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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
QUÍMICA FARMACÉUTICA
CONTROL MICROBIOLÓGICO DE PRODUCTOS NATURALES DE USO TÓPICO
CON FINES CICATRIZANTES, COMERCIALIZADOS EN CENTROS NATURISTAS Y
MERCADOS DE LA CIUDAD DE QUITO.
Trabajo de investigación presentado como requisito previo para la obtención del título de
“Químico Farmacéutico”
Autor: Jonathan Vinicio Martínez Ayala
Tutora: Dra. Rommy Ivette Terán Soto
DMQ, Octubre del 2018
ii
DEDICATORIA
“Una actitud positiva y optimista
es la fe que conduce al logro;
nada puede realizarse sin esperanza”
A mi Madre y hermanos Rosario Vanessa y Marco…
iii
AGRADECIMIENTOS
Quiero agradecer a Dios por su guía, salud y bendiciones en cada paso que doy en mi vida.
También a Mi Madre Rosario, por su inmenso apoyo, tiempo, amor, paciencia y sabios consejos
que me han ayudado para seguir creciendo como persona y ahora en esta nueva etapa como
profesional.
Agradezco a la Universidad Central del Ecuador a la facultad de facultad de Ciencias Químicas
por todo lo que viví en el transcurso de toda mi carrera universitaria, agradezco infinitamente a mi
profesora y tutora Msc. Rommy Terán por todo su tiempo, dedicación, paciencia y sus
conocimientos invertidos que me han permitido terminar este proyecto de investigación con éxito,
gracias a su experiencia y su motivación.
A mis hermanos y tíos Marco y Vanessa, Rocio, Grace y Jorge les agradezco por su compañía,
consejos y apoyo brindado durante esta etapa estudiantil. A una persona muy especial Nicole Rojas
por ser un gran apoyo en esta etapa importante de mi vida. Gracias por su tiempo y su amor
incondicional.
A mis profesores, Dra. Liliana Naranjo, a la Dra. Dayana Borja, al Dr. Fernando Novillo, Dr.
Javier Santamaría gracias por compartir su sabiduría y por su vocación para formar nuevos
Químicos Farmacéuticos.
A mis amigos y compañeros porque junto a ustedes viví una de las mejores etapas de mi vida,
les agradezco por haber hecho de mi vida estudiantil y personal, la más divertida y extraordinaria.
iv
v
vi
vii
LUGAR DONDE SE REALIZARÁ LA INVESTIGACIÓN
La presente investigación que tiene como título “Control microbiológico de Productos Naturales
de uso tópico con fines cicatrizantes, comercializados en centros naturistas y mercados de la
ciudad de Quito” se ejecutó en los Laboratorios de Microbiología y Tecnología farmacéutica de la
facultad de Ciencias Químicas de la Universidad Central del Ecuador.
viii
INDICE DE CONTENIDOS
Dedicatoria ..................................................................................................................................................ii
Agradecimientos ....................................................................................................................................... iii
Constancia de aprobación del tutor ........................................................................................................... v
Constancia de aprobación del trabajo final por tribunal ........................................................................... vi
Resumen.................................................................................................................................................... xi
Abstract..................................................................................................................................................... xii
Introducción ............................................................................................................................................... 1
Capítulo I .................................................................................................................................................... 3
1. El Problema ............................................................................................................................................ 3
1.1. Planteamiento del Problema ................................................................................................................ 3
1.2. Formulación del problema ................................................................................................................... 5
1.3. Objetivos de la Investigación .............................................................................................................. 5
1.3.1. Objetivo General .............................................................................................................................. 6
1.3.2. Objetivos Específicos ....................................................................................................................... 6
1.4. Justificación e importancia ................................................................................................................. 7
Capítulo II ................................................................................................................................................. 9
2. Marco Teórico ....................................................................................................................................... 9
2.1. Antecedentes ...................................................................................................................................... 9
2.2. Fundamento Teórico.......................................................................................................................... 11
2.3. Marco Legal ...................................................................................................................................... 30
2.4. Hipótesis ............................................................................................................................................ 34
2.5. Conceptualización de variables ..........................................................................................................35
Capitulo III ............................................................................................................................................... 36
3. Metodología.......................................................................................................................................... 36
3.1. Diseño de investigación .................................................................................................................... 36
3.2. Población y muestra .......................................................................................................................... 37
3.3. Equipos y materiales.......................................................................................................................... 37
3.4. Métodos y procedimientos................................................................................................................. 40
3.5. Matriz Operacionalización de las variables …................................................................................... 44
3.6. Técnicas e instrumentos de recolección de datos .............................................................................. 45
3.7. Técnicas de procesamiento y análisis de datos ................................................................................. 45
Capitulo IV ………………………………………................................................................................... 47
4. Análisis y discusión de resultados …………….................................................................................... 47
Capítulo V ………………….................................................................................................................... 62
5. Conclusiones y Recomendaciones ........................................................................................................ 62
Bibliografía .............................................................................................................................................. 63
Anexos ..................................................................................................................................................... 66
ix
INDICE DE TABLAS
Tabla 1.Clasificación de Cremas Cutáneas. ....................................................................................... 23
Tabla 2. Criterios de aceptación para la calidad microbiológica de formas farmacéuticas no
estériles. .............................................................................................................................................. 24
Tabla 3. Características de los productos naturales de uso tópico con fines cicatrizantes. ................ 39
Tabla 4.Matriz de Operacionalización de variables. .......................................................................... 45
Tabla 5.Test de aptitud del método en presencia del producto, método de extensión para el RTMA.
............................................................................................................................................................ 47
Tabla 6.Test de aptitud del método en presencia del producto, método de extensión y vertido para el
RTML. ................................................................................................................................................ 49
Tabla 7. Recuento total de microorganismos aerobios en los productos naturales con fines
cicatrizantes. ....................................................................................................................................... 50
Tabla 8.Recuento total de mohos y levaduras en los productos. ........................................................ 52
Tabla 9. Porcentaje de microorganismos aislados y detección de Staphylococcus aureus y
Pseudomonas aeruginosa como microorganismos especificos. ........................................................ 53
Tabla 10. Control organoléptico y extensibilidad de los productos y su relación con la
contaminación microbiana encontrada. .............................................................................................. 57
Tabla 11.Relación del pH de los productos naturales de uso tópico con fines cicatrizantes con la
contaminación microbiana encontrada. .............................................................................................. 58
Tabla 12. Identificación de Envase. ................................................................................................... 60
Tabla 13. Identificación de Etiqueta. ................................................................................................. 60
Tabla 14. Identificación de Prospecto. ............................................................................................... 61
INDICE DE ANEXOS
Anexos A.. Árbol de problemas ......................................................................................................... 66
Anexos B. Sondeo de Productos Naturales de uso tópico con fines Cicatrizantes. ........................... 67
Anexos C. Diagramas de flujo. .......................................................................................................... 68
Anexos D. Identificación de microorganismos. ................................................................................. 73
Anexos E. Identificación de hongos y levaduras. .......................................................................... …73
Anexos F. Resultados de la Identificación de cada microorganismo. ................................................ 75
Anexos G. Instrumento de recolección de datos: guía de observación………………………….……..76
INDICE DE ILUSTRACIONES
Ilustración 1. Tinción Simple: Candida albicans. .............................................................................. 75
Ilustración 2.Candida albicans: Agar Candida cromogénico……………………………………....75
Ilustración 3.Prueba de Tubo germinal: Candida albicans.Agar Sabouraud,Lente 100x .................. 76
Ilustración 4. Bacillus cereus: Agar TSA…………………………………………………………..75
Ilustración 5. Bacillus subtilis: Agar TSA ......................................................................................... 76
x
LISTA DE ABREVIATURAS
ARCSA: Agencia Nacional de Regulación, Control y Vigilancia Sanitaria.
BPM: Buenas Prácticas de Manufactura.
BPA: Buenas Prácticas de Almacenamiento.
BPD: Buenas Prácticas de Distribución.
RTMA: Recuento total de microorganismos aerobios
RTML: Recuento total de mohos y levaduras
USP-NF: The United States Pharmacopeia and The National Formulary
UFC: Unidades formadoras de colonias
UFM: Unidades formadoras de mohos
OMS: Organización Mundial de la Salud
DIGEMID: Dirección General de Medicamentos Insumos y Drogas
MSA: Agar Manitol Salado
pH: Potencial de hidrógeno
SAB: Agar Sabouraud
TSA: Tripticasa soya agar
TSB: Caldo digerido peptona de caseína- peptona de soya .
xi
Control Microbiológico de Productos Naturales de Uso Tópico con fines Cicatrizantes,
Comercializados en Centros Naturistas y Mercados de la Ciudad de Quito.
Autor: Jonathan Vinicio Martínez Ayala
Tutora: Dra. Rommy Ivette Terán Soto
RESUMEN
Los tipos de formas farmacéuticas no estériles semi-sólidas y líquidas, como las cremas y gotas
contienen en la mayoría de sus formulaciones un elevado porcentaje de agua y muchas de las
sustancias utilizadas en su fabricación pueden ser degradadas biológicamente por microorganismos
y alterar sus propiedades físicas y químicas. Este tipo de productos considerados como no estériles
no pueden superar un número determinado de mohos y levaduras y de microorganismos aerobios
(de 101 ufc/g o ufc/ml y de 102 ufc/g o ufc/ml respectivamente) así como no pueden presentar
Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa como microorganismos específicos, para
considerarse seguros para las personas que los usan. La presente investigación evaluó el control
microbiológico de Productos Naturales de uso tópico con fines cicatrizantes, comercializados en
centros naturistas y mercados de la ciudad de Quito. En la primera etapa de esta investigación se
realizó la revisión en la base de datos de la Agencia Nacional de Regulación, Control y Vigilancia
Sanitaria (ARCSA) y se aplicó un sondeo de opinión, en el que se determinó que seis productos de
uso tópico con fines cicatrizantes tenían mayor demanda entre los usuarios. En la segunda etapa, se
realizó la aptitud del método de recuento en presencia del producto para microorganismos aerobios
y mohos y levaduras. El Recuento total de microorganismos aerobios (RTMA) y el Recuento total
de hongos y levaduras (RTML) en los productos se hizo por los métodos de recuento en placa
(extensión y vertido) la presencia de los microorganismos específicos y se determinó por siembra
en agares selectivos. Por último, se efectuó una comparación de la información del envase, etiquetas
y prospecto de los productos analizados, con la Normativa Sanitaria para la Obtención del Registro
Sanitario emitida por (ARCSA). En este trabajo también se reportan los resultados de la prueba de
extensibilidad en las cremas, el control organoléptico y la medición del pH de los productos. Los
resultados obtenidos fueron que el 27% de los Productos Naturales cicatrizantes no cumplen con las
especificaciones de la USP39-NF34, (2016) para el RTMA y para RTML. Ninguno de los 18
productos presentó Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa, pero si otros
microorganismos como: Bacillus subtilis, Bacillus cereus y Candida albicans.
PALABRAS CLAVE: CONTROL MICROBIOLÓGICO, PRODUCTO NATURAL DE USO
TÓPICO,CICATRIZANTE, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis,
Bacillus cereus, Candida albicans.
xii
Microbiological Control of Natural Products of Topical Use for Cicatrizant Purposes,
Commercialized in Naturist Centers and Markets of the City of Quito.
Autor: Jonathan Vinicio Martínez Ayala
Tutora: Dra. Rommy Ivette Terán Soto
ABSTRACT
The types of semi-solid and liquid non-sterile pharmaceutical forms, such as creams and drops,
contain in most of their formulations a high percentage of water and many of the substances used in
their manufacture can be degraded biologically by microorganisms and alter their physical
properties and chemical. This type of products considered as non-sterile can not exceed a certain
number of molds and yeasts and aerobic microorganisms (101 ufc / g or ufc / ml and 102 ufc / g or
ufc / ml respectively) as well as can not present Staphylococcus aureus and Pseudomonas
aeruginosa as specific microorganisms, to be considered safe for people who use them. The present
investigation evaluated the microbiological control of natural products for topical use with scarring
purposes, commercialized in naturist centers and markets of the city of Quito. In the first stage of
this investigation, a review was made in the database of the National Agency for Regulation, Control
and Health Surveillance (ARCSA) and an opinion poll was applied, in which it was determined that
six topical products with scarring purposes had higher demand among users. In the second stage, the
aptitude of the counting method was carried out in the presence of the product for aerobic
microorganisms and molds and yeasts. The total count of aerobic microorganisms (RTMA) and the
total count of fungi and yeasts (RTML) in the products was made by the methods of plate count
(extension and spillage) the presence of the specific microorganisms and was determined by seeding
in agars selective Finally, a comparison was made of the packaging information, labels and leaflet
of the analyzed products, with the Sanitary Regulation for the Obtaining of the Sanitary Registry
issued by (ARCSA). This paper also reports the results of the extensibility test on the creams, the
organoleptic control and the pH measurement of the products. The results obtained were that 27%
of the Natural Healing Products do not comply with the specifications of the USP39-NF34, (2016)
for the RTMA and for RTML. None of the 18 products presented Staphylococcus aureus and
Pseudomonas aeruginosa, but other microorganisms such as Bacillus subtilis, Bacillus cereus and
Candida albicans.
KEY WORDS: MICROBIOLOGICAL CONTROL, NATURAL PRODUCT OF TOPICAL USE,
CICATRIZING, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis, Bacillus
cereus, Candida albicans.
1
INTRODUCCIÓN
En el Ecuador la contaminación microbiana de Productos Naturales de uso tópico, constituye
un gran problema de salud pública, ya que un elevado número de la población acude a este tipo
de terapias con Productos Naturales de uso tópico con fines cicatrizantes, manifestando que
cuando llegan a cortarse o tener accidentes, colocan estos productos sobre la herida para que
exista una pronta cicatrización.
La mayoría de las formulaciones contienen un elevado porcentaje de agua y muchas de las
sustancias utilizadas en su fabricación pueden ser degradadas biológicamente por
microorganismos, por lo que, son productos que necesitan un mayor control por parte de la
Agencia Nacional de Regulación, Control y Vigilancia Sanitaria (ARCSA), debido a que se
deterioran más rápido con el paso del tiempo. Cuando estos productos son aplicados
directamente a la herida, la probabilidad de que estos microorganismos causen daño al paciente,
aumenta considerablemente. Los daños causados a la salud del paciente son variables y dependen
de varios factores, como el estado inmunológico de la persona, la edad y la vía de ingreso del
microorganismo.
Los productos naturales se expenden sin prescripción facultativa y a esto se suma la falta de
un control pos registro por parte de los organismos reguladores, todo esto influye en que se
comercialicen productos sin la debida calidad microbiológica, repercutiendo negativamente en
la salud del paciente que usa estos productos, que se expanden libremente en las tiendas
naturistas y mercados de la ciudad de Quito. Es por ello que el desarrollo de Productos Naturales
de Uso Medicinal debería cumplir con la aplicación de Buenas Prácticas de Manufactura (BPM)
y de Buenas Practicas de Almacenamiento (BPA) para asegurar la calidad microbiológica del
producto terminado, por ende, los Productos Naturales Procesados de Uso Medicinal podrían
no ser seguros para el consumidor, por lo que se ha planteado hacer el análisis microbiológico
de Productos Naturales de uso tópico con fines cicatrizantes de venta libre y que se emplean
para tratar heridas.
El primer capítulo de esta investigación se describe el planteamiento del problema donde se
evalúa la situación actual en la utilización de Productos Naturales con fines cicatrizantes que
no cuentan con registro sanitario, además de la formulación del problema y la justificación,
mostrando la importancia de la investigación hacia los pacientes que utilizan estos Productos
Naturales con fines cicatrizantes para el tratamiento de sus heridas.
En el segundo capítulo, se presenta el marco teórico donde se localiza la información
científica correspondiente a estudios microbiológicos de Productos Naturales de uso tópico con
fines cicatrizantes como formas farmacéuticas no estériles, el marco legal relacionado al
Régimen del Buen vivir, la reglamentación de la Agencia Nacional de Regulación, Control y
2
Vigilancia Sanitaria (ARCSA), asimismo se exponen las hipótesis, terminando con la
conceptualización de las variables.
El tercer capítulo, puntualiza el marco metodológico, el diseño, tipo y nivel que requirió esta
investigación, conjuntamente con la población y muestra necesaria para el desarrollo del control
microbiológico de los Productos Naturales de uso tópico con fines cicatrizantes, así como el
procedimiento a seguir, basándose en los capítulos de la USP39-NF34,(2016): «capítulo 61»
Examen microbiológico de productos no Estériles: pruebas de recuento microbiano y «capítulo
62» Examen microbiológico de productos no Estériles: Pruebas de microorganismos
específicos. En este capítulo se menciona los métodos, procedimientos equipos, materiales y
reactivos que se utilizó, la matriz de operacionalización de variables de caracterización y de
interés, las técnicas de recolección de datos y el finalmente el análisis de datos.
El cuarto capítulo detalla el análisis y discusión de los resultados obtenidos en la
investigación.
Finalmente, en el quinto capítulo se presentan las conclusiones, recomendaciones,
Bibliografía y Anexos.
3
CAPÍTULO I
1 EL PROBLEMA
1.1 Planteamiento del problema
Los productos farmacéuticos de uso tópico incluyen cremas y ungüentos, se han empleado
durante mucho tiempo para combatir cicatrices de cirugías, lesiones, quemaduras, acné, estrías
y las infecciones bacterianas y fúngicas de la piel. Sin embargo, pueden sufrir deterioro
microbiano debido a malas condiciones de fabricación, envasado o a una distribución y
almacenamiento defectuosos, llegando a ocasionar daños graves a los pacientes que usan estos
productos, debido que su vía de administración es tópica y existe el riesgo de que los
microorganismos entren en el organismo y provoquen una infección. (Rana, 2014)
La contaminación microbiana puede reducir o eliminar el efecto terapéutico de los principios
activos o causar infecciones inducidas por medicamentos contaminados. Los microorganismos
presentes en medicamentos no solo los vuelven peligrosos desde el punto de vista infeccioso,
además pueden cambiar las propiedades físico-químicas y organolépticas de los medicamentos
o cambiar el contenido de los ingredientes activos debido a que los microorganismos pueden
convertir las drogas en productos tóxicos, llegando a ser un grave problema de salud pública.
(Ratajczak, Kubicka, Sawicka, & Długaszewska, 2014)
Desde hace muchos años, se han informado varios casos diferentes de infecciones causadas
por el uso de medicamentos contaminados. El primer caso de una infección inducida por drogas
se informó en 1907, cuando se descubrió que la vacuna contra la peste bubónica estaba
contaminada con un bacilo anaeróbico Gram Positivo. El segundo caso documentado fue una
Infección provocada por la bacteria Salmonella, usualmente ocasionada por la ingesta de
tabletas contaminadas de tiroidina y el último caso documentado fue una infección ocular,
ocasionada al aplicarse un ungüento de hidrocortisona contaminado con Pseudomonas
aeruginosa. (Kallings & Ringertz , 1966).
En la actualidad en el 2012, se informó sobre tres casos de infecciones provocadas por
microorganismos. El primero y el segundo ocasionado por el hongo Aspergillus fumigatus, que
ha afectado a 214 personas con un brote de meningitis fúngica, al aplicar inyecciones de acetato
de metilprednisolona y acetonida de triamcinolona contaminadas. El tercer caso un brote de
bacteriemia por Leclercia adecarboxylata, asociado al uso de viales de heparina contaminados.
(Correa, Mazo, & Valderrama, 2012). El último caso documentado fue en el año 2017, describieron
un brote de infección por Serratia marcescens, por el uso de clorhexidina acuosa al 2%
contaminada. (Urrutia , Domínguez, & Arias, 2017).
4
Estudios realizados por Altunaga (2001), plantean que la elaboración de cosméticos a base
de productos de origen natural requiere un mayor control microbiológico, ya que este tipo de
producto presenta condiciones favorables para el crecimiento microbiano por la excesiva
cantidad de agua en su composición y la mala manipulación que les dan a estos productos desde
su realización. Encontrando contaminación microbiana en las cremas elaboradas a base de fango
el 0.6%. Debido a esto, la seguridad y la calidad de los Productos Naturales de uso tópico
constituyen elementos de importancia para la salud de la población su desarrollo económico y
social. (Altunaga, 2001)
Existen irregularidades en el proceso de producción de medicamentos, que han dado lugar a
que los productos de baja calidad no reciban autorizaciones de comercialización. Groopman,
Pestka y Wu F (2014), estudiaron 1285 muestras de fármacos en forma de tabletas, cápsulas y
ungüentos en Arabia Saudita, los resultados arrojados mostraron que 24 muestras no cumplieron
con los requisitos de la Farmacopea Europea. La causa más común de incumplimiento fue, los
niveles excesivos del recuento máximo aceptable de hongos y levaduras. Los microorganismos
aislados pertenecían al género: Aspergillus. (Groopman, Pestka, & Wu F, 2014)
Estudios realizados por Mugoyela y Mwambete (2010), mencionan que no solo la presencia
de microorganismos en los productos farmacéuticos no estériles, causan infecciones bacterianas
indeseables, sino que también se da por la presencia de toxinas. Ocasionando enfermedades
como por ejemplo la diarrea, gastroenteritis aguda o dolor abdominal. Las infecciones graves
en personas inmunocomprometidas se han asignado a Klebsiella spp. Particularmente
neumonía. Siendo así que el significado de los microorganismos en los productos no estériles
debe ser evaluado en términos del uso del producto, naturaleza del producto y riesgo potencial
para el usuario. (Mugoyela & Mwambete, 2010)
La demanda de Productos Naturales y cosméticos ha crecido notablemente tanto en el Ecuador
como en el resto del mundo, en el Ecuador existen 79 laboratorios farmacéuticos de Productos
Naturales procesados de uso medicinal con permiso de funcionamiento. En el año 2016 la
entidad emitió 36 registros sanitarios de Productos Naturales. Las industrias naturales y
cosméticas mueven en el país unos 350 millones de dólares anuales y está creciendo a un
promedio del 20% anual, en relación al PIB (4244 USD) per cápita de Ecuador alcanzado en el
2011. (Cando , 2013)
En el Ecuador, hay un importante cambio en la tendencia de consumo de estos Productos
Naturales de uso tópico cicatrizantes. En los diferentes sectores comerciales del sur, centro y
norte de Quito, es frecuente el expendio de Productos Naturales de uso tópico. Las personas han
manifestado que cuando llegan a cortarse o tener accidentes, colocan los Productos Naturales
cicatrizantes sobre la herida para que exista una pronta cicatrización y que en algunos casos han
5
sufrido infecciones probablemente por productos contaminados, por lo que existe un problema
de salud pública, ya que los microorganismos que se encuentran en los Productos Naturales
podrían ser transmisibles al paciente y causarle enfermedad.
Un producto cicatrizante no debería estar exento de cumplir los límites microbianos para los
productos de uso cutáneo no estériles y es la Agencia Nacional de Regulación, Control y
Vigilancia Sanitaria (ARCSA), la encargada de realizar inspecciones técnicas de muestras de
los Productos Naturales Procesados de uso Medicinal, para un análisis de control de calidad.
Sin embargo, parece que estos controles no son periódicos y podrían estar circulando productos
que no cumplen con los criterios microbianos respectivos. De tal manera, que en este proyecto
se realizó el control microbiológico de Productos Naturales de uso tópico con fines cicatrizantes
comercializados en centros naturistas y mercados de la ciudad de Quito, debido a que no se han
encontrado estudios en Ecuador sobre este tipo de análisis en estos Productos Naturales, con la
problemática ya mencionada se realizó un diagrama causa-efecto sobre los problemas que
ocasionan la contaminación microbiana en los Productos Naturales de uso tópico con fines
cicatrizantes como se visualiza en el ANEXO A.
1.2 Formulación del problema
¿Los Productos Naturales de uso tópico con fines cicatrizantes que se comercializan en
tiendas naturistas y mercados de la ciudad de Quito, cumplen con el control microbiológico de
las especificaciones de la USP 39 NF 34 para productos de uso cutáneo de formas farmacéuticas
no estériles en cuanto a microorganismos aerobios totales, mohos, levaduras y microorganismos
específicos?
1.3 Preguntas de investigación
¿Cuáles son los Productos Naturales de uso tópico con fines cicatrizantes que constan en la
base de datos del ARCSA?
¿Cuáles son los Productos Naturales de uso tópico con fines cicatrizantes más vendidos en
la Ciudad de Quito?
¿Cuál es el control microbiológico de los Productos Naturales de uso tópico con fines
cicatrizantes?
¿Cuáles son los controles organolépticos, pH y extensibilidad de los Productos Naturales de
uso tópico con fines cicatrizantes?
6
¿Qué Productos Naturales de uso tópico con fines cicatrizantes cumplen con la información
del envase, etiquetas y prospecto, establecido en la Normativa Sanitaria Para la Obtención Del
Registro Sanitario?
1.4 Objetivos de la investigación
1.4.1 Objetivo general.
Realizar el control microbiológico de Productos Naturales de uso tópico con fines
cicatrizantes, comercializados en centros naturistas y mercados de la Ciudad de Quito.
1.4.2 Objetivos específicos.
Revisar la base datos de la Agencia Nacional de Regulación, Control y Vigilancia Sanitaria
(ARCSA).
Realizar un sondeo de opinión sobre los Productos Naturales de uso tópico con fines
cicatrizantes más comercializados y seleccionar los productos más vendidos.
Realizar la aptitud del método de recuento en placa (extensión y vertido) tanto para
microorganismos aerobios (RTMA) como para mohos y levaduras (RTML) y la prueba en
producto.
Identificar los Microorganismos Aislados de los productos naturales de uso tópico con fines
cicatrizantes.
Determinar las características organolépticas, pH y extensibilidad de los Productos Naturales de
uso tópico con fines cicatrizantes.
Contrastar la información del envase, etiquetas y prospecto de los Productos Naturales tópicos
con fines cicatrizantes con la Normativa Sanitaria para la Obtención del Registro Sanitario
emitida por: La Dirección Ejecutiva de la Agencia Nacional de Regulación, Control y Vigilancia
Sanitaria- ARCSA.
7
1.5 Importancia y justificación de la investigación
Se han observado según investigaciones previas que los productos naturales están teniendo
una gran acogida en todas partes del mundo. En América Latina, las preparaciones
farmacéuticas a base de recursos naturales están sujetas a controles de calidad, los cuales son
responsabilidad del titular del registro y el fabricante. Para el caso de las materias primas, antes
de su utilización, deberán someterse a un estricto control de calidad que elimine las posibles
falsificaciones o alteraciones y garantice su identidad. Este proceso comprende ensayos físicos,
químicos y microbiológicos. ( Oficina Económica y Comercial de la Embajada de España en
Bogota, 2005)
En Colombia, el INVIMA es el ente ejecutor de las políticas trazadas por el Ministerio de
Salud y por tanto a través de actividades de control y seguimiento, debe garantizar que la
ciudadanía obtenga productos terminados eficaces, seguros y de buena calidad tanto a nivel de
medicamentos como de productos homeopáticos, cosméticos, insumos para la salud y productos
con base en recursos naturales. Por otra parte, el control de calidad de los productos en proceso
y terminados por parte del INVIMA comprende actividades de inspección y muestreo,
verificación de las propiedades orgánicas, ensayos físico-químicos y controles microbiológicos.
( Oficina Económica y Comercial de la Embajada de España en Bogota, 2005)
En el Perú, la entidad encargada de velar por el control y la vigilancia de los Productos
Naturales es la Dirección General de Medicamentos Insumos y Drogas (DIGEMID), la cual
viene cumpliendo este rol desde diciembre de 1997. Los Productos Naturales están teniendo una
gran acogida también en el Perú, debido a una gran demanda de Productos Naturales, se han
creado muchos laboratorios que los fabrican, no obstante, no todos ellos elaboran productos de
calidad, muchos de ellos venden sus productos sin tener un registro sanitario, en el trabajo de
investigación realizado por Cáceda y Samillán (2015), han revelado la presencia de
contaminación en productos farmacéuticos de origen natural. (Cáceda & Samillán, 2015).
En el Ecuador, la Agencia Nacional de Regulación, Control y Vigilancia Sanitaria (ARCSA),
se centra en controlar los productos de uso y consumo humano en el país, el control sobre
productos fabricados en el territorio nacional o en el exterior, para su importación, exportación,
comercialización, dispensación y expendio. En base a esto, supervisará medicamentos
(biológicos, sujetos a fiscalización y homeopáticos), Productos Naturales de uso medicinal,
cosméticos, productos higiénicos de uso industrial, plaguicidas de uso doméstico, industrial y
salud pública; dispositivos médicos, productos dentales y reactivos químicos de diagnóstico. De
igual forma, el ARCSA tiene a cargo la emisión de permisos de funcionamiento, certificados de
buenas prácticas, notificación y registro sanitario. (Agencia Nacional de Regulación, Control y
Vigilancia Sanitaria , 2018)
8
En Quito, las personas recurren a comprar estos productos que se comercializan libremente
en muchas tiendas naturistas, debido a que sus precios son más económicos y porque muchas
personas prefieren la medicina natural por la creencia de que tienen menos efectos secundarios
que los medicamentos sintéticos. El control permanente por parte de la autoridad para lograr
que el producto mantenga la calidad, seguridad y eficacia desde el momento de su elaboración
hasta que llegue al consumidor y aún más durante su uso es primordial. Debido a que la
contaminación microbiana de estos productos son un grave problema de salud pública, ya que
pueden ocasionar daños en la salud humana, debido que su vía de administración es tópica y no
necesariamente si se aplica sobre piel intacta, y existe el riesgo de que los gérmenes entren en
el organismo y provoquen una infección.
En este trabajo, se investigó si los Productos Naturales de uso tópico con fines cicatrizantes,
que son expendidos en centros naturistas y mercados de la ciudad Quito, cumplen con las
especificaciones establecidas en la USP 39-NF 34, (2016). Con la finalidad de reportar las
posibles irregularidades en la seguridad microbiológica de los productos analizados, que
podrían poner en peligro a la salud del paciente, ya que el uso de productos cicatrizantes
contaminados por microorganismos, puede causar infecciones llegando a agravar las lesiones
del paciente, por lo que estos resultados serán notificados a la Dirección Ejecutiva de la
Agencia Nacional de Regulación, Control y Vigilancia Sanitaria- (ARCSA), para que tome las
medidas pertinentes.
9
CAPÍTULO II
2 MARCO TEÓRICO
2.1 Antecedentes
El uso de Productos Naturales se ha generalizado entre la población, debido a que ha surgido
la necesidad de buscar alternativas naturales a fármacos con acción farmacológica cicatrizante,
dado que es más barata y sostenible. Muchos de estos productos son categorizados como no
estériles, sin embargo, no pueden exceder los límites microbianos establecidos en la USP 39 en
cuanto al recuento total de microorganismos aerobios de hongos y levaduras y la ausencia de
microorganismos objetables.
En un estudio realizado por M. Kubicka, Sawicka, Długaszewska y M. Ratajczak (2014),
demostraron la calidad microbiológica de productos fabricados por diferentes plantas
farmacéuticas en Polonia. Se analizaron un total de 1285 muestras de medicamentos no estériles,
en forma de tabletas, cápsulas, ungüentos y jarabes con diversas composiciones. Se evaluó la
calidad microbiológica de los fármacos y los resultados arrojados mostraron que el porcentaje
de muestras no conformes fue del 1,87%, excediendo los límites máximos permitidos de conteo
microbiológico. Siendo los medicamentos que contenían materias primas de origen natural, los
grupos de medicamentos que no satisfacían los requisitos. Determinando que no cumplió con lo
establecido por la Farmacopea Europea, debido a un recuento excesivo de hongos y levaduras
con un número de muestras igual a doce y el recuento total de microorganismos aerobios con
un número de muestras igual a diez. (Ratajczak, Kubicka, Sawicka, & Długaszewska, 2014)
En otro estudio se analizaron 59 muestras de propóleo, reportándose que en el 4% de las
muestras hay la presencia de Escherichia coli y en el 2% se encontró Staphylococcus aureus.
Los resultados demostraron que el grupo indicador mohos y levaduras fue el más crítico, donde
92 a 94% de las muestras evaluadas estuvieron fuera de los límites exigidos por las
farmacopeas. Se concluyó que la presencia de hongos se puede explicar debido a un mal manejo
asociado a la humedad de la materia prima y el crecimiento de estos microorganismos se puede
dar por la presencia de trazas de miel y polen en el propóleo crudo obtenido de la colmena, lo
cual indica condiciones sanitarias deficientes en el proceso de recolección y conservación de
las muestras. (Talero, Hernández, & Figueroa, 2012)
Hugbo y Onyekweli (2003), evaluaron la calidad microbiológica de diez marcas de cremas
y lociones cosméticas que se comercializan libremente en los mercados en la ciudad de Benín
en Nigeria. Se evaluó sus cargas bacterianas, fúngicas y la capacidad del conservante, así como
también se verificó la información de etiquetas de los productos. Determinando que todos los
productos fueron contaminados en diversos grados. Los resultados mostraron que siete de los
10
diez productos presentaron crecimiento de hongos y nueve de los diez productos tenían
crecimientos bacterianos. Siendo el Staphylococcus spp el microorganismo que más se encontró
en las cremas. Se concluyó que las cremas y lociones cosméticas evaluadas no cumplen con los
estándares de límites microbianos especificados en la farmacopea europea. En el mismo estudio,
de las diez marcas de cosméticos ningún producto dio a conocer la fecha de fabricación y solo
tres indicaron las fechas de vencimiento de sus productos. Nueve de los 10 fabricantes dieron
indicaciones de la inclusión de un conservante, pero no del tipo de conservante utilizado. Con
respecto a los números de lote, solo cuatro empresas dieron los números de lote de los productos.
(Hugbo & Onyekweli, 2003)
Cáceda y Samillán (2015), demostraron la calidad microbiológica de 13 Productos Naturales
expendidos en la ciudad de Tacna, Perú. Basándose en los límites de la OMS para productos
medicinales herbales. Para Bacterias aerobias mesófilas viables, no más de 10 000 ufc/g y para
hongos por 1 g o ml, no más de 100 ufm/g. Los resultados arrojados mostraron ausencia de
patógenos, pero se encontró que el 84,61% de muestras sobrepasan el recuento de mesófilos
aerobios y el 92.3% sobrepasan el recuento de hongos y levaduras, así mismo el 30,77% no
presentaron número de registro sanitario. Concluyendo que los Productos Naturales expendidos
en las casas naturistas no cumplen con las condiciones microbiológicas mínimas para su venta
al público, pudiendo convertirse en una fuente de infecciones al consumidor. Los elevados
números de aerobios mesófilos viables y de hongos totales son resultado de una posible
contaminación de origen natural, siendo un riesgo para la salud de sus consumidores al poder
encontrarse posibles patógenos oportunistas y/o micotoxinas. (Cáceda & Samillán, 2015)
Jwel Rana y Tohura Sultana (2014), evaluaron la calidad microbiológica de 30 tipos
diferentes de productos tópicos farmacéuticos (15 cremas y 15 ungüentos) comúnmente
utilizados para las enfermedades de la piel en Bangladesh. Los resultados arrojados mostraron
una contaminación bacteriana por encima del límite de seguridad en la mayoría de las muestras,
especialmente en ungüentos que, en las muestras de crema. Encontrándose Escherichia coli y
Klebsiella spp en cuatro muestras, Staphylococcus spp en 50% y Pseudomonas spp en 80% de
las muestras. En este trabajo se concluyó que los ungüentos son más propensos al ataque
microbiano que las cremas, debido a sus condiciones de fabricación, envasado y
almacenamiento. (Sultana & Rana, 2014)
En el Ecuador, los Productos Naturales con fines cicatrizantes se comercializan en centros
naturistas y mercados en Quito sin ninguna restricción, y se desconoce si la agencia regulatoria
ARCSA realiza el control posregistro constante de estos productos, por tal razón, este proyecto
realizó el análisis microbiológico de este tipo de Productos Naturales de uso tópico con fines
cicatrizantes que se expenden libremente en Quito.
11
2.2 Fundamento teórico
2.2.1 Definiciones.
Productos Naturales Procesados de Uso Medicinal. – “Es el producto medicinal terminado
y etiquetado cuyos ingredientes activos están formados por cualquier parte de los recursos
naturales de uso medicinal o sus combinaciones, como droga cruda, extracto estandarizado o en
una forma farmacéutica reconocida, que se utiliza con fines terapéuticos. No se considera un
producto natural procesado de uso medicinal, si el recurso natural de uso medicinal se combina
con sustancias activas definidas desde el punto de vista químico, inclusive constituyentes de
recursos naturales, aislados y químicamente definidos”. (ARCSA, 2016)
Producto de venta libre. – “Es el producto medicinal que por su composición y por la acción
farmacológica de sus principios activos, es autorizado para ser expendido o dispensado sin
prescripción facultativa”. (ARCSA, 2016)
Registro Sanitario. – “Es la certificación otorgada por la Agencia Nacional de Regulación,
Control y Vigilancia Sanitaria, para la importación, exportación y comercialización de los
productos de uso y consumo humano señalados en la Ley Orgánica de Salud. Dicha certificación
es otorgada cuando se cumpla con los requisitos de calidad, seguridad, eficacia y aptitud para
consumir y usar dichos productos cumpliendo los trámites establecidos en la Ley Orgánica de
Salud, reglamentos y normativas técnicas que regule la agencia al respecto”. (ARCSA, 2016)
Control posregistro.- “Es el conjunto de actividades técnicas y sanitarias que se realizan en
todas las etapas desde la producción hasta la utilización de los Productos Naturales procesados
de uso medicinal, verificando que los establecimientos que los producen, almacenan,
distribuyen, importan, exportan, comercializan y expenden cumplen con los requisitos técnicos
y legales establecidos en la normativa vigente, con el fin de precautelar que los Productos
Naturales procesados de uso medicinal mantengan las condiciones de calidad, seguridad y
eficacia en base a las cuales la autoridad sanitaria nacional le otorgó el Registro Sanitario”.
(ARCSA, 2016)
2.2.2 Productos más comúnmente utilizados con fines cicatrizantes.
De acuerdo al sondeo de opinión (Anexo B), los Productos Naturales de uso tópico con fines
cicatrizantes que tienen mayor demanda en los centros naturistas y mercados de la ciudad de
Quito son: crema de matico y caléndula, gotas de sangre de drago y tintura de propóleo.
12
2.2.3 Efecto cicatrizante de los Productos Naturales más comúnmente utilizados con fines
cicatrizantes.
S. Benavides (2016), probó el efecto cicatrizante del extracto del propóleo de Abeja Melifera
(Apis Mellifera scutellata) en 20 cabras de la raza Saanen en San Salvador (Ciudad Delgado).
Donde a cada cabra se les hizo una herida situada en la región torácica y se les aplicó
tratamientos de forma tópica en dosis de 2 ml en las heridas dos veces al día, durante un periodo
de cuatro semanas. Finalmente se demostró que el extracto etílico de propóleo al 50% cicatrizó
completamente la herida de las cabras a las cuatro semanas (28 días). (Benavides, 2016)
G. Gallardo & Barboza (2015), determinaron el efecto cicatrizante del gel elaborado del látex
de Croton lechleri “Sangre de Drago” en 15 ratones, en los que se empleó el método de test de
cicatrización y se aplicó los respectivos geles. Donde se obtuvo mayor efecto cicatrizante con
el gel al 2% de látex de Croton lechleri “Sangre de Drago”. ( Gallardo Vásquez & Barboza ,
2015)
M. Vásconez (2015), evaluó la actividad cicatrizante de los extractos de Acíbar de Sábila
(Aloe barbadensis) y Matico (Eupatorium glutinosum) en el dorso de 24 ratones administrados
de manera tópica, hasta cicatrización completa. Los resultados arrojados demostraron que todos
los extractos poseen actividad cicatrizante efectiva terminando la cicatrización en un periodo de
8,33 días debido a la presencia de compuestos antraquinónicos en el Acíbar y flavonoides en el
Matico que al combinarse presentan sinergia. (Vásconez, 2015)
Addis Menéndez (2007), estudió el efecto cicatrizante e irritante ocular dérmico y oftálmico
de una crema al 1% de Calendula officinalis L. Sobre las heridas abiertas en piel de ratas, así
como la evaluación de su índice de irritabilidad dérmica y oftálmica en conejos. Comprobándose
que la crema favorece el proceso de la cicatrización en piel de ratas, además se concluyó que no
es irritante tras su administración en piel y ojos de conejos. Estos resultados demuestran el
posible uso de la crema como futuro agente fitoterapeútico. (Menéndez & Parra, 2007)
2.2.4 Descripción de los componentes de origen natural con fines cicatrizantes.
2.2.4.1 Matico (Piper aduncum).
El Matico o Piper aduncum es un arbusto de unos 4 metros de altura aproximadamente con
flores blancas que pertenece a la familia de la pimienta, conocido también con el nombre de
13
pañil o hierba del soldado, debido a que aliviaban las hemorragias causadas por enfrentamientos
en la guerra. Las propiedades medicinales se encuentran principalmente en las hojas. (Muñoz,
Montes , & Wilkomirsky, 2004)
Parte Utilizada: Hojas
Propiedades y Usos: El infuso es utilizado como diurético, antiinflamatorio, antiséptico
local y cicatrizante. Por vía tópica las hojas suelen ser empleadas en infusión, decocto o
pulverizadas en la cicatrización de heridas, y como pomada en las grietas en los pezones. Se
recurre al infuso o decocto por vía oral en el caso de úlceras digestivas y lesiones en las mucosas.
La infusión de matico es igualmente utilizada en el tratamiento de afecciones hepáticas. (Muñoz,
Montes , & Wilkomirsky, 2004)
2.2.4.2 Caléndula (Calendula officinalis).
Es una planta herbácea de flores amarillas o naranjas que comienza a florecer a principios de
primavera. Las flores tienen la capacidad de cerrarse por la noche y volverse abrir cuando el sol
sale. Todas las partes de la caléndula tienen fuerte olor aromático, desagradable y su sabor es
amargo. Es muy común en las regiones mediterráneas, crecen en la mayoría de los jardines y
terrenos baldíos sin necesidad de ser sembrada. (Rebiere & Rebiere, 2017)
Parte Utilizada: Flores
Propiedades y Usos: Es antiinflamatoria, antimicrobiana, antioxidante, antiviral, antiséptica,
anti fúngica y cicatrizante. Estimula el sistema inmunológico y es beneficiosa para las úlceras.
Las cremas son eficaces para la dermis y protegen la piel. (Rebiere & Rebiere, 2017)
2.2.4.3 Sangre De Drago (Croton lechleri).
Las especies conocidas como sangre de drago, se atribuyen a América tropical y subtropical
desde el Sur de México hasta Sudamérica; son comunes en bosques secundarios y bordes de
bosques, cerca de sitios húmedos. Se propaga por semillas. El árbol del que se extrae la resina
de la sangre de drago es un árbol de copa amplia de 10 a 20 metros de altura con un tronco de
unos 20 a 25 cm. de diámetro y corteza de color grisácea-blanquecina, que al corte exuda una
resina rojiza y por ello recibe ese nombre de “sangre de drago”. (Restrepo , Romero, & Nestor,
2005)
14
Parte Utilizada: Látex, corteza y hojas
Propiedades y Usos: Los estudios del látex determinan sus propiedades antiinflamatorias y
cicatrizante de heridas, estimulante del crecimiento celular, es antioxidante y antibacterial,
antimicótica y antiviral; se usa contra bacterias Gram positivas y para hongos dermatofitos. Es
muy utilizada en la medicina tradicional y en la industria farmacéutica, pues el clorhidrato de
taspina estimula la cicatrización, y su alcaloide tiene propiedades antiinflamatorias. (Restrepo
, Romero, & Nestor, 2005)
2.2.4.4 Propóleo (Própolis).
El origen del propóleo es principalmente vegetal. Se trata de resinas o gomas viscosas e
impermeables al agua que las pecoreadoras van a recolectar en las yemas de árboles como el
álamo, las resinosas, los abedules, castaños y otros árboles. Es utilizado por las abejas que lo
recolectan y cubren con él el interior de su nido con el fin de reforzarlo y calorifugarlo.
Optimizan así la regularización del microclima de la colmena. ( Jean-Prost , 2007)
Composición: El propóleo proviene de la mezcla de sustancias resinosas recogida de los
vegetales, de cera 30 %, de sustancias procedentes de regurgitaciones glandulares segregadas
por las abejas y de polen. El propóleo contiene carburos de hidrogeno, lípidos, alcoholes,
aldehídos y ácidos, sustancias flavonoides como la crisina y galangina, quetonas, vitaminas,
cumarinas y terpenoides. ( Jean-Prost , 2007)
Propiedades y Usos: variables según el origen botánico y geográfico las propiedades
antisépticas y cicatrizantes son conocidas desde hace tiempo. Su poder antiinflamatorio y
anestésico, así como su actividad antiviral bacteriostática y bactericida, estas últimas debido a
la galangina y a la pinocembrina. Todas estas particulares aptitudes permiten al propóleo, bajo
forma de ungüento o de extracto alcohólico, acelerar la cicatrización de heridas y quemaduras,
cuidar las afecciones de la piel, hacer desaparecer verrugas, sabañones, eczemas, etc. ( Jean-
Prost , 2007)
2.2.5 Heridas
Una herida es una pérdida de continuidad de la piel o mucosa producida por algún agente
físico o químico. (Salem, Perez, & Henning, 2000)
15
2.2.5.1 Clasificación de Heridas.
Las heridas se pueden clasificar en dos categorías generales: agudas y crónicas. Las heridas
agudas “normalmente siguen de un proceso de reparación ordenado y secuencial que da como
resultado el restablecimiento continuo de la integridad anatómica y funcional”. Por el contrario,
“las heridas crónicas no siguen un proceso ordenado y secuencial para producir integridad
anatómica y funcional, o sigue el proceso de reparación alcanzar un resultado anatómico y
funcional sostenido”. (Salem, Perez, & Henning, 2000)
2.2.6 Cicatrización
La cicatrización de heridas en piel es un proceso de alta complejidad orientado a recuperar
la integridad del tejido, permitiendo su regeneración y restaurando sus funciones. (Guarín &
Quiroga, 2013)
2.2.6.1 Cicatriz.
Son marcas o señales en la piel que se producen como resultado de la curación de una herida
o lesión. El proceso se realiza por la acción del colágeno que producen los fibroblastos de las
células cercanas a la herida. El exceso de colágeno es el que produce la cicatriz que suele ser
roja en principio y, poco a poco, alcanza la coloración de la piel. El tejido de la cicatriz no es
tan elástico ni posee las secreciones aceitosas del tejido normal, lo cual hace que aparezcan más
secas al tacto y que siempre posean una cierta sensación de picor o dolor. El proceso de
cicatrización suele ser más intenso en las personas jóvenes que producen cicatrices más grandes
y más gruesas que las mayores. (Guarín & Quiroga, 2013)
2.2.6.2 Tipos de cicatrización.
En el cierre primario se aproximan los tejidos alterados por suturas, grapas o telas
adhesivas. Con el tiempo la síntesis, depósito y enlace transversal de colágeno y otras proteínas
matrices, que tienen una importancia vital en este tipo de reparación, proporcionan al tejido
fuerza e integridad.
En el cierre primario tardío, la aproximación de los bordes de la herida se pospone hasta
varios días después que se originó la herida. En el retraso del cierre está indicado para prevenir
16
la infección de heridas con una contaminación bacteriana importante, cuerpos extraños o
traumatismo tisular extenso.
Durante el periodo en que permanece abierta, es necesario cambiar apósitos de solución
salina estéril, húmedos, cuando menos dos veces al día para que la herida sea óptima para el
cierre. Debe evitarse el uso de agua oxigenada y yodóforos en estas heridas abiertas porque estas
soluciones destruyen los tejidos del huésped y las bacterias. La justificación para retrasar el
cierre primario se basa en los eventos biológicos normales de la cicatrización. Si la herida
permanece abierta, es menor la probabilidad de invasión bacteriana. En el tiempo que la herida
permanece abierta ocurre cambios que disminuyen de manera significativa la probabilidad de
infección después del cierre. (Jiménez, César, MD., 2008)
El cierre espontáneo o cierre “secundario” de una herida, ocurre cuando los bordes de la
misma se acercan entre sí por el proceso biológico de contracción
La falta de cierre espontáneo de una herida abierta es un fenómeno que origina una herida
crónica. Las heridas de espesor parcial cicatrizan por el proceso de epitelización. Ocurre primero
por migración y a continuación mitosis de células epiteliales. (Jiménez, César, MD., 2008)
2.2.6.3 Proceso de cicatrización.
El proceso de cicatrización activado a partir del daño producido se describe, por lo general,
como una sucesión de eventos independientes. En esencia se puede entender como un conjunto
de cuatro fases solapadas e interconectadas y dependientes de la activación y de la acción celular
que estimulan el crecimiento, reparación y remodelación del tejido, lo que permite el
restablecimiento de las características físicas, mecánicas y eléctricas que favorecen las
condiciones normales del tejido. Para entender un poco más este proceso, a continuación, se
describen las 4 fases referidas: (Guarín & Quiroga, 2013)
Fase de coagulación
Esta fase inicia inmediatamente después de presentarse la lesión y se altera la integridad del
tejido; tiene una duración de hasta 15 minutos. Su objetivo principal es evitar la pérdida de
fluido sanguíneo mediante el cese de la hemorragia y la formación del coágulo, protegiendo así
el sistema vascular y la función de los órganos vitales.
Fase de inflamación
17
Esta fase tiene su inicio hacia el minuto 16 y presenta una duración de hasta seis días; se
presenta como respuesta protectora e intenta destruir o aislar aquellos agentes que representen
peligro para el tejido.
Fase de proliferación
Es la tercera etapa dentro del proceso de cicatrización, derivada del proceso de inflamación
y precursora de la fase de maduración; se inicia hacia el tercer día y dura aproximadamente de
15 a 20 días. El objetivo de esta fase es generar una barrera protectora, con el fin de aumentar
los procesos regenerativos y evitar el ingreso de agentes nocivos.
Fase de maduración
Esta fase se caracteriza por la formación, organización y resistencia que obtiene el tejido al
formar la cicatriz. (Guarín & Quiroga, 2013)
2.2.6.4 Fitoterapia de la cicatrización.
La Fitoterapia consiste en el empleo de plantas medicinales para fines terapéuticos.
Argumentos a favor del uso de plantas medicinales, sin desmerecer a los medicamentos
convencionales, pueden ser tenidos en cuenta a la hora de tratar determinadas situaciones que
afecten a la salud:
• Reparación global del organismo.
• Mayor efecto preventivo.
• Menores efectos secundarios.
• Efecto más duradero, debido a su mejor tolerancia los tratamientos pueden seguirse durante
largos periodos de tiempo.
• Acción polivalente, ya que a diferencia de los medicamentos (que son prescritos para una
dolencia muy específica), las plantas tienen múltiples propiedades, por lo que pueden actuar
sobre diferentes dolencias al mismo tiempo.
• Complemento seguro, pueden servir como complemento a tratamientos con
medicamentos convencionales con un menor riesgo de interacciones. (López & Revuelta García,
2012)
Tratamientos específicos a base de plantas medicinales
18
Patología: Úlceras y Heridas: El tratamiento se basa en plantas de acción cicatrizante y
antiséptica, principalmente. Si la herida es limpia y cerrada se procederá al lavado de la herida
con infusiones o decocciones de las plantas que veremos a continuación, y si la herida está
infectada o es una herida abierta por ejemplo en las úlceras se aplicaran cataplasmas o
compresas. Fitoterapia: Camomila, Nogal, Caléndula, Sanícula y Equinacea. (López & Revuelta
García, 2012)
La función principal de la fitoterapia en el tratamiento de las cicatrices se centra en el proceso
de cicatrización y supone la utilización de una serie de plantas que tienen como objetivo
fundamental:
Desinflamar la herida.
Favorecer la cicatrización al incrementar la regeneración celular.
Impedir las infecciones bacterianas en heridas producidas por quemaduras, cortes, acné.
(Tenesaca, 2015)
2.2.6.5 Mecanismos relacionados con la cicatrización de heridas.
En todos los procesos de cicatrización participan tres mecanismos biológicos muy distintos;
sin embargo, hay diferencias importantes en la contribución de cada uno según el tipo de herida.
La epitelización es el proceso por el cual migran queratinocitos y a continuación se dividen
para recubrir la pérdida de espesor parcial de piel o mucosa.
La contracción es el mecanismo para el cual hay un cierre espontáneo de heridas cutáneas
de espesor total o constricción de órganos tubulares, como el colédoco o el esófago, después de
una lesión.
El depósito de matriz de tejido conjuntivo es el proceso por el cual se incorporan
fibroblastos hacia el sitio de la lesión y producen una nueva matriz de tejido conjuntivo. Este
proceso es muy importante en el cierre primario de heridas, sean de piel, tendones o anastomosis
intestinales. La colágena transversal y su organización en el tejido conjuntivo que se forma en
el proceso proporcionan la fuerza e integridad a todos los tejidos. (Dominguez, M. Galiano J,
Martínez F, Pérez J., 2002)
2.2.7 Descripción de formas farmacéuticas de uso tópico.
2.2.7.1 Cremas.
19
Son preparaciones semisólidas destinadas a aplicarse sobre la piel o sobre ciertas mucosas
con la finalidad de conseguir una acción local, dar lugar a una penetración de los principios
activos o por su acción emoliente o protectora. Están compuestas por un excipiente o base,
simple o compuesto, de origen natural o sintético, formando un sistema de una o varias fases.
En este excipiente se pueden incorporar principios activos solidos o líquidos, disueltos o
dispersos. Reciben esta denominación los sistemas multifásicos constituidos por una fase acuosa
y otra oleosa, pudiendo ser A/O y O/A, dependiendo del emulgente que incorporen. Tiene un
aspecto homogéneo. Estos son utilizados masivamente no solo para el cuidado de la piel o para
aliviar dolores, inflamaciones sino también como cicatrizante de heridas, entre muchas otras
aplicaciones. (Hernández, Moreno, & Zaragozá, 2010)
Dentro de las preparaciones semisólidas se incluyen las cremas, ungüentos, pastas, pomadas
y geles. Estas formas farmacéuticas están formuladas con excipientes y principios activos que
pueden encontrarse en solución, suspensión o emulsión. (Jover & Bermejo, 2005)
Clasificación de las cremas
Una de las clasificaciones de las cremas, en la que se toma en cuenta las características
fisicoquímicas, son las del tipo de emulsión que forman y se clasifica en: Hidrófilas y Lipófilas.
como se muestra en la tabla 1. (Cadena, 2005)
Tabla 1.Clasificación de Cremas Cutáneas.
CREMA EMULSION
Crema
Hidrófilas
Aceite – Agua
Cremas
Lipófilas
Agua – Aceite
Nota: (Cadena, 2005) En: Folleto de Tecnología Farmacéutica
Cremas hidrófobas o lipófilas: son aquellas en las que la fase externa es la oleosa por
contener emulgentes A/O, como alcoholes de lanolina, ésteres de sorbitan y mono glicéridos.
Cremas hidrófilas: en las que la fase externa es acuosa o por contener emulgentes O/A,
como jabones de sodio y trietanolamina, alcoholes grasos sulfatados, polisorbatos y ésteres de
ácidos y alcoholes grasos. Pueden también incorporar emulgentes A/O que refuerzan la acción
principal. (Hernández, Moreno, & Zaragozá, 2010)
20
Características de las cremas:
Buena tolerancia (no irritación, o sensibilización).
Inercia frente al principio activo (compatibilidad física y química), así como frente al
material de acondicionamiento.
Estabilidad frente a factores ambientales para garantizar su conservación.
Consistencia conveniente para que su extensión sobre la piel sea fácil y puedan dispensarse
en tubos.
Caracteres organolépticos agradables.
Capacidad para incorporar sustancias solubles en agua y en aceite.
Capacidad para actuar en piel grasa o seca.
Facilidad para transferir rápidamente a la piel las sustancias activas. No deshidratar, ni
desengrasar la piel (Torres, 2012)
Componentes de la crema
Una crema usualmente está constituida de aceites o ceras, agente emulsionante, agentes
antioxidantes, aromatizantes, conservantes y humectantes. (Aulton, 2001)
Conservantes: Se incluyen en la formulación con la finalidad de prevenir el crecimiento que
pudieran estar presentes en la materia prima o que se introducen en el producto durante el uso.
Las características adecuadas que debe poseer un conservante son un amplio espectro frente a
todas las bacterias levaduras y hongos; ausencia de actividad tóxica, irritante o sensibilizante,
una hidrosolubilidad alta y compatibilidad con los demás componentes y con el envase. (Aulton,
2001)
Productos usados para proteger a las cremas de la contaminación microbiana
Los conservantes antimicrobianos, se incluyen en la fórmula de las cremas para mantener la
estabilidad del producto. La incorporación de conservantes en las formulaciones cosméticas es
necesaria debido a que, los cosméticos en general, son una excelente fuente de nutrientes para
bacterias, hongos y levaduras. (Cando , 2013)
La eficacia antimicrobiana de un sistema conservante se evalúa sobre la base de la cantidad
de microorganismos eliminados o cuyo crecimiento es inhibido. Los puntos críticos para evaluar
su eficacia son: la selección del microorganismo, el nivel de microorganismos en el inóculo, el
21
esquema de muestreo y la interpretación de datos. (Cando , 2013)
Diversos autores han definido los atributos de un conservador ideal:
-Efectivos en concentraciones relativamente bajas frente a un amplio espectro o variedad de
microorganismos, que podrían causar enfermedad o deterioro del producto.
-Solubles en la concentración requerida.
-Atóxicos y no sensibilizantes en las concentraciones usadas.
-Compatibles con los componentes de la fórmula y los componentes del envase.
-Libres de olores o colores objetables.
-Estables en un amplio espectro de condiciones. (Cando , 2013)
2.2.7.2 Gotas de uso tópico.
Son un tipo de formas líquidas cutáneas que pueden ser disoluciones, emulsiones o
suspensiones. Son preparados líquidos, acuosos o ligeramente alcohólicos en los que los
principios activos van disueltos o en suspensión con acción local para aplicar sobre la piel
(epidermis/dermis) o mucosas. (Hernández, Moreno, & Zaragozá, 2010)
Los preparados farmacológicos que se aplican directamente sobre la piel están formados por:
– Fármaco o principio activo
– Vehículo o base
– Productos secundarios como conservantes, aromatizantes y colorantes.
Debe evitarse la absorción trasncutánea del principio activo y excipientes.
Utilidad: principalmente en dermatología, también administración de antiinflamatorios,
antihistamínicos, anestésicos locales. (Hernández, Moreno, & Zaragozá, 2010)
2.2.7.3 Tinturas.
Las tinturas son soluciones alcohólicas o hidroalcohólicas preparadas de materiales vegetales
o sustancias químicas; Una tintura es un compuesto farmacéutico q se consigue a partir de la
acción de algún disolvente (alcohol, éter, vinagre, etc.) sobre sustancias vegetales, animales o
22
minerales. La tintura es un producto extractivo obtenido por la acción de un vehículo adecuado
sobre la droga vegetal. La USP describe específicamente dos procesos para la preparación de
tinturas: por percolación y por maceración. Su administración es de Uso tópico. (Gennaro, 2003)
Clasificación
Las tinturas se dividen en simples y compuestas: las primeras constan de alcohol y una sola
sustancia, y las segundas de alcohol y muchas sustancias reunidas.
Vehículos
Los vehículos más utilizados son las mezclas hidroalcohólicas, pero en algunos casos se
incorpora también glicerina.
Para las hierbas menos resinosas (albahaca, orégano, etc.) se utiliza un alcohol de menos
graduación (entre 60 y 70 grados) y para las más resinosas (mirra, eucalipto, canela, etc.) se
utiliza de mayor (entre 70 y 80 grados). (Gennaro, 2003)
2.2.8 Control de calidad de productos de uso tópico.
El Control de Calidad consiste en realizar mediciones de parámetros del producto,
determinando si los valores obtenidos están en concordancia con unas especificaciones
preestablecidas. Los ensayos de control de calidad se realizan con la finalidad de asegurar que
el producto terminado cuenta con la calidad apropiada. (Fernández-Montes, E. A., 2003)
2.2.8.1 Criterios de aceptación microbiológica para formas farmacéuticas no estériles
según la Farmacopea de Estados Unidos.
El examen microbiológico de productos no estériles se efectúa con los métodos: Pruebas de
Recuento Microbiano <<capítulo 61>> y Pruebas de Microorganismos Específicos <<capítulo
62>>, según la USP 39 NF 34, (2016).
La USP 39 NF 34, (2016). Indica una serie de lineamientos para la manipulación y evaluación
de las muestras de productos no estériles que van a ser sometidos a un análisis microbiológico.
Los análisis a los que deben ser sometidos los productos no estériles son recuento total de
23
microorganismos aerobios (RTMA), recuento total de hongos y levaduras (RTML) y
microorganismos específicos. Los criterios de aceptación para productos farmacéuticos no
estéril están establecidos en: Examen microbiológico de productos no estériles: criterios de
aceptación para preparaciones Farmacéuticas y sustancias de uso farmacéutico <<capítulo
1111>>, que se detallan en la Tabla 2.
24
Tabla 2. Criterios de aceptación para la calidad microbiológica de formas farmacéuticas no estériles.
Vía de administración Recuento total de
microorganismos aerobios
(ufc/g o ufc/ml)
Recuento total de Hongos y
levaduras (ufc/g o ufc/ml)
Microorganismos
específicos
Preparaciones no acuosas para uso oral
103 102
Ausencia de Escherichia coli (1 g o 1 ml)
Preparaciones acuosas para uso oral
102 101
Ausencia de Escherichia coli (1 g o 1 ml)
Uso rectal 103 102
----------
Uso gingival 102 101
Ausencia de Staphylococcus aureus (1 g o 1 ml)
Ausencia de Pseudomonas aeruginosa (1 g o 1 ml)
Uso oromucosal 102 101
Ausencia de Staphylococcus aureus (1 g o 1 ml)
Ausencia de Pseudomonas aeruginosa (1 g o 1 ml)
Uso cutáneo 102 101
Ausencia de Pseudomonas aeruginosa (1 g o 1 ml)
Ausencia de Staphylococcus aureus (1 g o 1 ml)
Uso nasal 102 101
Ausencia de Pseudomonas aeruginosa (1 g o 1 ml)
Ausencia de Staphylococcus aureus (1 g o 1 ml)
Uso auricular 102 101
Ausencia de Pseudomonas aeruginosa (1 g o 1 ml)
25
Ausencia de Staphylococcus
aureus (1 g o 1 ml)
Uso vaginal 102 101
Ausencia de Pseudomonas aeruginosa (1 g o 1 ml)
Ausencia de Staphylococcus aureus (1 g o 1 ml)
Ausencia de Candida albicans (1 g o 1 ml)
Parches transdérmicos
(límites para un parche
incluyendo la capa adhesiva
y el soporte)
102 101
Ausencia de Pseudomonas aeruginosa (1 parche)
Ausencia de Staphylococcus aureus (1 parche)
Uso por inhalación (los
requisitos especiales aplican
a las preparaciones líquidas
para nebulización)
102 101
Ausencia de Pseudomonas aeruginosa (1 g o 1 ml)
Ausencia de Staphylococcus aureus (1 g o 1 ml)
Ausencia de bacterias Gramnegativas tolerantes a
la bilis (1 g o 1 ml) Obtenido de: (USP 39 NF34, 2016) Volumen 1 / *En Productos No Estériles. Farmacopea de los Estados Unidos de América. Capítulo 1111.pág:1438
Elaborado por: Jonathan Martínez
26
2.2.8.2 Examen microbiológico de productos no estériles: criterios de aceptación para
preparaciones farmacéuticas y sustancias de uso farmacéutico.
La presencia de ciertos microorganismos en preparaciones no estériles, puede tener el potencial de
reducir y hasta inactivar la actividad terapéutica del producto y de afectar adversamente la salud del
paciente. Los fabricantes deben asegurar por tanto una baja biocarga de formas farmacéuticas terminadas
mediante la implementación de las guías de Buenas Prácticas de Fabricación vigentes durante la
fabricación, el almacenamiento y la distribución de preparaciones farmacéuticas. (USP 39 NF34, 2016)
2.2.8.3 Métodos para el recuento total de microorganismos aerobios totales (RTMA) y el recuento
total de hongos y levaduras (RTML) en productos No Estériles.
Existen tres métodos para el recuento microbiano de microorganismos aerobios, y dos para el RTHL.
La elección de uno de estos métodos se considera la naturaleza del producto y el límite de microorganismos
que debe cumplir. (USP 39 NF34, 2016)
Métodos para el recuento total de microorganismo aerobios totales:
Filtración por Membrana
Método de Recuento en Placa (extensión o vertido)
Método del Número Más Probable (NMP)
Métodos para el recuento total de mohos y levaduras:
Filtración por Membrana
Método de Recuento en Placa (extensión o vertido)
Métodos de Recuento en Placa:
Se fundamentan en el crecimiento de los microorganismos en un medio de cultivo, en placa, formando
colonias. Por lo tanto, se determinan por este método sólo las células microbianas viables en las
condiciones de trabajo. Como las colonias Microorganismo pueden originarse tanto de una célula como de
un grupo de células, se utiliza el término Unidades Formadoras de Colonias (ufc). Las condiciones óptimas
de recuento se dan cuando desarrollan entre 30 y 300 colonias por placa. (USP 39 NF34, 2016)
Estos métodos miden el número de células viables en el producto. Los métodos de contaje en placa son:
método de extensión en superficie y vertido en placa. (USP 39 NF34, 2016)
Método de Vertido en Placa: Se agrega a la placa 1 ml de la muestra diluida y de 15 a 20 ml manteniendo
la temperatura de ambos medios a no más de 45ºC. Se empleará Agar Digerido de Caseína para recuento
27
total de microorganismos aerobios (RTMA) y Soja o Agar Sabouraud Dextrosa para recuento total de
hongos filamentosos y levaduras (RTCHL), al menos dos placas de Petri para cada microorganismo. La
muestra y el agar se homogeniza y se deja solidificar. Se incuba las placas para bacterias a una temperatura
de 30 a 35°C por ≤ 3 días y para hongos a una temperatura de 20 a 25°C por ≤ 5. Luego de la incubación
se realiza el conteo de unidades formadoras de colonias, donde se tomará la media aritmética de los
recuentos obtenidos en cada medio y se calculará el número de ufc en el inóculo original. (USP 39 NF34,
2016)
Método de Extensión en Superficie: Se Agrega de 15 a 20 ml de Agar Digerido de Caseína y Soja o
Agar Sabouraud Dextrosa a cada placa de Petri, aproximadamente a 45º C, y se deja solidificar. Se Seca
las placas, por ejemplo, en un gabinete con flujo de aire laminar o en una incubadora. Se empleará al menos
dos placas de Petri para cada microorganismo. Se esparce un volumen medido de no menos de 0,1 ml del
inóculo y se extiende uniformemente con el asa de Digralsky sobre la superficie del Agar Digerido de
Caseína Soja para recuento total de microorganismos aerobios (RTMA) y sobre el Agar Sabouraud
Dextrosa para recuento total de hongos y levaduras (RTML). Esta técnica permite el crecimiento de las
colonias de microorganismos aerobios sobre la superficie del medio. Los cultivos se incuban y se realiza
el conteo. (USP 39 NF34, 2016)
2.2.8.4 Interpretación de los resultados.
El recuento total de microorganismos aerobios (RTMA) se considera equivalente al número de ufc
encontrado usando Agar Digerido de Caseína-Soja; si se detectan colonias de hongos en este medio,
contarlas como parte del RTMA. El recuento total combinado de hongos filamentosos y levaduras (RTML)
se considera equivalente al número de ufc encontrado empleando Agar Sabouraud Dextrosa; si se detectan
colonias de bacterias en este medio, contarlas como parte del RTML. (USP 39 NF34, 2016)
Estos criterios de aceptación se fundamentan en los resultados individuales o en el promedio de
recuentos repetidos.
- 101 ufc: recuento máximo aceptable = 20;
- 102 ufc: recuento máximo aceptable = 200;
- 103 ufc: recuento máximo aceptable = 2000;
Las pruebas han sido diseñadas principalmente para determinar si una sustancia o preparación cumple
con una especificación establecida de calidad microbiológica. (USP 39 NF34, 2016)
En caso de cremas los límites de aceptación son 102 (ufc/g o ufc/ml) para recuento total de
microorganismos aerobios y 101 (ufc/g o ufc/ml) para recuento total de hongos y levaduras. (USP 39 NF34,
2016)
28
2.2.8.5 Aptitud del método de recuento de microorganismos aerobios y de mohos y levaduras en
presencia del producto.
Es el test para demostrar la aplicabilidad del método para la detección de microorganismos en el
producto de prueba.
La validación debe mostrar que la recuperación de un inóculo de ≤100 ufc del microorganismo no es
inhibida por el producto o por el método de neutralización. (USP 39 NF34, 2016)
2.2.8.6 Determinación de Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa. Como
microorganismos específicos en formas farmacéuticas de uso tópico.
Un microorganismo objetable es aquel que no puede estar presente en un producto ya que puede
degradarlo y causar infecciones al paciente. Las pruebas de identificación de microorganismos patógenos
permitirán determinar la ausencia, o presencia limitada, de microorganismos específicos que puedan ser
detectados en las condiciones descritas por la USP 39.
Las pruebas han sido diseñadas principalmente para determinar si una sustancia o preparación cumple
con alguna especificación establecida de calidad microbiológica. (USP 39 NF34, 2016)
2.2.8.7 Microorganismos específicos para productos de uso cutáneo Staphylococcus aureus
y Pseudomonas aeruginosa.
Características microbiológicas Staphylococcus aureus.
Estos microorganismos se caracterizan por presentar una disposición típica en forma de racimos de
uvas. Staphylococcus aureus denominado así por sus colonias amarillas (aureus = oro, dorado). Los
miembros de esta especie son anaerobios facultativos. Crecen después de incubarse durante 18-24 horas,
formando colonias lisas, elevadas, brillantes y de bordes enteros, presentan consistencia cremosa de 0.5-1.5
mm de diámetro. Producen coagulasa que se manifiesta por su capacidad para coagular el plasma y es
resistente al calor, a la desecación y puede crecer en medios con grandes cantidades de hasta el 12% de
NaCl. (Tortora, Berdell, & Case, 2007)
Medios de aislamiento e Identificación
El medio recomendable y usado por la mayoría de los laboratorios es el agar sal manitol. Este medio
permite realizar la identificación presuntiva de Staphylococcus aureus por la pigmentación amarilla.
Debido a que esta bacteria fermenta el manitol se genera un cambio de color en el medio que vira de rojo
pálido a amarillo. Se realiza con el empleo de la tinción de Gram, pruebas bioquímicas como: prueba de la
catalasa, fermentación de glucosa. La prueba de la coagulasa sigue siendo la más utilizada. (Tortora,
Berdell, & Case, 2007)
29
Enfermedades causadas por Staphylococcus aureus
Produce varias toxinas que contribuyen a su patogenicidad porque aumentan su capacidad de invadir el
cuerpo o dañar los tejidos. Las infecciones causadas por Staphylococcus aureus se producen por lesiones
cutáneas, traumáticas o quirúrgicas que favorecen la penetración de la bacteria desde la piel a los tejidos
profundos. Esta bacteria es capaz de causar enfermedades de amplio espectro como infecciones menores
de la piel e infecciones invasoras serias. Staphylococcus aureus, es uno de los patógenos que se observa
con mayor frecuencia en infecciones de heridas quirúrgicas, tanto superficiales como profundas, así como
también está implicado en las infecciones de úlceras crónicas como el pie diabético. (Tortora, Berdell, &
Case, 2007)
Características microbiológicas de Pseudomonas aeruginosa.
Es un bacilo Gram negativo aerobio, considerado un patógeno oportunista. El tamaño esta entre 0,5 um
y 0,8 um de espesor por 1,5 um y 3,8 um de largo. No forma esporas. Su temperatura óptima de crecimiento
es de 37ºC, pero puede tolerar temperaturas de hasta 45ºC- 50ºC. Puede sobrevivir durante al menos 70 días
en agua destilada. Esta bacteria tiene motilidad positiva gracias a su flagelo. En relación con su
metabolismo, es aerobio (aunque puede desarrollarse en condiciones anaerobias utilizando nitrato),
catalasa positiva y oxidasa positiva. Se caracteriza por producir una variedad de pigmentos, como la
piocianina (de color azul verdoso), la pioverdina (pigmento fluorescente de color verde amarillento) y la
piorrubina (de color rojo). (Prats , 2008)
Medios de aislamiento e Identificación
Más del 95% de las cepas de Pseudomonas aeruginosa pueden identificarse observando la presencia de
las siguientes características primarias: Colonias grandes, se produce piocianina, que imparte un color
verdoso al medio de cultivo y las colonias son oxidasa positiva (dentro de los 10 segundos), tiene un ligero
aroma a frutas. Su morfología es característica de identificación en algunos medios de cultivo, por ejemplo,
en medio agar Cetrimida, es un bacilo curvo o recto, aislado o en pareja o cadenas cortas. (Prats , 2008)
Enfermedades causadas por Pseudomonas aeruginosa
Es un patógeno que causa infecciones en personas inmunocomprometidas, como por ejemplo personas
con quemaduras en la piel, puede causar neumonías, infecta el tracto urinario, tejidos, heridas, y es el
causante de otras enfermedades en la sangre. También, la Pseudomonas aeruginosa es causante de
dermatitis, originada por disminución del control de la calidad del agua de uso doméstico. La transmisión
se produce principalmente a través del contacto de la piel lesionada o reblandecida y de las mucosas con
el agua o con los objetos contaminados. En el ámbito sanitario, constituyen una fuente de infección para
los pacientes el instrumental quirúrgico, los respiradores, los catéteres o las manos del personal sanitario
contaminadas. Es el factor más común causante de altas fiebres en infecciones. (Prats , 2008)
2.2.9 Control fisicoquímico de productos no estériles de uso cutáneo.
30
2.2.9.1 Control organoléptico.
Aspecto: se observará visualmente las características macroscópicas de la muestra si existe algún
cambio como separación de fases en la emulsión, precipitación, turbidez indican contaminación
microbiana. (ANVISA, 2008)
Color: El color se utiliza como una forma de identificación y facilita la aceptación por parte del paciente.
Por lo cual, el color debe ser uniforme en todos los lotes de su forma farmacéutica. (FDA, 2003)
Olor: El olor es un factor importante ya que cambios en él indican contaminación microbiana. (FDA,
2003)
2.2.9.2 Control de pH.
La determinación de pH consiste en medir el potencial que se desarrolla a través de una fina membrana
de vidrio que separa dos soluciones con diferente concentración de protones, es un sensor utilizado en el
método electroquímico para medir el pH de una disolución. (Bedoya, 2015) Si el producto es semisólido o
sólido se debe preparar una solución, dispersión o suspensión acuosa de la muestra en una concentración
conocida preestablecida y con el electrodo apropiado determinar el pH.
2.2.9.3 Extensibilidad
La extensibilidad se la define como el incremento de superficie que presenta una muestra de emulsión
cuando se la somete a la acción de pesos crecientes, en intervalos fijos de tiempo. La extensibilidad es la
propiedad que poseen ciertos cuerpos no ductiles de ser extendidos por la presión o por la acción de dos fuerzas.
(Fernández-Montes, 2003)
2.3 Marco legal
CONSTITUCIÓN DE LA REPÚBLICA TÍTULO II
CAPÍTULO SEGUNDO. (DERECHOS DEL BUEN VIVIR)
SECCIÓN SÉPTIMA. (SALUD)
Art. 32.- La salud es un derecho que garantiza el Estado, cuya realización se vincula al ejercicio de
otros derechos, entre ellos el derecho al agua, la alimentación, la educación, la cultura física, el trabajo, la
seguridad social, los ambientes sanos y otros que sustentan el buen vivir.
El Estado garantizará este derecho mediante políticas económicas, sociales, culturales, educativas y
ambientales; y el acceso permanente, oportuno y sin exclusión a programas, acciones y servicios de
31
promoción y atención integral de salud, salud sexual y salud reproductiva. La prestación de los servicios
de salud se regirá por los principios de equidad, universalidad, solidaridad, interculturalidad, calidad,
eficiencia, eficacia, precaución y bioética, con enfoque de género y generacional.
Título VII. Régimen de buen vivir.
CAPÍTULO primero. (Oclusión y equidad)
SECCIÓN SEGUNDA. (Salud)
Art. 358.- El sistema nacional de salud tendrá por finalidad el desarrollo, protección y recuperación de
las capacidades y potencialidades para una vida saludable e integral, tanto individual como colectiva, y
reconocerá la diversidad social y cultural. El sistema se guiará por los principios generales del sistema
nacional de inclusión y equidad social, y por los de bioética, suficiencia e interculturalidad, con enfoque de
género y generacional.
Art. 359.- El sistema nacional de salud comprenderá las instituciones, programas, políticas, recursos,
acciones y actores en salud; abarcará todas las dimensiones del derecho a la salud; garantizará la
promoción, prevención, recuperación y rehabilitación en todos los niveles; y propiciará la participación
ciudadana y el control social.
Art. 360.- El sistema garantizará, a través de las instituciones que lo conforman, la promoción de la salud,
prevención y atención integral, familiar y comunitaria, con base en la atención primaria de salud; articulará
los diferentes niveles de atención; y promoverá la complementariedad con las medicinas ancestrales y
alternativas. La red pública integral de salud será parte del sistema nacional de salud y estará conformada
por el conjunto articulado de establecimientos estatales, de la seguridad social y con otros proveedores que
pertenecen al Estado, con vínculos jurídicos, operativos y de complementariedad.
LEY ORGÁNICA DE LA SALUD TÍTULO PRELIMINAR
CAPITULO I
DEL DERECHO A LA SALUD Y SU PROTECCIÓN
Art. 2.- Todos los integrantes del Sistema Nacional de Salud para la ejecución de las actividades
relacionadas con la salud, se sujetarán a las disposiciones de esta Ley, sus reglamentos y las normas
establecidas por la autoridad sanitaria nacional.
Art. 3.- La salud es el completo estado de bienestar físico, mental y social y no solamente la ausencia
de afecciones o enfermedades. Es un derecho humano inalienable, indivisible, irrenunciable e intransigible,
32
cuya protección y garantía es responsabilidad primordial del Estado; y, el resultado de un proceso colectivo
de interacción donde Estado, sociedad, familia e individuos convergen para la construcción de ambientes,
entornos y estilos de vida saludables.
NORMATIVA SANITARIA PARA LA OBTENCIÓN DEL REGISTRO
SANITARIO CAPITULO VII
DEL ENVASE, ETIQUETAS Y PROSPECTO
Art. 28.- Del envase: El envase de los productos deberá estar fabricado con materiales que no produzcan
reacción física o química con el producto y que no alteren su calidad, seguridad y eficacia. Cuando sea el
caso, el envase deberá proteger al producto de la luz.
Art. 29.- De las etiquetas: Las etiquetas de los Productos Naturales procesados de uso medicinal
importados y nacionales deberán estar redactadas en idioma castellano y en caracteres claramente legibles e
indelebles, deberán contener la siguiente información:
a. Nombre comercial del producto;
b. Nombre científico (género y especie) del/los recursos/s natural/es;
c. Cantidad contenida en el envase;
d. Composición cuantitativa en peso de recurso natural;
e. Forma farmacéutica o presentación comercial, según corresponda;
f. Vía de administración;
g. Posología y tiempo máximo de uso; cuando corresponda
h. Advertencias y Contraindicaciones
i. Modo de empleo; según corresponda,
j. Condiciones de almacenamiento;
k. Modalidad de venta;
l. Indicaciones terapéuticas; cuando corresponda
m. Fechas de elaboración y vencimiento;
n. Número de lote;
o. Nombre del laboratorio fabricante, ciudad y país;
p. Número de registro sanitario;
q. Leyendas:
33
1. Generales Obligatorias:
i. "Producto medicinal, manténgase fuera del alcance de los niños".
ii. "En el caso de presentar efectos adversos, comunicarse inmediatamente con la ARCSA y con
el Titular del Registro Sanitario"
2. Específicas:
i. "Si usted está tomando algún medicamento, consulte con su médico antes de ingerir este
producto", para productos de venta libre.
ii. "Si los síntomas persisten, consulte a su médico", para productos de venta libre.
iii. "Muestra Médica, prohibida su venta", para las muestras médicas, tanto en etiquetas internas
como externas.
iv. "Este producto está dirigido a tratar el efecto sintomático, no es curativo", para el caso de los
Productos Naturales Procesados de Uso Medicinal Demostrado pre-Clínicamente.
Art. 30.- En el caso que las etiquetas del envase primario que por su naturaleza no puedan incluir toda
la información antes descrita, deberán contener mínimo la siguiente información:
a. Nombre comercial del producto;
b. Nombre científico (género y especie) del recurso natural;
c. Nombre del laboratorio fabricante;
d. Composición cuantitativa en peso de recurso natural utilizado;
e. Vía de administración; (no parenterales ni estériles)
f. Fecha de vencimiento;
g. Número de lote;
h. Número de Registro Sanitario.
Art. 31.- Prospecto. - En el envase y en todas sus presentaciones de los Productos Naturales procesados
de uso medicinal, deberá incluirse un prospecto dirigido al usuario, el que deberá contener toda la
información detallada de los aspectos descritos a continuación:
a. Nombre comercial del producto;
b. Composición cuantitativa en peso de recurso natural utilizado y cualitativa en excipientes;
c. Nombre y dirección del Titular del Registro Sanitario y del titular del producto;
d. Información del producto:
1. Nombre científico (género y especie) del/os recurso/s natural/es;
34
2. Forma farmacéutica;
3. Indicaciones terapéuticas aprobadas.
e. Información antes de usar el producto:
1. Contraindicaciones;
2. Precauciones de uso y advertencias: Uso en mujeres embarazadas o cuando se sospeche de sus
existencias; y en período de lactancia, niños, ancianos, personas con ciertas patologías específicas, efectos
que puede producir sobre la capacidad para conducir o utilizar maquinaria, información sobre excipientes
y sus advertencias;
3. Interacciones, según corresponda.
f. Información de uso:
1. Modo de empleo para un uso adecuado del producto;
2. Vía de administración;
3. Posología y duración del tratamiento;
4. Síntomas en caso de sobredosis y acciones a seguir.
g. Información de Reacciones Adversas:
1. Descripción de los efectos adversos o reacciones adversas;
2. En el caso que no se tuviera reportes de reacciones adversas, se indicará lo siguiente: "No se
conocen, no existen estudios de este producto sobre reacciones adversas, por lo que, si usted presenta algún
tipo de reacción adversa durante o después de consumir este producto, informar inmediatamente a la
ARCSA y al Titular del Registro Sanitario".
h. Información de conservación del producto:
1. Condiciones de almacenamiento;
2. Advertencias sobre ciertos signos visibles de deterioro del envase;
i. Leyendas:
Art. 32.- En caso de Productos Naturales Procesados de uso medicinal que dispongan solo de envase
primario y requieran incluir el prospecto, este deberá adjuntarse de tal manera que no sea fácilmente
desprendible. (ARCSA, 2016)
2.4 Hipótesis
Hi: Los Productos Naturales de uso tópico con fines cicatrizantes analizados contienen una carga
microbiana aceptable de acuerdo con las especificaciones de la Farmacopea de Estados Unidos (USP 39
NF34) y se encuentran libres de microorganismos específicos, siendo aptos para el paciente.
35
Ho: Los Productos Naturales de uso tópico con fines cicatrizantes no contienen una carga microbiana
aceptable de acuerdo con las especificaciones de la Farmacopea de Estados Unidos (USP 39 NF34) y tienen
microorganismos específicos, siendo inadecuados para el paciente.
2.5 Conceptualización de variables
En los Productos Naturales de uso tópico con fines cicatrizantes: cremas de matico y caléndula, gotas
de sangre de drago y tintura de propóleo. Se realizó la aptitud del método, el recuento total de
microorganismo aerobios: Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis; el recuento
total de mohos y levaduras: Candida albicans mediante el contaje por ufc/g o ufc/ml. La prueba en los
Productos Naturales de uso tópico con fines cicatrizantes para el RTMA y para RTML; microorganismo
específico Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa. Finalmente, con la extensibilidad de las
cremas, el control organoléptico y el pH.
36
CAPÍTULO III
3 METODOLOGÍA
3.1 Diseño de la investigación
El presente estudio se basó en los siguientes parámetros de Investigación:
Tuvo un enfoque cuantitativo, ya que se realizó un estudio experimental, el mismo que proporcionó datos
que son cuantificados. De acuerdo con Delgado, (2016) menciona que el enfoque cuantitativo estudia una
realidad objetiva, recoge información empírica de cosas o aspectos que se pueden (contar, pesar o medir)
y que por su naturaleza siempre arroja números como resultado (Delgado, 2016). Con el enfoque
cuantitativo en esta investigación se encaminó a cuantificar la carga microbiana (recuento total de aerobios
totales, recuento total de mohos y levaduras, y microorganismo especifico), en los Productos Naturales de uso
tópico con fines cicatrizantes, el cual se obtuvo mediante un proceso rigurosamente sistemático, y lo más
objetivo posible.
Esta investigación se encuentra dentro del nivel Descriptivo, de acuerdo con Cazau, (2006) menciona
que el nivel descriptivo va a determinar propiedades importantes para medir y hace referencia de como es
y como se manifiesta un fenómeno y la frecuencia con la que ocurre. Pertenece a este tipo de nivel ya que
su finalidad desde el punto de vista estadístico: es estimar parámetros mediante la Estadística descriptiva
(recoger, analizar e interpretar los datos) y porque permitirá la medición precisa de variables de interés en
la muestra (Cazau, 2006). Por ende, este tipo de nivel descriptivo se relaciona con el estudio de los Productos
Naturales de uso tópico con fines cicatrizantes.
Los tipos de investigación que apoyaron la investigación fueron de 3 tipos: El primero que es por el
lugar que es una Investigación de campo, ya que este estudio se llevó a cabo con materiales necesarios y
equipos de los laboratorios de Microbiología General y Tecnología Farmacéutica de la Facultad de
Ciencias Químicas. El segundo es por la fuente de datos que es una investigación documental también
bibliográfica, porque los estudios se compararon con las especificaciones establecidas en la USP 39 NF34
(2016) y el tercer tipo de investigación según la intervención del Investigador es Experimental, ya que este
proyecto de investigación analizó el control microbiológico de Productos Naturales de uso tópico con fines
cicatrizantes comercializados en la ciudad Quito, a través de las metodologías: aptitud del método con
microorganismos aerobios totales, mohos y levaduras, la prueba en producto (extensión y vertido), e
incluyendo el análisis de microorganismo específico, concluyendo con un análisis de extensibilidad en las
cremas, organoléptico y pH.
37
3.2 Población y muestra
Población: La población está constituida por 18 marcas de Productos Naturales de uso tópico con fines
cicatrizantes (Cremas, gotas y tintura) de diversos laboratorios que se venden en los Centros Naturistas y
Mercados de la ciudad de Quito.
Muestra: La muestra está constituida de 6 marcas de Productos Naturales de uso tópico con fines
cicatrizantes de laboratorios como: Neo-fármaco, Pronavit, Ecua-Farma Natural, Apícola Apinelly,
Paschero que son comprados en centros naturistas y mercados de la ciudad de Quito. Cada marca de
producto cicatrizante se analizó por triplicado, dando un total de 18 muestras para el análisis. La elección
del tamaño de muestra se basó en un sondeo de opinión, donde se seleccionó los productos más vendidos
de acuerdo al censo realizado en los Centros Naturistas y Mercados de los sectores (Sur, Centro y Norte)
de la ciudad de Quito, que permite determinar el tamaño de la muestra de acuerdo con la población de
estudio como se visualiza en el ANEXO B.
3.3 Equipos, Materiales, Medios de Cultivo y Productos para análisis.
En este proyecto de investigación se utilizó los siguientes Equipos, materiales, medios de cultivo y productos
para el control microbiológico de los Productos Naturales de uso tópico con fines cicatrizantes.
3.3.1 Equipos:
Balanza Analítica: Scout Pro.
Estufa: Binder Fd.
Mechero
Autoclave: Daihan Scientific.
Micropipetas: 100 ul Thermo Scientific.
Incubadora: bacterias: MMM Group.
Incubadora: Hongos y Levaduras: MMM Group.
Vortex: Classic Velp Scientifica.
Espectrofotómetro: Fisher Scientific.
Potenciómetro: Mettler Toledo.
Refrigerador: Indurama.
Calculadora: Casio.
Computador: hp.
38
Micropipetas: 1000 ul Sumedix.
3.3.2 Materiales:
Cajas Petri: Gold Lab.
Varillas de vidrio
Tubos de Ensayo: Pyrex
Pipetas Volumétricas: Thermo.
Asas de Inoculación
Asa de Digralsky
Erlenmeyer 250 ml 500 ml
Erlenmeyer 1000 ml: Gold Lab.
Vasos de precipitación. Pyrex
Porta objetos
Cubre objetos
Jeringuillas 5 ml
Jeringuillas 10 ml
Puntas 100 ul y 1000 ul
Probetas: Pyrex.
Pera de Succión
Marcadores
Cinta adhesiva
Papel aluminio
Papel empaque
Gradilla
3.3.3 Medios de Cultivo:
Agar Candida Cromogénico.
Tryptic Soy Agar (TSA): Difco.
Tryptic Soy Broth (TSB): Difco.
Mannitol-Egg-yolk-Polymyxine-agar (MYP): Merck.
Sabouraud Dextrose: Difco.
Agar Sal Manitol: Merck. Agar Cetrimide: Difco.
39
3.3.4 Reactivos:
Tween 80.
Hidróxido de sodio.
Cristal Violeta: Merck Safranina: Merck.
Lugol: Merck.
Alcohol – Cetona: Merck
Agua destilada
Solución salina
3.3.5 Productos para análisis:
Los productos se adquirieron en mercados y centros naturistas en los sectores (Sur, centro y norte) de la
ciudad de Quito. En la Tabla 3 se encuentra la descripción de los Productos Naturales de uso tópico con fines
cicatrizantes que se requirieron, indicando su nombre, forma farmacéutica, lote, registro sanitario, fecha de
elaboración y caducidad.
Tabla 3. Características de los Productos Naturales de uso tópico con fines cicatrizantes.
Código de
productos Nombre
del
producto
natural
Forma
Farmacéutica
Casa
comercial
Presentación
Fecha de
elaboración
Fecha de
caducidad Lote
Registro
sanitario n=18
M01
A
Matico Crema Neo fármaco Crema 12g 12-2017 12-2021 171201 074-
MNN1203 B
C
M02
A
Matico Crema Pronavit Crema 20g 04-2016 04-2019 UMT2
70416
0222-
MNN10-06 B
C
M03
A
Propóleo Tintura Apícola
Apinelly Gotero 30 ml 11-2017 11-2019 1777
1036-
MNN-08-
13 B
C
M04
A Sangre de
drago Gotas
Ecua-farma
natural
Gotero sin
cantidad * 12-2020 * * B
C
M05
A Sangre de
drago Gotas Sin marca
Gotero sin
cantidad * * * * B
C
M06
A
Caléndula Crema Paschero Crema 60g 05-2017 05-2019 020517 M50OCO1
576-056C B
C *Producto viene sin información Elaborado por: Jonathan Martínez.
40
3.4 Métodos y Procedimientos.
Revisión base datos ARCSA y realización de sondeo de opinión.
En función de los Productos Naturales de uso tópico con fines cicatrizantes comercializados en Quito,
se revisó y comparó con la base de datos de la Agencia Nacional de Regulación Control y Vigilancia
Sanitaria, en vista de que no se encontró la información requerida. Se realizó un sondeo de opinión en los
centros naturistas y mercados de la ciudad de Quito, sobre los Productos Naturales de uso tópico con fines
cicatrizantes que se dispensan con mayor continuidad, donde se escogió a los productos para realizar el
control microbiológico como se visualiza en el ANEXO B.
Control de esterilidad de medios de cultivo.
Aseguramiento de esterilidad de medios de cultivo: Trypticase Soy Agar (TSA), Agar Sabouraud
(SAB), Tryptic Soy Broth (TSB), Agar Cetrimida, Agar Manitol Salado (MSA).
Se incubó las cajas Petri con cada medio de cultivo sin inocular microorganismos a 35°C por 24 a 48
horas para bacterias y a 25°C por 3-5 días para hongos y levaduras. Se determinó que los medios son
estériles, ya que no se observó crecimiento de bacterias ni hongos en las cajas Petri.
Control de esterilidad del ambiente en la zona de procesamiento de muestras.
Se destapó una caja de TSA y una caja SAB cerca de la zona de procesamiento de los Productos
Naturales de uso tópico cicatrizantes para determinar el control microbiológico del aire y se incubo las
cajas de TSA en un período de 24 a 48 horas a 37°C y las cajas de SAB en un tiempo de 3-5 días a 25°C.
Examen microbiológico de productos no estériles.
Se realizó la Aptitud del método, el conteo del recuento total de microorganismos aerobios (RTMA) y
el recuento total de mohos y levaduras (RTML), microorganismos especificos, identificación y aislamiento
de microorganismos, que se visualizan en los diagramas de flujo en el ANEXO C, D, E y F.
Aptitud del método de Recuento en placa en Presencia del Producto.
La aptitud del método se realizó siguiendo los lineamientos establecidos en la USP 39 NF 34 (2016),
41
en el «capítulo 61» (Examen microbiológico de productos no Estériles: pruebas de recuento microbiano).
Se desinfectó la superficie del envase con Etanol al 70% (v/v) y se secó con una gasa estéril. Se preparó la
muestra diluyendo 1 g o 1 ml del producto en 9 ml de Tryptic Soy Broth (TSB) y se usó 1 ml de Tween 80
con lo cual se neutraliza la actividad antimicrobiana y ayuda en la mezcla de dos sustancias poco miscibles,
actuando como emulsificante, ayudando en la solubilización de aceites, pomadas en agua (USP 39 NF34,
2016)
Consecutivamente, se inoculó una suspensión microbiana de concentración conocida (100 ufc/ml) de
microorganismos: Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, y la levadura:
Candida albicans. Se sembró por el método de extensión en dos cajas en los medios de TSA para bacterias
y en dos cajas en SAB para mohos y levaduras, las cuales se incubaron a 37°C por 24 horas y 25°C de 3-
7 días respectivamente. El método es apto pues se recuperaron alrededor 100 ufc/ml. Se tomó la media
aritmética de los recuentos en caja y se calculó el número de ufc por g o por ml del producto. (USP 39
NF34, 2016) . ANEXO C.
Prueba en producto. Recuento total de microorganismos aerobios (RTMA) y recuento total de mohos
y levaduras (RTML).
En este estudio se siguió los lineamientos de la USP 39 NF 34 (2016). Se desinfectó la superficie del
envase con Etanol al 70% (v/v) y se secó con una gasa estéril, Se preparó la muestra diluyendo 1g o 1ml
del producto en 9 ml de Tryptic Soy Broth (TSB) y se usó 1 ml de Tween 80, Consecutivamente, Se sembró
por el método de extensión en dos cajas en los medios de TSA para bacterias y en dos cajas en SAB para
mohos y levaduras, las cuales se incubaron a 37°C por 24 horas y 25°C de 3-7 días respectivamente. (USP
39 NF34, 2016)
Por la técnica de extensión se colocó 0,1 ml de la muestra diluida en la placa Petri con TSA para el recuento
total de microorganismos aerobios y en SAB para el recuento total de mohos y levaduras. Se extendió
uniformemente con el Asa de Digralsky. Los medios se incubaron a temperatura entre 30º y 35º C de 24 a 48
horas para RTMA y a una temperatura entre 20º y 25º C durante un período de 3 a 7 días para RTML y
finalmente se contó las unidades formadoras de colonia y se calculó las ufc/ml y ufc/g del producto. (USP 39
NF34, 2016)
Por la técnica de vertido se colocó 1 ml de la muestra diluida en la placa Petri y se incuba con 25 ml de TSA
para el recuento total de microorganismos aerobios y en 25 ml de SAB para el recuento total de mohos y
levaduras. Los medios se incubaron a temperatura entre 30º y 35º C de 24 a 48 horas para RTMA y a una
temperatura entre 20º y 25º C durante un período de 3 a 7 días para RTML y finalmente se contó las unidades
formadoras de colonia y se calculó las ufc/ml y ufc/g del producto. (USP 39 NF34, 2016)
42
Determinación de Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa como microorganismos
específicos en formas farmacéuticas de uso tópico.
Preparación de la Muestra e Incubación Previa: Se disolvió 1g y 1ml del producto en un tubo con 9 ml
de TSB (dilución 1 en 10). Se Añadió 1 ml de polisorbato 80 como un agente tensoactivo, para favorecer
la suspensión de sustancias poco humectables. Se Incubo a una temperatura de 30ºC a 35ºC durante un
período de 18 a 24 horas.
Selección y Subcultivo: Se Agitó el cultivo revitalizado y se subcultivo en una placa de Agar Cetrimida,
para Pseudomonas aeruginosa y para Staphylococcus aureus se subcultivo en una placa de Agar Manitol
Salado. Se incubaron las placas a una temperatura de 30ºC a 35ºC durante un período de 18 a 72 horas.
Interpretación: Si en el Agar Cetrimida se visualiza el crecimiento de colonias productoras de pigmentos
verdes, indicará la posible presencia de Pseudomonas aeruginosa. Esto se confirmará mediante pruebas de
identificación, una tinción Gram, la prueba de oxidasa y los resultados en TSI. Si en el Agar Manitol Salado
se visualiza el crecimiento de colonias amarillas o blancas rodeadas de una zona amarilla indicará la posible
presencia de Staphylococcus aureus. Esto se confirmará mediante pruebas de identificación, una tinción
Gram, la prueba de catalasa y coagulasa. El producto cumplirá con la prueba si no se desarrollan colonias
o si los resultados de las pruebas de identificación confirmatorias son negativos.
Identificación de los microorganismos aislados en los Productos Naturales de uso tópico con fines
cicatrizantes.
Para la identificación de las bacterias se procedió a realizar primero una tinción Gram para diferenciar las
bacterias Gram-positivas y bacterias Gram-negativas y los hongos se los identificaron por tinción simple.
Que se visualiza en los diagramas de flujo en los ANEXO E.
Bacillus spp.
Se realizó la tinción Gram a las colonias que crecieron en el medio TSA agar, dando como resultados
bacilos Gram-positivos. Se realizó los siguientes pasos para su identificación:
Identificación en Agar MYP
Para diferenciar el tipo de Bacillus se procedió a sembrar a través de la técnica de estriación en el agar
43
MYP y se incubó a 37 °C de 24 a 48 horas.
Si el resultado es positivo para Bacillus subtilis, las colonias serán cremosas de color amarillo sin zona
de precipitado.
Si el resultado es un crecimiento óptimo de las colonias típicas de Bacillus cereus las colonias serán
grandes, planas, secas, rosadas de halo de precipitación por la degradación de yema de huevo.
Identificación de Candida albicans.
Para la identificación de levaduras que crecieron en el medio SAB, se procedió a realizar primero una
tinción simple. ANEXO E.
El crecimiento de colonias de Candida en el agar SAB, fueron lisas, brillantes, de color blanquecino.
Se colocó una colonia en el portaobjetos para realizar la Tinción Simple con cristal violeta, se observó con
el lente de 100x colocando aceite de inmersión, posteriormente se determinó que eran levaduras, para la
identificación del tipo de levadura se realizaron las siguientes pruebas:
Prueba del tubo germinal
Se colocó de una a tres cepas de la levadura en 1ml de suero humano. Se incubó a 35°C durante de 2-3 horas,
luego se colocó una gota de la emulsión sobre un portaobjetos limpio y desengrasado, se colocó el cubre objetos
y se visualizó con el lente de 100x, .la formación del tubo germinal, que es una extensión filamentosa de la
levadura.
Identificación en agar cándida cromógenico.
A través de la técnica de estriación se procedió a sembrar la cepa en el agar cromogénico para Candida
y se incubó a 25 °C de 3 a 5 días. Si el resultado es positivo se da un crecimiento de colonias cremosas de
color verde claro.
Determinación del Control organoléptico, pH y extensibilidad de Productos Naturales de uso tópico
con fines cicatrizantes.
Control Organoléptico.
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El control organoléptico se realizó con la intervención de los sentidos para la identificación del Aspecto,
olor y color. Para el color se colocó 5 ml en el caso de las gotas y tinturas y para las cremas se colocó 5
gramos en unos vasos dosificadores y se observó la variación de color; en el olor se percibió con la
interacción de los receptores olfativos y el Aspecto se observó visualmente las características
macroscópicas de la muestra. ANEXO D
Determinación de pH.
Para la detección del pH de las muestras, se utilizó el potenciómetro del laboratorio de Tecnología
Farmacéutica, se colocó 5ml de las gotas y tintura y 5 gramos en el caso de las cremas en un vaso
dosificador y con el electrodo apropiado de medición se determinó el pH, luego se lavó con agua destilada
al electrodo y se procedió a detectar el nuevo el valor del pH. ANEXO D
Determinación de extensibilidad.
Para el ensayo de extensibilidad, se colocó con la jeringuilla 1ml de la crema en el centro de la cruz
marcada en una placa de vidrio y se colocó una placa superior sobre ésta. Se midieron los diámetros
horizontal y vertical y se determinó el promedio del diámetro del área del círculo formado. ANEXO D
Comparación de la información del envase, etiquetas y prospecto de los Productos Naturales tópicos
con fines cicatrizantes con la Normativa Sanitaria para la Obtención del Registro Sanitario emitida por:
ARCSA.
En este estudio una vez que se obtuvo los Productos Naturales de uso tópico con fines cicatrizantes, se
verificó que los envases, etiquetas y prospecto cumplan con lo establecido en la Normativa Sanitaria para
la Obtención del Registro Sanitario.
Previo al análisis microbiológico se inspeccionó cuidadosamente el aspecto que presentaron los
productos al momento de recibirlos y se anotó las irregularidades que se observaron en el envase, etiqueta
y prospecto.
3.5 Matriz de Operacionalización de variables
En la tabla 4 se muestra la matriz de operacionalización de variables de este estudio, con sus respectivas
variables, dimensiones e indicadores.
45
Tabla 4.Matriz de Operacionalización de variables.
VARIABLE DIMENSIONES INDICADORES
CARACTERIZACIÓN
Productos Naturales con fines
cicatrizantes
Identificación de la muestra
Información envase
Información Etiquetas
Información Prospecto
Cumple / No cumple
Control microbiológico de
productos no estériles
ufc/ml
ufc/g
Cumple / No cumple INTERÉS
Recuento total de microorganismo
aerobios
Staphylococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa
Bacillus subtilis
ufc /g
ufc /ml
Recuento total de Mohos y
Levaduras
Candida albicans
Aspergillus niger
ufc /g
ufc /ml
Microorganismo específico Staphylococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa Ausencia
Elaborado por: Jonathan Martínez.
3.6 Técnicas e instrumentos de recolección de datos
Se utilizó Instrumentos de recolección de datos, en los cuales se registraron en tablas los datos recopilados
de la aptitud del método, prueba en producto, microorganismos específicos, la información de las etiquetas,
envases y prospectos de los 6 productos de uso tópico cicatrizantes. También se utilizó un cuaderno de
laboratorio donde se registraron los datos de la extensibilidad de las cremas, control organoléptico y la
determinación de pH. ANEXO G.
3.7 Técnicas de procesamiento y análisis de datos
Para el análisis de ufc/g, ufc/ml para aptitud del método, prueba en producto, porcentajes de
microorganismos aislados y el porcentaje de productos contaminados. Se utilizó la aplicación de hojas de
cálculo en Microsoft Excel. Para la representación de los datos se utilizó una Estadística descriptiva y
tablas.
Los resultados de RTMA y RTML se compararon con los criterios de la Farmacopea de Estados Unidos,
USP 39 NF34 (2016), para productos de categoría dos (productos de uso cutáneo), estableciendo una matriz
de aceptación o rechazo en los productos cicatrizantes de uso cutáneo de acuerdo con las especificaciones.
46
Se calculó el porcentaje de Cremas y gotas en las que estuvieron presentes los microorganismos
identificados.
Se expresó mediante porcentajes los productos cicatrizantes que no cumplen para el recuento total de
microorganismos aerobios (RTMA) y el recuento total de mohos y levaduras (RTML).
Mediante la caracterización del control organoléptico, pH y extensibilidad en los productos cicatrizantes
de uso tópico, se estableció si los cambios de pH, características organolépticas o extensibilidad en las
cremas están o no con relación a su grado de contaminación microbiana.
Los resultados de la información del envase, etiquetas y prospecto de los Productos Naturales tópicos con
fines cicatrizantes se compararon de acuerdo con las especificaciones con la Normativa Sanitaria para la
Obtención del Registro Sanitario emitida por: La Dirección Ejecutiva de la Agencia Nacional de
Regulación, Control y Vigilancia Sanitaria- ARCSA. Estableciendo una matriz de aceptación o rechazo en
los productos cicatrizantes de uso cutáneo.
47
CAPITULO IV
4 Análisis y discusión de resultados
4.1 Resultados del análisis microbiológico.
En 15 Productos Naturales de uso tópico con fines cicatrizantes, se realizó el análisis microbiológico,
tales como la Aptitud del método, la prueba en producto y los microorganismos especificos.
4.2 Aptitud del método de recuento microbiano en presencia del producto.
La tabla 5 muestra el recuento final de los microorganismos recuperados en ufc/ml y ufc/g de la
suspensión inoculada de microorganismos en presencia de los productos con fines cicatrizantes. La
realización de la aptitud del método en presencia del producto nos permitió asegurarnos de que el
crecimiento de los microorganismos no sea inhibido por las propiedades antimicrobianas de los productos,
para lo cual en cada tubo que contenían 9 ml de TSB más 1 g de cada uno de los Productos Naturales
cicatrizantes, se inoculó una suspensión de microorganismos de concentración conocida (100 ufc/ml o 100
ufc/g) de: Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis y Candida albicans. La
validación debe mostrar que la recuperación del inóculo de 100 ufc del microorganismo no es inhibida por
el producto o por el método de neutralización.
Con el método de vertido, no se obtuvieron buenos resultados para las 15 muestras de Productos
Naturales con fines cicatrizantes, que representan el 100% de las muestras. Ya que el crecimiento por este
método fue <10ufc/ml y <10ufc/g. A pesar de que la cantidad de la muestra analizada en este método, es
de 1000 ul. El no crecimiento de las colonias de microorganismos, pudo deberse a la sensibilidad al calor
de los microorganismos presentes en los Productos Naturales cicatrizantes, pudiendo ser afectados por el
agar caliente que se coloca sobre los 1000 ul de muestra en el método de vertido. En cambio, que, en la
técnica de extensión, la muestra añadida es de 100 ul, menor que en la de vertido, pero esta técnica fue en
la que se aislaron más microorganismos. Por lo que en este estudio se realizó el RTMA solo por el método
de extensión, debido a que en las pruebas preliminares se obtuvo un contaje mayor de microorganismos.
Tabla 5.Test de aptitud del método en presencia del producto, método de extensión para el RTMA.
n=15
Productos
semisólidos Inoculo Inicial
Recuento final
de las cajas
ufc/g Microorganismos
Staphylococcus aureus M01 100 100
M02 100 100
48
M06 100 100
Pseudomonas aeruginosa
M01 100 150
M02 100 200
M06 100 150
Bacillus subtilis
M01 100 200
M02 100 100
M06 100 250
Microorganismos Productos
líquidos Inoculo Inicial
Recuento final
de las cajas
ufc/ml
Staphylococcus aureus
M03* 100 0
M04 100 100
M05 100 100
Pseudomonas aeruginosa
M03* 100 0
M04 100 150
M05 100 100
Bacillus subtilis
M03* 100 0
M04 100 -
M05 100 -
*Se Descarta M03, debido a % de Etanol >20 en la formulación del producto cicatrizante.
-: Método no es apto, debido a que el producto se encuentra contaminado con Bacillus subtilis y
nos podría dar resultados falsos positivos.
En negrillas los datos que están por fuera del contaje de recuperación (100ufc/ml o ufc/g).
Elaborado por Martínez Jonathan.
La recuperación de todos los microorganismos es adecuada para la mayoría de las muestras de los
Productos Naturales con fines cicatrizantes. El microorganismo que mejor se recupera en todas las
muestras es Staphylococcus aureus y el que tiene valores por fuera del contaje de recuperación (100 ufc/ml)
es Pseudomonas aeruginosa. El elevado contaje de recuperación en ufc/g para la muestra M01 y M06 de
la suspensión microbiana de Bacillus subtilis, se debería a que existe adicionalmente la presencia de estos
microorganismos en los productos cicatrizantes que se inocularon.
En las muestras M04 y M05 no fue apto realizar la aptitud del método, ya que nos llevaría a dar un
resultado falso positivo, debido a que estas muestras se encontraron contaminadas con este tipo de
microorganismo e interferían con el contaje real de los microorganismos estudiados.
En el producto M03, la recuperación de las bacterias inoculadas no fue exitosa debido al contenido de
Etanol existente en la formulación de este producto, Sin embargo, para verificar que efectivamente es el
etanol el que está inhibiendo el crecimiento bacteriano, se realizó un blanco con etanol y agua simulando
la formulación del producto (27,42ml Etanol y 2,58ml Agua ) y realizando el mismo procedimiento a la
muestra M03 para la aptitud del método en presencia del producto, dándonos como resultado que el etanol
es el que actúa como antimicrobiano. Es así que debido al porcentaje de etanol que presentó el producto
no fue necesario realizar el control microbiológico, por lo que se descartó este lote de producto M03.
49
La tabla 6 muestra el recuento final de los microorganismos recuperados en ufc/ml y ufc/g de la
suspensión inoculada de microorganismos en presencia de los productos con fines cicatrizantes por el
método de extensión y vertido. La recuperación de Candida albicans, en el RTML es adecuada para el
método de extensión que para el método de vertido como se muestra en la tabla 6. No se realizó la aptitud
del método en presencia del producto para Aspergillus niger. Debido a que al realizar el análisis de Prueba
en Producto no existió ningún crecimiento de este tipo de hongo en ningún producto cicatrizante.
Tabla 6.Test de aptitud del método en presencia del producto, método de extensión y vertido para el RTML.
Método de extensión
Microorganismos Producto
semisólidos
Inoculo
Inicial
Recuento final de las cajas
ufc/g
Candida albicans
M01 100 100
M02 100 100
M06 100 150
Productos
líquidos
Inoculo
Inicial
Recuento final de las cajas
ufc/ml
M03* 100 0
M04 100 150
M05 100 100
*Se Descarta M03, debido a % de Etanol >20 en la formulación del producto cicatrizante.
Elaborado por Martínez Jonathan.
Estos resultados indican que la aptitud del método de recuento en presencia del producto a través de la
técnica de extensión para el RTMA y RTML, es apta para las 5 (M01, M02, M04, M05, M06) marcas de
Método de vertido
Microorganismos Producto
semisólidos Inoculo Inicial
Recuento final de las
cajas
ufc/g
Candida albicans
M01 100 15
M02 100 30
M06 100 60
Productos
líquidos Inoculo Inicial
Recuento final de las
cajas
ufc/ml
M03* 100 0
M04 100 45
M05 100 50
50
Productos Naturales cicatrizantes, indicando que la aptitud del método que se realizó siguiendo los
lineamientos establecidos en la USP 39 NF 34 (2016), es suficiente para la neutralización de las actividades
antimicrobianas en los Productos Naturales cicatrizantes.
4.3 Recuento total de microorganismos aerobios en los Productos.
Las especificaciones de la USP 39 NF34, (2016) para las formas farmacéuticas semisólidas y líquidas
de uso cutáneo son un máximo de 102 ufc/ml o ufc/g para microorganismos aerobios totales. En la Tabla
7 se observa que, los Productos Naturales de uso tópico con fines cicatrizantes M04a, M05a, M05b, M06b
superan el límite de 102 ufc/ml y representan el 26.67%, es decir estos Productos Naturales cicatrizantes
no cumplen con la especificación de la USP 39 NF34,2016. Al analizar los productos por la técnica de
extensión, 11 de las 15 muestras de productos cicatrizantes presentaron un contaje menor a 102 ufc/ml,
siendo el 73.33% de las muestras. El contaje más alto fue en la muestra M05b con un recuento de 2.4 x
105 ufc/ml.
Tabla 7. Recuento total de microorganismos aerobios (RTMA) en los Productos Naturales con fines cicatrizantes.
Método de extensión
Muestras n=15 ufc/ml de muestra Interpretación
CUMPLE O NO CUMPLE
M03*
A <10 C
B <10 C
C <10 C
M04
A 2.0x105 NC
B <10 C
C <10 C
M05
A 7.9x103 NC
B 2.4x105 NC
C <10 C
Muestras ufc/g de muestra Interpretación
M01
A <10 C
B <10 C
C <10 C
M02
A 5.0x101 C
B <10 C
C <10 C
M06
A 1.0x102 C
B 5.0x102 NC
C <10 C
*Se Descarta M03, debido a % de Etanol >20 en la formulación del producto cicatrizante.
En negrillas el contaje de microorganismos aerobios que sobrepasan la especificación de la USP39 NF 34,2016 para
formas farmacéuticas de uso cutáneo. C: Cumple; NC: No Cumple.
Elaborado por Martínez Jonathan.
Los Productos Naturales cicatrizantes que excedieron con la especificación de la USP 39 NF34, (2016)
en los métodos de recuento en placa representan un 26.67%. Estos resultados contrastan con los del estudio
51
realizado por Hugbo y Onyekweli (2003), en el que se estudiaron 10 marcas de cremas y lociones
cosméticas, donde el 90% tienen un crecimiento microbiano que sobrepasan las especificaciones
establecidas por la Farmacopea Europea. En otro estudio, que también se evaluó 13 Productos Naturales,
encontró que el 84,61% de las muestras evaluadas estuvieron fuera de los límites exigidos por las
farmacopeas. (Cáceda & Samillán, 2015).
Los posibles factores que pudieron influir para que se exceda la especificación de la carga microbiana
quizás fue a que no existió un control microbiológico estricto después de cada proceso de manufactura
realizado, falta de controles de calidad a los productos terminados y malas condiciones de almacenamiento
de la materia prima de los productos no estériles, la falta de las BPM en el proceso de fabricación de las
formas farmacéuticas, la temperatura y humedad del ambiente de la manufactura no fueron las apropiadas,
malas condiciones de almacenamiento, ya que los Equipos usados para la obtención de este tipo de aguas
para la preparación de productos de uso cutáneo pueden ser reservorio de bacterias. De manera que el
resultado obtenido en esta Investigación es mucho menor al de estos estudios. La razón pudo ser debido a
que tuvieron mejores procesos de purificación del agua, trabajaron con BPA y BPM durante la fabricación
de las formas farmacéuticas no estériles y fue mejor los tratamientos de las materias primas.
Los Productos Naturales cicatrizantes M04a, M05a, M05b y M06b por el método de extensión,
sobrepasan de manera excesiva en microorganismos aerobios, estos están elaborados con solventes como
el agua. Al ser un extracto líquido en el caso de las gotas y semi-sólidos en el caso de las cremas, el agua
es fundamental para todas las formas de vida, los microorganismos dependen de la disponibilidad de agua
para su crecimiento celular, razón por la cual el agua utilizada en la preparación de estos productos
farmacéuticos no estériles, debe ser purificada y debe cumplir con las especificaciones microbiológicas,
de lo contrario el agua contaminada puede ser favorable para el desarrollo de bacterias y hongos. Los
Productos Naturales cicatrizantes deben tener preservantes, ya que son formas farmacéuticas de uso
cutáneo que se aplican directo a una herida y una vez que salen al mercado no se dispensan rápido al
paciente, por lo tanto, el tener un preservante es algo que minimizara la existencia de microorganismos
durante la vida útil del producto o hasta que el producto llegue a manos del consumidor. Una de las
inconsistencias también encontradas en estos Productos Naturales cicatrizantes es que, en la información
del empaque secundario, primario, etiquetas y prospectos no indican la sustancia que actúa como
preservante o si contienen uno en su formulación.
A diferencia de las marcas de los productos con extracto alcohólico como: el producto M03, no
presentaron ningún crecimiento de microorganismos aerobios totales, esto se debe a que el etanol actúa
como conservante y evita la proliferación de microorganismos. Por lo que no es necesario un control
microbiológico, debido a que posee más del 20% de etanol en su formulación.
En consecuencia, estos resultados del RTMA muestran mayor contaminación en los Productos
Naturales cicatrizantes M04a, M05a, M05b y M06b, siendo el mejor método de recuento en placa, el de
52
extensión y las marcas de los productos M02a y M06a presentaron crecimiento de microorganismos
aerobios totales que están dentro de la especificación de la USP 39 NF34, (2016).
4.4 Recuento total de mohos y levaduras en los Productos.
Las especificaciones de la USP 39 NF34,2016 para las formas farmacéuticas semisólidas y líquidas de
uso cutáneo son un máximo de 101 ufc/ml o ufc/g para mohos y levaduras. En la Tabla 8 se visualiza que
por la técnica de extensión 14 de 15 muestras de Productos Naturales cicatrizantes, tienen un contaje menor
a 101 ufc/ml siendo el 93.33%. El producto M06B es el que supera el límite de 101 ufc/ml representando
el 6.67% y con un recuento de 1.2x103 ufc/g. Por el método de vertido también solo el producto M06b es
el que supera el límite de 101 ufc/ml representando el 6.67% y con un recuento de 1.05x103 ufc/g.
Tabla 8. Recuento total de mohos y levaduras en los Productos Naturales con fines cicatrizantes.
n=15 Método de extension Método de vertido
Muestras ufc/ml de muestra Interpretación ufc/ml de muestra Interpretación
M03*
A <10 C <10 C
B <10 C <10 C
C <10 C <10 C
M04
A <10 C <10 C
B <10 C <10 C
C <10 C <10 C
M05
A <10 C <10 C
B <10 C <10 C
C <10 C <10 C
Muestras ufc/g de muestra Interpretación ufc/g de muestra Interpretación
M01
A <10 C <10 C
B <10 C <10 C
C <10 C <10 C
M02
A <10 C <10 C
B <10 C <10 C
C <10 C <10 C
M06
A <10 C <10 C
B 1.2x103 NC 1.05x103 NC
C <10 C <10 C
*Se Descarta M03, debido a % de Etanol >20 en la formulación del producto cicatrizante.
En negrillas el contaje de microorganismos aerobios que sobrepasan la especificación de la USP 39 NF 34,2016 para
formas farmacéuticas de uso cutáneo. C: Cumple; NC: No Cumple.
Elaborado por Martínez Jonathan.
En este estudio el porcentaje de productos que sobrepasan el límite de hongos y levaduras fue del 6,67
otros estudios reportan porcentajes más altos como el estudio de Talero, et al. (2012) donde analizaron 59
53
muestras de propóleo, el 92 a 94% de las muestras evaluadas estuvieron fuera de los límites de hongos y
levaduras, exigidos por las farmacopeas. Los posibles factores que pudieron influir para que exista el
crecimiento de mohos y levaduras en los Productos Naturales con fines cicatrizantes, se puede explicar a
un mal manejo asociado a la humedad de la materia prima y el crecimiento de estos microorganismos se
puede dar por la presencia de elementos traza dado a actividades agrícolas como es el riego y la aplicación
de fertilizantes inorgánicos, lo cual indica condiciones sanitarias deficientes en el proceso de recolección
y envasado al momento de la conservación de las muestras.
En el estudio realizado por Cáceda y Samillán (2015), donde demostraron la calidad microbiológica de
13 Productos Naturales, dando un resultado de 92.3% que sobrepasan el recuento de hongos y levaduras,
siendo el resultado de una posible contaminación de origen natural, existiendo un riesgo para la salud de
sus consumidores al poder encontrarse posibles patógenos oportunistas o micotoxinas. Por lo tanto, hay
que tomar en cuenta que en las formulaciones dermatológicas las Fases acuosas, oleosas, carbohidratos y
proteínas: son soportes para bacterias y hongos.
4.5 Microorganismos Especificos, Determinación de Staphylococcus aureus y Pseudomonas
aeruginosa en los Productos.
Los fabricantes de los Productos Naturales de uso tópico con fines cicatrizantes, deben elaborar
productos siguiendo buenas prácticas de manufactura y deben asegurar que los productos no estériles
cumplan los criterios apropiados de pureza microbiológica, que se incluyen en las monografías de
Farmacopea de Estados Unidos, (2016) y lo más transcendental que estos productos se preparan
específicamente con el fin de garantizar que el producto natural sea terapéuticamente efectivo y seguro
para el paciente y que estos no estén contaminados con microorganismos objetables. La Tabla 9 detalla
que ninguno de los 15 Productos Naturales de uso tópico con fines cicatrizantes se encontraban
contaminados con Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa, esto puede indicar que tanto los
excipientes como los extractos de las plantas con que elaboraron los productos no estaban contaminados
con estos microorganismos, además podría indicar que los operadores siguen procedimientos asépticos y
buenas prácticas de manufactura. Estos resultados contrastan con los del estudio de Jwel Rana y Tohura
Sultana, et al. (2014), en el que se estudiaron 30 marcas de productos tópicos farmacéuticos (15 cremas y
15 ungüentos) donde el 50% de las muestras presentaron Staphylococcus spp y el 80% Pseudomonas spp.
En otro estudio, que también difiere el porcentaje de microorganismos objetables es el de Hugbo,
Onyekweli, et al. (2003), donde evaluaron la calidad microbiológica de diez marcas de cremas y lociones
cosméticas, y se encontró que el 90% de las cremas tenían crecimientos bacterianos. Siendo el
Staphylococcus spp el microorganismo que más se encontró. Ya que, al no existir un conservante universal,
debido a la complejidad de los vehículos dermatológicos y sus procesos de manufactura. La mayoría de
los productos dermatológicos deberían tomar precauciones al momento de realizar sus productos y ejecutar
sus procedimientos estrictamente con BM, BPA y BPD, para así obtener un producto terminado seguro,
eficaz y de calidad.
54
Tabla 9. Porcentaje de microorganismos aislados en los productos.
Nota: -: ausencia +: presencia
Elaborado por Martínez Jonathan.
4.6 Microorganismos Aislados en los Productos Naturales de uso tópico con fines
cicatrizantes.
En la Tabla 9 se aprecia el porcentaje de microorganismos aislados por cada Producto Natural
cicatrizante, los microorganismos identificados son: Bacillus subtilis, Bacillus cereus y Candida albicans.
Los productos M02b, M04a, M05a, M05b y M06a presentaron mayor contaminación de Bacillus
subtilis con un 33,35%, los productos M05a, M05b y M06b presentaron mayor porcentaje de Bacillus
cereus con 20,01% y el producto M06b presentó contaminación por Candida albicans con 6.67%.
n=15 Bacillus subtilis Bacillus cereus Candida
albicans
Microorganismos especificos
Staphylococcus
aureus
Pseudomonas
aeruginosa
Muestras % % % - -
M01
A - 0 - 0 - 0 - -
B - 0 - 0 - 0 - -
C - 0 - 0 - 0 - -
M02
A + 6,67 - 0 - 0 - -
B - 0 - 0 - 0 - -
C - 0 - 0 - 0 - -
M03
A - 0 - 0 - 0 - -
B - 0 - 0 - 0 - -
C - 0 - 0 - 0 - -
M04
A + 6,67 - 0 - 0 - -
B - 0 - 0 - 0 - -
C - 0 - 0 - 0 - -
M05
A + 13,34
+ 13,34
- 0 - -
B + + - 0 - -
C - 0 - 0 - 0 - -
M06
A + 6,67 - 0 - 0 - -
B - 0 + 6,67 + 6,67 - -
C - 0 - 0 - 0 - -
TOTAL 33,35 20,01 6,67 0 0
55
La mayoría de los Productos Naturales de uso tópico con fines cicatrizantes (40.0%) tienen por lo menos
un microorganismo contaminante. El microorganismo que se encontró en mayor presencia es Bacillus
subtilis seguido de Bacillus cereus y el microorganismo que se encontró con menor presencia en los
productos cicatrizantes fue Candida albicans.
En el estudio de Hugbo et al. (2003), de una muestra de 10 marcas de cremas y lociones se aisló en 9
de 10 lociones Bacillus spp. en un 90%, por otra parte, en el mismo estudio con respecto a una crema
acuosa, el recuento mayor fue de Bacillus subtilis con un contaje de 2.5x102 ufc/g. En comparación con
esta investigación de los 15 Productos Naturales cicatrizantes en 5 se aisló Bacillus subtilis lo que
representa un 33,33% y en 3 productos se aisló Bacillus cereus que representa un 20,01% , es decir tienen
menor porcentaje que el estudio anterior y en el producto que nos dio un mayor contaje de Bacillus subtilis
y Bacillus cereus fue en la M05b con un recuento de 2.4x105 ufc/ml, posiblemente esto se deba a que
existió un mal tratamiento de las materias primas, debido a la condición deteriorada de fabricación y
empaquetado o a una distribución y almacenamiento defectuosos, las condiciones de fabricación, envasado
y almacenamiento de los productos tópicos no fueron las mejores.
La presencia de estos microorganismos que causan infecciones bacterianas indeseables, es dañina,
incluso si se incluyen en pequeñas cantidades. A pesar de ser Bacillus subtilis, un microorganismo cuyo
hábitat natural es el suelo, se encuentra ampliamente distribuido en la naturaleza. Entre sus principales
características se encuentra su capacidad para formar esporas en diversas condiciones de estrés. Bacillus
subtilis no es considerado patógeno humano; sin embargo, las infecciones graves en personas
inmunocomprometidas se han asignado a Bacillus spp. Ya que puede contaminar los alimentos, pero
raramente causa intoxicación alimenticia. (José E. de los Monteros, 2005) Bacillus cereus es una bacteria
genéticamente diversa más patógena que Bacillus subtilis, que se encuentra comúnmente en el ambiente.
Es un bacilo Gram positivo, aerobio facultativo, esporulado, lo que les confiere resistencia a condiciones
ambientales extremas, tales como calentamiento, congelación, secado y radiación benéfica y las esporas
pueden sobrevivir por largos períodos en alimentos con bajo contenido de agua. Este microorganismo es
considerado como una bacteria benéfica, ya que algunas cepas se utilizan como probióticos y como
promotor de crecimiento en plantas. (Instituto Naciona de la Salud, 2011)
Las fuentes para que exista el crecimiento de Bacillus subtilis y Bacillus cereus en las formulaciones
dermatológicas podrían ser el material de acondicionamiento, los equipos de fabricación, envase y
empaque, la materia prima, el agua, un ambiente de limpieza inadecuada, prácticas pobres de higiene al
realizar procedimientos sin BPM, BPA y BPD.
En este estudio se aisló Candida albicans en 1 de 15 Productos Naturales cicatrizantes (6.67%) como
se muestra en la tabla 10, el porcentaje de Candida albicans, es bajo en comparación con el estudio de
Raquel Gudiño, (2013), que obtuvo en seis muestras de cremas Candida spp. con un (42.9%). Las posibles
causas de la presencia de levaduras en la forma farmacéutica es que esta especie es dimórfico ya que se
desarrolla de forma distinta según la temperatura de crecimiento y tiende a encontrarse en el suelo, agua,
56
aire, alimentos y algunos vegetales y normalmente se encuentra en la cavidad oral, microflora de la piel,
tracto respiratorio en el ser humano y membranas mucosas de mamíferos. Por lo tanto, las fuentes
potenciales para el crecimiento de Candida albicans, podrían ser la materia prima, agua, material de
acondicionamiento, equipos de fabricación y envase, ambiente de limpieza inadecuada y prácticas pobres
de higiene.
Por lo tanto, la presencia de agentes patógenos oportunistas, podrían reducir o incluso eliminar el efecto
terapéutico de las drogas o causar infecciones inducidas por estos productos contaminados y es de gran
importancia que un producto formulado y fabricado con el propósito de curar una enfermedad cutánea
específica, debe ser seguro, eficaz y de calidad. De lo contrario, una contaminación microbiológica del
producto natural en sí podría conducir a la complicación del tratamiento. Para minimizar el riesgo de tal
uso comprometido del producto de calidad, el monitoreo de rutina y el examen microbiológico de los
Productos Naturales reclaman una demanda significativa con respecto a la seguridad del consumidor.
Además, el examen de calidad microbiológica de los Productos Naturales tópicos en Ecuador todavía está
empezando.
4.7 Resultados del control organoléptico y extensibilidad de los Productos Naturales con fines
cicatrizantes.
En la Tabla N° 10, se muestran los resultados de los controles organolépticos y los resultados de la prueba
de extensibilidad de los 15 Productos Naturales cicatrizantes. En donde los microorganismos aislados en
la M06b fueron Bacillus cereus y Candida albicans, para la M02a y M04a fue Bacillus subtilis y para la
M05a y b fueron Bacillus subtilis y Bacillus cereus. Un factor principal en la contaminación por Candida
albicans y Bacillus cereus, pudo deberse al contenido de agua existente en la formulación del producto
que favorecería el sobre-crecimiento de la levadura y la bacteria. Ya que, al poseer valores de
extensibilidades más altas, al tener mayor incremento en la superficie este podría ser factor para que exista
una alta carga microbiana presente en la muestra M06, a diferencia de la M01 que posee valores bajos de
extensibilidad y no se encontró ningún microorganismo presente. Por ende, los productos que tengan
valores altos de extensibilidad estarían expuestos a una contaminación bacteriana. En las muestras M04
Y M05, los factores que se pudieron dar para que exista Bacillus subtilis y Bacillus cereus, podría ser al
momento de realizar el envasado de la sangre de drago al gotero, por una mala manipulación del operador
con el producto o desde la obtención de la materia prima no se trabajó con BPM, dando como resultado
un producto terminado defectuoso.
El estudio del área de extensibilidad es una prueba que guarda una estrecha relación con la apariencia
de formulaciones semisólidas. Una emulsión no debe ser ni poco extensible (muy viscoso), ni demasiado
extensible (muy fluido) ya que sería muy desagradable a la hora de su aplicación e incómodo para el
paciente. La muestra M06b, al tener una extensibilidad de 3632 mm2, al ser demasiado extensible muy
fluida y que al tener agua en su formulación podría ser un factor para que en ella hubiera crecido Bacillus
cereus y Candida albicans.
57
La tabla N° 10 evidencia que el 66,67% de los Productos Naturales cicatrizantes presentó partículas
extrañas visibles, mientras que el 33.33% no. En las muestras M02, M04 y M05 el origen de partículas
extrañas puede estar relacionado con la formulación, de manera, que se puede comprobar, que la falta de
alteración física no puede asegurar que el producto esté o no libre de microorganismos.
Ninguno de los 15 productos cuenta con especificaciones en la base de datos del ARCSA para poder
realizar una comparación y determinar si en realidad hubo un cambio o no en las características físicas de
los productos a causa de la contaminación microbiana.
Tabla 10. Control organoléptico y extensibilidad de los Productos y su relación con la contaminación microbiana
encontrada.
Muestras Aspecto Color Olor Extensibilidad
(mm2)
Microorganismo
Aislado
M01
A Emulsión
Homogénea,
con partículas
visibles,
semisólida de
consistencia
blanda
Verde Oscuro
Pimienta
755
- B 755
C 661
M02
A Emulsión
Homogénea
con partículas
visibles,
semisólida de
consistencia
blanda.
Verde Claro
Pimienta
755 Bacillus subtilis
B 616
- C 531
M03
A Líquido acuoso
traslucido
Sin presencia
de partículas
Amarillento Resinoso
Aromático NA B
C
M04
A Líquido acuoso
opaco , con
presencia de
partículas
visibles.
Vino Herbal NA
Bacillus subtilis
B -
C
M05
A Líquido acuoso
opaco, con
presencia de
partículas
visibles.
Vino Herbal NA
Bacillus subtilis /
Bacillus cereus
B Bacillus subtilis /
Bacillus cereus
C -
M06
A Emulsión
Homogénea
libre de
partículas
visibles,
semisólida de
consistencia
blanda
Blanco Herbal
2827 Bacillus subtilis
B 3632 Bacillus cereus /
Candida albicans
C 2642 -
Nota: -: Ausencia de microorganismos ; NA: No aplica.
58
Elaborado por Martínez Jonathan.
4.8 pH de los Productos Naturales con fines cicatrizantes.
La USP39-NF34, (2016) menciona que el pH permitido para las cremas se encuentra en un rango de 5,5
hasta 7,5. La tabla N° 11 muestra que las muestras M02, M04, M05 y M06 no cumplen con el pH
establecido. Mientras que las muestras M01 y M03, se encuentran dentro del rango permitido. Se puede
observar que los Productos Naturales cicatrizantes M02a, M04a, M05a, b y M06a, que presentaron un
mayor contaje de microorganismo aerobios en especial de Bacillus subtilis tenían un valor de pH en el
rango de 3,5 a 8,06. por lo tanto, las formulaciones deberían centrarse alrededor de un pH cercano a 7,
donde el producto sea más estable, y las tasas de curación sean mayores siendo aceptable por el paciente.
El rango de pH para el crecimiento de Bacillus cereus es de 4,5 a 9,5 con un pH óptimo de 6 a 7. Se ha
señalado que Bacillus cereus es más resistente a condiciones de estrés como pH ácido, sales biliares y altas
temperaturas en condiciones aeróbicas (López & Martínez, 2011). Resultados que difieren con los
obtenidos en este estudio ya que el rango de pH en el que creció Bacillus cereus fue de: 3,5 a 8,31. La
tolerancia al pH ácido pudo deberse a que las cepas ya se han expuesto anteriormente a pH ácidos o a su
relación con el estado fisiológico de la bacteria.
Sin embargo, se desconoce si en la formulación de las cremas, tuvieron agentes modificadores del pH
o agentes emulsionantes para aumentar la estabilidad de las emulsiones de modo que la emulsión no cambie
significativamente con el paso del tiempo. En el caso de las gotas también se desconoce si la formulación
tiene un sistema buffer adecuado que ayude al mantenimiento del pH y que no provoque lesiones o dolor
al momento de aplicar sobre las heridas. También hay que recordar que las muestras M02a, M04a, M05a,
b y M06a y b se encuentran contaminadas por lo que no se podría asegurar que el pH determinado sea el
correspondiente al del producto inicial o que se haya alterado por la presencia de los microorganismos
encontrados.
Tabla 11. Relación del pH de los Productos con la contaminación microbiana encontrada.
Muestras
n=18
pH
Promedio Promedio
General
Microorganismo
Aislado Repeticiones
1ra 2da 3ra
M01
A 6,51 6,53 6,52 6,52
6,51 - B 6,5 6,53 6,51 6,51
C 6,5 6,52 6,51 6,51
M02
A 5,02 4,9 5,02 4,98
4,98
Bacillus subtilis
B 4,98 5,02 4,96 4,99
-
C 4,89 5,03 4,98 4,97
M03
A 5,60 5,62 5,60 5,61
5,60 B 5,62 5,59 5,60 5,60
C 5,60 5,60 5,60 5,60
M04 A 3,73 3,74 3,73 3,73 3,59 Bacillus subtilis
59
B 3,48 3,48 3,48 3,48 -
C 3,57 3,57 3,56 3,57
M05
A 3,49 3,5 3,49 3,49
3,5
Bacillus subtilis /
Bacillus cereus
B 3,54 3,53 3,53 3,53 Bacillus subtilis /
Bacillus cereus
C 3,5 3,48 3,5 3,49 -
M06
A 7,96 7,9 7,9 7,92
8,06
Bacillus subtilis
B 8,35 8,22 8,35 8,31 Bacillus cereus /
Candida albicans
C 7,99 7,86 7,96 7,94 -
Elaborado por Martínez Jonathan.
4.9 Evaluación del cumplimiento de normas de Envases, etiquetas y prospectos de
los Productos Naturales de uso tópico con fines cicatrizantes.
En la Tabla 12 se presenta la información del envase, donde de los 6 Productos Naturales de uso tópico
con fines cicatrizantes analizados, los productos M04 y M05, no cumplieron con la identificación del
envase, ya que sus envases no protegen al producto de la luz. En la tabla 13 se presenta la información de
las etiquetas, donde solo el producto M01 cumple con lo declarado por el ARCSA sobre toda la
información que debe contener las etiquetas, el producto M05 no cumple con lo declarado ya que este
producto no posee una etiqueta. Ninguno de los 6 fabricantes dio indicaciones acerca de la inclusión de un
conservante y solo los fabricantes del producto M01 y M03 revelaron la composición cuantitativa en peso
de recurso natural utilizado. Con respecto a los números de lote, solo 4 empresas dieron a conocer los
números de lote y registro sanitario de los productos M01, M02, M03 y M06. El producto M05 no presentó
la fecha de vencimiento y solo los productos M01, M02 y M06 dieron a conocer la vía de administración.
En la tabla 14 se detalla la información acerca de los prospectos, dando como resultado que solo los
productos M03 y M06 contienen un prospecto al interior de su envase secundario.
Estas insuficiencias e inconsistencias en las divulgaciones de las etiquetas de los envases deben
considerarse con gran preocupación. Esto es particularmente así desde el punto de vista de la no
divulgación de los números de lote; lo que significa que, en el caso de que un producto defectuoso se libere
inadvertidamente en el mercado, los retiros serían extremadamente difícil de efectuar. Ya que el número
de lote tiene un papel fundamental en el aseguramiento de la calidad. Debido a que los fabricantes realizan
pruebas de calidad en los productos. Si un producto no cumple con los niveles aceptables, los números de
lote son claves para encontrar e identificar lo que pudo verse afectado por el producto defectuoso. Pues
productos que contengan el mismo número de lote se consideraran malos.
De los 6 productos analizados en este estudio, 4 (66,67%) presentaron registro sanitario y al compararlo
con los reportes dados en el estudio realizado por Valenzuela (2005), donde el 23,7% de productos
contaban con registro sanitario, se observa una diferencia del 42,97% más de productos que ahora cuentan
60
con este registro, dando a entender, que tanto ha mejorado el control de estos productos desde el estudio
realizado en Lima, Perú por Valenzuela en el 2005.
Las fechas de fabricación y de vencimiento también son de vital importancia y deben especificarse para
proporcionar guías sobre el marco de tiempo para el cual la salubridad de un producto puede estar
razonablemente asegurada.
Se afirmó que la mayoría de los laboratorios de los Productos Naturales de uso tópico con fines
cicatrizantes, no cumplen con los requerimientos necesarios para un producto terapéutico natural según la
Normativa Sanitaria para la Obtención del Registro Sanitario emitida por: ARCSA, además que se supone
que la fabricación de los productos analizados fue hecha de manera artesanal. A diferencia de este estudio,
solo se encontró un cumplimiento con los requerimientos de etiquetado dado en lo declarado por ARCSA.
Dado que en la actualidad se fabrican Productos Naturales a escala industrial, el foco de control se ha
desplazado a la evaluación del lugar de fabricación y al proceso de producción. (Ratajczak et al, 2014;
Rashed et al., 2015). Los fabricantes de éstos son responsables de elaborar Productos Naturales de calidad
adecuada, sin embargo, los resultados obtenidos en el presente estudio indican que aún no se cumple esto
en los Productos Naturales expendidos en Quito, evidenciando el escaso control por parte de las autoridades
correspondientes, la falta de conciencia de las casas naturistas y mercados , la falta de interés y de
información por parte de los consumidores directos al comprar productos que pueden ocasionarles daño,
al no tener un registro sanitario, ni toda la información que necesitan los usuarios conocer.
Tabla 12. Identificación de Envase.
Código M01 M02 M03 M04 M05 M06
INFORMACIÓN ENVASE C/NC C/NC C/NC C/NC C/NC C/NC
Protege al producto de la Luz. C C C NC NC C
Nota: C: cumple; NC: No cumple.
Elaborado por Martínez Jonathan.
Tabla 13. Identificación de Etiqueta.
Código: M01 MO2 MO3 MO4 MO5 M06
INFORMACIÓN ETIQUETA C/NC C/NC C/NC C/NC C/NC C/NC
Redactadas en idioma castellano. C C C C NC C
Caracteres claramente legibles e indelebles. C C C C NC C
Nombre comercial del producto. C C C C NC C
Nombre científico (género y especie) del recurso natural. C NC NC NC NC NC
Nombre del laboratorio fabricante. C C C C NC C
Composición cuantitativa en peso de recurso natural utilizado. C NC C NC NC NC
61
Vía de administración. C C NC NC NC C
Fecha de vencimiento. C C C C NC C
Número de lote. C C C NC NC C
Número de Registro Sanitario. C C C NC NC C
Nota: C: cumple; NC: No cumple. Elaborado por Martínez Jonathan.
Tabla 14. Identificación de Prospecto.
Nota: C: cumple; NC: No cumple.
Elaborado por Martínez Jonathan.
Código: M01 M02 M03 M04 M05 M06
INFORMACIÓN PROSPECTO C/NC C/NC C/NC C/NC C/NC C/NC
Nombre comercial del producto. NC NC C NC NC C
Composición cuantitativa en peso de recurso natural utilizado y
cualitativa en excipientes. NC NC C NC NC NC
Nombre y dirección del Titular del Registro Sanitario y del titular del
producto. NC NC C NC NC C
Información del producto:
Nombre científico (género y especie)
del/os recurso/s natural/es. NC NC NC NC NC NC
Forma farmacéutica. NC NC C NC NC C
Indicaciones terapéuticas aprobadas. NC NC NC NC NC C
Información antes de usar el
producto:
Contraindicaciones. NC NC C NC NC NC
Precauciones de uso y advertencias. NC NC C NC NC NC
Interacciones, según corresponda. NC NC NC NC NC NC
Información de uso:
Modo de empleo para un uso
adecuado del producto. NC NC C NC NC C
Vía de administración. NC NC NC NC NC C
Posología y duración del
tratamiento. NC NC NC NC NC NC
Síntomas en caso de sobredosis y
acciones a seguir. NC NC NC NC NC NC
Información de Reacciones Adversas. NC NC NC NC NC NC
Información de
conservación del producto
Condiciones de almacenamiento. NC NC C NC NC C
Advertencias sobre ciertos signos
visibles de deterioro del envase. NC NC NC NC NC NC
Leyendas. NC NC C NC NC C
62
CAPÍTULO V
5. Conclusiones y Recomendaciones
5.1. Conclusiones
Se Realizó el control microbiológico de Productos Naturales de uso tópico con fines cicatrizantes,
comercializados en centros naturistas y mercados de la Ciudad de Quito, encontrándose que el 27% de
estos para el Recuento total de microorganismos aerobios (RTMA) y el 6.67% para el Recuento total de
mohos y levaduras (RTML) no cumplen con las especificaciones de la USP 39 NF34, (2016), para
productos no estériles de uso cutáneo. No se detectó, Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa,
como microorganismo específico en este tipo de formas farmacéuticas, pero se aislaron bacterias aerobias,
como, Bacillus cereus y Bacillus subtilis. El contaminante fúngico encontrado fue, Candida albicans. El
microorganismo que más se aisló en los productos cicatrizantes es Bacillus subtilis con 33,35% y el
microorganismo aislado en menor proporción fue Candida albicans con 6.67%.
Se detectó que el mejor método para el RTMA y RTML es el método de extensión en placa ya que se
obtuvo una mayor cantidad de productos cicatrizantes con microorganismos. Para RTMA los productos
M02a, M04a, M05a, M05b, M06a, M06b y para RTML el producto M06b, fueron los que presentaron
crecimiento microbiano.
Se realizó el control organoléptico de los 18 productos cicatrizantes, obteniendo colores desde el verde
oscuro hasta el blanco y olores característicos como la pimienta, resinosos y herbales. Al realizar la
extensibilidad en los 9 productos semisólidos se encontró valores que van desde 531 a 755 mm2 siendo
muy viscosas y valores de 2642 a 3632 mm2 que son muy fluidas. Se determinó el pH de los Productos
Naturales cicatrizantes, en donde los productos M02, M04, M05 y M06 estaban fuera del rango de 5,5 a
7,5 que menciona la USP39-NF34, (2016), por lo tanto, favorece el crecimiento de todos microorganismos
encontrados en este estudio.
Al comparar la información de envases, etiquetas y prospectos de los Productos Naturales con lo
declarado en la Normativa Sanitaria para la Obtención del Registro Sanitario emitida por ARCSA. Se encontró
que el 33,33% de los productos no cumplieron con la identificación del envase, el 83,33% no cumplieron
con declarado en la identificación de las etiquetas y el 66,67 no cumplieron con declarado en la
identificación de los prospectos y solo 4 (66,67%) presentaron registro sanitario.
5.2. Recomendaciones.
Se recomienda que a más de los controles realizados en este estudio se realice un control de calidad a
los Productos Naturales con fines cicatrizantes, el cual incluya la evaluación de sus criterios fisicoquímicos
como la estabilidad de principios activos y excipientes sus propiedades reológicas, pH aparente,
contaminación por partículas y se realice el control microbiológico por otro método de contaje como
filtración por membrana, para obtener mejores resultados, con el fin de obtener productos terminados
eficaces seguros y de calidad.
63
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ANEXOS
Anexos A. Árbol De Problemas
La Salud, desarrollo
económico y social de
la población afectada
Escasos controles post
Notificación Sanitaria
Obligatoria de Productos
Naturales de uso tópico con
fines cicatrizantes
Carencia de investigación
local en Productos
Naturales con fines
cicatrizantes
Falta de buenas
prácticas de
manufactura en
Productos
Naturales de uso
tópico con fines
cicatrizantes
Deterioro del
Producto Natural
Producto Natural
terminado
contaminado
Crecimiento de
microorganismos
objetables, hongos
y levaduras.
Productos Naturales
con fines cicatrizantes
Comercializados
libremente en la
ciudad de Quito sin
Registro Sanitario
Cambios en el aspecto
físico del Producto
Natural (Color, olor y
textura) Perdida de la Seguridad,
eficacia y calidad del
Producto Natural
Rechazo del producto
Congelamiento, decomiso de
producto, suspensión total o
parcial de actividades o clausura
de establecimiento.
Infecciones
graves
ocasionadas
al paciente.
Anexos B. Sondeo de Productos Naturales de uso tópico con fines Cicatrizantes.
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD CIENCIAS QUIMICAS
QUÍMICA FARMACÉUTICA
SONDEO DE OPINIÓN A CENTROS NATURISTAS Y MERCADOS DE LA CIUDAD DE QUITO
LUGAR Y FECHA: _________________________
CENTRO NATURISTA: ______________________
1. ¿QUÉ TIPO DE PRODUCTO NATURAL DE USO TOPICO CON FINES CICATRIZANTES PREFIEREN MÁS
LOS CLIENTES?
2. ¿QUÉ MARCAS COMERCIALES O FABRICANTES PRODUCEN LOS PRODUCTOS NATURALES DE
USO TOPICO CON FINES CICATRIZANTES QUE PREFIEREN LOS CLIENTES?
Anexos C. Diagramas de flujo.
C.1. Aptitud del método en presencia del producto.
Tubo Ensayo 1 COLOCAR
TOMAR
9 ML DE TSB
100 ul Suspensión
Microbiana
LEER
AÑADIR
COLONIA
MICROORGANISMO
Vortex 1min
DILUIR
AGITAR
INICIO
FIN
Tubo Ensayo 1
Espectrofotómetro 625nm;
A=0,089
Tubo Ensayo 2-7
1 g o 1 ml Producto
COLOCAR Tubo Ensayo +9 ml TSB: T2
Tween 80 TUBO 2
INOCULAR TUBO 2
Técnica Extensión
Técnica
Vertido
SEMBRAR
SEMBRAR
100ul Caja Monopetri TSA
Y SAB
1000 ul CAJA Monopetri
TSA Y SAB
Contar Ufc/ml
Ufc/g INCUBAR
INCUBADORA BACTERIAS
37°C
INCUBADORA HONGOS
25°C
C.2. Prueba en Producto: RTMA, Método de extensión.
C.2. Prueba en Producto: RTMA, Método de Vertido.
Tubo Ensayo 9ml TSB (1) DISOLVER
AGITAR
1 ml DE GOTAS
1 g CREMA
INCUBAR
100 ul
Tubo Ensayo 1
Vortex 1min
SEMBRAR
INICIO
TSA AGAR
INCUBADORA
BACTERIAS
37°C
24-48 horas
CONTAR
FIN
Tubo Ensayo 9ml TSB (1) DISOLVER
AGITAR
1 ml DE GOTAS
1 g CREMA
INCUBAR
1000 ul
Tubo Ensayo 1
Vortex 1min
SEMBRAR
INICIO
25 ml TSA AGAR
INCUBADORA
BACTERIAS
37°C
24-48 horas
CONTAR
FIN
C.3. Prueba en Producto: RTML, Método de extensión.
C.3. Prueba en Producto: RTML, Método de Vertido.
Tubo Ensayo 9ml TSB (1) DISOLVER
AGITAR
1 ml DE GOTAS
1 g CREMA
INCUBAR
100 ul
Tubo Ensayo 1
Vortex 1min
SEMBRAR
INICIO
SAB AGAR
INCUBADORA
HONGOS
25°C
3-5 dias
CONTAR
FIN
Tubo Ensayo 9 ml TSB (1) DISOLVER
AGITAR
1 ml DE GOTAS
1g CREMA
INCUBAR
1000ul
Tubo Ensayo 1
Vortex 1min
SEMBRAR
INICIO
25 ml SAB
INCUBADORA
HONGOS
25°C
3-5 dias
CONTAR
FIN
C.4. Microorganismo especificos. Revitalización
Selección y Subcultivo
Tubo Ensayo 9ml TSB + 1
ml polisorbato (1) DISOLVER
AGITAR
1 ml DE GOTAS
1 g CREMA
Vortex 1min
INCUBAR
INICIO
INCUBADORA
BACTERIAS
37°C
24-48 horas
FIN
AGAR CETRIMIDA
Pseudomonas aeruginosa
AGITAR
SUBCULTIVAR
Cultivo revitalizado Vortex 1min
INCUBAR
INICIO
INCUBADORA
BACTERIAS
37°C
24-48 horas
FIN
SUBCULTIVAR MSA
Staphylococcus aureus
100 ul Extensión
y 1000 ul vertido
Cultivo revitalizado
CONTAR
Anexos D. Control organoléptico, pH y extensibilidad de productos naturales de uso tópico con
fines cicatrizantes.
D1. Control organoléptico.
D2. Medición del pH
D3. Extensibilidad
Vasos
dosificadores
ASPECTO
COLOR
5 ml DE GOTAS
5 g CREMA
OLOR
INICIO
FIN
Vasos
dosificadores
Vasos
dosificadores
Vasos
dosificadores
COLOCAR
MEDIR
5 ml DE GOTAS
5 g CREMA
INICIO
FIN
Vasos
dosificadores
POTENCIOMETRO
Placa de vidrio COLOCAR
MEDIR
1 ml CREMA
INICIO
FIN
Regla
Anexos E. Identificación de microorganismos.
E1. Bacillus spp.
Porta objetos COLOCAR
REALIZAR
Colonia microorganismo
SEMBRAR
Tinción Gram
NEGATIVOS
POSITIVOS
COLOR
INICIO
FIN
COCOS BACILOS
CAJAS PETRI
Colonias rosadas, con
un halo de precipitación
Bacillus cereus
MYP
ROSADO
MORADO
Colonias
amarillentas
Bacillus subtilis
COLONIA
E2. Candida albicans.
E.3. Prueba de Tubo Germinal
MICROSCOPIO
E.4. Prueba Candida cromogénico
MICROSCOPIO
Porta objetos
COLOCAR
OBSERVAR
Colonia de Levadura
INICIO
FIN
Tinción simple
Suero Humano COLOCAR
INCUBAR
Colonia de Levadura
INICIO
FIN
INCUBADORA
BACTERIAS
37°C
2 horas
OBSERVAR MICROSCOPIO
Candida cromogénico agar SEMBRAR
INCUBAR
Colonia de Levadura
INICIO
FIN
INCUBADORA
HONGOS 25° C
72 horas
OBSERVAR Colonias
Color : Verde Claro
REALIZAR
Observar Estructuras Morfológicas
MICROSCOPIO
Anexos F. Resultados de la Identificación de cada microorganismo.
F1. Características de Bacillus subtilis.
ENSAYO RESULTADO
TSA Colonias grandes blanquecinas, mucoides, de borde irregular.
Tinción Gram Bacilos Gram-positivos, cadenas largas de color moradas.
Agar MYP (Manitol-Yema de
huevo-Polimixina)
Colonias redondas, con borde completo de color amarrillo.
F2. Características de Bacillus cereus.
ENSAYO RESULTADO
TSA Colonias grandes, rugosas, secas, y de borde irregular de color
blanquecino.
Tinción Gram Bacilos Gram-positivos, cadenas cortas de color morado.
Agar MYP (Manitol-Yema de
huevo-Polimixina)
Colonias redondas, con borde completo de color rosado con una
zona de precipitado.
F3. Características de Candida albicans.
ENSAYO RESULTADO
SAB Colonias redondas con borde completo y con elevación de color
blanquecino.
Tinción Simple Estructuras ovaladas - redondas .
Tubo germinal Vista al microscopio : Esferas con una protuberancia.
Agar cromogénico Colonias redondas, con borde completo de color verde claro.
Ilustración 1. Tinción Simple: Candida albicans.
Lente 100x
Ilustración 2.Candida albicans: Agar Candida cromogénico. Ilustración 3.Prueba de Tubo germinal: Candida albicans.
. Agar Sabouraud Lente 100x
.
Ilustración 4. Bacillus cereus: Agar TSA. Ilustración 5. Bacillus subtilis: Agar TSA
Agar MYP. Agar MYP.
.
Anexos G. INSTRUMENTO DE RECOLECCIÓN DE DATOS: GUÍA DE OBSERVACIÓN.
Identificación del producto natural de uso tópico cicatrizante:
IDENTIFICACIÓN DE LA MUESTRA
Forma
farmacéutica
Principio
activo
Casa
comercial
Lote Fecha de
Elaboración
Fecha de
Expiración
Registro
Sanitario
Elaborado por: Jonathan Martínez
Identificación de Etiqueta, envase y prospecto:
Producto:
INFORMACIÓN ENVASE Cumple No Cumple
Protege al producto de la Luz.
Elaborado por: Jonathan Martínez
Producto:
INFORMACIÓN ETIQUETA Cumple No Cumple
Redactadas en idioma castellano.
Caracteres claramente legibles e indelebles.
Nombre comercial del producto.
Nombre científico (género y especie) del recurso natural.
Nombre del laboratorio fabricante.
Composición cuantitativa en peso de recurso natural utilizado.
Vía de administración.
Fecha de vencimiento.
Número de lote.
Número de Registro Sanitario.
Elaborado por: Jonathan Martínez
Producto:
INFORMACIÓN PROSPECTO Cumple No Cumple
Nombre comercial del producto.
Composición cuantitativa en peso de recurso natural utilizado y
cualitativa en excipientes.
Nombre y dirección del Titular del Registro Sanitario y del titular del
producto.
Nombre científico (género y especie)
del/os recurso/s natural/es.
Forma farmacéutica.
Información del producto:
Indicaciones terapéuticas aprobadas.
Información antes de usar el
producto:
Contraindicaciones.
Precauciones de uso y advertencias.
Interacciones, según corresponda.
Información de uso:
Modo de empleo para un uso
adecuado del producto.
Vía de administración.
Posología y duración del tratamiento.
Síntomas en caso de sobredosis y
acciones a seguir.
Información de Reacciones Adversas.
Información de conservación
del producto
Condiciones de almacenamiento.
Advertencias sobre ciertos signos
visibles de deterioro del envase.
Leyendas.
Elaborado por: Jonathan Martínez
Aptitud del método de recuento en presencia del producto: Recuento total de microorganismos aerobios
(RTMA) Muestra:
Método de extensión. TSA ufc/caja
Código:
Microorganismo
Recuento inicial Recuento
promedio de cajas
Factor de
dilución
Recuento final
Staphylococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa
Bacillus subtilis
Microorganismo
Método de vertido TSA ufc/caja
Recuento inicial Recuento
promedio de cajas
Factor de
dilución
Recuento final
Staphylococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa
Bacillus subtilis
Elaborado por: Jonathan Martínez
Aptitud del método de recuento en presencia del producto: Recuento total de mohos y levaduras
(RTML)
Microorganismo
Método de extensión. SAB ufc/caja
Recuento inicial Recuento
promedio de
cajas
Factor de
dilución
Recuento final
Candida albicans
Aspergillus niger
Microorganismo
Método de vertido SAB ufc/caja
Recuento inicial Recuento
promedio de
cajas
Factor de
dilución
Recuento final
Candida albicans
Aspergillus niger
Elaborado por: Jonathan Martínez
![[CREATING LABELS] MAKING TEXT DESIGNING LABELS … · [CREATING LABELS] MAKING TEXT DESIGNING LABELS PRINTING LABELS COMPLETED LABELS USEFUL FUNCTIONS USER'S GUIDE / Español Printed](https://img.dokumen.tips/doc/110x75/5e718e59f26dfc19d238892e/creating-labels-making-text-designing-labels-creating-labels-making-text-designing.jpg)
