pro každyacute čas měřeniacute Z růstoveacute křivky (hustota
buněk x čas) Z grafu sniacuteženiacute specifickeacute
růstoveacute rychlosti proti logaritmu koncentrace
NOEC
Vyhodnoceniacute
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Hustota buněk v kontrole se zvyacutešiacute za 3 dny alespoň 16x
pH v kontrole nesmiacute změnit svoji hodnotu o viacutece než 15 jednotky
Hustota buněk v kontrole se zvyacutešiacute za 3 dny alespoň 16x
Koncentrace zkoušeneacute laacutetky nesmiacute klesnout pod 80 původniacute hodnoty
Kriteacuteria jakosti
Zaacutevěr
Parametry zkoušky se v obou porovnaacutevanyacutech dokumentech vyacuterazně nelišiacute rozdiacutely jsou většinou minimaacutelniacute
Hlavniacutem rozdiacutely Nařiacutezeniacute komise (ES) č 4402008 povoluje před samotnou
zkoušku zařadit provedeniacute limitniacute zkoušky Lišiacute se kriteacuteria jakosti Lišiacute se požadavky na koncentračniacute řadu
Děkujeme za pozornost
Porovnaacutevaacuteme
ČSN EN 28692 Zkouška inhibice růstu
sladkovodniacutech řas Scenedesmus subspicatus a Senastrum capricornutum
NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008 sekce C3 Zkouška inhibice růstu řas
Popis zkoušky
Ciacutel stanovit uacutečinky laacutetky na růst jednobuněčnyacutech
zelenyacutech řas Podstata zkoušky Exponenciaacutelně rostouciacute kultury
vybranyacutech zelenyacutech řas jsou po několik generaciacute vystaveny za definovanyacutech podmiacutenek různyacutem koncentraciacutem zkoušeneacute laacutetky
Kultivace 72 hodin Měřeniacute hustoty buněk minimaacutelně každyacutech 24 hodin
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Neprovaacutediacute se Koncentrace 100 mgl nebo odpoviacutedajiacuteciacute rozpustnosti laacutetky
Ciacutel prokaacutezat že EC50 je vyššiacute než tato koncentrace
Minimaacutelně 3x se stejnyacutem počtem kontrol
Stanoveniacute biomasy i růstoveacute rychlosti
Pokles oproti kontrole o 25 a viacutece rarr provedeniacute uacuteplneacute zkoušky
Limitniacute zkouška
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Doporučeneacute organismy Selenastrum
capricornutum např 8681 SAG ATCC 22662 nebo CCAP 2784
Scenedesmus subspicatus např 8681 SAG ATCC 22662 nebo CCAP 2784
Rychle rostouciacute druhy přednostně Selenastrum
capricornutum např ATCC 22662 nebo CCAP 2784
Scenedesmus subspicatus např 8681 SAG
Jineacute musiacute byacutet uvedeny ve zpraacutevě
Testovaciacute organismy
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Kvalitniacute destilovanaacute nebo deionizovanaacute
Destilačniacute přiacutestroj bez měděnyacutech čaacutestiacute
4 zaacutesobniacute roztoky
Kvalitniacute destilovanaacute nebo deionizovanaacute voda s vodivostiacute menšiacute než 5 μScm
Destilačniacute přiacutestroj bez měděnyacutech čaacutestiacute
4 zaacutesobniacute roztoky Sterilizace membraacutenovou
filtraciacute nebo v autoklaacutevu pH přibližně 8
Zkušebniacute meacutedium
Zaacutesobniacute roztoky
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Teplota 23degC plusmn 2degC Staacuteleacute a rovnoměrneacute
osvětleniacute - 400-700 nm
bull Intenzita 60-120 μE mndash2s (35 ndash 70 times 1018 fotonů mndash2s) při měřeniacute v rozsahu 400ndash700 nm
bull 6 000ndash10 000 lx
Teplota 21-25degC plusmn 2degC Staacuteleacute a rovnoměrneacute
osvětleniacute - 400-700 nm
bull Intenzita 60-120 μE mndash2s (35 ndash 70 times 1018 fotonů mndash2s) při měřeniacute v rozsahu 400ndash700 nm
bull 6 000ndash10 000 lx
Kultivačniacute zařiacutezeniacute
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Zaacutesobniacute roztoky přiacuteprava rozpuštěniacutem laacutetky v deionizovaneacute vodě nebo kvalitniacute destilovaneacute
Sterilizace zaacutesobniacutech roztoků přes membraacutenovyacute filtr (02 microm) nebo v autoklaacutevu při 120degC po 15 minut
Uacuteprava pH (při jeho vyacuteraznyacutech změnaacutech) na pH řediacuteciacute vody pomociacute HCl a NaOH
Zaacutesobniacute roztoky přiacuteprava rozpuštěniacutem laacutetky v deionizovaneacute vodě nebo kvalitniacute destilovaneacute s vodivostiacute menšiacute než 5 μScm
Koncentrace pomocnyacutech laacutetek (org rozpouštědla emulgaacutetory dispergaacutetory) minimaacutelniacute ne viacutec než 100 mgl meacutedia
Uacuteprava pH (při jeho vyacuteraznyacutech změnaacutech) na pH řediacuteciacute vody pomociacute HCl a NaOH
Činidla
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Přiacutemeacute počiacutetaacuteniacute pomociacute počiacutetače čaacutestic nebo mikroskopem s počiacutetaciacute komůrkou
Nepřiacutemeacute počiacutetaacuteniacute za předpokladu dostatečneacute citlivosti (10000 buněk na 1 ml) a prokaacutezaneacute dobreacute korelaci s hustotou buněk mohou byacutet použity i jineacute postupy (fotometrie turbidimetrie spektrofotometrie)
Přiacutemeacute počiacutetaacuteniacute živyacutech buněk např pod mikroskopem s počiacutetaciacutemi komůrkami
bull Za předpokladu dostatečneacute citlivosti a prokaacutezaneacute dobreacute korelace s buněčnou hustotou mohou byacutet použity i jineacute postupy (fotometrie turbidimetriehellip)
Měřeniacute hustoty
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Orientačniacute zkoušky rarr koncentračniacute rozmeziacute
Objem inokula by měl byacutet takovyacute aby hustota buněk byla cca 104 buněkml
Koncentračniacute řada by měla obsahovat 4 ndash 5 koncentraciacute od 10 ndash 90 inhibice růstu
Orientačniacute zkoušky rarr koncentračniacute rozmeziacute
Počaacutetečniacute hustota cca 104 buněkml
Geometrickaacute řada nejmeacuteně 5 koncentraciacute Nejnižšiacute žaacutednyacute
pozorovatelnyacute činek Nejvyššiacute omezeniacute růstu
nejmeacuteně o 50
Zkušebniacute postup
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
3 opakovaacuteniacute pro každou koncentraci
6 stejnyacutech kontrolniacutech vzorků bez laacutetky
3 opakovaacuteniacute pro každou koncentraci
3 kontroly bez laacutetky 3 kontroly s pomocnou
laacutetkou
Zkušebniacute postup
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Přidaacuteniacute zkoušeneacute laacutetky k prekultuře řas
V kultivačniacutem zařiacutezeniacute třepaacuteniacute miacutechaacuteniacute nebo probublaacutevaacuteniacute
Stanoveniacute hustoty po 24 48 a 72 hodinaacutech
Měřeniacute pH na začaacutetku a po 72 hodinaacutech nemaacute se měnit o viacutec než 15
Přidaacuteniacute zkoušeneacute laacutetky k prekultuře řas
V kultivačniacutem zařiacutezeniacute třepaacuteniacute miacutechaacuteniacute nebo probublaacutevaacuteniacute
Stanoveniacute hustoty po 24 48 a 72 hodinaacutech
Jako blank filtrovaneacute meacutedium
Měřeniacute pH na začaacutetku a po 72 hodinaacutech nemaacute se měnit o viacutec než 15
Provedeniacute zkoušky
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Pro každou zkoušenou koncentraci a růstovyacute vzorek se sestrojiacute růstovaacute křivka v podobě grafu logaritmu středniacute hodnoty buněk v zaacutevislosti na čase
Vypočte se inhibice v procentech Vyacutepočtem plochy pod růstovou křivkou
(integraacutel biomasy) Vyacutepočtem růstoveacute rychlosti
EC50 se určiacute sestaveniacutem tabulky a sestrojeniacutem růstoveacuteho grafu a od oka proloženiacutem přiacutemky
NOEC
EC50 pro každyacute čas měřeniacute Z růstoveacute křivky (hustota
buněk x čas) Z grafu sniacuteženiacute specifickeacute
růstoveacute rychlosti proti logaritmu koncentrace
NOEC
Vyhodnoceniacute
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Hustota buněk v kontrole se zvyacutešiacute za 3 dny alespoň 16x
pH v kontrole nesmiacute změnit svoji hodnotu o viacutece než 15 jednotky
Hustota buněk v kontrole se zvyacutešiacute za 3 dny alespoň 16x
Koncentrace zkoušeneacute laacutetky nesmiacute klesnout pod 80 původniacute hodnoty
Kriteacuteria jakosti
Zaacutevěr
Parametry zkoušky se v obou porovnaacutevanyacutech dokumentech vyacuterazně nelišiacute rozdiacutely jsou většinou minimaacutelniacute
Hlavniacutem rozdiacutely Nařiacutezeniacute komise (ES) č 4402008 povoluje před samotnou
zkoušku zařadit provedeniacute limitniacute zkoušky Lišiacute se kriteacuteria jakosti Lišiacute se požadavky na koncentračniacute řadu
Děkujeme za pozornost
Popis zkoušky
Ciacutel stanovit uacutečinky laacutetky na růst jednobuněčnyacutech
zelenyacutech řas Podstata zkoušky Exponenciaacutelně rostouciacute kultury
vybranyacutech zelenyacutech řas jsou po několik generaciacute vystaveny za definovanyacutech podmiacutenek různyacutem koncentraciacutem zkoušeneacute laacutetky
Kultivace 72 hodin Měřeniacute hustoty buněk minimaacutelně každyacutech 24 hodin
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Neprovaacutediacute se Koncentrace 100 mgl nebo odpoviacutedajiacuteciacute rozpustnosti laacutetky
Ciacutel prokaacutezat že EC50 je vyššiacute než tato koncentrace
Minimaacutelně 3x se stejnyacutem počtem kontrol
Stanoveniacute biomasy i růstoveacute rychlosti
Pokles oproti kontrole o 25 a viacutece rarr provedeniacute uacuteplneacute zkoušky
Limitniacute zkouška
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Doporučeneacute organismy Selenastrum
capricornutum např 8681 SAG ATCC 22662 nebo CCAP 2784
Scenedesmus subspicatus např 8681 SAG ATCC 22662 nebo CCAP 2784
Rychle rostouciacute druhy přednostně Selenastrum
capricornutum např ATCC 22662 nebo CCAP 2784
Scenedesmus subspicatus např 8681 SAG
Jineacute musiacute byacutet uvedeny ve zpraacutevě
Testovaciacute organismy
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Kvalitniacute destilovanaacute nebo deionizovanaacute
Destilačniacute přiacutestroj bez měděnyacutech čaacutestiacute
4 zaacutesobniacute roztoky
Kvalitniacute destilovanaacute nebo deionizovanaacute voda s vodivostiacute menšiacute než 5 μScm
Destilačniacute přiacutestroj bez měděnyacutech čaacutestiacute
4 zaacutesobniacute roztoky Sterilizace membraacutenovou
filtraciacute nebo v autoklaacutevu pH přibližně 8
Zkušebniacute meacutedium
Zaacutesobniacute roztoky
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Teplota 23degC plusmn 2degC Staacuteleacute a rovnoměrneacute
osvětleniacute - 400-700 nm
bull Intenzita 60-120 μE mndash2s (35 ndash 70 times 1018 fotonů mndash2s) při měřeniacute v rozsahu 400ndash700 nm
bull 6 000ndash10 000 lx
Teplota 21-25degC plusmn 2degC Staacuteleacute a rovnoměrneacute
osvětleniacute - 400-700 nm
bull Intenzita 60-120 μE mndash2s (35 ndash 70 times 1018 fotonů mndash2s) při měřeniacute v rozsahu 400ndash700 nm
bull 6 000ndash10 000 lx
Kultivačniacute zařiacutezeniacute
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Zaacutesobniacute roztoky přiacuteprava rozpuštěniacutem laacutetky v deionizovaneacute vodě nebo kvalitniacute destilovaneacute
Sterilizace zaacutesobniacutech roztoků přes membraacutenovyacute filtr (02 microm) nebo v autoklaacutevu při 120degC po 15 minut
Uacuteprava pH (při jeho vyacuteraznyacutech změnaacutech) na pH řediacuteciacute vody pomociacute HCl a NaOH
Zaacutesobniacute roztoky přiacuteprava rozpuštěniacutem laacutetky v deionizovaneacute vodě nebo kvalitniacute destilovaneacute s vodivostiacute menšiacute než 5 μScm
Koncentrace pomocnyacutech laacutetek (org rozpouštědla emulgaacutetory dispergaacutetory) minimaacutelniacute ne viacutec než 100 mgl meacutedia
Uacuteprava pH (při jeho vyacuteraznyacutech změnaacutech) na pH řediacuteciacute vody pomociacute HCl a NaOH
Činidla
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Přiacutemeacute počiacutetaacuteniacute pomociacute počiacutetače čaacutestic nebo mikroskopem s počiacutetaciacute komůrkou
Nepřiacutemeacute počiacutetaacuteniacute za předpokladu dostatečneacute citlivosti (10000 buněk na 1 ml) a prokaacutezaneacute dobreacute korelaci s hustotou buněk mohou byacutet použity i jineacute postupy (fotometrie turbidimetrie spektrofotometrie)
Přiacutemeacute počiacutetaacuteniacute živyacutech buněk např pod mikroskopem s počiacutetaciacutemi komůrkami
bull Za předpokladu dostatečneacute citlivosti a prokaacutezaneacute dobreacute korelace s buněčnou hustotou mohou byacutet použity i jineacute postupy (fotometrie turbidimetriehellip)
Měřeniacute hustoty
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Orientačniacute zkoušky rarr koncentračniacute rozmeziacute
Objem inokula by měl byacutet takovyacute aby hustota buněk byla cca 104 buněkml
Koncentračniacute řada by měla obsahovat 4 ndash 5 koncentraciacute od 10 ndash 90 inhibice růstu
Orientačniacute zkoušky rarr koncentračniacute rozmeziacute
Počaacutetečniacute hustota cca 104 buněkml
Geometrickaacute řada nejmeacuteně 5 koncentraciacute Nejnižšiacute žaacutednyacute
pozorovatelnyacute činek Nejvyššiacute omezeniacute růstu
nejmeacuteně o 50
Zkušebniacute postup
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
3 opakovaacuteniacute pro každou koncentraci
6 stejnyacutech kontrolniacutech vzorků bez laacutetky
3 opakovaacuteniacute pro každou koncentraci
3 kontroly bez laacutetky 3 kontroly s pomocnou
laacutetkou
Zkušebniacute postup
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Přidaacuteniacute zkoušeneacute laacutetky k prekultuře řas
V kultivačniacutem zařiacutezeniacute třepaacuteniacute miacutechaacuteniacute nebo probublaacutevaacuteniacute
Stanoveniacute hustoty po 24 48 a 72 hodinaacutech
Měřeniacute pH na začaacutetku a po 72 hodinaacutech nemaacute se měnit o viacutec než 15
Přidaacuteniacute zkoušeneacute laacutetky k prekultuře řas
V kultivačniacutem zařiacutezeniacute třepaacuteniacute miacutechaacuteniacute nebo probublaacutevaacuteniacute
Stanoveniacute hustoty po 24 48 a 72 hodinaacutech
Jako blank filtrovaneacute meacutedium
Měřeniacute pH na začaacutetku a po 72 hodinaacutech nemaacute se měnit o viacutec než 15
Provedeniacute zkoušky
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Pro každou zkoušenou koncentraci a růstovyacute vzorek se sestrojiacute růstovaacute křivka v podobě grafu logaritmu středniacute hodnoty buněk v zaacutevislosti na čase
Vypočte se inhibice v procentech Vyacutepočtem plochy pod růstovou křivkou
(integraacutel biomasy) Vyacutepočtem růstoveacute rychlosti
EC50 se určiacute sestaveniacutem tabulky a sestrojeniacutem růstoveacuteho grafu a od oka proloženiacutem přiacutemky
NOEC
EC50 pro každyacute čas měřeniacute Z růstoveacute křivky (hustota
buněk x čas) Z grafu sniacuteženiacute specifickeacute
růstoveacute rychlosti proti logaritmu koncentrace
NOEC
Vyhodnoceniacute
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Hustota buněk v kontrole se zvyacutešiacute za 3 dny alespoň 16x
pH v kontrole nesmiacute změnit svoji hodnotu o viacutece než 15 jednotky
Hustota buněk v kontrole se zvyacutešiacute za 3 dny alespoň 16x
Koncentrace zkoušeneacute laacutetky nesmiacute klesnout pod 80 původniacute hodnoty
Kriteacuteria jakosti
Zaacutevěr
Parametry zkoušky se v obou porovnaacutevanyacutech dokumentech vyacuterazně nelišiacute rozdiacutely jsou většinou minimaacutelniacute
Hlavniacutem rozdiacutely Nařiacutezeniacute komise (ES) č 4402008 povoluje před samotnou
zkoušku zařadit provedeniacute limitniacute zkoušky Lišiacute se kriteacuteria jakosti Lišiacute se požadavky na koncentračniacute řadu
Děkujeme za pozornost
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Neprovaacutediacute se Koncentrace 100 mgl nebo odpoviacutedajiacuteciacute rozpustnosti laacutetky
Ciacutel prokaacutezat že EC50 je vyššiacute než tato koncentrace
Minimaacutelně 3x se stejnyacutem počtem kontrol
Stanoveniacute biomasy i růstoveacute rychlosti
Pokles oproti kontrole o 25 a viacutece rarr provedeniacute uacuteplneacute zkoušky
Limitniacute zkouška
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Doporučeneacute organismy Selenastrum
capricornutum např 8681 SAG ATCC 22662 nebo CCAP 2784
Scenedesmus subspicatus např 8681 SAG ATCC 22662 nebo CCAP 2784
Rychle rostouciacute druhy přednostně Selenastrum
capricornutum např ATCC 22662 nebo CCAP 2784
Scenedesmus subspicatus např 8681 SAG
Jineacute musiacute byacutet uvedeny ve zpraacutevě
Testovaciacute organismy
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Kvalitniacute destilovanaacute nebo deionizovanaacute
Destilačniacute přiacutestroj bez měděnyacutech čaacutestiacute
4 zaacutesobniacute roztoky
Kvalitniacute destilovanaacute nebo deionizovanaacute voda s vodivostiacute menšiacute než 5 μScm
Destilačniacute přiacutestroj bez měděnyacutech čaacutestiacute
4 zaacutesobniacute roztoky Sterilizace membraacutenovou
filtraciacute nebo v autoklaacutevu pH přibližně 8
Zkušebniacute meacutedium
Zaacutesobniacute roztoky
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Teplota 23degC plusmn 2degC Staacuteleacute a rovnoměrneacute
osvětleniacute - 400-700 nm
bull Intenzita 60-120 μE mndash2s (35 ndash 70 times 1018 fotonů mndash2s) při měřeniacute v rozsahu 400ndash700 nm
bull 6 000ndash10 000 lx
Teplota 21-25degC plusmn 2degC Staacuteleacute a rovnoměrneacute
osvětleniacute - 400-700 nm
bull Intenzita 60-120 μE mndash2s (35 ndash 70 times 1018 fotonů mndash2s) při měřeniacute v rozsahu 400ndash700 nm
bull 6 000ndash10 000 lx
Kultivačniacute zařiacutezeniacute
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Zaacutesobniacute roztoky přiacuteprava rozpuštěniacutem laacutetky v deionizovaneacute vodě nebo kvalitniacute destilovaneacute
Sterilizace zaacutesobniacutech roztoků přes membraacutenovyacute filtr (02 microm) nebo v autoklaacutevu při 120degC po 15 minut
Uacuteprava pH (při jeho vyacuteraznyacutech změnaacutech) na pH řediacuteciacute vody pomociacute HCl a NaOH
Zaacutesobniacute roztoky přiacuteprava rozpuštěniacutem laacutetky v deionizovaneacute vodě nebo kvalitniacute destilovaneacute s vodivostiacute menšiacute než 5 μScm
Koncentrace pomocnyacutech laacutetek (org rozpouštědla emulgaacutetory dispergaacutetory) minimaacutelniacute ne viacutec než 100 mgl meacutedia
Uacuteprava pH (při jeho vyacuteraznyacutech změnaacutech) na pH řediacuteciacute vody pomociacute HCl a NaOH
Činidla
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Přiacutemeacute počiacutetaacuteniacute pomociacute počiacutetače čaacutestic nebo mikroskopem s počiacutetaciacute komůrkou
Nepřiacutemeacute počiacutetaacuteniacute za předpokladu dostatečneacute citlivosti (10000 buněk na 1 ml) a prokaacutezaneacute dobreacute korelaci s hustotou buněk mohou byacutet použity i jineacute postupy (fotometrie turbidimetrie spektrofotometrie)
Přiacutemeacute počiacutetaacuteniacute živyacutech buněk např pod mikroskopem s počiacutetaciacutemi komůrkami
bull Za předpokladu dostatečneacute citlivosti a prokaacutezaneacute dobreacute korelace s buněčnou hustotou mohou byacutet použity i jineacute postupy (fotometrie turbidimetriehellip)
Měřeniacute hustoty
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Orientačniacute zkoušky rarr koncentračniacute rozmeziacute
Objem inokula by měl byacutet takovyacute aby hustota buněk byla cca 104 buněkml
Koncentračniacute řada by měla obsahovat 4 ndash 5 koncentraciacute od 10 ndash 90 inhibice růstu
Orientačniacute zkoušky rarr koncentračniacute rozmeziacute
Počaacutetečniacute hustota cca 104 buněkml
Geometrickaacute řada nejmeacuteně 5 koncentraciacute Nejnižšiacute žaacutednyacute
pozorovatelnyacute činek Nejvyššiacute omezeniacute růstu
nejmeacuteně o 50
Zkušebniacute postup
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
3 opakovaacuteniacute pro každou koncentraci
6 stejnyacutech kontrolniacutech vzorků bez laacutetky
3 opakovaacuteniacute pro každou koncentraci
3 kontroly bez laacutetky 3 kontroly s pomocnou
laacutetkou
Zkušebniacute postup
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Přidaacuteniacute zkoušeneacute laacutetky k prekultuře řas
V kultivačniacutem zařiacutezeniacute třepaacuteniacute miacutechaacuteniacute nebo probublaacutevaacuteniacute
Stanoveniacute hustoty po 24 48 a 72 hodinaacutech
Měřeniacute pH na začaacutetku a po 72 hodinaacutech nemaacute se měnit o viacutec než 15
Přidaacuteniacute zkoušeneacute laacutetky k prekultuře řas
V kultivačniacutem zařiacutezeniacute třepaacuteniacute miacutechaacuteniacute nebo probublaacutevaacuteniacute
Stanoveniacute hustoty po 24 48 a 72 hodinaacutech
Jako blank filtrovaneacute meacutedium
Měřeniacute pH na začaacutetku a po 72 hodinaacutech nemaacute se měnit o viacutec než 15
Provedeniacute zkoušky
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Pro každou zkoušenou koncentraci a růstovyacute vzorek se sestrojiacute růstovaacute křivka v podobě grafu logaritmu středniacute hodnoty buněk v zaacutevislosti na čase
Vypočte se inhibice v procentech Vyacutepočtem plochy pod růstovou křivkou
(integraacutel biomasy) Vyacutepočtem růstoveacute rychlosti
EC50 se určiacute sestaveniacutem tabulky a sestrojeniacutem růstoveacuteho grafu a od oka proloženiacutem přiacutemky
NOEC
EC50 pro každyacute čas měřeniacute Z růstoveacute křivky (hustota
buněk x čas) Z grafu sniacuteženiacute specifickeacute
růstoveacute rychlosti proti logaritmu koncentrace
NOEC
Vyhodnoceniacute
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Hustota buněk v kontrole se zvyacutešiacute za 3 dny alespoň 16x
pH v kontrole nesmiacute změnit svoji hodnotu o viacutece než 15 jednotky
Hustota buněk v kontrole se zvyacutešiacute za 3 dny alespoň 16x
Koncentrace zkoušeneacute laacutetky nesmiacute klesnout pod 80 původniacute hodnoty
Kriteacuteria jakosti
Zaacutevěr
Parametry zkoušky se v obou porovnaacutevanyacutech dokumentech vyacuterazně nelišiacute rozdiacutely jsou většinou minimaacutelniacute
Hlavniacutem rozdiacutely Nařiacutezeniacute komise (ES) č 4402008 povoluje před samotnou
zkoušku zařadit provedeniacute limitniacute zkoušky Lišiacute se kriteacuteria jakosti Lišiacute se požadavky na koncentračniacute řadu
Děkujeme za pozornost
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Doporučeneacute organismy Selenastrum
capricornutum např 8681 SAG ATCC 22662 nebo CCAP 2784
Scenedesmus subspicatus např 8681 SAG ATCC 22662 nebo CCAP 2784
Rychle rostouciacute druhy přednostně Selenastrum
capricornutum např ATCC 22662 nebo CCAP 2784
Scenedesmus subspicatus např 8681 SAG
Jineacute musiacute byacutet uvedeny ve zpraacutevě
Testovaciacute organismy
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Kvalitniacute destilovanaacute nebo deionizovanaacute
Destilačniacute přiacutestroj bez měděnyacutech čaacutestiacute
4 zaacutesobniacute roztoky
Kvalitniacute destilovanaacute nebo deionizovanaacute voda s vodivostiacute menšiacute než 5 μScm
Destilačniacute přiacutestroj bez měděnyacutech čaacutestiacute
4 zaacutesobniacute roztoky Sterilizace membraacutenovou
filtraciacute nebo v autoklaacutevu pH přibližně 8
Zkušebniacute meacutedium
Zaacutesobniacute roztoky
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Teplota 23degC plusmn 2degC Staacuteleacute a rovnoměrneacute
osvětleniacute - 400-700 nm
bull Intenzita 60-120 μE mndash2s (35 ndash 70 times 1018 fotonů mndash2s) při měřeniacute v rozsahu 400ndash700 nm
bull 6 000ndash10 000 lx
Teplota 21-25degC plusmn 2degC Staacuteleacute a rovnoměrneacute
osvětleniacute - 400-700 nm
bull Intenzita 60-120 μE mndash2s (35 ndash 70 times 1018 fotonů mndash2s) při měřeniacute v rozsahu 400ndash700 nm
bull 6 000ndash10 000 lx
Kultivačniacute zařiacutezeniacute
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Zaacutesobniacute roztoky přiacuteprava rozpuštěniacutem laacutetky v deionizovaneacute vodě nebo kvalitniacute destilovaneacute
Sterilizace zaacutesobniacutech roztoků přes membraacutenovyacute filtr (02 microm) nebo v autoklaacutevu při 120degC po 15 minut
Uacuteprava pH (při jeho vyacuteraznyacutech změnaacutech) na pH řediacuteciacute vody pomociacute HCl a NaOH
Zaacutesobniacute roztoky přiacuteprava rozpuštěniacutem laacutetky v deionizovaneacute vodě nebo kvalitniacute destilovaneacute s vodivostiacute menšiacute než 5 μScm
Koncentrace pomocnyacutech laacutetek (org rozpouštědla emulgaacutetory dispergaacutetory) minimaacutelniacute ne viacutec než 100 mgl meacutedia
Uacuteprava pH (při jeho vyacuteraznyacutech změnaacutech) na pH řediacuteciacute vody pomociacute HCl a NaOH
Činidla
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Přiacutemeacute počiacutetaacuteniacute pomociacute počiacutetače čaacutestic nebo mikroskopem s počiacutetaciacute komůrkou
Nepřiacutemeacute počiacutetaacuteniacute za předpokladu dostatečneacute citlivosti (10000 buněk na 1 ml) a prokaacutezaneacute dobreacute korelaci s hustotou buněk mohou byacutet použity i jineacute postupy (fotometrie turbidimetrie spektrofotometrie)
Přiacutemeacute počiacutetaacuteniacute živyacutech buněk např pod mikroskopem s počiacutetaciacutemi komůrkami
bull Za předpokladu dostatečneacute citlivosti a prokaacutezaneacute dobreacute korelace s buněčnou hustotou mohou byacutet použity i jineacute postupy (fotometrie turbidimetriehellip)
Měřeniacute hustoty
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Orientačniacute zkoušky rarr koncentračniacute rozmeziacute
Objem inokula by měl byacutet takovyacute aby hustota buněk byla cca 104 buněkml
Koncentračniacute řada by měla obsahovat 4 ndash 5 koncentraciacute od 10 ndash 90 inhibice růstu
Orientačniacute zkoušky rarr koncentračniacute rozmeziacute
Počaacutetečniacute hustota cca 104 buněkml
Geometrickaacute řada nejmeacuteně 5 koncentraciacute Nejnižšiacute žaacutednyacute
pozorovatelnyacute činek Nejvyššiacute omezeniacute růstu
nejmeacuteně o 50
Zkušebniacute postup
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
3 opakovaacuteniacute pro každou koncentraci
6 stejnyacutech kontrolniacutech vzorků bez laacutetky
3 opakovaacuteniacute pro každou koncentraci
3 kontroly bez laacutetky 3 kontroly s pomocnou
laacutetkou
Zkušebniacute postup
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Přidaacuteniacute zkoušeneacute laacutetky k prekultuře řas
V kultivačniacutem zařiacutezeniacute třepaacuteniacute miacutechaacuteniacute nebo probublaacutevaacuteniacute
Stanoveniacute hustoty po 24 48 a 72 hodinaacutech
Měřeniacute pH na začaacutetku a po 72 hodinaacutech nemaacute se měnit o viacutec než 15
Přidaacuteniacute zkoušeneacute laacutetky k prekultuře řas
V kultivačniacutem zařiacutezeniacute třepaacuteniacute miacutechaacuteniacute nebo probublaacutevaacuteniacute
Stanoveniacute hustoty po 24 48 a 72 hodinaacutech
Jako blank filtrovaneacute meacutedium
Měřeniacute pH na začaacutetku a po 72 hodinaacutech nemaacute se měnit o viacutec než 15
Provedeniacute zkoušky
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Pro každou zkoušenou koncentraci a růstovyacute vzorek se sestrojiacute růstovaacute křivka v podobě grafu logaritmu středniacute hodnoty buněk v zaacutevislosti na čase
Vypočte se inhibice v procentech Vyacutepočtem plochy pod růstovou křivkou
(integraacutel biomasy) Vyacutepočtem růstoveacute rychlosti
EC50 se určiacute sestaveniacutem tabulky a sestrojeniacutem růstoveacuteho grafu a od oka proloženiacutem přiacutemky
NOEC
EC50 pro každyacute čas měřeniacute Z růstoveacute křivky (hustota
buněk x čas) Z grafu sniacuteženiacute specifickeacute
růstoveacute rychlosti proti logaritmu koncentrace
NOEC
Vyhodnoceniacute
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Hustota buněk v kontrole se zvyacutešiacute za 3 dny alespoň 16x
pH v kontrole nesmiacute změnit svoji hodnotu o viacutece než 15 jednotky
Hustota buněk v kontrole se zvyacutešiacute za 3 dny alespoň 16x
Koncentrace zkoušeneacute laacutetky nesmiacute klesnout pod 80 původniacute hodnoty
Kriteacuteria jakosti
Zaacutevěr
Parametry zkoušky se v obou porovnaacutevanyacutech dokumentech vyacuterazně nelišiacute rozdiacutely jsou většinou minimaacutelniacute
Hlavniacutem rozdiacutely Nařiacutezeniacute komise (ES) č 4402008 povoluje před samotnou
zkoušku zařadit provedeniacute limitniacute zkoušky Lišiacute se kriteacuteria jakosti Lišiacute se požadavky na koncentračniacute řadu
Děkujeme za pozornost
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Kvalitniacute destilovanaacute nebo deionizovanaacute
Destilačniacute přiacutestroj bez měděnyacutech čaacutestiacute
4 zaacutesobniacute roztoky
Kvalitniacute destilovanaacute nebo deionizovanaacute voda s vodivostiacute menšiacute než 5 μScm
Destilačniacute přiacutestroj bez měděnyacutech čaacutestiacute
4 zaacutesobniacute roztoky Sterilizace membraacutenovou
filtraciacute nebo v autoklaacutevu pH přibližně 8
Zkušebniacute meacutedium
Zaacutesobniacute roztoky
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Teplota 23degC plusmn 2degC Staacuteleacute a rovnoměrneacute
osvětleniacute - 400-700 nm
bull Intenzita 60-120 μE mndash2s (35 ndash 70 times 1018 fotonů mndash2s) při měřeniacute v rozsahu 400ndash700 nm
bull 6 000ndash10 000 lx
Teplota 21-25degC plusmn 2degC Staacuteleacute a rovnoměrneacute
osvětleniacute - 400-700 nm
bull Intenzita 60-120 μE mndash2s (35 ndash 70 times 1018 fotonů mndash2s) při měřeniacute v rozsahu 400ndash700 nm
bull 6 000ndash10 000 lx
Kultivačniacute zařiacutezeniacute
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Zaacutesobniacute roztoky přiacuteprava rozpuštěniacutem laacutetky v deionizovaneacute vodě nebo kvalitniacute destilovaneacute
Sterilizace zaacutesobniacutech roztoků přes membraacutenovyacute filtr (02 microm) nebo v autoklaacutevu při 120degC po 15 minut
Uacuteprava pH (při jeho vyacuteraznyacutech změnaacutech) na pH řediacuteciacute vody pomociacute HCl a NaOH
Zaacutesobniacute roztoky přiacuteprava rozpuštěniacutem laacutetky v deionizovaneacute vodě nebo kvalitniacute destilovaneacute s vodivostiacute menšiacute než 5 μScm
Koncentrace pomocnyacutech laacutetek (org rozpouštědla emulgaacutetory dispergaacutetory) minimaacutelniacute ne viacutec než 100 mgl meacutedia
Uacuteprava pH (při jeho vyacuteraznyacutech změnaacutech) na pH řediacuteciacute vody pomociacute HCl a NaOH
Činidla
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Přiacutemeacute počiacutetaacuteniacute pomociacute počiacutetače čaacutestic nebo mikroskopem s počiacutetaciacute komůrkou
Nepřiacutemeacute počiacutetaacuteniacute za předpokladu dostatečneacute citlivosti (10000 buněk na 1 ml) a prokaacutezaneacute dobreacute korelaci s hustotou buněk mohou byacutet použity i jineacute postupy (fotometrie turbidimetrie spektrofotometrie)
Přiacutemeacute počiacutetaacuteniacute živyacutech buněk např pod mikroskopem s počiacutetaciacutemi komůrkami
bull Za předpokladu dostatečneacute citlivosti a prokaacutezaneacute dobreacute korelace s buněčnou hustotou mohou byacutet použity i jineacute postupy (fotometrie turbidimetriehellip)
Měřeniacute hustoty
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Orientačniacute zkoušky rarr koncentračniacute rozmeziacute
Objem inokula by měl byacutet takovyacute aby hustota buněk byla cca 104 buněkml
Koncentračniacute řada by měla obsahovat 4 ndash 5 koncentraciacute od 10 ndash 90 inhibice růstu
Orientačniacute zkoušky rarr koncentračniacute rozmeziacute
Počaacutetečniacute hustota cca 104 buněkml
Geometrickaacute řada nejmeacuteně 5 koncentraciacute Nejnižšiacute žaacutednyacute
pozorovatelnyacute činek Nejvyššiacute omezeniacute růstu
nejmeacuteně o 50
Zkušebniacute postup
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
3 opakovaacuteniacute pro každou koncentraci
6 stejnyacutech kontrolniacutech vzorků bez laacutetky
3 opakovaacuteniacute pro každou koncentraci
3 kontroly bez laacutetky 3 kontroly s pomocnou
laacutetkou
Zkušebniacute postup
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Přidaacuteniacute zkoušeneacute laacutetky k prekultuře řas
V kultivačniacutem zařiacutezeniacute třepaacuteniacute miacutechaacuteniacute nebo probublaacutevaacuteniacute
Stanoveniacute hustoty po 24 48 a 72 hodinaacutech
Měřeniacute pH na začaacutetku a po 72 hodinaacutech nemaacute se měnit o viacutec než 15
Přidaacuteniacute zkoušeneacute laacutetky k prekultuře řas
V kultivačniacutem zařiacutezeniacute třepaacuteniacute miacutechaacuteniacute nebo probublaacutevaacuteniacute
Stanoveniacute hustoty po 24 48 a 72 hodinaacutech
Jako blank filtrovaneacute meacutedium
Měřeniacute pH na začaacutetku a po 72 hodinaacutech nemaacute se měnit o viacutec než 15
Provedeniacute zkoušky
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Pro každou zkoušenou koncentraci a růstovyacute vzorek se sestrojiacute růstovaacute křivka v podobě grafu logaritmu středniacute hodnoty buněk v zaacutevislosti na čase
Vypočte se inhibice v procentech Vyacutepočtem plochy pod růstovou křivkou
(integraacutel biomasy) Vyacutepočtem růstoveacute rychlosti
EC50 se určiacute sestaveniacutem tabulky a sestrojeniacutem růstoveacuteho grafu a od oka proloženiacutem přiacutemky
NOEC
EC50 pro každyacute čas měřeniacute Z růstoveacute křivky (hustota
buněk x čas) Z grafu sniacuteženiacute specifickeacute
růstoveacute rychlosti proti logaritmu koncentrace
NOEC
Vyhodnoceniacute
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Hustota buněk v kontrole se zvyacutešiacute za 3 dny alespoň 16x
pH v kontrole nesmiacute změnit svoji hodnotu o viacutece než 15 jednotky
Hustota buněk v kontrole se zvyacutešiacute za 3 dny alespoň 16x
Koncentrace zkoušeneacute laacutetky nesmiacute klesnout pod 80 původniacute hodnoty
Kriteacuteria jakosti
Zaacutevěr
Parametry zkoušky se v obou porovnaacutevanyacutech dokumentech vyacuterazně nelišiacute rozdiacutely jsou většinou minimaacutelniacute
Hlavniacutem rozdiacutely Nařiacutezeniacute komise (ES) č 4402008 povoluje před samotnou
zkoušku zařadit provedeniacute limitniacute zkoušky Lišiacute se kriteacuteria jakosti Lišiacute se požadavky na koncentračniacute řadu
Děkujeme za pozornost
Zaacutesobniacute roztoky
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Teplota 23degC plusmn 2degC Staacuteleacute a rovnoměrneacute
osvětleniacute - 400-700 nm
bull Intenzita 60-120 μE mndash2s (35 ndash 70 times 1018 fotonů mndash2s) při měřeniacute v rozsahu 400ndash700 nm
bull 6 000ndash10 000 lx
Teplota 21-25degC plusmn 2degC Staacuteleacute a rovnoměrneacute
osvětleniacute - 400-700 nm
bull Intenzita 60-120 μE mndash2s (35 ndash 70 times 1018 fotonů mndash2s) při měřeniacute v rozsahu 400ndash700 nm
bull 6 000ndash10 000 lx
Kultivačniacute zařiacutezeniacute
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Zaacutesobniacute roztoky přiacuteprava rozpuštěniacutem laacutetky v deionizovaneacute vodě nebo kvalitniacute destilovaneacute
Sterilizace zaacutesobniacutech roztoků přes membraacutenovyacute filtr (02 microm) nebo v autoklaacutevu při 120degC po 15 minut
Uacuteprava pH (při jeho vyacuteraznyacutech změnaacutech) na pH řediacuteciacute vody pomociacute HCl a NaOH
Zaacutesobniacute roztoky přiacuteprava rozpuštěniacutem laacutetky v deionizovaneacute vodě nebo kvalitniacute destilovaneacute s vodivostiacute menšiacute než 5 μScm
Koncentrace pomocnyacutech laacutetek (org rozpouštědla emulgaacutetory dispergaacutetory) minimaacutelniacute ne viacutec než 100 mgl meacutedia
Uacuteprava pH (při jeho vyacuteraznyacutech změnaacutech) na pH řediacuteciacute vody pomociacute HCl a NaOH
Činidla
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Přiacutemeacute počiacutetaacuteniacute pomociacute počiacutetače čaacutestic nebo mikroskopem s počiacutetaciacute komůrkou
Nepřiacutemeacute počiacutetaacuteniacute za předpokladu dostatečneacute citlivosti (10000 buněk na 1 ml) a prokaacutezaneacute dobreacute korelaci s hustotou buněk mohou byacutet použity i jineacute postupy (fotometrie turbidimetrie spektrofotometrie)
Přiacutemeacute počiacutetaacuteniacute živyacutech buněk např pod mikroskopem s počiacutetaciacutemi komůrkami
bull Za předpokladu dostatečneacute citlivosti a prokaacutezaneacute dobreacute korelace s buněčnou hustotou mohou byacutet použity i jineacute postupy (fotometrie turbidimetriehellip)
Měřeniacute hustoty
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Orientačniacute zkoušky rarr koncentračniacute rozmeziacute
Objem inokula by měl byacutet takovyacute aby hustota buněk byla cca 104 buněkml
Koncentračniacute řada by měla obsahovat 4 ndash 5 koncentraciacute od 10 ndash 90 inhibice růstu
Orientačniacute zkoušky rarr koncentračniacute rozmeziacute
Počaacutetečniacute hustota cca 104 buněkml
Geometrickaacute řada nejmeacuteně 5 koncentraciacute Nejnižšiacute žaacutednyacute
pozorovatelnyacute činek Nejvyššiacute omezeniacute růstu
nejmeacuteně o 50
Zkušebniacute postup
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
3 opakovaacuteniacute pro každou koncentraci
6 stejnyacutech kontrolniacutech vzorků bez laacutetky
3 opakovaacuteniacute pro každou koncentraci
3 kontroly bez laacutetky 3 kontroly s pomocnou
laacutetkou
Zkušebniacute postup
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Přidaacuteniacute zkoušeneacute laacutetky k prekultuře řas
V kultivačniacutem zařiacutezeniacute třepaacuteniacute miacutechaacuteniacute nebo probublaacutevaacuteniacute
Stanoveniacute hustoty po 24 48 a 72 hodinaacutech
Měřeniacute pH na začaacutetku a po 72 hodinaacutech nemaacute se měnit o viacutec než 15
Přidaacuteniacute zkoušeneacute laacutetky k prekultuře řas
V kultivačniacutem zařiacutezeniacute třepaacuteniacute miacutechaacuteniacute nebo probublaacutevaacuteniacute
Stanoveniacute hustoty po 24 48 a 72 hodinaacutech
Jako blank filtrovaneacute meacutedium
Měřeniacute pH na začaacutetku a po 72 hodinaacutech nemaacute se měnit o viacutec než 15
Provedeniacute zkoušky
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Pro každou zkoušenou koncentraci a růstovyacute vzorek se sestrojiacute růstovaacute křivka v podobě grafu logaritmu středniacute hodnoty buněk v zaacutevislosti na čase
Vypočte se inhibice v procentech Vyacutepočtem plochy pod růstovou křivkou
(integraacutel biomasy) Vyacutepočtem růstoveacute rychlosti
EC50 se určiacute sestaveniacutem tabulky a sestrojeniacutem růstoveacuteho grafu a od oka proloženiacutem přiacutemky
NOEC
EC50 pro každyacute čas měřeniacute Z růstoveacute křivky (hustota
buněk x čas) Z grafu sniacuteženiacute specifickeacute
růstoveacute rychlosti proti logaritmu koncentrace
NOEC
Vyhodnoceniacute
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Hustota buněk v kontrole se zvyacutešiacute za 3 dny alespoň 16x
pH v kontrole nesmiacute změnit svoji hodnotu o viacutece než 15 jednotky
Hustota buněk v kontrole se zvyacutešiacute za 3 dny alespoň 16x
Koncentrace zkoušeneacute laacutetky nesmiacute klesnout pod 80 původniacute hodnoty
Kriteacuteria jakosti
Zaacutevěr
Parametry zkoušky se v obou porovnaacutevanyacutech dokumentech vyacuterazně nelišiacute rozdiacutely jsou většinou minimaacutelniacute
Hlavniacutem rozdiacutely Nařiacutezeniacute komise (ES) č 4402008 povoluje před samotnou
zkoušku zařadit provedeniacute limitniacute zkoušky Lišiacute se kriteacuteria jakosti Lišiacute se požadavky na koncentračniacute řadu
Děkujeme za pozornost
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Teplota 23degC plusmn 2degC Staacuteleacute a rovnoměrneacute
osvětleniacute - 400-700 nm
bull Intenzita 60-120 μE mndash2s (35 ndash 70 times 1018 fotonů mndash2s) při měřeniacute v rozsahu 400ndash700 nm
bull 6 000ndash10 000 lx
Teplota 21-25degC plusmn 2degC Staacuteleacute a rovnoměrneacute
osvětleniacute - 400-700 nm
bull Intenzita 60-120 μE mndash2s (35 ndash 70 times 1018 fotonů mndash2s) při měřeniacute v rozsahu 400ndash700 nm
bull 6 000ndash10 000 lx
Kultivačniacute zařiacutezeniacute
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Zaacutesobniacute roztoky přiacuteprava rozpuštěniacutem laacutetky v deionizovaneacute vodě nebo kvalitniacute destilovaneacute
Sterilizace zaacutesobniacutech roztoků přes membraacutenovyacute filtr (02 microm) nebo v autoklaacutevu při 120degC po 15 minut
Uacuteprava pH (při jeho vyacuteraznyacutech změnaacutech) na pH řediacuteciacute vody pomociacute HCl a NaOH
Zaacutesobniacute roztoky přiacuteprava rozpuštěniacutem laacutetky v deionizovaneacute vodě nebo kvalitniacute destilovaneacute s vodivostiacute menšiacute než 5 μScm
Koncentrace pomocnyacutech laacutetek (org rozpouštědla emulgaacutetory dispergaacutetory) minimaacutelniacute ne viacutec než 100 mgl meacutedia
Uacuteprava pH (při jeho vyacuteraznyacutech změnaacutech) na pH řediacuteciacute vody pomociacute HCl a NaOH
Činidla
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Přiacutemeacute počiacutetaacuteniacute pomociacute počiacutetače čaacutestic nebo mikroskopem s počiacutetaciacute komůrkou
Nepřiacutemeacute počiacutetaacuteniacute za předpokladu dostatečneacute citlivosti (10000 buněk na 1 ml) a prokaacutezaneacute dobreacute korelaci s hustotou buněk mohou byacutet použity i jineacute postupy (fotometrie turbidimetrie spektrofotometrie)
Přiacutemeacute počiacutetaacuteniacute živyacutech buněk např pod mikroskopem s počiacutetaciacutemi komůrkami
bull Za předpokladu dostatečneacute citlivosti a prokaacutezaneacute dobreacute korelace s buněčnou hustotou mohou byacutet použity i jineacute postupy (fotometrie turbidimetriehellip)
Měřeniacute hustoty
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Orientačniacute zkoušky rarr koncentračniacute rozmeziacute
Objem inokula by měl byacutet takovyacute aby hustota buněk byla cca 104 buněkml
Koncentračniacute řada by měla obsahovat 4 ndash 5 koncentraciacute od 10 ndash 90 inhibice růstu
Orientačniacute zkoušky rarr koncentračniacute rozmeziacute
Počaacutetečniacute hustota cca 104 buněkml
Geometrickaacute řada nejmeacuteně 5 koncentraciacute Nejnižšiacute žaacutednyacute
pozorovatelnyacute činek Nejvyššiacute omezeniacute růstu
nejmeacuteně o 50
Zkušebniacute postup
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
3 opakovaacuteniacute pro každou koncentraci
6 stejnyacutech kontrolniacutech vzorků bez laacutetky
3 opakovaacuteniacute pro každou koncentraci
3 kontroly bez laacutetky 3 kontroly s pomocnou
laacutetkou
Zkušebniacute postup
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Přidaacuteniacute zkoušeneacute laacutetky k prekultuře řas
V kultivačniacutem zařiacutezeniacute třepaacuteniacute miacutechaacuteniacute nebo probublaacutevaacuteniacute
Stanoveniacute hustoty po 24 48 a 72 hodinaacutech
Měřeniacute pH na začaacutetku a po 72 hodinaacutech nemaacute se měnit o viacutec než 15
Přidaacuteniacute zkoušeneacute laacutetky k prekultuře řas
V kultivačniacutem zařiacutezeniacute třepaacuteniacute miacutechaacuteniacute nebo probublaacutevaacuteniacute
Stanoveniacute hustoty po 24 48 a 72 hodinaacutech
Jako blank filtrovaneacute meacutedium
Měřeniacute pH na začaacutetku a po 72 hodinaacutech nemaacute se měnit o viacutec než 15
Provedeniacute zkoušky
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Pro každou zkoušenou koncentraci a růstovyacute vzorek se sestrojiacute růstovaacute křivka v podobě grafu logaritmu středniacute hodnoty buněk v zaacutevislosti na čase
Vypočte se inhibice v procentech Vyacutepočtem plochy pod růstovou křivkou
(integraacutel biomasy) Vyacutepočtem růstoveacute rychlosti
EC50 se určiacute sestaveniacutem tabulky a sestrojeniacutem růstoveacuteho grafu a od oka proloženiacutem přiacutemky
NOEC
EC50 pro každyacute čas měřeniacute Z růstoveacute křivky (hustota
buněk x čas) Z grafu sniacuteženiacute specifickeacute
růstoveacute rychlosti proti logaritmu koncentrace
NOEC
Vyhodnoceniacute
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Hustota buněk v kontrole se zvyacutešiacute za 3 dny alespoň 16x
pH v kontrole nesmiacute změnit svoji hodnotu o viacutece než 15 jednotky
Hustota buněk v kontrole se zvyacutešiacute za 3 dny alespoň 16x
Koncentrace zkoušeneacute laacutetky nesmiacute klesnout pod 80 původniacute hodnoty
Kriteacuteria jakosti
Zaacutevěr
Parametry zkoušky se v obou porovnaacutevanyacutech dokumentech vyacuterazně nelišiacute rozdiacutely jsou většinou minimaacutelniacute
Hlavniacutem rozdiacutely Nařiacutezeniacute komise (ES) č 4402008 povoluje před samotnou
zkoušku zařadit provedeniacute limitniacute zkoušky Lišiacute se kriteacuteria jakosti Lišiacute se požadavky na koncentračniacute řadu
Děkujeme za pozornost
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Zaacutesobniacute roztoky přiacuteprava rozpuštěniacutem laacutetky v deionizovaneacute vodě nebo kvalitniacute destilovaneacute
Sterilizace zaacutesobniacutech roztoků přes membraacutenovyacute filtr (02 microm) nebo v autoklaacutevu při 120degC po 15 minut
Uacuteprava pH (při jeho vyacuteraznyacutech změnaacutech) na pH řediacuteciacute vody pomociacute HCl a NaOH
Zaacutesobniacute roztoky přiacuteprava rozpuštěniacutem laacutetky v deionizovaneacute vodě nebo kvalitniacute destilovaneacute s vodivostiacute menšiacute než 5 μScm
Koncentrace pomocnyacutech laacutetek (org rozpouštědla emulgaacutetory dispergaacutetory) minimaacutelniacute ne viacutec než 100 mgl meacutedia
Uacuteprava pH (při jeho vyacuteraznyacutech změnaacutech) na pH řediacuteciacute vody pomociacute HCl a NaOH
Činidla
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Přiacutemeacute počiacutetaacuteniacute pomociacute počiacutetače čaacutestic nebo mikroskopem s počiacutetaciacute komůrkou
Nepřiacutemeacute počiacutetaacuteniacute za předpokladu dostatečneacute citlivosti (10000 buněk na 1 ml) a prokaacutezaneacute dobreacute korelaci s hustotou buněk mohou byacutet použity i jineacute postupy (fotometrie turbidimetrie spektrofotometrie)
Přiacutemeacute počiacutetaacuteniacute živyacutech buněk např pod mikroskopem s počiacutetaciacutemi komůrkami
bull Za předpokladu dostatečneacute citlivosti a prokaacutezaneacute dobreacute korelace s buněčnou hustotou mohou byacutet použity i jineacute postupy (fotometrie turbidimetriehellip)
Měřeniacute hustoty
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Orientačniacute zkoušky rarr koncentračniacute rozmeziacute
Objem inokula by měl byacutet takovyacute aby hustota buněk byla cca 104 buněkml
Koncentračniacute řada by měla obsahovat 4 ndash 5 koncentraciacute od 10 ndash 90 inhibice růstu
Orientačniacute zkoušky rarr koncentračniacute rozmeziacute
Počaacutetečniacute hustota cca 104 buněkml
Geometrickaacute řada nejmeacuteně 5 koncentraciacute Nejnižšiacute žaacutednyacute
pozorovatelnyacute činek Nejvyššiacute omezeniacute růstu
nejmeacuteně o 50
Zkušebniacute postup
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
3 opakovaacuteniacute pro každou koncentraci
6 stejnyacutech kontrolniacutech vzorků bez laacutetky
3 opakovaacuteniacute pro každou koncentraci
3 kontroly bez laacutetky 3 kontroly s pomocnou
laacutetkou
Zkušebniacute postup
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Přidaacuteniacute zkoušeneacute laacutetky k prekultuře řas
V kultivačniacutem zařiacutezeniacute třepaacuteniacute miacutechaacuteniacute nebo probublaacutevaacuteniacute
Stanoveniacute hustoty po 24 48 a 72 hodinaacutech
Měřeniacute pH na začaacutetku a po 72 hodinaacutech nemaacute se měnit o viacutec než 15
Přidaacuteniacute zkoušeneacute laacutetky k prekultuře řas
V kultivačniacutem zařiacutezeniacute třepaacuteniacute miacutechaacuteniacute nebo probublaacutevaacuteniacute
Stanoveniacute hustoty po 24 48 a 72 hodinaacutech
Jako blank filtrovaneacute meacutedium
Měřeniacute pH na začaacutetku a po 72 hodinaacutech nemaacute se měnit o viacutec než 15
Provedeniacute zkoušky
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Pro každou zkoušenou koncentraci a růstovyacute vzorek se sestrojiacute růstovaacute křivka v podobě grafu logaritmu středniacute hodnoty buněk v zaacutevislosti na čase
Vypočte se inhibice v procentech Vyacutepočtem plochy pod růstovou křivkou
(integraacutel biomasy) Vyacutepočtem růstoveacute rychlosti
EC50 se určiacute sestaveniacutem tabulky a sestrojeniacutem růstoveacuteho grafu a od oka proloženiacutem přiacutemky
NOEC
EC50 pro každyacute čas měřeniacute Z růstoveacute křivky (hustota
buněk x čas) Z grafu sniacuteženiacute specifickeacute
růstoveacute rychlosti proti logaritmu koncentrace
NOEC
Vyhodnoceniacute
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Hustota buněk v kontrole se zvyacutešiacute za 3 dny alespoň 16x
pH v kontrole nesmiacute změnit svoji hodnotu o viacutece než 15 jednotky
Hustota buněk v kontrole se zvyacutešiacute za 3 dny alespoň 16x
Koncentrace zkoušeneacute laacutetky nesmiacute klesnout pod 80 původniacute hodnoty
Kriteacuteria jakosti
Zaacutevěr
Parametry zkoušky se v obou porovnaacutevanyacutech dokumentech vyacuterazně nelišiacute rozdiacutely jsou většinou minimaacutelniacute
Hlavniacutem rozdiacutely Nařiacutezeniacute komise (ES) č 4402008 povoluje před samotnou
zkoušku zařadit provedeniacute limitniacute zkoušky Lišiacute se kriteacuteria jakosti Lišiacute se požadavky na koncentračniacute řadu
Děkujeme za pozornost
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Přiacutemeacute počiacutetaacuteniacute pomociacute počiacutetače čaacutestic nebo mikroskopem s počiacutetaciacute komůrkou
Nepřiacutemeacute počiacutetaacuteniacute za předpokladu dostatečneacute citlivosti (10000 buněk na 1 ml) a prokaacutezaneacute dobreacute korelaci s hustotou buněk mohou byacutet použity i jineacute postupy (fotometrie turbidimetrie spektrofotometrie)
Přiacutemeacute počiacutetaacuteniacute živyacutech buněk např pod mikroskopem s počiacutetaciacutemi komůrkami
bull Za předpokladu dostatečneacute citlivosti a prokaacutezaneacute dobreacute korelace s buněčnou hustotou mohou byacutet použity i jineacute postupy (fotometrie turbidimetriehellip)
Měřeniacute hustoty
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Orientačniacute zkoušky rarr koncentračniacute rozmeziacute
Objem inokula by měl byacutet takovyacute aby hustota buněk byla cca 104 buněkml
Koncentračniacute řada by měla obsahovat 4 ndash 5 koncentraciacute od 10 ndash 90 inhibice růstu
Orientačniacute zkoušky rarr koncentračniacute rozmeziacute
Počaacutetečniacute hustota cca 104 buněkml
Geometrickaacute řada nejmeacuteně 5 koncentraciacute Nejnižšiacute žaacutednyacute
pozorovatelnyacute činek Nejvyššiacute omezeniacute růstu
nejmeacuteně o 50
Zkušebniacute postup
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
3 opakovaacuteniacute pro každou koncentraci
6 stejnyacutech kontrolniacutech vzorků bez laacutetky
3 opakovaacuteniacute pro každou koncentraci
3 kontroly bez laacutetky 3 kontroly s pomocnou
laacutetkou
Zkušebniacute postup
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Přidaacuteniacute zkoušeneacute laacutetky k prekultuře řas
V kultivačniacutem zařiacutezeniacute třepaacuteniacute miacutechaacuteniacute nebo probublaacutevaacuteniacute
Stanoveniacute hustoty po 24 48 a 72 hodinaacutech
Měřeniacute pH na začaacutetku a po 72 hodinaacutech nemaacute se měnit o viacutec než 15
Přidaacuteniacute zkoušeneacute laacutetky k prekultuře řas
V kultivačniacutem zařiacutezeniacute třepaacuteniacute miacutechaacuteniacute nebo probublaacutevaacuteniacute
Stanoveniacute hustoty po 24 48 a 72 hodinaacutech
Jako blank filtrovaneacute meacutedium
Měřeniacute pH na začaacutetku a po 72 hodinaacutech nemaacute se měnit o viacutec než 15
Provedeniacute zkoušky
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Pro každou zkoušenou koncentraci a růstovyacute vzorek se sestrojiacute růstovaacute křivka v podobě grafu logaritmu středniacute hodnoty buněk v zaacutevislosti na čase
Vypočte se inhibice v procentech Vyacutepočtem plochy pod růstovou křivkou
(integraacutel biomasy) Vyacutepočtem růstoveacute rychlosti
EC50 se určiacute sestaveniacutem tabulky a sestrojeniacutem růstoveacuteho grafu a od oka proloženiacutem přiacutemky
NOEC
EC50 pro každyacute čas měřeniacute Z růstoveacute křivky (hustota
buněk x čas) Z grafu sniacuteženiacute specifickeacute
růstoveacute rychlosti proti logaritmu koncentrace
NOEC
Vyhodnoceniacute
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Hustota buněk v kontrole se zvyacutešiacute za 3 dny alespoň 16x
pH v kontrole nesmiacute změnit svoji hodnotu o viacutece než 15 jednotky
Hustota buněk v kontrole se zvyacutešiacute za 3 dny alespoň 16x
Koncentrace zkoušeneacute laacutetky nesmiacute klesnout pod 80 původniacute hodnoty
Kriteacuteria jakosti
Zaacutevěr
Parametry zkoušky se v obou porovnaacutevanyacutech dokumentech vyacuterazně nelišiacute rozdiacutely jsou většinou minimaacutelniacute
Hlavniacutem rozdiacutely Nařiacutezeniacute komise (ES) č 4402008 povoluje před samotnou
zkoušku zařadit provedeniacute limitniacute zkoušky Lišiacute se kriteacuteria jakosti Lišiacute se požadavky na koncentračniacute řadu
Děkujeme za pozornost
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Orientačniacute zkoušky rarr koncentračniacute rozmeziacute
Objem inokula by měl byacutet takovyacute aby hustota buněk byla cca 104 buněkml
Koncentračniacute řada by měla obsahovat 4 ndash 5 koncentraciacute od 10 ndash 90 inhibice růstu
Orientačniacute zkoušky rarr koncentračniacute rozmeziacute
Počaacutetečniacute hustota cca 104 buněkml
Geometrickaacute řada nejmeacuteně 5 koncentraciacute Nejnižšiacute žaacutednyacute
pozorovatelnyacute činek Nejvyššiacute omezeniacute růstu
nejmeacuteně o 50
Zkušebniacute postup
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
3 opakovaacuteniacute pro každou koncentraci
6 stejnyacutech kontrolniacutech vzorků bez laacutetky
3 opakovaacuteniacute pro každou koncentraci
3 kontroly bez laacutetky 3 kontroly s pomocnou
laacutetkou
Zkušebniacute postup
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Přidaacuteniacute zkoušeneacute laacutetky k prekultuře řas
V kultivačniacutem zařiacutezeniacute třepaacuteniacute miacutechaacuteniacute nebo probublaacutevaacuteniacute
Stanoveniacute hustoty po 24 48 a 72 hodinaacutech
Měřeniacute pH na začaacutetku a po 72 hodinaacutech nemaacute se měnit o viacutec než 15
Přidaacuteniacute zkoušeneacute laacutetky k prekultuře řas
V kultivačniacutem zařiacutezeniacute třepaacuteniacute miacutechaacuteniacute nebo probublaacutevaacuteniacute
Stanoveniacute hustoty po 24 48 a 72 hodinaacutech
Jako blank filtrovaneacute meacutedium
Měřeniacute pH na začaacutetku a po 72 hodinaacutech nemaacute se měnit o viacutec než 15
Provedeniacute zkoušky
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Pro každou zkoušenou koncentraci a růstovyacute vzorek se sestrojiacute růstovaacute křivka v podobě grafu logaritmu středniacute hodnoty buněk v zaacutevislosti na čase
Vypočte se inhibice v procentech Vyacutepočtem plochy pod růstovou křivkou
(integraacutel biomasy) Vyacutepočtem růstoveacute rychlosti
EC50 se určiacute sestaveniacutem tabulky a sestrojeniacutem růstoveacuteho grafu a od oka proloženiacutem přiacutemky
NOEC
EC50 pro každyacute čas měřeniacute Z růstoveacute křivky (hustota
buněk x čas) Z grafu sniacuteženiacute specifickeacute
růstoveacute rychlosti proti logaritmu koncentrace
NOEC
Vyhodnoceniacute
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Hustota buněk v kontrole se zvyacutešiacute za 3 dny alespoň 16x
pH v kontrole nesmiacute změnit svoji hodnotu o viacutece než 15 jednotky
Hustota buněk v kontrole se zvyacutešiacute za 3 dny alespoň 16x
Koncentrace zkoušeneacute laacutetky nesmiacute klesnout pod 80 původniacute hodnoty
Kriteacuteria jakosti
Zaacutevěr
Parametry zkoušky se v obou porovnaacutevanyacutech dokumentech vyacuterazně nelišiacute rozdiacutely jsou většinou minimaacutelniacute
Hlavniacutem rozdiacutely Nařiacutezeniacute komise (ES) č 4402008 povoluje před samotnou
zkoušku zařadit provedeniacute limitniacute zkoušky Lišiacute se kriteacuteria jakosti Lišiacute se požadavky na koncentračniacute řadu
Děkujeme za pozornost
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
3 opakovaacuteniacute pro každou koncentraci
6 stejnyacutech kontrolniacutech vzorků bez laacutetky
3 opakovaacuteniacute pro každou koncentraci
3 kontroly bez laacutetky 3 kontroly s pomocnou
laacutetkou
Zkušebniacute postup
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Přidaacuteniacute zkoušeneacute laacutetky k prekultuře řas
V kultivačniacutem zařiacutezeniacute třepaacuteniacute miacutechaacuteniacute nebo probublaacutevaacuteniacute
Stanoveniacute hustoty po 24 48 a 72 hodinaacutech
Měřeniacute pH na začaacutetku a po 72 hodinaacutech nemaacute se měnit o viacutec než 15
Přidaacuteniacute zkoušeneacute laacutetky k prekultuře řas
V kultivačniacutem zařiacutezeniacute třepaacuteniacute miacutechaacuteniacute nebo probublaacutevaacuteniacute
Stanoveniacute hustoty po 24 48 a 72 hodinaacutech
Jako blank filtrovaneacute meacutedium
Měřeniacute pH na začaacutetku a po 72 hodinaacutech nemaacute se měnit o viacutec než 15
Provedeniacute zkoušky
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Pro každou zkoušenou koncentraci a růstovyacute vzorek se sestrojiacute růstovaacute křivka v podobě grafu logaritmu středniacute hodnoty buněk v zaacutevislosti na čase
Vypočte se inhibice v procentech Vyacutepočtem plochy pod růstovou křivkou
(integraacutel biomasy) Vyacutepočtem růstoveacute rychlosti
EC50 se určiacute sestaveniacutem tabulky a sestrojeniacutem růstoveacuteho grafu a od oka proloženiacutem přiacutemky
NOEC
EC50 pro každyacute čas měřeniacute Z růstoveacute křivky (hustota
buněk x čas) Z grafu sniacuteženiacute specifickeacute
růstoveacute rychlosti proti logaritmu koncentrace
NOEC
Vyhodnoceniacute
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Hustota buněk v kontrole se zvyacutešiacute za 3 dny alespoň 16x
pH v kontrole nesmiacute změnit svoji hodnotu o viacutece než 15 jednotky
Hustota buněk v kontrole se zvyacutešiacute za 3 dny alespoň 16x
Koncentrace zkoušeneacute laacutetky nesmiacute klesnout pod 80 původniacute hodnoty
Kriteacuteria jakosti
Zaacutevěr
Parametry zkoušky se v obou porovnaacutevanyacutech dokumentech vyacuterazně nelišiacute rozdiacutely jsou většinou minimaacutelniacute
Hlavniacutem rozdiacutely Nařiacutezeniacute komise (ES) č 4402008 povoluje před samotnou
zkoušku zařadit provedeniacute limitniacute zkoušky Lišiacute se kriteacuteria jakosti Lišiacute se požadavky na koncentračniacute řadu
Děkujeme za pozornost
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Přidaacuteniacute zkoušeneacute laacutetky k prekultuře řas
V kultivačniacutem zařiacutezeniacute třepaacuteniacute miacutechaacuteniacute nebo probublaacutevaacuteniacute
Stanoveniacute hustoty po 24 48 a 72 hodinaacutech
Měřeniacute pH na začaacutetku a po 72 hodinaacutech nemaacute se měnit o viacutec než 15
Přidaacuteniacute zkoušeneacute laacutetky k prekultuře řas
V kultivačniacutem zařiacutezeniacute třepaacuteniacute miacutechaacuteniacute nebo probublaacutevaacuteniacute
Stanoveniacute hustoty po 24 48 a 72 hodinaacutech
Jako blank filtrovaneacute meacutedium
Měřeniacute pH na začaacutetku a po 72 hodinaacutech nemaacute se měnit o viacutec než 15
Provedeniacute zkoušky
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Pro každou zkoušenou koncentraci a růstovyacute vzorek se sestrojiacute růstovaacute křivka v podobě grafu logaritmu středniacute hodnoty buněk v zaacutevislosti na čase
Vypočte se inhibice v procentech Vyacutepočtem plochy pod růstovou křivkou
(integraacutel biomasy) Vyacutepočtem růstoveacute rychlosti
EC50 se určiacute sestaveniacutem tabulky a sestrojeniacutem růstoveacuteho grafu a od oka proloženiacutem přiacutemky
NOEC
EC50 pro každyacute čas měřeniacute Z růstoveacute křivky (hustota
buněk x čas) Z grafu sniacuteženiacute specifickeacute
růstoveacute rychlosti proti logaritmu koncentrace
NOEC
Vyhodnoceniacute
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Hustota buněk v kontrole se zvyacutešiacute za 3 dny alespoň 16x
pH v kontrole nesmiacute změnit svoji hodnotu o viacutece než 15 jednotky
Hustota buněk v kontrole se zvyacutešiacute za 3 dny alespoň 16x
Koncentrace zkoušeneacute laacutetky nesmiacute klesnout pod 80 původniacute hodnoty
Kriteacuteria jakosti
Zaacutevěr
Parametry zkoušky se v obou porovnaacutevanyacutech dokumentech vyacuterazně nelišiacute rozdiacutely jsou většinou minimaacutelniacute
Hlavniacutem rozdiacutely Nařiacutezeniacute komise (ES) č 4402008 povoluje před samotnou
zkoušku zařadit provedeniacute limitniacute zkoušky Lišiacute se kriteacuteria jakosti Lišiacute se požadavky na koncentračniacute řadu
Děkujeme za pozornost
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Pro každou zkoušenou koncentraci a růstovyacute vzorek se sestrojiacute růstovaacute křivka v podobě grafu logaritmu středniacute hodnoty buněk v zaacutevislosti na čase
Vypočte se inhibice v procentech Vyacutepočtem plochy pod růstovou křivkou
(integraacutel biomasy) Vyacutepočtem růstoveacute rychlosti
EC50 se určiacute sestaveniacutem tabulky a sestrojeniacutem růstoveacuteho grafu a od oka proloženiacutem přiacutemky
NOEC
EC50 pro každyacute čas měřeniacute Z růstoveacute křivky (hustota
buněk x čas) Z grafu sniacuteženiacute specifickeacute
růstoveacute rychlosti proti logaritmu koncentrace
NOEC
Vyhodnoceniacute
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Hustota buněk v kontrole se zvyacutešiacute za 3 dny alespoň 16x
pH v kontrole nesmiacute změnit svoji hodnotu o viacutece než 15 jednotky
Hustota buněk v kontrole se zvyacutešiacute za 3 dny alespoň 16x
Koncentrace zkoušeneacute laacutetky nesmiacute klesnout pod 80 původniacute hodnoty
Kriteacuteria jakosti
Zaacutevěr
Parametry zkoušky se v obou porovnaacutevanyacutech dokumentech vyacuterazně nelišiacute rozdiacutely jsou většinou minimaacutelniacute
Hlavniacutem rozdiacutely Nařiacutezeniacute komise (ES) č 4402008 povoluje před samotnou
zkoušku zařadit provedeniacute limitniacute zkoušky Lišiacute se kriteacuteria jakosti Lišiacute se požadavky na koncentračniacute řadu
Děkujeme za pozornost
ČSN EN 28692 NAŘIacuteZENIacute KOMISE (ES) č 4402008
Hustota buněk v kontrole se zvyacutešiacute za 3 dny alespoň 16x
pH v kontrole nesmiacute změnit svoji hodnotu o viacutece než 15 jednotky
Hustota buněk v kontrole se zvyacutešiacute za 3 dny alespoň 16x
Koncentrace zkoušeneacute laacutetky nesmiacute klesnout pod 80 původniacute hodnoty
Kriteacuteria jakosti
Zaacutevěr
Parametry zkoušky se v obou porovnaacutevanyacutech dokumentech vyacuterazně nelišiacute rozdiacutely jsou většinou minimaacutelniacute
Hlavniacutem rozdiacutely Nařiacutezeniacute komise (ES) č 4402008 povoluje před samotnou
zkoušku zařadit provedeniacute limitniacute zkoušky Lišiacute se kriteacuteria jakosti Lišiacute se požadavky na koncentračniacute řadu
Děkujeme za pozornost
Zaacutevěr
Parametry zkoušky se v obou porovnaacutevanyacutech dokumentech vyacuterazně nelišiacute rozdiacutely jsou většinou minimaacutelniacute
Hlavniacutem rozdiacutely Nařiacutezeniacute komise (ES) č 4402008 povoluje před samotnou
zkoušku zařadit provedeniacute limitniacute zkoušky Lišiacute se kriteacuteria jakosti Lišiacute se požadavky na koncentračniacute řadu
Děkujeme za pozornost
Děkujeme za pozornost
