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Versuchsübersicht
Mikrobiologische Wasseruntersuchungen
Tag Versuch 13
Bestimmung
der Kolonie-
zahl
Versuch 14
Nachweis
E. coli und
Coliforme:
Flüssigkeitsan-
reicherung
Versuch 15
Nachweis
E. coli und
Coliforme:
Membran-
filtrations-
verfahren
Versuch 16
Nachweis
E. coli und
Coliforme:
Colilert-
Verfahren
Versuch 17
Nachweis
E. coli:
Mikrotiter-
platten-
verfahren
Versuch 18
Identifizierung
mit API 20 E-
System
Montag Anlegen von
Gussplatten
Ansatz von
Flüssigkulturen
Membran-
filtration
Animpfen von
Quanti-Trays
Animpfen
von Mikro-
titerplatten
-
Dienstag - Subkulturen
Endo-Agar
Subkulturen
CASO-Agar
Auswertung - -
Mittwoch Auszählung Ansatz: kleine
Bunte Reihe
Oxidase-Test,
Auswertung
- Auswertung -
Donners-
tag
Auszählung Auswertung
Bunte Reihe
- - - Ansetzen von
Teststreifen
Freitag Auszählung Auswertung
Bunte Reihe
- - - Auswertung
Versuch Nr. 13: Bestimmung der Koloniezahl
1. Tag (Montag)
Proben: Trinkwasser, Ruhrwasser.
Beschreibung der Wasserproben.
Ansatz: - Trinkwasser unverdünnt
- Ruhrwasser 1:10, 1:100
und 1:1000.
Anlegen von Gussplatten mit
Hefeextraktagar.
Bebrütung: 22 °C und 36 °C.
2. – 4. Tag (Mittwoch bis
Freitag)
Auszählung der Kolonien nach
2, 3 und 4 Tagen (Mittwoch bis
Freitag).
Berechnen der Koloniezahlen
pro mL.
Quelle: Madigan und Martinko, Brock Mikrobiologie, 2006.
Quelle: Süßmuth et al., 1999
Versuch Nr. 14: Nachweis von E. coli und coliformen
Bakterien mittels Flüssigkeitsanreicherung 4. und 5. Tag (Donnerstag und
Freitag) Ablesen der Reaktionen aller Bunten
Reihen (positive bzw. negative
Reaktionen)
1. Lactose-Bouillon ( 36 °C, 24 h - 48 h):
Gas- und Säurebildung
2. Glucose-Bouillon (44 °C, 24 h):
Gas- und Säurebildung
3. Tryptophan-Bouillon (36 °C, 24 h):
Indolbildung
4. Nähragar (36 °C 24 h): Oxidase-Test
5. Citratagar (36 °C, 24 h - 48 h): Wachstum
Angabe der Ergebnisse:
Nachweis von E. coli, coliformen
Bakterien bzw. Nicht-Coliformen in
100 mL Wasserprobe.
Versuch Nr. 19: Identifizierung coliformer und
anderer Bakterien mit einem standardisierten
Testsystem (api 20 E)
1. Tag (Donnerstag)
Identifizierung von 4 Reinkulturen
auf Nähragar mit api 20 E-System
(aus Ruhrwasser gewonnene Isolate).
Beimpfen von 4 Teststreifen mit
4 Reinkulturen auf Nähragar aus
Versuch Nr. 14.
Bebrütung der Streifen: 36 °C, 24 h.
2. Tag (Freitag)
Auswertung und Identifizierung.
Mikrobiologisches Praktikum WS 2009/10
3. Woche: Wasseruntersuchungen
Versuchsablauf
Auswertung und Identifizierung Ablesen der Reaktionen und Protokollierung in Auswertebogen
(21 Reaktionen: "ONPG" bis "OX")
Oxidase-Test: Ergebnisse der
Reinkulturen auf Nähragar aus
Versuch Nr. 14 (Flüssigkeitsan-
reicherung)
Auswertung und Identifizierung
Ermittlung eines 7-stelligen Zahlenprofils (numerisches Profil).
Identifizierung anhand des Zahlenprofils im Analytischen-Profil-Index.
Ergebnisse in ausgehängte Tabelle eintragen.
Identifizierung von Kolonien mit dem API 20 E-System
(Beispiele aus früherem Praktikum)
Gruppe Identifizierte Spezies
1 Escherichia coli, Serratia liquefaciens, Kluyvera spp.
2 Aeromonas hydrophila, Aeromonas hydrophila-Vibrio fluvialis
3 Pseudomonas fluorescens-Pseudomonas aeruginosa
4 Kluyvera spp., Citrobacter koseri/farmeri, Aeromonas
hydrophila-Vibrio fluvialis
5 Isolate nicht identifizierbar
7 Escherichia coli, Citrobacter farmeri/koseri, Kluyvera
ascorbata/cryocrescens, Enterobacter cloacae, Klebsiella
planticola
8 Klebsiella oxytoca-Klebsiella planticola, Yersinia
enterocolitica, Enterobacter cloacae
9 Aeromonas hydrophila-Vibrio fluvialis, Citrobacter
koseri/farmeri-Kluyvera spp.
10 Aeromonas hydrophila-Vibrio fluvialis
Ergebnisse Praktikum-Mikrobiologie
Mikrobiologische
Wasseruntersuchungen
Bestimmung der Koloniezahl (Versuch Nr. 13)
Gruppe Koloniezahl (KBE/mL) nach
2, 3 und 4 Tagen bei 22 °C
Koloniezahl (KBE/mL) nach
2, 3 und 4 Tagen bei 36 °C
Ruhr Trinkwasser Ruhr Trinkwasser
1 1923/2242/3500 0/0/11 605/1473/1705 0/0/3
2 2530/7650/9286 0/0/0 1770/2300/2620 0/0/0
3 2645/7500/9682 0/20/50 2036/2255/2586 0/11/28
4 2159/7700/6500 0/0/29 1209/1459/1696 0/0/15
5 1970/4100/7725 0/7/13 1840/2095/2665 1/29/41
6 2600/5450/7952 0/39/49 2100/2654/2750 0/49/36
7 2327/3383/6600 0/54/57 2050/1400/1400 1/50/25
8 2186/2818/4727 0/0/47 1422/1631/1878 0/0/20
9 2671/7600/9409 0/0/13 2027/2509/2609 0/0/0
10 2768/11800/15591 0/0/20 1591/3250/4100 0/0/14
Bestimmung der Koloniezahl (Versuch Nr. 13)
Gruppe Koloniezahl (KBE/mL) nach
2, 3 und 4 Tagen bei 22 °C
Koloniezahl (KBE/mL) nach
2, 3 und 4 Tagen bei 36 °C
Ruhr Trinkwasser Ruhr Trinkwasser
11 1500/4300/6600 0/19/52 830/1523/1773 0/0/20
12 2464/24950/29955 0/6/37 2185/2964/3392 0/6/19
13 1300/2300/5100 0/31/40 1700/2000/2200 0/2/6
14 2546/7100/10524 0/11/22 1236/1650/1852 1/5/18
15 1845/4810/7400 0/0/0 1880/2190/2500 0/0/23
16 1690/5727/9100 0/0/22 312/756/820 1/0(?)/11
17 1468/2391 0/0 545/850 0/0
18 1759/3190/8333 0/30/48 585/1319/1532 0/7/12
19 1600/6100/8363 0/39/42 475/650/1081 0/0/1
20 2300/2630/2300 0/38/18 1100/1245/2200 0/0/12
Anforderungen an Trinkwasser nach der TrinkwV
_________________________________________________________
Koloniezahl TrinkwV 2001
(KBE/mL) Grenzwert/Anforderung
_________________________________________________________
22 °C (2 da), 3 db)) 100/mLa) bzw. ohne anormale Veränderungb)
36 °C (2 d) 100/mLa) bzw. ohne anormale Veränderungb)
___________________________________________________________
a) Die Angaben gelten bei Anwendung des Verfahrens der Koloniezahlbestimmung nach der
TrinkwV 2001 (Anlage 5, Teil I, d. Verfahren bb).
b) Die Angaben gelten bei Anwendung des Verfahrens der Koloniezahlbestimmung nach der
DIN EN ISO 6222 (Anlage 5, Teil I, d. Verfahren aa) (Praktikumsversuch).
Beide Verfahren sind nach der aktuell gültigen Trinkwasserverordnung zulässig.
E.coli und coliforme Bakterien: Flüssigkeitsanreicherung
(Versuch Nr. 14)
Gruppe E. coli und coliforme Bakterien in 100 mL Ruhrwasser
E. coli Coliforme Nicht-Coliforme
1 + -
2 +
3 - - +
4 - + -
5 + + -
6 + +
7 - - +
8 - + -
9 - + +
10 - + + (Mischkultur?)
E.coli und coliforme Bakterien: Flüssigkeitsanreicherung
(Versuch Nr. 14)
Gruppe E. coli und coliforme Bakterien in 100 mL Ruhrwasser
E. coli Coliforme Nicht-Coliforme
11 + + +
12 + + +
13 + - +
14 - + +
15 - + -
16 + - +
17 + + -
18 - + +
19 + + -
20 - + +
Trinkwasserbefunde bei allen Gruppen: coliforme Bakterien und
E. coli negativ in 100 mL
Coliforme Bakterien und E. coli in Ruhrwasser:
Membranfiltration (Versuch Nr. 15)
Gruppe Trinkwasser
(KBE/100 mL)
Ruhrwasser (KBE/100 mL)
Coliforme E. coli Coliforme E. coli
1 0 0 11500 3400
2 0 0 16000 3500
3 0 0 9475 3000
4 0 0 13250 3900
5 0 0 4500 3100
6 0 0 8375 3800
7 0 0 15075 4500
8 0 0 11550 2900
9 0 0 9300 4100
10 0 0 10500 5640
Coliforme Bakterien und E. coli in Ruhrwasser:
Membranfiltration (Versuch Nr. 15)
Gruppe Trinkwasser
(KBE/100 mL)
Ruhrwasser (KBE/100 mL)
Coliforme E. coli Coliforme E. coli
11 0 0 9900 4840
12 0 0 8700 3700
13 0 0 2575 1867
14 0 0 10600 3100
15 0 0 9675 2700
16 0 0 10200 3200
17 0 0 3800 2800
18 0 0 10675 2500
19 0 0 7700 3000
20 0 0 6800 3400
Coliforme Bakterien und E.coli: Colilert
(Versuch Nr. 16)
Gruppe Trinkwasser
(MPN/100 mL)
Ruhrwasser
(MPN/100 mL)
Coliforme E. coli Coliforme E. coli
1 0 0 > 2419 2419
2 0 0 > 2419 > 2419
3 0 0 > 2419 > 2419
4 0 0 > 2419 > 2419
5 0 0 > 2419 > 2419
6 0 0 > 2419 2419
7 0 0 > 2419 > 2419
8 0 0 > 2419 > 2419
9 0 0 > 2419 > 2419
10 0 0 > 2419 > 2419
11 0 0 > 2419 > 2419
Gruppe Trinkwasser
(MPN/100 mL)
Ruhrwasser
(MPN/100 mL)
Coliforme E. coli Coliforme E. coli
12 0 0 > 2419 > 2419
13 0 0 > 2419 > 2419
14 0 0 > 2419 > 2419
15 0 0 > 2419 2419
16 0 0 > 2419 1986
17 0 0 > 2419 > 2419
18 0 0 > 2419 > 2419
19 0 0 > 2419 > 2419
20 0 0 > 2419 > 2419
Coliforme Bakterien und E.coli: Colilert
(Versuch Nr. 16)
E.coli in Ruhrwasser: Mikrotiterplattenverfahren
(Versuch Nr. 17)
Gruppe E. coli
(MPN/100 mL)
Gruppe E. coli
(MPN/100 mL)
1 2994 11 2929
2 3197 12 2444
3 2715 13 3114
4 2843 14 4796
5 3421 15 3306
6 2715 16 2809
7 4005 17 2604
8 3092 18 3093
9 5035 19 3564
10 3093 20 2678
Mikrobiologische Anforderungen an Badegewässer
gemäß der EU-Badegewässerrichtlinie (2006)
Mikrobiologische Anforderungen an Badegewässer
Bewertung der Qualität eines Badegewässers anhand
Mikrobiologischer Befunde
Nach EU-Badegewässerrichtlinie:
Die Bewertung der Qualität eines Badegewässers erfolgt auf Basis von
Daten über vier Jahre (vier abgelaufene Badesaisons).
Maßnahmen nach hohen Einzelwerten - nach Badegewässerverordnung
NRW:
Wird bei der Badegewässerüberwachung für den Parameter
Escherichia coli ein Einzelwert von mehr als 1800 KBE/100 ml oder für
den Parameter Intestinale Enterokokken ein Einzelwert von mehr als
700 KBE/100 ml festgestellt, so ist eine sofortige Nachkontrolle durch-
zuführen. Liegen bei dieser Nachkontrolle die Messergebnisse wieder
über diesen Werten, ist ein zeitweiliges Badeverbot zu erlassen.
Badegewässer und Trinkwasser für das Ruhrgebiet
Verbund-Forschungsprojekt im Rahmen der BMBF-Initiative Risikomanagement von neuen Schadstoffen und Krankheitserregern
im Wasserkreislauf (RiSKWa)
Bakteriologische Untersuchungen an der Ruhr
Untersuchungsgebiet „Untere Ruhr“ (Baldeneysee/Ruhr),
8 Probenahmestellen
Boxplot-Diagram: mikrobiologische Parameter, 8 Probenahmestellen, Entnahme alle 2 Wochen,
maximal 184 Proben, Untersuchungszeitraum 13 Monate (April 2010 – Mai 2013). Medianwerte mit
Grenzen der 25. und 75. Perzentile. Striche nach oben und unten: Minimal- bzw. Maximalwerte.
Nachweishäufigkeiten (%) oben angegeben.
Location
Intestinal
enterococci E. coli
E. coli
(without rainfall
events)
RWW Styrum-Ost Excellent Poor Good quality
Löwental Sufficient Poor Good quality
Seaside Beach Good Sufficient Excellent
Polderpumpwerk Excellent Poor Excellent
Fischereiverein Good Poor Sufficient
Rote Mühle Good Poor Good
Zornige Ameise Sufficient Poor Poor
BarCelona Good Poor Sufficient
Klassifizierung der Badegwässerqualität nach
der EU Badegwässerrichtlinie.
Badesaison von Mai bis September 2012.
www.sichere-ruhr.de
Identifizierung von Kolonien mit dem api 20 E-System
(Versuch Nr. 18)
Gruppe Identifizierte Spezies
1 Enterobacter cloacae, Klebesiella oxytoca, Klebsiella
pneumoniae
2 Enterobacter cloacae/Serratia liquefaciens
3 Citrobacter freundii, Vibrio fluvialis
4 Enterobacter cloacae, Citrobacter freundii
5 Klebsiella terrigena, Klebsiella pneumoniae
6 Enterobacter cloacae
7 Aeromonas hydrophila/Vibrio fluvialis
8 Enterobacter cloacae, Enterobacter cloacae/Enterobacter
sakazakii
9 Citrobacter freundii, Enterobacter cloacae, Klebsiella
oxytoca/ornithinolytica, Aeromonas hydrophila/Vibrio fluvialis
10 Klebsiella oxytoca/ornithinolytica, Aeromonas hydrophila
Identifizierung von Kolonien mit dem api 20 E-System
(Versuch Nr. 18)
Gruppe Identifizierte Spezies
11 Escherichia coli, Enterobacter cloacae
12 Enterobacter cloacae/Enterobacter sakazakii
13 Enterobacter cloacae
14 Klebsiella ornithinolytica, Enterobacter cloacae
15 Enterobacter cloacae/Serratia liquefaciens/Enterobacter
sakazakii
16 Klebsiella pneumoniae, Citrobacter youngae, Escherichia
coli
17
18 Enterobacter cloacae, Aeromonas hydrophila/Vibrio fluvialis
19 Enterobacter cloacae
20 Enterobacter cloacae, Klebsiella pneumoniae, Serratia
liquefaciens