Upload
vunga
View
274
Download
2
Embed Size (px)
Citation preview
UJI TOKSISITAS AKUT EKSTRAK n-HEKSAN DAUN
Garcinia benthami Pierre TERHADAP LARVA Artemia
salina Leach DENGAN METODE BRINE SHRIMP
LETHALITY TEST (BSLT)
Laporan Penelitian ini ditulis sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
SARJANA KEDOKTERAN
OLEH :
Nur Rizqillah
NIM: 1110103000068
PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER
FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI
SYARIF HIDAYATULLAH
JAKARTA
1434 H/2013 M
ii
iii
iv
v
vi
vii
ABSTRAK
Nur Rizqillah. Program Studi Pendidikan Dokter. Uji Toksisitas Akut Ekstrak n-
heksan Daun Garcinia benthami Pierre Terhadap Larva Artemia salina Leach
dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). 2013
Garcinia benthami Pierre merupakan salah satu spesies dari genus Garcinia di
Indonesia.Daun ini mengandung senyawa xanton, kumarin, flavonoida dan
terpenoid. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui toksisitas ekstrak n-
heksan daun Garcinia benthami Pierre terhadap larva Artemia salina Leach
dengan metode Brine Shrimp lethality Test (BSLT). Penelitian ini menggunakan
hewan uji 330 ekor larva Artemia salina Leach yang dibagi dalam 10 kelompok.
Tiap kelompok terdiri dari 10 ekor, dengan replikasi 3 kali tiap kelompok.
Kemudian ekstrak daun Garcinia benthami Pierre dimasukkan dalam konsentrasi
akhir 5 ppm,10 ppm,20 ppm, 50 ppm, 100 ppm, 150 ppm, 250 ppm, 500 ppm,
1000 ppm, dan 1500 ppm. Pengamatan terhadap larva yang mati 24 jam setelah
pemberian ekstrak. Berdasarkan data, LC50 ekstrak n-heksan daun Garcinia
benthami Pierre ditentukan dengan analisis probit menggunakan metode probit.
Hasil dari analisis probit menunjukkan harga LC50 dari ekstrak n-heksan daun
Garcinia benthami Pierre adalah 3981 ppm. Hasil tersebut menunjukkan bahwa
ekstrak daun Garcinia benthami Pierre tidak mempunyai potensi toksisitas
terhadap larva Artemia salina Leach. Hal ini ditunjukkan dengan harga
LC50>1000 ppm.
Kata kunci : Toksisitas, ekstrak daun Garcinia benthami Pierre, Brine Shrimp
Lethality Test (BSLT)
ABSTRACT
Nur Rizqillah. Medical Education Study Program. Acute Toxicity Test of
Garcinia benthami Pierre Extract Against Artemia salina Leach Larvae Using
Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) Method. 2013
Garcinia benthami Pierre is one kind of Garcinia species in Indonesia. The leaves
contain xanton, kumarin, flavonoid and terpenoid bioactive coumponds. The aims
of the research is determine the lethal toxicity value of Garcinia benthami Pierre
n-hexane leaves extract toward Artemia salina Leach larva by Brine Shrimp
lethality Test (BSLT) method. This research use 330 larva Artemia salina Leach
that devided into 10 groups. Each group consist of 10 animals with three
replication. Later Garcinia benthami Pierre leaves extract included in every
concentration 5 ppm, 10 ppm, 20 ppm, 50 ppm, 100 ppm, 150 ppm, 250 ppm, 500
ppm, 1000 ppm, and 1500 ppm. Observations were made during 24 hours of
Artemia salina Leach larvae mortality. Based on the data, LC50 extract n-hexane
Garcinia benthami Pierre leave determined by analysis of probit by using probity
method. The result of probity analysis shows LC50 value from n-hexane extract
Garcinia benthami Pierre leave is 3981 ppm. Result indicates that the extract
Garcinia benthami Pierre leave didn`t have any potential toxicity to Artemia
salina Leach larvae. In this case indicates with LC50>1000 ppm.
Keywords : Toxicity,Garcinia benthami Pierre extract, BSLT
viii
DAFTAR ISI
LEMBAR JUDUL ...........................................................................................
LEMBAR PERNYATAAN ............................................................................
LEMBAR PERSETUJUAN ...........................................................................
LEMBAR PENGESAHAN .............................................................................
KATA PENGANTAR .....................................................................................
ABSTRAK ........................................................................................................
DAFTAR ISI ....................................................................................................
DAFTAR TABEL ............................................................................................
DAFTAR GAMBAR .......................................................................................
BAB I PENDAHULUAN
1.1 Latar belakang ...................................................................................
1.2 Rumusan masalah .............................................................................
1.3 Tujuan penelitian ..............................................................................
1.3.1 Tujuan umum ..........................................................................
1.3.2 Tujuan khusus ..........................................................................
1.4 Manfaat penelitian ............................................................................
1.4.1 Bagi masyarakat.......................................................................
1.4.2 Bagi institusi ............................................................................
1.4.3 Bagi peneliti ............................................................................
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Landasan teori ...................................................................................
2.1.1 Obat Tradisional ......................................................................
2.1.2 Toksikologi .............................................................................
2.1.3 Garcinia benthami Pierre.........................................................
2.1.4 Uji Toksisitas metoda Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)…
2.1.5 Metode ekstraksi ......................................................................
2.2 Kerangka konsep ...............................................................................
2.3 Definisi operasional ..........................................................................
BAB III METODE PENELITIAN
1.1 Desain penelitian ..............................................................................
1.2 Waktu dan tempat penelitian ............................................................
1.3 Bahan yang diuji ...............................................................................
1.4 Alat dan bahan penelitian .................................................................
1.4.1 Alat penelitian .........................................................................
1.4.2 Bahan penelitian ......................................................................
1.5 Cara kerja penelitian .........................................................................
1.5.1 Penyiapan sampel atau pembuatan Simplisia..........................
1.5.2 Pembuatan ekstrak daun Garcinia benthami Pierre...............
1.5.3 Uji aktivitas toksisitas dengan metode BSLT.......................
1.5.4 Pengukuran toksisitas............................................................
i
ii
iii
iv
v
vii
viii
x
xi
1
2
2
2
3
3
3
3
3
4
4
4
6
8
11
14
15
16
16
16
16
16
17
17
17
17
18
20
ix
1.5.5 Analisis data toksisitas.........................................................
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil ekstraksi daun Garcinia benthami Pierre.................................
4.2 Perhitungan nilai LC50.....................................................................
BAB V SIMPULAN DAN SARAN
5.1 Simpulan ...........................................................................................
5.2 Saran ..................................................................................................
DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................
LAMPIRAN .....................................................................................................
21
23
23
30
30
31
34
x
DAFTAR TABEL
Tabel 4.1 Hasil mortalitas larva Artemia salina Leach dengan penambahan
ekstrak n-heksan daun Garcinia benthami Pierre………..………..
24
Tabel 4.2 Hasil uji toksisitas ekstrak n-heksan daun Garcinia benthami
Pierre………………………………………………..…………….
26
Tabel 4.3 Hasil Mortalitas larva Artemia salina Leach dengan pemberian
DMSO…………………………..……………………………......
29
Tabel 6.1 Perhitungan % kematian larva Artemia salina Leach, nilai probit,
dan LC50 daun Garcinia benthami Pierre........................................
36
Tabel 6.3 Nilai probit .................................................................................... 43
xi
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 Daun Garcinia benthami Pierre.................................................... 6
Gambar 6.1 Hasil determinasi ..........................................................................
Gambar 6.2 Foto Depan Kaleng Telur Artemia salina Leach………………...
Gambar 6.3 Foto Belakang Kaleng Telur Artemia salina Leach…………….
Gambar 6.4 Grafik Regresi Linier ekstrak daun Garcinia benthami Pierre….
34
35
35
37
Gambar 6.5 Simplisia daun Garcinia benthami Pierre...................................... 47
Gambar 6.6 Destilasi pelarut n-heksan….........................................................
Gambar 6.7 Proses maserasi..............................................................................
47
47
Gambar 6.8 Penyaringan filtrat daun Garcinia benthami Pierre ..................... 47
Gambar 6.9 Pembuatan ekstrak kental.............................................................. 47
Gambar 6.10 Ekstrak kental daun Garcinia benthami Pierre........................... 47
Gambar 6.11 Pemberian air laut………............................................................ 48
Gambar 6.12 Wadah penetasan Artemia salina Leach...................................... 48
Gambar 6.13 Telur Artemia salina Leach yang akan ditetaskan......................
Gambar 6.14 Ekstrak yang akan diencerkan………………………………….
Gambar 6.15 Tabung Pengenceran……………………………………….......
48
48
48
1
BAB 1
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Obat-obatan yang bersumber dari bahan alam saat ini sudah dikenal dan
digunakan pada sebagian besar masyarakat Indonesia atau yang biasa disebut
sebagai obat tradisional. Obat tradisional mudah diterima oleh masyarakat
karena harga lebih murah dan mudah di dapat. Banyak penelitian sebelumnya
yang telah meneliti mengenai macam obat tradisional, kandungan kimia serta
khasiat yang ada di dalamnya. Namun, adapula tanaman yang belum diketahui
manfaatnya, sehingga perlu diteliti lebih lanjut.1
Umumnya masih banyak tanaman yang dapat dijadikan bahan obat
tradisional tetapi belum diketahui oleh masyarakat Indonesia karena jenis-
jenisnya dianggap tidak banyak memberikan manfaat. Ada beberapa jenis
tanaman Garcinia yang ada di Indonesia, seperti G. Mangostana L, G.
Lancilimba, dan G. benthami Pierre. Namun, masyarakat Indonesia hanya
mengetahui satu jenis tanaman saja, yaitu manggis ( G. Mangostana L.).
Sehingga mendorong para peneliti untuk mencari tahu kandungan kimia
sampai manfaat atau khasiat yang dapat diperoleh dari tanaman Garcinia
lainnya.
Garcinia termasuk famili Clusiaceae yang telah diketahui mempunyai
manfaat yang besar untuk kesehatan karena mengandung senyawa yang
mempunyai bioaktivitas sebagai antioksidan. Garcinia benthami Pierre
merupakan salah satu spesies dari genus Garcinia yang tumbuh di Indonesia.2
Penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa kandungan kimia yang
terdapat dari spesies Garcinia diantaranya yaitu senyawa golongan xanton,
kumarin, flavonoida dan terpenoid. Berdasarkan hasil penelitian, xanton dari
genus Garcinia diketahui mempunyai aktivitas sebagai antioksidan,
antibakteri, antimalaria, antikanker dan antiinflamasi. Xanton dari G.
Lancilimba berperan aktif terhadap sel kanker MDA-MB-435S pada payudara.
2
Selain itu, pada G. Mangostana L yaitu mangostenon C juga mempunyai
aktivitas aktif terhadap sel kanker. Senyawa tersebut aktif terhadap tiga cell
line kanker manusia, epidermoid carcinoma of the mouth (KB), breast cancer
(BC-1) dan small sell lung cancer (NCI-H187).2
Peneliti belum menemukan penelitian tentang uji toksisitas pada daun
Garcinia benthami Pierre dengan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT).
Penelitian ini menerapkan metode BSLT dengan menggunakan larva Artemia
salina Leach sebagai hewan uji. Hasil uji toksisitas dengan metode ini telah
terbukti memiliki hubungan dengan daya sitotoksitas senyawa antikanker pada
suatu tanaman. Selain itu, metode ini sering digunakan sebagai skrining awal
untuk mengetahui senyawa aktif yang terkandung di dalam ekstrak tanaman.3
Oleh karena itu, penting dilakukannya penelitian ini untuk mengetahui potensi
toksisitas akut ekstrak n-heksana daun Garcinia benthami Pierre terhadap
larva Artemia salina Leach dengan metode BSLT. Hasil yang didapatkan
diharapkan dapat dijadikan bahan informasi tentang potensi toksisitas akut
pada ekstrak n-heksana daun Garcinia benthami Pierre sebagai salah satu
tanaman yang dapat dimanfaatkan sebagai tanaman obat tradisional dan dapat
digunakan secara luas oleh masyarakat Indonesia.
1.2 Rumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang di atas rumusan masalah dalam penelitian ini
adalah apakah ekstrak n-heksana daun Garcinia benthami Pierre mempunyai
potensi toksisitas akut terhadap larva Artemia salina Leach.
1.3 Tujuan Penelitian
1.3.1 Tujuan Umum
Tujuan umum penelitian ini adalah untuk mengetahui toksisitas akut ekstrak
n-heksan daun Garcinia benthami Pierre terhadap larva larva Artemia salina
Leach dengan metode BSLT.
3
1.3.2 Tujuan Khusus
Tujuan khusus penelitian ini adalah untuk menentukan nilai LC50 ekstrak n-
heksan daun Garcinia benthami Pierre terhadap larva Artemia salina Leach
dengan metode BSLT.
1.4 Manfaat Penelitian
1.4.1 Bagi Masyarakat
Menambah informasi tentang tumbuhan keluarga manggis yang berpotensi
sebagai tanaman obat.
1.4.2 Bagi Institusi
1. Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi tentang
potensi toksisitas akut ekstrak n-heksan daun Garcinia benthami Pierre
sehingga dapat digunakan sebagai alternatif dalam pengembangan
obat-obat alami sebagai pengobatan serta pencegahan dari penyakit
kanker.
2. Dapat dijadikan bahan rujukan penelitian di Fakultas Kedokteran dan
Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta.
1.4.3 Bagi Peneliti
1. Sebagai salah satu syarat mendapatkan gelar Sarjana Kedokteran di
Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri
Syarif Hidayatullah Jakarta.
2. Dapat menambah pengalaman peneliti dalam melakukan uji potensi
toksisitas terutama pada tanaman Garcinia benthami Pierre.
4
BAB 2
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Landasan Teori
2.1.1 Obat Tradisional
Obat tradisional adalah pilihan pengobatan yang akhir-akhir ini diminati
dan sering menjadi pilihan masyarakat luas, terlebih lagi dengan kesadaran
untuk memilih pengobatan dari bahan alami, bahkan dengan perkembangan
zaman, kini pengobatan alternatif dalam melayani kesehatan pada
masyarakat juga banyak diminati. Dari banyak penelitian, obat tradisional
memang sudah diakui kekhasiatannya oleh masyarakat. Oleh karena itu,
memanfaatkan tanaman dari bahan alami dan menggunakannya untuk
kesehatan dapat meningkatkan berkembangannya obat-obatan tradisional.3
Selain itu, memanfaatkan tanaman obat yang terbuat dari bahan alami juga
dapat digunakan untuk mengatasi penyakit kanker, telah diketahui bahwa
pengobatan kanker saat ini sangat mahal. Di Indonesia, penyakit kanker
merupakan urutan kelima, karena itulah penyakit kanker merupakan salah
satu penyakit yang menakutkan bagi masyarakat. Sudah banyak penelitian
yang telah dilakukan untuk mencari senyawa antikanker yang terkandung
pada berbagai tanaman tradisional sehingga akan dikembangkan menjadi obat
tradisional yang efektif dalam menghambat dan menghentikan aktivitas sel
kanker di dalam tubuh seseorang. Sehingga upaya pengembangan obat
tradisional perlu dikembangkan dan disebarluaskan.3
Salah satu tumbuhan yang perlu dikembangkan sebagai obat antikanker
adalah daun Garcinia benthami Pierre. Tumbuhan ini merupakan tumbuhan
yang belum banyak diketahui oleh masyarakat luas dan juga dapat
digunakan menjadi salah satu obat tradisional.
2.1.2 Toksikologi
Uji toksisitas merupakan salah satu bagian dari toksikologi. Uji
toksisitas diawali dari skrining mencari senyawa aktif kemudian dapat
5
dilanjutkan kembali dengan uji efektivitas atau selektivitas pada hewan
coba. 4
Toksikologi merupakan ilmu yang mempelajari secara kuantitatif dan
kualitatif pengaruh yang buruk dari zat kimiawi, fisis, dan biologis terhadap
suatu sistem biologis.4 Selain itu, dapat diartikan sebagai ilmu yang
mempelajari racun, tidak saja efeknya, tetapi juga mekanisme terjadinya
efek tersebut pada organisme. Racun tersebut dapat berupa zat kimia, fisis,
dan biologis. Toksin atau racun diartikan sebagai zat yang bila masuk ke
dalam tubuh dalam dosis cukup, bereaksi secara kimiawi dapat
menimbulkan kematian/kerusakan berat pada orang sehat.5
Sedangkan toksisitas merupakan kemampuan racun (molekul) untuk
menimbulkan kerusakan apabila masuk ke dalam tubuh dan lokasi organ
yang rentan terhadapnya. 6
Suatu zat mempunyai kadar toksisitas yang berbeda sehingga
menentukan tingkat toksisitas suatu toksin yang sedang diuji coba pada
berbagai organisme. Tetapi toksisitas ini bergantung pada berbagai faktor,
antara lain : 7
a) Spesies uji
b) Cara racun memasuki tubuh/ portal entri
c) Frekuensi dan lamanya paparan
d) Konsentrasi zat pemapar
e) Bentuk, sifat kimia/fisik zat pencemar
f) Kerentanan berbagai spesies terhadap pencemar
Semuanya faktor- faktor yang dapat menentukan efek yang terjadi.
Ada 2 jenis sifat efek toksik, yakni bersifat reversible (dapat kembali
seperti semula) dan bersifat irreversible (tidak dapat dirubah kembali).
Berikut ciri efek toksik yang bersifat reversible, yaitu : 7
1. Bila jumlah zat toksik dalam tempat kerjanya atau reseptornya telah
habis, maka reseptor akan kembali seperti keadaan semula.
2. Efek toksik yang diakibatkan akan cepat hilang atau kembali normal.
6
3. Ketoksikan sangat tergantung pada dosis, kecepatan absorbs,
distribusi, dan eleminasi
Sedangkan ciri-ciri dari sifat efek toksik yang bersifat irreversible, yaitu : 7
1. Kerusakan yang terjadi sifatnya permanen
2. Paparan berikutnya akan menimbulkan kerusakan yang sifatnya
sama sehingga memungkinkan terjadinya akumulasi efek toksik.
3. Paparan dengan takaran yang sangat kecil dalam jangka panjang
akan menimbulkan efek toksik yang sama efektifnya dengan yang
ditimbulkan oleh paparan dosis besar jangka pendek. Ini
menunjukkan zat yang dapat menimbulkan efek toksik irreversible
adalah zat beracun yang terakumulasi atau sangat sukar dieleminasi.
2.1.3 Garcinia benthami Pierre
Umumnya Garcinia merupakan tumbuhan yang masih belum diketahui
oleh banyak masyarakat luas karena jenis-jenisnya tidak banyak
memberikan manfaat kecuali manggis (Garcinia Mangostana L.).
Gambar 2.1 Garcinia benthami Pierre
Sumber : Dokumen pribadi
7
Klasifikasi taksonomi tumbuhan Garcinia benthami Pierre : 2
a. Regnum : Plantae
b. Divisi : Spermatophyta
c. Anak divisi : Angiospermae
d. Kelas : Dicotyledoneae
e. Sub kelas : Archichlamydeae
f. Ordo : Guttiferales
g. Familia : Clusiaceae
h. Genus : Garcinia
i. Species : Garcinia benthami Pierre
Tumbuhan Garcinia, sudah banyak ditemukan sebagian besar hutan di
Indonesia, selain itu juga dapat ditemukan di India dan Sri Lanka. Di Indonesia,
tumbuhan Garcinia juga terdapat di Kalimantan Timur, Borneo, Sarawak, Sabah. 8
Garcinia merupakan tumbuhan yang tidak terlalu besar, dan sering ditemukan di
bawah pohon-pohon yang besar. Garcinia benthami Pierre merupakan salah satu
spesies dari garcinia. Tumbuhan ini memiliki tinggi sekitar 17 meter, diameter
tajuk 12 m dan memiliki diameter batang sekitar 43,13 cm.9
Memiliki batang yang
lurus, mengecil ke arah ujung. Bentuk pohon seperti kerucut, memiliki
percabangan berselang-seling. Selain itu, tanaman ini juga mempunyai nama lain
yaitu Garcinia ferrea Pierre.2
Jika dipotong, pada seluruh bagian tanaman akan mengeluarkan getah
kuning yang kental dan lengket. Daunnya berwarna hijau. Bunga berada di ketiak
daun. Daun kelopak dan daun mahkota terdiri dari 4-5 helai. Bunga jantan
memiliki benang sari yang jumlahnya bervariasi, dengan tangkai sari bersatu
menjadi satu. Pada bunga betina biasanya berukuran lebih besar dari bunga jantan,
benang sari semu dengan tangkai sarinya yang bersatu menjadi sebuah cincin di
bagian pangkal, bakal buah beruang 2-12 dan biasanya berbentuk papila. Bijinya
besar, biasanya terbungkus oleh arilus yang berisi banyak sari buah. Embrionya
berupa masa padat, hanya tersusun atas hipokotil, sedangkan bijinya tidak ada.10
8
2.1.4 Uji Toksisitas Metoda Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Zat yang telah diuji dengan uji toksisitas, akan melalui beberapa test
keamanan pada hewan coba, meliputi :7
1. Uji toksisitas akut, yaitu uji untuk mengetahui nilai LC50 atau LD50 yang
masih dapat ditoleransi oleh binatang percobaan, yang hasilnya akan
ditransformasi pada manusia.
2. Uji toksisitas subakut, adalah suatu uji untuk menentukan organ sasaran
(organ yang rentan) atau tempat kerjanya. Umumnya dilakukan dengan
menggunakan 3 dosis dan menggunakan 2 spesies yang berbeda.
3. Uji toksisitas kronik, adalah suatu uji yang tujuannya hampir sama dengan
toksisitas sub akut. Uji ini diperlukan jika obat nantinya akan digunakan
dalam jangka waktu yang panjang.
4. Uji efek pada organ reproduksi, suatu uji untuk melihat perilaku yang
berkaitan dengan reproduksi (perilaku kawin), perkembangan janin,
kelainan janin, proses kelahiran, dan perkembangan janin setelah
dilahirkan.
5. Uji karsinogenik, adalah uji untuk mengetahui apakah suatu zat jika
dipakai jangka panjang akan dapat menimbulkan kanker. Uji ini dilakukan
jika obat tersebut nantinya akan digunakan dalam jangka panjang.
6. Uji mutagenik, adalah suatu uji untuk melihat adanya perubahan gen jika
zat digunakan jangka panjang.
Metode BSLT merupakan salah metode uji toksisitas akut. Metode BSLT
yang digunakan menggunakan cara Meyer yang biasanya dilakukan untuk
penapisan pada ekstrak dari tumbuhan ataupun buah yang diperkirakan
memiliki sifat antitumor atau antikanker sebelum melakukan uji in vitro yang
menggunakan sel lestari tumor.11
Metoda ini diketahui digunakan sebagai
bioassay guided fractionation bahan alam, juga dapat digunakan untuk metoda
pra-skrining penelitian sel tumor di Cell Culture Labaratory of the Purdue
Cancer Center, Purdue University. Metode Meyer ini ditujukan terhadap
tingkat mortalitas larva udang Artemia salina L. yang disebabkan oleh ekstrak
uji.12
9
Hasil uji toksisitas dengan metode BSLT telah dibuktikan memiliki korelasi
dengan daya sitotoksitas dari senyawa antikanker.3 Hasil uji toksisitas
dinyatakan dalam persen LC50
(Lethal Consentration).12
LC50 didefinisikan
sebagai dosis atau konsentrasi yang diberikan sekali (tunggal) atau beberapa
kali dalam 24 jam dari suatu zat yang secara statistik diharapkan dapat
mematikan 50% hewan coba.7 Besarnya toksisitas tergatung dari jumlah
kematian larva setelah pemberian zat yang mengandung senyawa antikanker.
Ekstrak dikatakan bersifat toksik jika harga LC50
< 1000 ppm, sedangkan untuk
senyawa murni jika LC50
<200 ppm berpotensi sebagai antikanker.13
Ekstrak
atau fraksi senyawa yang memiliki harga LC50 > 0-30 ppm berpotensi sebagai
antikanker, LC50 > 30-200 ppm berpotensi sebagai antibakteri, sedangkan LC50
> 200-1000 ppm berpotensi sebagai pestisida.13
Artemia salina Leach merupakan kelompok udang-udangan (Crustaceae)
dari filum Arthropoda, kingdom Animalia. Artemia salina Leach biasanya
hidup di lingkungan danau berair asin. Kadar garam perairan sangat
berpengaruh pada proses penetasan udang, kadar garam < 6% menyebabkan
telur udang tenggelam dan tidak bisa menetas. Jika kadar garam > 25%, telur
akan berada pada kondisi tersuspensi, sehingga telur udang dapat menetas
dengan normal.14
Siklus hidup Artemia salina Leach dimulai dari saat penetasan telur atau
embrio. Setelah 15-20 jam, pada suhu 250C kista akan menetas menjadi
embrio. Dalam waktu 20-24 jam, embrio tersebut berubah menjadi naupli
(larva udang) yang dapat berenang bebas. Siklus hidup Artemia salina Leach
dipengaruhi oleh beberapa faktor, diantaranya pH, cahaya, suhu, kadar garam,
dan aerasi O2. pH terbaik untuk siklus hidup Artemia salina Leach adalah
sebesar 8-9, sedangkan pH di bawah 5 atau di atas 10 dapat membunuh
Artemia salina Leach. Cahaya sangat diperlukan untuk proses penetasan dan
pertumbuhan Artemia salina Leach. Selain itu, kadar oksigen harus tetap dijaga
dengan baik untuk mendukung pertumbuhan Artemia salina Leach.15
10
Jika faktor-faktor tersebut dapat dilakukan dengan optimal, Artemia salina
Leach akan tumbuh dan berkembang dengan cepat. Apabila kadar oksigen
dalam air rendah, air mengandung polutan organik, atau salinitas perairan
meningkat, Artemia salina Leach akan memakan bakteri, plankton, dan sel
khamir. Pada kondisi tersebut, Artemia salina Leach akan memproduksi
hemoglobin sehingga tampak berwarna jingga kemerahan.14
Pada proses inkubasi selama 24 jam, larva udang Artemia salina Leach
membutuhkan proses aerasi dengan menggunakan aerator. Aerasi merupakan
proses terjadinya kontak antara air dan udara, sehingga terjadi perpindahan
seyawa yang bersifat volatile. Proses aerasi dapat meningkatkan jumlah O2 di
dalam air, menghilangkan CO2, H2S, dan menghilangkan rasa serta bau yang
disebabkan oleh zat-zat organik. Aerasi juga dapat meningkatkan pH dan
menurunkan suhu termal air laut.16
Proses aerasi dapat dilakukan dengan dua
cara yaitu cara pertama adalah dengan memompakan udara atau oksigen ke
dalam air, sehingga dihasilkan gelembung udara yang berkontak langsung
dengan air. Cara yang kedua adalah dengan menekan air ke atas untuk
berkontak langsung dengan udara, proses tersebut dilakukan dengan bantuan
pemutaran baling-baling pada permukaan air.17
Pemilihan larva udang sebagai hewan uji pada penelitian didasarkan karena
Artemia salina Leach memiliki beberapa kesamaan dengan mamalia, misalnya
pada tipe DNA-dependent RNA polimerase Artemia salina Leach serupa
dengan yang terdapat pada mamalia dan organisme yang memiliki ouabaine-
sensitive Na+ dan K
+ dependent ATPase, sehingga senyawa maupun ekstrak
yang terdapat aktivitas pada sistem tersebut dapat terdeteksi.18
Selain itu,
pemilihan Artemia salina Leach dikarenakan telur Artemia salina Leach
memiliki daya tahan yang lama (dapat tetap hidup dalam kondisi kering,
selama beberapa tahun), lebih mudah menetas dalam waktu 48 jam, sehingga
dapat dihasilkan naupli (larva udang) dalam jumlah banyak untuk diuji.15
Larva
udang pun memiliki kemampuan untuk mengatasi perubahan tekanan osmotik
dan regulasi ionik yang tinggi.19
Alasan lain yang menyebabkan dipilihnya
larva udang (naupli) sebagai hewan uji adalah karena larva udang memiliki
11
membran kulit yang tipis, sehingga kematian suatu larva akibat efek sitotoksik
dari senyawa bioaktif dapat dianalogikan dengan kematian sebuah sel dalam
organisme.20
Disamping itu, larva udang juga memiliki toleransi yang tinggi
terhadap selang salinitas yang luas, mulai dari air tawar hingga air yang
bersifat jenuh garam.21
Persen kematian Artemia salina Leach dapat dihitung setelah periode
inkubasi selama 24 jam, setelah pemberian sejumlah larutan uji pada media
hidupnya. Kematian tersebut disebabkan, karena larva udang mengalami
keracunan (toxicity) akibat keberadaan senyawa bioaktif yang masuk ke dalam
tubuhnya. Selain itu, sistem pertahanan tubuh (imunitas) yang dibentuk larva
udang masih belum mampu untuk menghambat dan menoleransi senyawa
bioaktif yang terdapat pada media hidupnya. Kematian larva udang dinyatakan
berdasarkan hasil pengamatan menggunakan kaca pembesar dan ditunjukkan
dengan tidak adanya motilitas (pergerakan) dari larva udang. Selanjutnya
dihitung efek farmakologis, berdasarkan analisis probit (LC50).15
2.1.5 Metode Ekstraksi
Ekstraksi adalah penarikan dari kandungan kimia yang dapat larut
sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dengan pelarut cair. Ada
beberapa cara pembuatan ekstraksi : 2
2.1.5.1 Cara Dingin
a. Maserasi
Maserasi adalah proses ekstraksi simplisia menggunakan pelarut
dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur
ruangan (suhu kamar). Cara ekstraksi ini menggunakan prinsip metode
pencapaian konsentrasi pada keseimbangan. Remaserasi adalah melakukan
beberapa kali pengulangan dengan menambahkan pelarut setelah
dilakukan penyaringan maserat pertama dan seterusnya. 2
12
b. Perkolasi
Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai
sempurna (exhaustive extraction) biasanya dilakukan pada suhu kamar.
Terdapat beberapa proses yang terdiri dari tahapan pengembangan bahan,
tahap maserasi antara, tahap perkolasi sebenarnya (penetesan atau
penampungan ekstrak), terus menerus sampai diperoleh ekstrak (perkolat)
yang jumlahnya 1-5 kali bahan. 2
2.1.4.2 Cara Panas
a. Refluks
Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik didihnya
selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan
dengan adanya pendingin balik. Umumnya dilakukan pengulangan proses
pada residu pertama sampai 3-5 kali. Sehingga termasuk proses ekstraksi
sempurna. 2
b. Soxhlet
Soxhlet adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu baru yang
umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi kontinu
dengan jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik. 2
c. Digesti
Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan kontinu) pada
temperatur yang lebih tinggi dari temperatur ruangan (kamar), yaitu secara
umum dilakukan pada temperatur 400-50
0C.
2
d. Infus
Infus adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur penangas air
(bejana infus tercelup dalam penangas air mendidih, temperatur terukur
(960- 98
0C) selama waktu tertentu (15-20 menit).
2
13
e. Dekok
Dekok adalah infus pada waktu yang lebih lama dan temperatur sampai
titik didih air selama 30 menit. 2
14
2.2 Kerangka Konsep
METODE BSLT
Penetasan Artemia salina Leach
selama 48 jam
Didapatkan hasil penelitian
Persentase Persen kematian
larva udang
Nilai Probit,
Persamaan linier
y=a+bx
Pemberian larutan uji (ekstrak n-
heksan daun Garcinia benthami
Pierre) dan menghitung persen
kematian Artemia salina Leach
menggunakan kaca pembesar setelah
periode inkubasi selama 24 jam
Uji Toksisitas Akut
Memiliki Senyawa Bioaktif
Ekstrak daun Garcinia benthami Pierre
NILAI LC50
UJI TOKSISITAS
15
2.3 Definisi Operasional
No Variabel Definisi Cara ukur Alat ukur Skala
ukur
Hasil ukur
1. Konsentra
si ekstrak
daun
Garcinia
benthami
Pierre
Konsentrasi
larutan uji
dalam ppm (1
μg/mL)
V1M1=V2M2
(perbandingan
μg ekstrak
dengan mL n-
heksan)
- Numerik 50 ppm,
100 ppm,
200 ppm,
500 ppm
1000 ppm
2. Toksisitas
sampel
Nilai toksisitas
sampel yang
diuji pada
masing-masing
konsentrasi
Pengukuran
dilakukan
dengan
menghitung
jumlah
Artemia salina
Leach yang
mati sebanyak
50 % dari total
larva uji (10
ekor pada
tabung
reaksi).
Menggunaka
n kaca
pembesar
dan
ditunjukkan
dengan tidak
adanya
motilitas
(pergerakan)
dari larva
udang.
Numerik Hasil
toksisitas
dalam
persen LC50
3. LC50 Dosis atau
konsentrasi
yang diberikan
dalam 24 jam
dari suatu zat
dan dapat
mematikan 50%
hewan coba
Menentukan
persamaan
garis lurus
hubungan
antara nilai
probit dengan
log dosis
- Kategorik Ekstrak LC50
< 1000 ppm
= bersifat
toksik
Sedangkan
senyawa
murni LC50
<200 ppm =
antikanker
16
BAB 3
METODE PENELITIAN
3.1 Desain Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan pendekatan Post
Test-Only Control Group Design dan cara pengambilan sampel yaitu
Purposive Random Sampling terhadap larva Artemia salina Leach di
Laboratorium untuk menguji potensi toksisitas. Perlakuan dengan pemberian
ekstrak n-heksan daun Garcinia benthami Pierre terhadap larva Artemia salina
Leach.
3.2 Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini akan dilakukan pada bulan Maret sampai bulan Agustus 2013 di
Laboratorium Farmakognosi dan Fitofarmaka, Laboratorium Farmakologi,
dan Laboratorium Biologi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan
Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta.
3.3 Bahan yang Diuji
Daun Garcinia benthami Pierre diambil dari Kebun Raya Bogor dan telah di
determinasi di laboratorium LIPI-Bogor (lampiran 1). Tujuan dilakukannya
determinasi dan identifikasi daun yaitu untuk mengetahui dan memastikan
famili dan spesies tanaman yang akan diteliti. Proses ekstraksi dilakukan di
Laboratorium Farmakognosi dan Fitofarmaka Fakultas Kedokteran dan Ilmu
Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta.
3.4 Alat dan Bahan Penelitian
3.4.1 Alat Penelitian
Gelas ukur, neraca analitik, gelas beaker, tabung reaksi, pipet, batang
pengaduk kaca, rotary evaporator, lup, vial atau botol kaca, lakban,
kertas saring, lemari asam, wadah bening, mikropipet, dan lampu,
sterofoam, aluminium foil, cawan penguap.
17
3.4.2 Bahan Penelitian
Ekstrak daun Garcinia benthami Pierre, aquadest, pelarut yang
digunakan yaitu n-heksan mempunyai sifat non polar sehingga akan
melarutkan senyawa-senyawa nonpolar yang terdapat dalam ekstrak
kasar n-heksan daun Garcinia benthami Pierre. Pemilihan n-heksan
sebagai pelarut karena n-heksan memiliki titik didih rendah, mudah
menguap, bersifat tidak berbahaya, dan tidak beracun. Hewan uji yang
digunakan yaitu larva Artemia salina Leach, sebagai pelarut tambahan
digunakan larutan DMSO (Dimethyl Sulfoxide) untuk membantu
kelarutan ekstrak n-heksan dalam aquades, dan air laut.
3.5 Cara Kerja Penelitian
3.5.1 Penyiapan Sampel atau Pembuatan Simplisia
Daun Garcinia benthami Pierre yang dipilih dalam penelitian ini yaitu
daun segar dan tidak cacat dari strukturnya sebanyak 6 kg, kemudian
dikeringkan di Balai Penelitian Tanaman Obat dan Aromatik (BALITRO)
dengan cara oven sampai kering.
Setelah kering, simplisia dibersihkan dari kotoran-kotoran yang mungkin
menempel pada permukaan maupun belakang daun. Selanjutnya simplisia
dihaluskan dengan menggunakan blender sampai terlihat halus. Setelah itu,
simplisia ditimbang sebanyak 1 kg untuk proses ekstraksi dan proses
selanjutnya.
3.5.2 Pembuatan Ekstrak Daun Garcinia benthami Pierre
Sebanyak 1 kg dari daun Garcinia benthami Pierre dimasukkan ke dalam
botol untuk dilakukan maserasi dengan pelarut n-heksan sebanyak 6 L yang
sebelumnya telah di destilasi dengan rotary evaporator. Maserasi dilakukan
sebanyak 3 hari. Hasil maserasi disaring dengan menggunakan kertas saring
dan dari hasil penyaringan diperoleh filtrat. Kemudian filtrat tersebut
dipekatkan menjadi ekstrak kental dengan memasukkan ke dalam labu
18
evaporator. Pelarut diuapkan menggunakan rotary evaporator pada suhu +
450C sampai pelarut tidak keluar lagi pada labu alas bulat tempat sisa
penampungan pelarut, sehingga didapatkan ekstrak kental n-heksan. Hasil
penyaringan juga didapatkan ampas simplisia dan kemudian kembali
maserasi dengan pelarut n-heksan hingga didapatkan filtat n-heksan
mendekati hijau bening agar klorofil yang terdapat pada daun dapat hilang
semua. Telah dilakukan tujuh kali proses maserasi dan dilakukan dalam
waktu + 1 bulan. Setiap dilakukannya proses maserasi tersebut, masing-
masing ekstrak kental yang disatukan dan dipindahkan ke dalam cawan
penguap. Setelah diproses maserasi telah selesai, maka hasil ekstrak kental
yang telah didapatkan dikeringkan dalam oven sampai didapatkan ekstrak n-
heksan yang kering (konsentrasi 100 %) ditimbang.
3.5.3 Uji Aktivitas Toksisitas Dengan metode BSLT
Pengujian dilakukan pada ekstrak kental daun Garcinia benthami Pierre
dengan metode BSLT. Metode BSLT merupakan metode skrining awal
terhadap senyawa aktif yang terdapat pada tanaman yang akan diuji. Selain
itu, proses pengerjaannya pun mudah, relatif tidak mahal, dan tidak
membutuhkan waktu yang lama. Metode BSLT pun mempunyai tingkat
kepercayaan sekitar 95% untuk uji toksisitas suatu senyawa di dalam ekstrak
kasar tanaman.22
Sebelum melakukan pengujian, dilakukan penetasan larva Artemia salina
Leach terlebih dahulu dengan menetaskan telurnya 48 jam. Air laut yang
digunakan untuk penelitian, pH nya diukur terlebih dahulu. Dari hasil
pengukuran didapatkan pH air laut adalah pH 8-9. Penetasan dilakukan
dengan cara merendam telur tersebut dalam air laut secukupnya pada wadah.
Wadah tersebut dibagi menjadi dua bagian dengan menggunakan sterofoam
dan diberi lubang di bagian bawahnya. Wadah yang telah dibagi menjadi dua
bagian tersebut, sebagian diberi lakban pada samping wadah dan ditutupi
aluminium foil diatasnya serta tidak dikenai sinar lampu dan yang sebagian
lagi tidak dilakban dan tidak diberikan aluminium foil di atasnya dan diberi
19
sinar lampu. Perlakuan tersebut digunakan untuk meletakkan telur pada
tempat yang tidak di terang/gelap sehingga telur dapat menetas dan berpindah
ke lubang pada daerah yang tidak diberi sinar lampu.
Setelah didapatkan larva Artemia salina Leach, dilakukan penimbangan
pada ekstrak n-heksan sebanyak 2000 mg. Kemudian dilakukan pengenceran
dengan akuades, akan tetapi karena n-heksan merupakan pelarut non polar
sehingga pada ekstraknya diberikan tambahan 2 ml larutan DMSO dalam
labu 100 ml ditambahkan aquades sampai batas kalibrasi. Kemudian
dilakukan pengenceran dengan membuat konsentrasi 50 ppm, 100 ppm, 200
ppm, 500 ppm, 1000 ppm, 1500 ppm, 2500 ppm, 5000 ppm, 10.000 ppm, dan
15.000 ppm dari masing-masing dilakukan pengulangan sebanyak 3 kali
(triplikat). Kemudian dimasukkan 10 ekor larva Artemia salina Leach ke
dalam tabung reaksi kemudian ditambahkan 9 ml air laut dan dicampurkan 1
ml larutan pengenceran dari masing-masing konsentrasi 50 ppm, 100 ppm,
200 ppm, 500 ppm, 1000 ppm, 1500 ppm, 2500 ppm, 5000 ppm, 10.000 ppm,
dan 15.000 ppm. Sehingga didapatkan konsentrasi ekstrak pada tabung reaksi
terisi larva Artemia salina Leach yaitu 5 ppm, 10 ppm, 20 ppm, 50 ppm, 100
ppm, 150 ppm, 200 ppm, 500 ppm, 1000 ppm, dan 1500 ppm, karena adanya
penambahan dengan 9 ml air laut dan 1 ml ekstrak. Untuk memastikan efek
DMSO terhadap larva Artemia salina Leach dilakukan uji BSLT hanya
dengan menggunakan DMSO dengan cara memasukkan 2 ml DMSO di
dalam labu 100 ml tanpa penambahan ekstrak ditambahkan aquades sampai
batas kalibrasi labu tersebut. Kemudian dilakukan pengenceran dengan
membuat konsentrasi 50 ppm, 100 ppm, 200 ppm, 500 ppm, 1000 ppm 1500
ppm, 2500 ppm, 5000 ppm, 10.000 ppm, 15.000 ppm, dan 20.000 ppm. 10
ekor larva Artemia salina Leach dimasukkkan ke dalam tabung reaksi
kemudian diambil 9 ml air laut dan ditambahkan 1 ml dari pengenceran
DMSO tersebut, sehingga konsentrasi DMSO pada masing-masing tabung
reaksi yaitu yaitu 5 ppm, 10 ppm, 20 ppm, 50 ppm, 100 ppm, 150 ppm, 250
ppm, 500 ppm, 1000 ppm, 1500 ppm, dan 2000 ppm. Selain itu, pembuatan
kontrol negatif pada air laut juga telah dilakukan. Dimasukkan 10 ekor larva
20
Artemia salina Leach ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan 10 ml air laut
tanpa penambahan ekstrak.
3.5.4 Pengukuran Toksisitas
Uji toksisitas yang dilakukan dengan metode BSLT menggunakan larva
Artemia salina Leach terhadap ekstrak n-heksan. Sehingga diperoleh suatu
data yang kemudian diolah dengan menggunakan metode analisis probit
untuk menentukan nilai LC50.
Pengukuran dilakukan dengan menghitung jumlah Artemia salina Leach
yang mati sebanyak 50 % dari total larva uji (10 ekor pada tabung reaksi).
Kemudian nilai LC50 dihitung dengan memasukkan angka probit (50%
kematian larva uji). Efek toksisitas dihitung dari persen kematian larva
Artemia salina Leach.23
% kematian =
x 100 %
Kemudian membuat persamaan regresi linier:24
y = a+bx
y = nilai probit,
x = log konsentrasi.
a =Intercept (garis potong)
b = Slope (kemiringan dari garis regresi linear)
LC50 adalah nilai y yang dimasukkan ke dalam nilai x = 50%. Apabila pada
kontrol ada larva yang mati, maka persen kematian ditentukan dengan rumus
Abbot: 23
% kematian =
x 100 %
Keterangan :
21
T = jumlah larva uji yang mati,
K = jumlah larva kontrol yang mati
10 = jumlah larva uji.
3.5.5 Analisis Data Toksisitas
Ada banyak cara untuk menentukan nilai LC50. Salah satu cara yaitu
dengan metode probit. Cara ini dilakukan dengan menghitung frekuensi (%
respon) efek yang ditimbulkan kemudian dihubungkan dengan dosis dalam
skala logaritma, maka akan diperoleh kurva dengan bentuk sigmoid ( ʃ ).
Bagian tengah kurva yaitu, antara 16-84 % respon cukup proporsional (lurus)
untuk memperkirakan efek hubungan dosis versus respon, baik efek
farmakologi (ED50) atau toksikologi (LC50). Sedangkan bagian yang tidak
lurus, menunjukkan respon kematian kurang dari 16% atau lebih dari 84%
dapat diluruskan dengan memprobitkan.7
Untuk menghitung LC50 berdasarkan metode probit, berikut merupakan
langkah pembuatan perhitungan LC50, yaitu : 7
1. Mempunyai tabel probit
2. Menentukan nilai probit dari % kematian tiap kelompok hewan uji
3. Menentukan log dosis tiap-tiap kelompok
4. Menentukan persamaan garis lurus hubungan antara nilai probit
dengan log dosis, y= ax+b
5. Masukkan nilai 5 (probit dari 50% kematian hewan coba) pada
persamaan garis lurus, pada nilai y. Nilai LC50 dihitung dari nilai anti
logX pada saat Y= 5.
Dari langkah-langkah yang telah disebutkan diatas, maka pada penelitian
akan dibuat:
1. Data persentase kematian larva Artemia salina Leach dilihat pada
tabel probit sehingga diperoleh nilai probit,
22
2. Kemudian membuat grafik antara log konsentrasi (x) dan nilai
probit (y) sehingga diperoleh persamaan regresi linier y = a+bx.
3. Masukkan nilai y = 5 (probit dari 50%) pada persamaan y=a+bx,
maka nilai LC50 ditentukan dengan nilai x
4. Selanjutnya nilai X dikonversikan ke bentuk antilog.
Ekstrak dikatakan bersifat toksik jika harga LC50
< 1000 ppm, sedangkan
untuk senyawa murni jika LC50
<200 ppm berpotensi sebagai antikanker.13
23
BAB 4
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Ekstraksi Daun Garcinia benthami Pierre
Ekstraksi dibuat dari daun Garcinia benthami Pierre yang diambil sebanyak 6
kg daun segar dari Kebun Raya Bogor. Pengeringan daun dilakukan di Balai
Penelitian Tanaman Obat dan Aromatik (BALITRO) agar proses pengeringan
berlangsung lebih cepat. Dari proses pengeringan didapatkan berat daun menjadi
3,5 kg. Daun juga telah diidentifikasi serta determinasi di Pusat Penelitian Biologi
LIPI–Bogor.
Proses pembuatan ekstraksi daun Garcinia benthami Pierre dilakukan dengan
cara maserasi bertingkat, berdasarkan tingkat kepolaran dari masing-masing
pelarut. Pelarut yang digunakan secara berurutan, yaitu n-heksan, etil asetat, dan
methanol. Pada penelitian ini, pelarut yang digunakan adalah n-heksan.
Dari hasil proses maserasi didapatkan filtrat akhir pelarut n-heksan sebanyak
1100 ml. Hasil ekstrak kental dari daun Garcinia benthami Pierre yang didapat
sebanyak 5 g. Hasil ekstrak kental yang telah didapat, ditimbang sebanyak 2 g
kemudian dilakukan pengenceran pada konsentrasi 5 ppm, 10 ppm, 20 ppm, 50
ppm, 100 ppm, 150 ppm, 200 ppm, 500 ppm, 1000 ppm, dan 1500 ppm. Untuk
melarutkan ekstrak n-heksan perlu ditambahkan DMSO sebanyak 2 ml.
Penambahan DMSO pada ekstrak n-heksan sebelum ditambahkan aquades
bertujuan untuk membantu kelarutan senyawa uji dalam aquades sehingga
senyawa dapat terlarut secara merata.
4.2 Perhitungan Nilai LC50
Hasil potensi aktivitas antikanker dapat diketahui dari jumlah kematian larva
Artemia salina Leach karena disebabkan adanya pengaruh dari pemberian ekstrak
daun Garcinia benthami Pierre pada konsentrasi 5 ppm, 10 ppm, 20 ppm, 50 ppm,
100 ppm, 150 ppm, 200 ppm, 500 ppm, 1000 ppm dan 1500 ppm pada tabung
24
reaksi. Hal ini disebabkan karena adanya pengenceran akibat penambahan air laut
9 ml pada tabung reaksi.
Tabel 4.1. Mortalitas Larva Artemia salina Leach dengan Ekstrak n-heksan Daun
Garcinia benthami Pierre
Ekstrak n-heksan daun
Garcinia benthami Pierre
Mortalitas larva Artemia salina Leach
Konsentrasi Pengulangan I Pengulangan II Pengulangan III % mati
5 ppm 0 1 0 3,33
10 ppm 0 1 1 6,67
20 ppm 1 1 1 10
50 ppm 1 2 1 16,67
100 ppm 2 1 3 20
150 ppm 3 2 2 23,33
250 ppm 2 3 3 26,67
500 ppm 3 3 3 30
1000 ppm 4 3 3 33,33
1500 ppm 4 3 4 36,67
Kontrol negatif (air laut) 0 0 0 0,00
Hasil Artemia salina Leach yang mengalami kematian dengan
penambahan ekstrak n-heksan yang telah dilakukan 3 kali pengulangan (triplikat)
sehingga didapatkan persen kematian dari masing-masing konsentrasi sebagai
berikut:
1. Pada konsentrasi 5 ppm menunjukkan persen kematian larva Artemia
salina Leach sebesar 3, 33%.
2. Pada konsetrasi 10 ppm menunjukkan persen kematian larva Artemia
salina Leach sebesar 6,67%.
3. Pada kosentrasi 20 ppm menunjukkan persen kematian larva Artemia
salina Leach sebesar 10%.
25
4. Pada konsentrasi 50 ppm menunjukkan persen kematian larva Artemia
salina Leach sebesar 16,67%.
5. Pada konsentrasi 100 ppm menunjukkan persen kematian larva
Artemia salina Leach sebesar 20%.
6. Pada konsentrasi 150 ppm menunjukkan persen kematian larva
Artemia salina Leach sebesar 23,33%
7. Pada konsentrasi 250 ppm menunjukkan persen kematian larva
Artemia salina Leach sebesar 26,67%
8. Pada konsentrasi 500 ppm menunjukkan persen kematian larva
Artemia salina Leach sebesar 30%
9. Pada konsnetrasi 1000 ppm menunjukkan persen kematian larva
Artemia salina Leach sebesar 33,33%
10. Pada konsnetrasi 1500 ppm menunjukkan persen kematian larva
Artemia salina Leach sebesar 36,67%
11. Pada kontrol negatif menunjukkan persen kematian larva Artemia
salina Leach sebesar 0,00%
Dari tabel 4.1 menunjukkan bahwa semakin tinggi konsentrasi ekstrak n-
heksan daun Garcinia benthami Pierre yang diberikan pada larva Artemia salina
Leach maka semakin tinggi pula persen larva kematian Artemia salina Leach.
Akan tetapi kematian 50% larva didapatkan pada konsentrasi >1000 ppm
sehingga ekstrak n-heksan daun Garcinia benthami Pierre disimpulkan tidak
mempunyai potensi toksik dengan uji BSLT.
Berikut hasil analisis uji toksisitas ekstrak n-heksan daun Garcinia benthami
Pierre dengan metode (BSLT) pada tabel di bawah ini.
26
Tabel 4.2 Data Hasil Uji Toksisitas Ekstrak n-heksan Daun Garcinia benthami
Pierre dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Hasil Uji Hasil Perhitungan
Konsentrasi
(ppm)
Log
konsentrasi
(X)
% mati Probit (Y) X2 Y
2 XY
0 0,00 0,00 0,00 0 0 0
5 0,69 3,33 3,1616 0,48 9,99 2,18
10 1 6,67 3,5015 1 12,26 3,50
20 1,30 10 3,7184 1,69 13,83 4,83
50 1,69 16,67 3,8877 2,86 15,11 6,57
100 2 20 4,1684 4 17,38 8,34
150 2,18 23,33 4,2710 4,75 18,24 9,31
250 2,39 26,67 4,3781 5,71 19,17 10,46
500 2,69 30 4,4756 7,24 20,03 12,04
1000 3 33,33 4,5684 9 20,87 13,70
1500 3,18 36,67 4,6602 10,11 21,72 14,82
∑ 20,12 40,79 46,84 168,6 85,75
Nilai slope (m) = ∑( )∑( ) ∑( )
(∑( )) ∑( )
Intersep (b) = ∑( )∑( ) ∑( ) ∑
(∑( )) ∑( )
Sehingga nilai slope (m) = ( ) ( ) – ( )
( ) ( )
=
=
= 0,57
27
Intersep (b) = ( )( ) ( )( )
( ) ( )
=
=
= 2,91
Sehingga persamaan garis lurus hubungan antara Y (nilai probit dari %
kematian) dengan X (log dosis) adalah Y = 0,57X +2,91
Y=0,57X+2,91
5=0,57X+2,91
2,09=0,57X
X=3,6
Antilog 3,6= 3981, jadi LC50 untuk zat uji diatas adalah 3981 ppm.
Untuk memastikan kebenaran perhitungan, maka dilakukan perhitungan
regresi linier dengan Microsoft Excel.
Grafik 4.1 Grafik Regresi Linier ekstrak daun Garcinia benthami Pierre
Sehingga didapatkan persamaan linier Y= 0,581x + 2,907
y = 0,5814x + 2,9075 R² = 0,9694
0
1
2
3
4
5
0 1 2 3 4
Nila
i Pro
bit
Log Konsentrasi
Regresi Linier Ekstrak Daun Garcinia benthami Pierre
Series1
Linear (Series1)
28
Berdasarkan persamaan linier tersebut didapatkan nilai LC50 :
Y= 0,581x + 2,907
5= 0,581x + 2,907
2,093 = 0,581x
X= 3,6
Antilog 3,6 = 3981
Dari tabel 4.2 menunjukkan bahwa ekstrak n-heksan mempunyai nilai
LC50 sebesar 3981 ppm dapat dikatakan memiliki nilai LC50>1000 ppm. Ekstrak
dikatakan bersifat toksik jika harga LC50
< 1000 ppm, sedangkan untuk senyawa
murni jika LC50
<200 ppm berpotensi sebagai antikanker.13
Hal ini menunjukkan
bahwa ekstrak n-heksan memiliki nilai LC50> 1000 ppm bersifat non toksik
terhadap larva Artemia salina Leach sehingga diperkirakan tidak memiliki potensi
antikanker.
Perhitungan nilai LC50 juga dilakukan dengan menggunakan metode analisis
probit dengan software SPSS 16. Melalui perangkat tersebut dapat ditentukan
hubungan linearitas antara konsentrasi formula terhadap probit kematian dari larva
udang. Berdasarkan pengujian menggunakan software SPSS 16 tersebut,
diperoleh nilai LC50 sebesar 4587,051 (lampiran 7). Distribusi data juga sudah
diuji menggunakan uji normalitas. Sampel yang digunakan <50, maka
menggunakan uji normalitas dengan Kolmogorov-Smirnov. Nilai p-value yang
diperoleh > 0,05 artinya distribusi data normal (lampiran 7).
Untuk menguji apakah kematian larva Artemia salina Leach disebabkan
karena pengaruh DMSO maka dilakukan pengujian BSLT dengan DMSO tanpa
ekstrak. Hasil pengujian dengan DMSO dapat dilihat pada tabel 4.3. Hasil
pengujian menunjukkan bahwa pada kadar DMSO yang tertinggi sebesar 2000
ppm, persentase kematian larva Artemia salina Leach hanya 13.33%. Hal ini
menunjukkan bahwa DMSO sebagai pelarut ekstrak tidak berefek signifikan pada
kematian larva pada konsentrasi ekstrak 2000 ppm yang mengakibatkan kematian
larva sebesar 90%. Bila dihitung 2000 ppm DMSO setara dengan 0.2 % kadar
29
DMSO dalam larutan. Hal ini masih sesuai dengan penelitian sebelumnya pada sel
mast yang menyebutkan kadar DMSO 0.4% tidak menyebabkan eksositosis
histamine dari sel mast.25
Selain itu, pada penelitian lain juga menyebutkan
penambahan DMSO tidak boleh lebih dari 50 μl, karena jika lebih akan dapat
menyebabkan kematian pada larva udang.26
Pada penelitian ini konsentrasi akhir
terbesar pada ekstrak kadar DMSO nya 20 μl. Sedangkan kontrol negatif
(mortalitas 0%) 10 ml air laut tanpa pemberian ekstrak yang telah diberikan tidak
memberikan kematian pada larva Artemia salina Leach sehingga larva yang mati
merupakan pengaruh senyawa toksik dari ekstrak daun Garcinia benthami Pierre
yang diuji bukan karena pengaruh faktor lainnya.
Tabel 4.3 Mortalitas Larva Artemia salina Leach dengan Pemberian DMSO
Sebagai Kontrol
DMSO
Mortalitas larva Artemia salina Leach
Konsentrasi Pengulangan I Pengulangan II Pengulangan III % mati
Kontrol negatif (air laut) 0 0 0 0,00
5 ppm 0 0 0 0,00
10 ppm 0 0 0 0,00
20 ppm 0 0 0 0,00
50 ppm 0 0 0 0,00
100 ppm 0 0 0 0,00
150 ppm 0 0 0 0,00
250 ppm 0 0 0 0,00
500 ppm 0 1 0 3,33
1000 ppm 1 1 0 6,66
1500 ppm 1 1 1 10
2000 ppm 2 1 1 13,33
30
BAB 5
SIMPULAN DAN SARAN
5.1 Simpulan
Kesimpulan penelitian ini adalah pada penghitungan nilai LC50 didapatkan
ekstrak n-heksan daun Garcinia benthami Pierre mempunyai nilai sebesar
3981 ppm menunjukkan bahwa ekstrak n-heksan daun Garcinia benthami
Pierre tidak mempunyai potensi toksisitas terhadap larva Artemia salina
Leach sehingga tidak dapat dijadikan sebagai obat antikanker.
5.2 Saran
Berdasarkan kesimpulan, penelitian selanjutnya disarankan untuk
dilakukan penelitian tentang potensi/manfaat ekstrak n-heksan daun
Garcinia benthami Pierre selain dari potenssi toksik atau antikanker.
Firman Allah SWT dalam surah Al-An’am (6) ayat 141 menyebutkan:
Artinya: “Dan Dia-lah yang menjadikan kebun-kebun yang
berjunjung dan yang tidak, berjunjung, pohon kurma, tanam-tanaman
yang bermacam-macam buahnya, zaitun dan delima yang serupa (bentuk
dan warnanya), tetapi tidak sama (rasannya) Makanlah dari buahnya
(yang bermacam-macam itu) bila dia berbuah, dan tunaikanlah haknya di
hari memetik hasilnya (dengan dikeluarkan zakatnnya); dan janganlah
kamu berlebih-lebihan. Sesungguhnya Allah tidak menyukai orang-orang
yang berlebihan." (Q.S Al An’am: 141).
31
DAFTAR PUSTAKA
1. Ramadhani, A. Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Daun Sukun (Artocarpus
altilis) Terhadap Larva Artemia Salina Leach Dengan Metode Brine Shrimp
Lethality Test (BSLT). Tesis. Semarang, 2009.
2. Amelia, P. Isolasi, Elusidasi, Struktur dan uji aktivitas antioksidan senyawa
kimia dari daun Garcinia Benthami. Tesis. Jakarta: Farmasi UI, 2011.
3. Mutia, D.Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Buah Anggur (Vitis vinifera)
Terhadap Larva Artemia salina Leach Dengan Metode Brine Shrimp Lethality
Test (BSLT). Tesis. Yogyakarta: Fakultas Kedokteran Universitas
Diponegoro, 2010.
4. Soemitrat, Juli. Toksikologi Lingkungan. Bandung: Gadjah Mada University
Press, 2005.
5. Goodman, L.S. and Gilman, A. The Pharmacological Basis of
Therapeutics.2nd
ed. N.Y.: The MacMilan Co., 1956.
6. Sax, N.I. et al. Dangerous Properties of Industrial Materials. N.Y.: Reinhold
Pub.Co.,1957.
7. Priyanto. Toksikologi Mekanisme, Terapi Antidotum, dan Penilaian Resiko.
Depok : Lembaga Studi dan Konsultasi Farmakologi Indonesia (LESKONFI),
2009.
8. Garcinia benthami Pierre, Fl. Forest. Conchinch.
http://www.asianplant.net/Clusiaceae/Garcinia_benthami.htm.
9. Sari, R. Garcinia (Clusiaceae) Di Kebun Raya Bogor : Fisiognomi,
Keragaman dan Potensi, 2000.
10. Rachman, I. Sumber Koleksi Herbarium Bogoriense. Bogor: Bidang Botani
Pusat Penelitian Biologi-LIPI, 2003.
11. Widjhati R, A., Supriyono dan Subintoro. Pengembangan Senyawa Bioaktif
dari Biota Laut. Forum Bioteknologi Kelautan dan Perikanan. Pusat Riset
Pengolahan Produk dan Sosial Ekonomi Kelautan dan Perikanan, Depertemen
Kelautan dan Perikanan, 2004.
32
12. Alam G. Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) Sebagai Bioassay Dalam Isolasi
Senyawa Bioaktif dari Bahan Alam. Majalah Farmasi dan Farmakologi.,
2002.
13. Meyer BN, Ferrigni NR, Putnam JE, Jacobsen LB, Nichols DE, McLaughlin
JL. Brine Shrimps: A Convenient General Bioassay for Active Plant
Constituent. Planta Medica, 1982.
14. Purwakusumah W. Artemia Salina (Brine Shrimp). [terhubung berkala].
http://www. O-fish.com/artemia/php, 2007.
15. Kurniawan, A. Aktivitas Antioksidan dan Potensi Hayati dari Kombinasi
Ekstrak Empat Jenis Tanaman Obat Indonesia. Bogor: Fakultas Matematika
dan Ilmu Pengetahuan Alam Institut Pertanian Bogor, 2011.
16. Setiarto HB. Deteksi dan uji toksisitas LC50 Senyawa Aflatoksin B1, B2, G1,
G2 Pada Kacang Tanah (Arachis hypogeal L) [skripsi]. Bogor: Fakultas
Matematika dan IPA, Institut Pertanian Bogor, 2009.
17. Moss B. Ecology of Fresh Waters. Norwich: Anglia, 1937
18. Panjaitan, RB. Uji toksisitas akut ekstrak kulit batang pulasari (Alyxiae
Cortex) dengan metode brine Shrimp Lethality test (BSLT). Universitas Sata
Dharma Fakultas Farmasi. Yogyakarta: 2011.
19. Croghan PC. The osmotic and ionic regulation of Artemia salina. Zoology
Journal, 1957.
20. Fenton J. Toxicology : A Case Oriental Approach. Boca Raton; ORC Pr,
2002.
21. Diah SH. Pembenihan udang galah Macrobrahium rosenbergi de Man
[laporan kerja praktik]. Bandung: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan
Alam, Institut Teknologi Bandung, 1991.
22. Lisdawati, V., Wiryowidagyo, S., Kardono S. Brine Shrimp Lethality Test
(BSLT) dari Berbagai Fraksi Ekstrak Daging Buah dan Kulit Biji Mahkota
Dewa (Phaleria macrocarpa).
23. Septyanti, C. Potensi Pelepah Temulawak (Curcuma xanthorriza) Sebagai
Antikanker dan Antioksidan. Bogor: Departemen Kimia Fakultas Matematika
dan Ilmu Pengetahuan Alam Institut Pertanian Bogor, 2012.
33
24. Rahmah, M. Aktivitas Sitotoksik Ekstrak Heksana, Diklorometana dan
Metanol Daun Keji Beling (Sericocalyx crispus. L) Terhadap Artemia salina
Leach.
25. Agung EN, et all. Anti-allergic Effects Of 1,5-(4’-HYDROXY-3’-
METHOXYPHENYL)-1,4-PENTADIENE-3-ONE On Mast Cell-Mediated
Allergy Model. Malaysian Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol. 7, No. 1,
51–71, 2009.
26. Noveri R, et all. Skrining Aktivitas Sitotoksik Ekstrak dan Fraksi Beberapa
Jenis Spon Laut Asal Pulau Mandeh Sumatera Barat.
34
LAMPIRAN
Lampiran 1
Gambar 6.1 Hasil determinasi
35
Lampiran 2
Gambar 6.2 Foto Depan Kaleng Telur Artemia salina Leach
Gambar 6.3 Foto Belakang Kaleng Telur Artemia salina Leach
36
Lampiran 3
Tabel 6.1 Perhitungan % kematian larva Artemia salina Leach, nilai probit, dan
LC50 daun Garcinia benthami Pierre
Hasil Uji Hasil Perhitungan
Konsentrasi
(ppm)
Log
konsentrasi
(X)
% mati Probit (Y) X2 Y
2 XY
0 0,00 0,00 0,00 0 0 0
5 0,69 3,33 3,1616 0,48 9,99 2,18
10 1 6,67 3,5015 1 12,26 3,50
20 1,30 10 3,7184 1,69 13,83 4,83
50 1,69 16,67 3,8877 2,86 15,11 6,57
100 2 20 4,1684 4 17,38 8,34
150 2,18 23,33 4,2710 4,75 18,24 9,31
250 2,39 26,67 4,3781 5,71 19,17 10,46
500 2,69 30 4,4756 7,24 20,03 12,04
1000 3 33,33 4,5684 9 20,87 13,70
1500 3,18 36,67 4,6602 10,11 21,72 14,82
∑ 20,12 40,79 46,84 168,6 85,75
Regresi Linier
y = a+bx
jadi,
y = a+ bx
Y=0,57X+2,91
5=0,57X+2,91
2,09=0,57X
X=3,6
Antilog 3,6= 3981
LC50 = 3981 ppm
37
Lampiran 3
Gambar 6.4 Grafik Regresi Linier ekstrak daun Garcinia benthami Pierre
y = 0,5814x + 2,9075 R² = 0,9694
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
4
4,5
5
0 1 2 3 4
Nila
i Pro
bit
Log Konsentrasi
Regresi Linier
Series1
Linear (Series1)
38
Pembuatan larutan ekstrak induk 20000 ppm :
=
= 20000 µg/ml = 20000 ppm
Pembuatan pengenceran dengan konsentrasi 15000 ppm
M1 V1 = M2 V2
20000 V1 = (15000) (25)
V1 = 18,75 ml
V1 = 187500 µl
Pembuatan pengenceran dengan konsentrasi 10000 ppm
M1 V1 = M2 V2
20000 V1 = (10000) (25)
V1 = 12,5 ml
V1 = 12500 µl
Pembuatan pengenceran dengan konsentrasi 5000 ppm
M1 V1 = M2 V2
20000 V1 = (5000) (25)
V1 = 6,25 ml
V1 = 6250 µl
Pembuatan pengenceran dengan konsentrasi 2500 ppm
M1 V1 = M2 V2
20000 V1 = (2500) (25)
V1 = 3,125 ml
V1 = 3125 µl
Pembuatan pengenceran dengan konsentrasi 1500 ppm
M1 V1 = M2 V2
20000 V1 = (1500) (25)
39
V1 = 1,875ml
V1 = 1875 µl
Pembuatan pengenceran dengan konsentrasi 1000 ppm
M1 V1 = M2 V2
20000 V1 = (1000) (25)
V1 = 1,25 ml
V1 = 1250 µl
Pembuatan pengenceran dengan konsentrasi 500 ppm
M1 V1 = M2 V2
20000 V1 = (500) (25)
V1 = 0,625 ml
V1 = 62,5 µl
Pembuatan pengenceran dengan konsentrasi 200 ppm
M1 V1 = M2 V2
20000 V1 = (200) (25)
V1 = 0,25 ml
V1 = 25 µl
Pembuatan pengenceran dengan konsentrasi 100 ppm
M1 V1 = M2 V2
20000 V1 = (100) (25)
V1 = 0,125 ml
V1 = 12,5 µl
Pembuatan pengenceran dengan konsentrasi 50 ppm
M1 V1 = M2 V2
20000 V1 = (50) (25)
V1 = 0, 0625 ml
V1 = 6,25 µl
40
Pembuatan larutan DMSO induk 20000 ppm :
= 0,02
Sehingga persen DMSO yang digunakan pada larutan induk 20000 ppm yaitu
0,02 x 100% = 2%, kadar DMSO dilakukan pengenceran sesuai dengan
pembuatan konsentrasi ekstrak.
Pembuatan pengenceran dengan konsentrasi 15000 ppm
M1 V1 = M2 V2
(18,75) (2%) = M2 (25)
M2 = 1,5%
Sehingga persen DMSO yang terdapat pada larutan 15000 yaitu 1,5%
Pembuatan pengenceran dengan konsentrasi 10000 ppm
M1 V1 = M2 V2
(12,5) (2%) = M2 (25)
M2 = 1%
Sehingga persen DMSO yang terdapat pada larutan 10000 yaitu 1%
Pembuatan pengenceran dengan konsentrasi 5000 ppm
M1 V1 = M2 V2
(6,25) (2%) = M2 (25)
M2 = 0,5%
Sehingga persen DMSO yang terdapat pada larutan 5000 yaitu 0,5%
Pembuatan pengenceran dengan konsentrasi 2500 ppm
M1 V1 = M2 V2
(3,125) (2%) = M2 (25)
M2 = 0,25%
Sehingga persen DMSO yang terdapat pada larutan 2500 yaitu 0,25%
41
Pembuatan pengenceran dengan konsentrasi 1500 ppm
M1 V1 = M2 V2
(1,875) (2%) = M2 (25)
M2 = 0,15%
Sehingga persen DMSO yang terdapat pada larutan 1500 yaitu 0,15%
Pembuatan pengenceran dengan konsentrasi 1000 ppm
M1 V1 = M2 V2
(1,25) (2%) = M2 (25)
M2 = 0,1%
Sehingga persen DMSO yang terdapat pada larutan 1000 yaitu 0,1%
Pembuatan pengenceran dengan konsentrasi 500 ppm
M1 V1 = M2 V2
(0,625) (2%) = M2 (25)
M2 = 0,05%
Sehingga persen DMSO yang terdapat pada larutan 500 yaitu 0,05%
Pembuatan pengenceran dengan konsentrasi 200 ppm
M1 V1 = M2 V2
(0,25) (2%) = M2 (25)
M2 = 0,02%
Sehingga persen DMSO yang terdapat pada larutan 200 yaitu 0,02%
Pembuatan pengenceran dengan konsentrasi 100 ppm
M1 V1 = M2 V2
(0,125) (2%) = M2 (25)
M2 = 0,01%
Sehingga persen DMSO yang terdapat pada larutan 100 yaitu 0,01%
42
Pembuatan Pengenceran dengan konsentrasi 50 ppm
M1 V1 = M2 V2
(0,0625) (2%) = M2 (25)
M2 = 0,005%
Sehingga persen DMSO yang terdapat pada larutan 50 yaitu 0,005
43
Lampiran 4
Tabel 6.2 Nilai Probit
44
45
46
47
Lampiran 5
Gambar Alat dan Bahan Penelitian
Gambar 6.5 Simplisia daun Garcinia Gambar 6.6 Proses destilasi pelarut
benthami Pierre n-heksan
Gambar 6.7 Proses maserasi Gambar 6.8 Penyaringan filtat n-heksan daun
Garcinia benthami Pierre
Gambar 6.9 Pembuatan ekstrak kental Gambar 6.10 Ekstrak kental daun
Garcinia benthami Pierre
48
Gambar 6.11 Pemberian air laut Gambar 6.12 Wadah penetasan
Artemia salina Leach
Gambar 6.13 Telur Artemia salina Leach Gambar 6.14 Ekstrak yang akan
yang akan ditetaskan diencerkan
Gambar 6.15 Tabung pengenceran
49
Lampiran 6
DAFTAR RIWAYAT HIDUP
Nama : Nur Rizqillah
Tempat, tanggal lahir : Jakarta, 7 Juli 1992
Alamat : Jln. Tebet Timur Dalam XI/76 Rt: 008 RW: 006
Jakarta Selatan
No. HP : +62 856 9343 5005
Email : [email protected]
Riwayat Pendidikan :
1. SDN Tebet Timur 20 Pagi (1998-2004)
2. SMPN 73 Jakarta (2004-2007)
3. SMAN 37 Jakarta (2007-2010)
4. PSPD FKIK UIN Jakarta (2010 - Sekarang)
50
Lampiran 7
51
52