UJI EFEK KOMBINASI ANTIBIOTIK CIPROFLOXACIN DENGAN … · 2018-05-18 · UJI EFEK KOMBINASI ANTIBIOTIK CIPROFLOXACIN DENGAN EKSTRAK ETANOL DAUN SIRIH (Piper betle L.) TERHADAP PERTUMBUHAN

UJI EFEK KOMBINASI ANTIBIOTIK CIPROFLOXACIN DENGAN

EKSTRAK ETANOL DAUN SIRIH (Piper betle L.) TERHADAP

PERTUMBUHAN Pseudomonas aeruginosa

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh:

Lintang Sari Hermadana

NIM: 148114060

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2018

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

i

UJI EFEK KOMBINASI ANTIBIOTIK CIPROFLOXACIN DENGAN

EKSTRAK ETANOL DAUN SIRIH (Piper betle L.) TERHADAP

PERTUMBUHAN Pseudomonas aeruginosa

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh:

Lintang Sari Hermadana

NIM: 148114060

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2018


ii


iii


iv

HALAMAN PERSEMBAHAN

Karya ini kupersembahkan untuk

Yesus Kristus, sumber hidup dan semangatku

Papa, mama, kakak, dan segenap keluarga tercinta sebagai rasa terima

kasihku atas dukungan dan penyertaan dalam doa

Sahabat- sahabat terkasih

Serta almamaterku


v


vi


vii

PRAKATA

Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yesus Kristus atas rahmat

dan penyertaan sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian skrispsi berjudul

“Uji Efek Kombinasi Antibiotik Ciprofloxacin Dengan Ekstrak Etanol Daun Sirih

(Piper Betle L.) Terhadap Pertumbuhan Pseudomonas aeruginosa” untuk

mendapatkan gelar sarjana (S. Farm.) ini dengan baik dan lancer.

Penulis menyadari selama penyusunan skripsi, penulis tidak lepas dari

bantuan, arahan, dan kerja sama berbagai pihak. Oleh karena itu, penulis

mengucapkan terima kasih kepada:

1. Ibu Aris Widayati, M. Si., Ph. D., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi

Universitas Sanata Dharma.

2. Ibu Dr. Yustina Sri Hartini, M. Si., Apt. selaku dosen pembimbing yang

selalu memberikan saran, arahan, dan evaluasi dari pembuatan proposal

hingga selesainya skripsi ini.

3. Ibu Dr. Erna Tri Wulandari, Apt. dan ibu Damiana Sapta Candrasari, S. Si.,

M.Sc. selaku dosen penguji yang selalu memberikan kritik dan saran kepada

penulis.

4. Laboran lantai satu sampai lantai empat, khususnya Pak Wagiran dan mbak

Ella yang telah membantu selama berlangsungnya penelitian.

5. Bapak Joko Tri Hatmono dan Ibu Tutik Iskanti yang memberikan dukungan

doa, semngat dan kasih saying serta selalu setia menemani dalam

penyusunan skripsi.

6. Angelica Rivera Santoso, Livia Setiastuti Hadiwinoto, Valentina Natalia

Dwi Kurniawati, dan Gusti Ayu Vivin Fitriani yang menjadi teman satu tim

skripsi yang selalu menjalani suka dan duka bersama- sama.

7. Prastika Prima dan Eva Novita atas dukungan semangat kepada penulis.


viii

8. Teman – teman FSM B 2014 Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma

atas doa, dukungan, dan kerja sama selama penyusunan penelitian skripsi.

9. Damianus Tri Eko Purwantoro atas dukungan doa dan semangat.

10. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu yang telah

memberikan doa, bantuan, dan dukungan, baik langsung maupun tidak

langsung kepada penulis selama penelitian dan penyusunan skripsi.

Penulis menyadari dalam penelitian dan penyusunan skripsi ini masih banyak

kekurangan, oleh karena itu peneliti memohon maaf apabila terdapat kesalahan.

Akhir kata, penulis berharap skripsi ini dapat bermanfaat dikemudian hari.

Yogyakarta, 4 Januari 2018

Penulis


ix

ABSTRAK

Latar belakang : Penyakit infeksi masih menjadi masalah kesehatan. Untuk

mengatasi penyakit infeksi yaitu menggunakan antibiotik. Semakin sering

menggunakan antibiotik yang tidak tepat dapat meningkatkan kejadian resistensi.

Pseudomonas aeruginosa merupakan salah satu bakteri penyebab penyakit infeksi.

Piper betle L. merupakan tanaman yang diketahui memiliki aktivitas antibakteri

terhadap Pseudomonas aeruginosa. Disisi lain Pseudomonas aeruginosa telah

dilaporakan mengalami resistensi terhadap antibiotik ciprofloxacin. Oleh karena itu

dilakukan penelitian efek kombinasi antibiotik ciprofloxacin dan ekstrak etanol

daun sirih terhadap pertumbuhan bakteri Pseudomonas aeruginosa.

Metode: Uji aktivitas antibakteri menggunakan metode sumuran dan checkboard.

Data diameter zona hambat dan optical density yang diukur kemudian diuji secara

statistik menggunakan uji Kruskal- Wallis dan Post- Hoc Dunn.

Hasil: Zona hambat yang didapat menunjukan terdapat perbedaan aktivitas

antibakteri antara perlakuan tunggal dan kombinasi. Analisis statistik menunjukan

terdapat perbedaan bermakna pada tiap perlakuan. Hasil dari FIC index menunjukan

efek indifferent.

Kesimpulan: Terdapat perbedaan aktivitas antar perlakuan antibakteri dan

kombinasi ektrak dan antibiotik menunjukan efek indifferent.

Kata kunci: ciprofloxacin, kombinasi, zona hambat, FIC index, Pseudomonas

aeruginosa


x

ABSTRACT

Background: Infection disease become one of the health problems. They use

antibiotic to resolve that problem. The more often the use of inappropriate

antibiotics can increase the incidence of resistance. Pseudomonas aeruginosa is one

of the bacteria that cause infection disease. Piper betle L. is a plant known to have

antibacterial activity against Pseudomonas aeruginosa. Besides, Pseudomonas

aeruginosa has been reported to have resistance to ciprofloxacin antibiotics.

Therefore, a researcher does research related with the effect of combination

ciprofloxacin antibiotic with ethanol extract of Piper betle L. against Pseudomonas

aeruginosa.

Method: Determination of antibacterial activity using well diffusion method and

checkboard methods. The inhibitory zone and optical density data were tested

statistically using Kruskal- Wallis and Post-Hoc Dunn tests.

Results: The diameter of zone inhibition showed a difference in antibacterial

activity between single and combination treatments. Statistical analysis showed that

there were significant differences in each treatment. The FIC index result showed

indifferent effects.

Conclusions: There was a difference in activity between antibacterial treatments

and the combination of extract and antibiotic showed indifferent effects.

Keywords: ciprofloxacin, combination, diameter of zone inhibition, FIC index,

Pseudomonas aeruginosa.


xi

DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN JUDUL .................................................................................... i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ............................................. ii

HALAMAN PENGESAHAN ....................................................................... iii

HALAMAN PERSEMBAHAN .................................................................... iv

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ........................................................ v

LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH

UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS ...................................................... vi

PRAKATA ................................................................................................... vii

ABSTRAK ................................................................................................... ix

ABSTRACT ................................................................................................... x

DARTAR ISI ................................................................................................ xi

DAFTAR TABEL ........................................................................................ xii

DAFTAR GAMBAR .................................................................................... xiii

DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................. xiv

PENDAHULUAN ........................................................................................ 1

METODE PENELITIAN .............................................................................. 2

HASIL DAN PEMBAHASAN ..................................................................... 8

KESIMPULAN DAN SARAN ..................................................................... 15

DAFTAR PUSTAKA ................................................................................... 16

LAMPIRAN ................................................................................................. 19

BIOGRAFI PENULIS .................................................................................. 26


xii

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel I. Hasil pengukuran dalam zona hambat .............................................. 10

Tabel II. Hasil pengukuran nilai OD dengan metode checkboard .................. 13


xiii

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 1. Rancangan metode checkboard .................................................... 6

Gambar 2. Kontrol Media dan Kontrol Pertumbuhan .................................... 9

Gambar 3. Hasil uji aktivitas antibakteri dengan metode sumuran ................. 10


xiv

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

Lampiran 1. Daun Sirih ................................................................................. 19

Lampiran 2. Surat Determinasi Tanaman (Daun Sirih Hijau)......................... 19

Lampiran 2. Sertifikat Hasil Uji Pseudomonas aeruginosa ........................... 20

Lampiran 3. Bukti Pengukuran dengan Microplate reader ............................ 21

Lampiran 4. Hasil pengukuran dengan Microplate reader ............................. 22

Lampiran 5. Hasil perhitungan statistik uji aktivitas antibakteri dengan metode

sumuran.................................................................................... 23


checkboard ............................................................................... 24


1

PENDAHULUAN

Permasalahan infeksi nosokomial atau juga dikenal dengan nama Hospital

Acquired Infection (HAI) yaitu infeksi yang terjadi di rumah sakit dan menyerang

penderita – penderita yang sedang dalam proses perawatan. Survei prevalensi yang

dilakukan oleh World Health Organization (WHO) di 55 rumah sakit dari 14 negara

yang mewakili 4 wilayah kerja WHO (Eropa, Mediterania, Asia Tenggara dan

Pasifik Barat) menunjukkan rata-rata 8,7% dari pasien yang dirawat di rumah sakit

mengalami infeksi nosokomial dan frekuensi tertinggi infeksi nosokomial

dilaporkan dari rumah sakit di Asia Tenggara dengan prevalensi 11% (Ducel et al.

2002).

Obat untuk mengatasi infeksi bakteri yaitu antibiotik. Dengan berjalannya

waktu, terjadi perubahan pada praktik perawatan kesehatan. Penderita yang dirawat

di rumah sakit dalam jangka panjang semakin banyak sehingga penggunaan

antibiotik semakin bertambah dan penggunaan yang tidak tepat dapat meningkatkan

resistensi terhadap antibiotik (Nurmala et al. 2015).

Pseudomonas aeruginosa merupakan salah satu bakteri yang

menyebabkan infeksi nosokomial (Vahdani et al. 2012). Multi drug resistant P.

aeruginosa (MDRPA) merupakan kondisi dimana suatu bakteri mengalami

resistensi terhadap tiga atau lebih kelas antibiotik. Di Indonesia, hasil penelitian

mengenai MDRPA, yang dilakukan oleh Rustini et al, melaporkan bahwa P.

aeruginosa mengalami resistensi terhadap beberapa antibiotik, seperti Ceftazidime

(25,32%), Cefotaxine (37,97%), Ceftriaxone (37,97%), Ciprofloxacin (27,85),

Gentamicin (26,58%), dan lain-lain. Ciprofloxacin adalah antibiotik yang termasuk

dalam golongan fluoroquinolon generasi kedua yang paling aktif terhadap P.

aeruginosa (Louie 1994).

Tingkat resistensi bakteri pada antibiotik tidak seimbang dengan

penemuan antibiotik baru. Di sisi lain terdapat potensi pada banyak tanaman untuk

pengobatan penyakit infeksi. Daun sirih secara tradisional dikenal bermanfaat

untuk pengobatan berbagai penyakit seperti bau mulut, bisul dan abses,

konjungtivitis, sembelit, sakit kepala, gatal, dan lain-lain (Agarwal et al. 2012). Di


2

sisi lain sirih hijau memiliki khasiat yang beragam, salah satunya sebagai

antibakteri. Sirih menunjukkan aktivitas antimikroba terhadap Streptococcus

pyrogen, Staphylococcus aureus, Proteus vulgaris, E.coli, Pseudomonas

aeruginosa, dan lain-lain (Pradhan et al. 2013).

Salah satu pengatasan resistensi bakteri terhadap antibiotik adalah dengan

mengkombinasikan antibiotik dengan ekstrak tanaman. Suatu penelitian

menyatakan bahwa suatu tanaman apabila dikombinasikan dengan antibiotik dapat

meningkatkan aktivitas antibakteri dan efek sinergis (Aiyegoro and Okoh 2009).

Peneliti akan melakukan penelitian mengenai uji efek kombinasi antibiotik

ciprofloxacin dengan ekstrak etanol daun sirih terdapat Pseudomonas auruginosa.

Pada penelitian ini digunakan pelarut etanol 70%, karena ekstrak etanol daun sirih

70% dapat menunjukan aktivitas antimikroba (Foo et al. 2015) . Sehingga dapat

diketahui aktivitas antibakteri dan efek kombinasi antibiotik ciprofloxacin dan

ekstrak etanol daun sirih.

METODE PENELITIAN

Jenis dan Rancangan Penelitian

Jenis penelitian ini termasuk jenis penelitian eksperimental murni dengan

rancangan eksperimental sederhana atau post only control grup design.

Bahan dan Alat Penelitian

Bahan – bahan yang digunakan pada penelitian ini yaitu bakteri uji

Pseudomonas aeruginosa dalam bentuk kultur yang didapat dari Laboratorium

Kesehatan Yogyakarta, daun sirih yang diperoleh dari daerah Sleman, Daerah

Istimewa Yogyakarta, media Nutrient Agar (Oxoid) dan Nutrien Broth (Oxoid)

yang diperoleh dari Laboratorium Mikrobiologi Universitas Sanata Dharma,

pelarut ekstrak etanol 70%, dimetilsulfoksida (DMSO) 1% (Merck), aquadest,

tablet antibiotik ciprofloxacin 500 mg, Buffer Pepton Water (Oxoid),


3

Alat yang digunakan yaitu oven (Memmert), petri, pelubang sumuran,

jarum ose, shaker ( Optimal), blender, kertas saring, timbangan analitik (OHAUS),

rotary evaporation (Buchi), IWAKI 96 well plates, mikropipet, alat- alat gelas

(beker, tabung reaksi, pipet volum, erlenmeyer, cawan petri, labu takar (Iwaki

Pyrex)), yellow tip steril, pengayak, cawan petri, bunsen, rak tabung reaksi,

autoclave (ALP), vortex, jarum ose, inkubator (Hemmert), Biological Safety

Cabinet class II type A2 (OHAUS), corong Buchner, alat destilasi, dan

nephelometer (PhoenixSpec).

Determinasi tanaman

Daun sirih yang digunakan diperoleh dari daerah Sleman, Daerah Istimewa

Yogyakarta. Determinasi daun sirih dilakukan di bagian Departemen Biologi

Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada.

Pembuatan simplisia daun sirih

Dipilih daun sirih yang segar, tidak berlubang, dan berwarna hijau muda

(Lampiran 1). Kemudian bahan baku dipisahkan dari bahan pengganggu (bagian

tanaman yang tidak dibutuhkan) dan pengotor. Daun sirih dicuci dengan air

mengalir sambil dibersihkan. Hal ini diulang sebanyak tiga kali. Daun sirih

dipotong melintang dengan ukuran sedang hingga kecil. Setelah dipotong, daun

sirih yang masih basah dikeringkan dalam oven dengan suhu 40oC hingga kering.

Kemudian daun sirih diserbuk dengan menggunakan blender yang kemudian diayak

menggunakan pengayak. Serbuk disimpan pada suhu rungan dan terlindungi dari

sinar matahari.

Penetapan kadar air simplisia kering daun sirih

Ekstrak ditimbang sebanyak 10 gram, dimasukkan ke dalam labu alas bulat.

Ditambahkan toluene jenuh air sebanyak 200mL. Kemudian dilakukan preparsi alat

dan labu dipanaskan selama 15menit. ketika toluene mendidih, penyuling diatur

dengan kecepatan kurang dari 2 tetes per detik, hingga sebagian air tersuling, lalu

kecepatan penyulingan dinaikkan hingga 4 tetes per detik dan penyulingan


4

dilanjutkan selama 5menit. Kemudian penampung hasil penyulingan didinginkan

hingga air dan toluene terpisah sempurna. Sehingga volume air dapat dibaca dan

kadar air dapat dihitung dalam %v/b.

Pembuatan ekstrak etanol daun sirih

Pembuatan ekstrak etanol daun sirih dilakukan menggunakan metode

maserasi. Serbuk simplisia daun sirih direndam sebanyak 10 gram pada 75 mL

pelarut etanol mengunakan erlenmeyer (Badan Pengawas Obat dan Makanan RI

2010). Maserasi dilakuakan dengan menggunakan shaker dan terlindung dari sinar

matahari. Hasil maserat yang diperoleh disaring menggunakan corong Buchner

yang dilapisi ketas saring dengan bantuan pompa vakum. Serbuk hasil penyarian

dimaserasi dengan pelarut baru sebanyak 25 mL selama 24 jam.

Hasil maserat pertama dan kedua kemudian diuapkan menggunakan rotary

evaporator pada suhu 70oC untuk menguapkan pelarut pada ekstrak. Ekstrak

diletakkan pada cawan petri dan diuapkan kembali untuk menghilangkan pelarut

yang masih terdapat dalam ekstrak. Penguapan dilakukan menggunakan waterbath

pada suhu 50-60oC. Ekstrak didapat merupakan eksrak kental dengan bobot tetep

sesuai dengan persyaratan yang telah ditetapkan.

Pembuatan seri konsentrasi ekstrak etanol daun sirih

Larutan stok dibuat dengan melarutkan 6000mg ekstrak kental ke dalam

10mL DMSO 1%, sehingga diperoleh konsentrasi larutan stok 600 mg/mL. Setelah

didapatkan stok 600 mg/mL, dilakukan pengenceran larutan hingga didapatkan

larutan 300 mg/mL dan 150 mg/mL.

Pembuaatan larutan seri antibiotik ciprofloxacin

Konsentrasi larutan stok ciprofloxacin adalah 2 mg/mL, dengan cara tablet

antibiotik ciprofloxacin 500mg digerus hingga halus kemudian dilarutkan dalam

10mL aquadest steril pada labu takar 10mL. Sehingga didapatkan konsentrasi

50mg/mL. Dari larutan 50mg/mL dilakukan pengenceran sehingga didapatkan

konsentrasi 0,5 μg/mL, 1 μg/mL, dan 2 μg/mL.


5

Penyiapan bakteri uji

Penyiapan bakteri uji berdasarkan pedoman Clinical and Laboratory

Standards Institute (2016). Kultur bakteri Pseudomonas aeruginosa diambil 1-2

ose ke Nutrient Broth (NB) steril kemudian diinkubasi pada suhu 37oC selama 24

jam untuk mendapatkan suspensi bakteri. Suspensi bakteri kemudian disetarakan

kekeruhannya dengan Mc Farland 0,5 menggunakan nefelometer.

Uji aktivitas antibakteri menggunakan metode sumuran

Media NA yang masih dalam bentuk cair diinokulasi dengan suspensi

bakteri uji secara pour plate, dituangkan dalam petri kemudian didiamkan hingga

memadat. Dengan menggunakan pelubang sumuran, media yang telah memadat

tersebut dibuat lubang- lubang sumuran. Jumlah lubang sumuran yang dibuat yaitu

sebanyak 6 lubang untuk kontrol negatif, antibiotik tunggal, ekstrak tunggal, dan

kombinasi ekstrak dan antibiotik.

Pada lubang-lubang sumuran diberikan antibiotik ciprofloxacin 0,5 μl/mL

dan ekstrak etanol daun sirih 150 mg/mL masing-masing 40μl. Kemudian diberikan

kombinasi ekstrak etanol daun sirih 150 mg/mL dan antibiotik ciprofloxacin 0,5

μl/mL, kombinasi ekstrak etanol daun sirih 300 mg/mL dan antibiotik ciprofloxacin

0,5 μl/mL, dan kombinasi ekstrak etanol daun sirih 600 mg/mL dan antibiotik

ciprofloxacin 0,5 μl/mL masing- masing dengan perbandingan 1:1 (20 μl:20 μl).

Kontrol negatif yaitu aquadest steril, Buffered Peptone Water (BPW), dan DMSO

1% dalam satu sumuran masing- masing 10 μl.

Dilakukan inkubasi selama 24 jam pada suhu 37oC, setelah diinkubasi

diamati hasilnya dan diukur zona hambat yang terbentuk. Zona hambat diukur

menggunakan penggaris satuan milimeter (mm) dengan mengukur diameter zona

hambat vertikal dan horizontal yang dikurangi diameter lubang sumuran dan dirata-

rata.

Uji efek kombinasi ekstrak etanol daun sirih dengan antibiotik ciprofloxacin


6

Pada pengukuran kombinasi ekstrak etanol daun sirih menggunakan metode

checkboard dengan modifikasi yang dilakukaan pada 96-well plate. Seri

pengenceran dibuat dengan two-fold dilution (pengenceran 1:1). Dimana KHM

ekstrak etanol yang digunakan yaitu 150 mg/mL dan KHM antibiotik ciprofloxacin

yaitu 2 µg/mL. Tiap perlakuan direplikasi 3 kali.

Gambar 1. Rancangan metode checkboard

keterangan:

Kuning tua : Blank

Hijau : Ekstrak etanol daun sirih tunggal (mg/mL)

Merah : Antibiotik ciprofloxacin tunggal (μg/mL)

Kuning muda : Kombinasi ekstrak etanol daun sirih dan antibiotik

ciprofloxacin

Biru muda : Kontrol negatif

Biru tua : Kontrol pertumbuhan

Pink : Blank ekstrak etanol daun sirih hijau dengan volume 25 μl

Ungu : Blank ekstrak etanol daun sirih hijau dengan volume 50 μl

Well diisi dengan 50 μl media NB, 50 μl bakteri uji Pseudomonas

aeruginosa, dan 50 μl antibakteri yang akan diuji. Untuk kontrol pertumbuhan yaitu


7

50 μl media NB dan 50 μl bakteri uji. Kontrol negatif yaitu 50 μl media NB, 50 μl

bakteri uji, dan 15 μl DMSO 1%, 15 μl aquadest steril, dan 15 μl BPW. Setelah

seluruh well terisi dilakukan inkubasi selama 24 jam pada suhu 37oC. Kemudian

dilakukan pengukuran optical density menggunakan elisa reader pada panjang

gelombang 595nm.

Perhitungan FIC

KHM merupakan konsentrasi terendah yang dapat menghambat

pertumbuhan bakteri yang diukur berdasarkan Optical Density (OD) pada panjang

gelombang 595 nm. Kemudian nilai OD sesudah inkubasi dibandingkan dengan

kontrol pertumbuhan. KHM merupakan OD dengan nilai dibawah kontrol

pertumbuhan dan selisih nilai OD dengan kontrol pertumbuhan terkecil.

Setelah didapatkan nilai KHM, maka dapat dilakukan perhitungan nilai FIC.

Perhitungan nilai FIC index digunakan untuk melihat efek yang terjadi dalam

kombinasi. Perhitungan FIC index menggunakan rumus:

FIC 𝑖𝑛𝑑𝑒𝑥 =KHM Ekstrak dalam kombinasi

KHM Ekstrak tunggal+

KHM 𝑐𝑖𝑝𝑟𝑜𝑓𝑙𝑜𝑥𝑎𝑐𝑖𝑛 dalam kombinasi

KHM 𝑐𝑖𝑝𝑟𝑜𝑓𝑙𝑜𝑥𝑎𝑐𝑖𝑛 tunggal

apabila:

Sinergis = nilai FIC index ≤ 0.5;

Indifferent = 0.5–4 ;

Antagonis = > 4

(Eliopoulos and Eliopoulos 1988, Blesson et al. 2015).

Teknik Analisis Data Penelitian

Analisis data pengukuran efek pada kombinasi ekstrak etanol daun sirih

dengan ciprofloxacin dilakukan 3 kali replikasi dan menghitung mean dan Standar

Deviasi (SD). Apabila data yang didapat homogen dan normal makan dilakukan uji

One Way ANOVA, tetapi apabila tidak homogen dan normal menggunakan Kruskal

Wallis pada nilai KHM ekstrak etanol daun sirih, KHM antibiotik ciprofloxacin,

dan KHM kombinasi ekstrak etanol daun sirih dan ciprofloxacin untuk mengetahui


8

perbedaan dari berbagai perlakuan. Apabila terdapat perbedaan, maka dilakukan uji

Post Hoc atau uji Dunn pada taraf kepercayaan 95%.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Daun sirih yang digunakan dalam penelitian ini didapatkan dari daerah

Sleman, Daerah Istimewa Yogyakarta pada bulan Juli 2017. Pembuktian kebenaran

tanaman yang digunakan dengan dilakukan determinasi. Hasil determinasi

menunjukan bahwa tanaman yang diteliti adalah daun sirih dengan nama latin Piper

betle L. (Lampiran 2).

Daun sirih yang telah terkumpul kemudian dilakukan pemisahan dengan

pengotor yang terdapat dalam daun, dicuci dengan air mengalir, dikeringkan,

kemudian dilakukan penyerbukan sehingga didapatkan simplisia daun sirih. Setelah

itu dilakukan penentuan kadar air. Penentuan kadar air dilakukan dengan metode

destilasi toluen (Gunanti et al. 2016). Tujuan dari penetapan kadar ini adalah untuk

mengetahui kadar air yang larut dalam pelarut yaitu toluen (Kartikasari et al. 2008).

Kadar air yang baik adalah kurang dari 10% (Dirjen POM, 1995). Kadar air yang

didapat pada penelitian ini yaitu 2,0037%, di mana telah sesuai dengan kadar air

yang baik.

Serbuk simpilisia daun sirih kemudian diekstrak menggunakan metode

maserasi. Maserasi yaitu seluruh serbuk kasar dimasukkan dalam wadah tertutup

dengan pelarut dan dibiarkan dalam pada suhu kamar dalam waktu kurang lebih 3

hari (Handa et al. 2008). Dalam penelitian ini menggunakan pelarut etanol 70%, di

mana etanol bersifat semipolar hingga polar, sehingga diharapkan etanol dapat

menarik senyawa senyawa polar maupun nonpolar yang terkandung dalam serbuk

simplisia dan dapat terlarut secara optimal (Kumalasari and Sulistyani 2011).

Ekstrak yang didapat kemudian disaring menggunakan corong Buchner

dan serbuk hasil penyaringan dilakukan remaserasi menggunakan pelarut etanol

70%. Ekstrak yang didapat merupakan eksrak kental dengan bobot tetap. Bobot

tetap adalah selisih 2 kali penimbangan berturut-turut tidak lebih dari 0,5mg

(Depkes RI, 1986). Ekstrak kental yang diperoleh yaitu 17,2266 gram. Setelah

didapatkan ekstrak kental dapat dihitung rendemennya. Penetapan rendemen


9

bertujuan mengetahui jumlah kira- kira simplisia yang dibutuhkan untuk pembuatan

sejumlah tertentu ekstrak kental dan efektifitas pelarut yang digunakan

mengekstrak senyawa kimia yang terkandung dalam daun sirih. Hasil rendemen

yang tinggi menunjukkan bahwa senyawa- senyawa kimia yang dapat tersari dalam

ekstrak cukup besar (Kartikasari et al. 2008, Maulida and Guntarti 2015). Pada

penelitian ini rendemen yang diperoleh yaitu 28,77 %.

Uji aktivitas antibakteri menggunakan metode difusi sumuran digunakan

sebagai uji pendahuluan untuk mengetahui apakah ekstrak etanol daun sirih

memiliki kemampuan sebagai antibakteri terhadap Pseudomonas aeruginosa.

Media yang digunakan dalam penelitian ini adalah media NA. Kontrol media dibuat

untuk memastikan bahwa pembuatan media NA aseptis dan pembuatan kontrol

pertumbuhan digunakan untuk memastikan bakwa bakteri Pseudomonas

aeruginosa dapat tumbuh dengan baik pada media NA. Kontrol negatif yang

digunakan yaitu DMSO 1%, aquadest steril, dan BPW. DMSO 1% digunakan untuk

melarutkan ekstrak etanol daun sirih, aquadest steril untuk melarutkan antibiotik

ciprofloxacin, dan BPW digunakan untuk mengencerkan bakteri. Kontrol negatif

digunakan untuk mengetahui apakah pelarut yang digunakan memiliki aktivitas

antibakteri atau tidak.

(a) (b)

Gambar 2. (a) Kontrol Media dan (b) Kontrol Pertumbuhan

Berdasarkan literatur konsentrasi KHM ekstrak etanol yaitu 50 mg/mL

(Chanudom et al. 2014) dan antibiotik ciprofloxacin yaitu 4 µg/mL (The Clinical


10

and Laboratory Standards Institute 2016). Tetapi dari hasil uji pendahuluan ekstrak

tanol daun sirih pada konsentarsi 50 mg/mL tidak menunjukan aktivitas antibakteri,

olehkarena itu konsentasi ekstrak etanol dinaikkan hingga konsentrasi 150 mg/mL.

Antibiotik ciprofloxacin pada konsentrasi 4 µg/mL menunjukan hasil overlapping,

sehingga konsentrasi ekstrak etanol diturunkan hingga konsentrasi 0,5µg/mL.

Dalam penelitian ini dilakukan replikasi sebanyak tiga kali. Dari hasil

pengamatan didapatkan zona hambat yang diukur menggunakan penggaris dengan

satuan millimeter (mm). Pengukuran dilakukan secara vertikal dan horizontal,

kemudian dari dua kali pengukuran dirata- rata dan selanjutnya dikurangi dengan

diameter lubang sumuran. Hasil pengukuran zona hambat ekstrak etanol daun sirih

terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa dapat dilihat pada Gambar 2.

Gambar 3. Hasil uji aktivitas antibakteri dengan metode sumuran

Keterangan:

A = antibiotik ciprofloxacin tunggal 0,5µg/mL

B = ekstrak etanol daun sirih 150 mg/mL

C = kombinasi ekstrak etanol daun sirih 150mg/mL

dan antibiotik ciprofloxacin 0,5 µg/mL

D = kombinasi ekstrak etanol daun sirih 300mg/mL


E = kombinasi ekstrak etanol daun sirih 600mg/mL


(-) = DMSO 1%, aquadest steril, dan BPW


11

Hasil pengukuran zona hambat uji antibakteri kombinasi ekstrak etanol

daun sirih dan antibiotik ciprofloxacin diringkas dalam Tabel I.

Tabel I. Hasil pengukuran dalam zona hambat

Perlakuan Keterangan Mean (mm) ± SD

A antibiotik ciprofloxacin tunggal 0,5µg/mL 9,8 ± 1,4

B ekstrak etanol daun sirih 150 mg/mL 8,6 ± 1,8

C kombinasi ekstrak etanol daun sirih 150mg/mL


8,3 ± 1,7

D kombinasi ekstrak etanol daun sirih 300mg/mL


9,1 ± 1,0

E kombinasi ekstrak etanol daun sirih 600mg/mL


5,5 ± 1,0

(-) DMSO 1%, aquadest steril, dan BPW 0

Keterangan: diameter sumuran = 9,0 mm, n= 3

Berdasarkan kategori zona hambat bakteri menurut Davis Stout (Rita

2010), pada penelitian ini zona hambat yang didapat termasuk kategori sedang

untuk semua konsentrasi. Kontrol negatif tidak menunjukkan adanya zona hambat,

hal ini menunjukkan bahwa DMSO 1%, aquadest steril, dan BPW yang digunakan

tidak berpengaruh pada uji antibakteri atau tidak memiliki aktivitas antibakteri.

Antibiotik tunggal dan ekstrak etanol daun sirih tunggal memiliki aktivitas terhadap

Pseudomonas aeruginosa dengan terdapatnya zona hambat. Antibiotik memiliki

zona hambat paling besar dengan yang lain. Hal ini menunjukkan bahwa antibiotik

ciprofloxacin paling poten terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa.

Data zona hambat yang didapat selanjutnya dilakukan analisis hasil secara

statistik (Lampiran 6). Data diuji normalitas distribusi menggunakan uji Shapiro

Wilk, karena jumlah sampel tiap kelompok hanya berjumlah tiga dan didapatkan

data tidak terdistribusi normal karena terdapat data dengan p < 0,05 yaitu antibiotik.

Kemudian dilakukan uji Levene Test untuk melihat homogenitas varian data. Hasil

uji ini didapatkan nilai p = 0,1067 (p > 0,05), sehingga menunjukkan data homogen.

Hasil uji menunjukkan data homogen, tetapi tidak terdistribusi normal. Oleh karena,


12

itu dilanjutkan dengan uji non- parametrik yaitu Kruskal- Wallis. Uji ini dilakukan

untuk mengetahui apakah ada perbedaan bermakna antar kelompok yang

selanjutnya dilanjutkan dengan uji Post- Hoc Dunn untuk melihat letak

perbedaannya. Hasil uji Kruskal- Wallis didapatkan p – value = 0,03614 (p < 0,05),

sehingga terdapat berbedaan bermakna dalam perlakuan yang dilakukan. Kemudian

dilanjukan dengan uji Post- Hoc Dunn dan didapatkan hasil bahwa terdapat

perbedaan bermakna antara antibiotik dengan kontrol negatif, ekstrak etanol daun

sirih dengan kontrol negatif, kombinasi ekstrak etanol daun sirih 150mg/mL dan

antibiotik ciprofloxacin 0,5 µg/mL dengan kontrol negatif, dan kombinasi ekstrak

etanol daun sirih 300mg/mL dan antibiotik ciprofloxacin 0,5 µg/mL dengan kontrol

negatif. Tetapi tidak terdapat perbedaan bermakna antara antibiotik dan ekstrak,

maupun ketika ekstrak dan antibiotik dikombinasikan. Hal ini menunjukaan tidak

terjadi efek sinergis. Berdasarkan zona hambat yang didapat, ketika dilakukan

kombinasi antara ekstrak etanol daun sirih dan antibiotik ciprofloxacin terdapat

penurunan aktivitas antibakteri, di mana zona hambat setelah dikombinasikan lebih

kecil daripada zona hambat antibiotik tunggal dan ekstrak tunggal.

Daun sirih mengandung tanin, antrakuinon, flavonoid, alkaloid, terpenoid,

saponin, glikosida, flobatanin, hidroksialkavikol asetat, isoeugeol, anetole, asam

stearat, metil eugenol, carvacrol, chavicol, dan lain- lain. Minyak esensial daun sirih

memiliki aktivitas antimikroba yang signifikan terhadap mikroorganisme, seperti

Pseudomonas aeruginosa (Taukoorah et al. 2016). Mekanisme minyak atsiri

sebagai antibakteria yaitu merusak dinding sel bakteri (Tiwari et al. 2011). Efek

aktivitas antibakteri minyak esensial dapat menghambat pertumbuhan bakteri

(bakteriostatik) atau menghancurkan sel bakteri (bakterisida) (Swamy et al. 2016).

Penelitian saat ini mengungkapkan bahwa daun sirih hanya menunjukkan efek

bakteriostatik (Taukoorah et al. 2016). Disisi lain antibiotik ciprofloxacin bersifat

bakterisida. Terdapat penelitian yang menyatakan bahwa apabila antibakteri

bersifat bakteriostatik dan bakterisida dikombinasikan menunjukkan efek antagonis

(Ocampo et al. 2014).

Kombinasi agen antimikroba bekerja pada lokasi bakteri yang berbeda

yang dapat menyebabkan efek sinergis (Basri et al. 2014). Ciprofloxacin bekerja


13

dengan menghambat DNA topoisomerase II, di mana flavonoid memiliki

mekanisme kerja yang sama dengan ciprofloxacin. Target flavonoid yaitu DNA

topoisomerase II (Shuchi et al. 2016). Oleh karena itu, ini dapat menjadi salah satu

faktor terjadinya efek tidak sinergis ketika dikombinasikan.

Uji aktivitas antibakteri juga dilakukan menggunakan metode checkboard.

Pada uji aktivitas antibakteri ini menggunakan media NB, dimana berdasarkan

orientasi bakteri dapat tumbuh dengan baik pada media NB. Uji kombinasi yag

dilakukan menggunakan perbandingan ekstrak etanol daun sirih dan antibiotik

ciprofloxacin 1:1. Seri pengenceran dalam penelitian ini dilakukan diluar untuk

menghindari terjadinya kesalahan dalam pengenceran. Tiap well diisi dengan 50µl

NB, 50µl bakteri Pseudomonas aeruginosa, dan 50µl ekstrak etanol daun sirih/

antibiotik ciprofloxacin atau kombinasi ekstrak etanol daun sirih dengan antibiotik

ciprofloxacin masing- masing 25µl. Kemudian setelah dilakukan inkubasi selama

24 jam pada suhu 37oC. Kemudian dilakukan pengukuran optical density

menggunakan microplate-reader pada panjang gelompang 595nm.

Setelah didapatkan nilai OD, maka dapat dihitung nilai FIC index dan

didapatkan nilai FIC index = 3 dan berdasarkan nilai FIC index kombinasi ektrak

etanol daun sirih dan antibiotik ciprofloxacin terhadap Pseudomonas aeruginosa

menunjukan efek indifferent. Indifferent adalah efek kombinasi ektrak etanol daun

sirih dan antibiotik ciprofloxacin memiliki efek yang sama dengan antibakteri

tunggal (Blesson et al. 2015).

Tabel II. Hasil pengukuran nilai OD dengan metode checkboard

Ekstrak Etanol Daun Sirih (mg/mL)

150 300 600

0,572* 0,104 0,742 0,491**

Antibiotik

Ciprofloxacin

(µg/mL)

0,5 0,021** 0,451 0,858 0,580

1 0,017 0,450 0,763 0,543***

2 0,012 0,443 0,796 0,586

Keterangan: n = 3, nilai OD sesudah dikurangi blank; *kontrol pertumbuahan

sebagai pembanding; ** KHM tunggal, *** KHM kombinasi.


14

Nilai OD yang didapat naik turun. Padahal semakin tinggi konsentrasi

kandungan fitokimia yang terdapat pada ekstrak semakin banyak dan aktivitas

antibakteri semakin meningkat. Meningkatnya aktivitas antibakteri dapat dilihat

dengan menurunnya jumlah bakteri yang ditunjukkan dengan nilai OD yang

semakin kecil. Hal ini mungkin dapat disebabkan karena adanya serapan dari

larutan ekstrak sehingga aktivitas antibakteri tidak dapat ditentukan apakah terdapat

meningkatan aktivitas antibakteri atau tidak.

Data hasil dari metode checkboard dilakukan uji statistik (Lampiran 7).

Uji normalitas dilakukan menggunakan Shapiro- Wilk dan didapatkan data yang

didapat tidak normal karena terdapat nilai yang dibawah 0,05 (p < 0,05). Kemudian

dilakukan uji Levene untuk melihat homogenitas data dan didapatkan hasil p =

0,020 (p < 0,05). Data yang didapat tidak homogen. Karena data yang didapat tidak

normal dan tidak homogen, maka dilanjutakan dengan uji non- parametrik yaitu

Kruskal- Wallis. Dari uji Kruskal- Wallis didapatkan nilai p– value = 0,013 (p <

0,05), sehingga terdapat perbedaan bermakna antar kelompok. Dilanjutkan dengan

uji Post- Hoc Dunn untuk melihat letak perbedaannya.

Berdasarkan uji uji Post- Hoc Dunn terdapat perbedaan bermakna antara

MIC antibiotik ciprofloxacin dan kontrol negatif dan MIC antibiotik ciprofloxacin

dan kontrol pertumbuhan (p< 0,05). Hal ini telah sesuai dengan perhitungan FIC

index, dimana tidak ada perbedaan antara penggunaan antibiotik ciprofloxacin,

ekstrak etanol daun sirih, maupun kombinasi antibiotik ciprofloxacin dan ekstrak

etanol daun sirih.

Data yang didapat pada uji antibakteri menggunakan metode checkboard

belum dapat dipastikan kevalidan datanya. Hal ini disebabkan karena nilai OD yang

didapat tidak linier atau naik- turun. Padahal berdasarkan hukum Lambert-Beer,

konsentrasi dengan absorbansi berbanding lurus yaitu semakin tinggi konsentrasi

absorbansi yang terbaca juga semakin besar (Thiha and Ibrahim 2015). Panjang

gelombang juga dapat menjadi penyebab data yang didapat tidak linier (Upstone

2000). Dimana apabila dilihat dari warna larutan ekstrak etanol daun sirih berwarna

merah dan ini tidak sesuai dengan pandang gelombang yang digunakan. Penelitian

ini menggunakan panjang gelombang 595, sedangkan untuk larutan berwarna


15

merah pada panjang gelombang 605- 750 nm (Shah et al. 2015). Hal lain yang

menyebabkan data tidak valid yaitu keterbatasan alat, dimana pada penelitian ini

tidak menggunakan microplate-shaker. Apabila tidak dilakukan mixing atau

pencampuran yang baik maka optical density sesungguhnya tidak dapat terbaca

(Gibbs 2001). Oleh karena itu, pada penelitian ini tidak dapat menyimpulkan efek

kombinasi antibakteri ekstrak etanol daun sirih dan antibiotik ciprofloxacin

menggunakan metode checkboard. Berdasarkan uji kombinasi antibakteri ekstrak

etanol daun sirih dan antibiotik ciprofloxacin menggunakan metode sumuran

terdapat perbedaan aktivitas yang ditunjukkan dengan menurunnya zona hambat

yang dihasilkan ketika dikombinasikan.

KESIMPULAN DAN SARAN

Berdasarkan hasil uji kombinasi aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun

sirih dan antibiotik ciprofloxacin terhadap Pseudomonas aeruginosa menggunakan

metode sumuran terdapat perbedaan aktivitas antibakteri dilihat dari diameter zona

hambat dan menggunakan metode checkboard didapatkan nilai FIC index 3 yang

berarti kombinasi ektrak etanol daun sirih dan antibiotik ciprofloxacin terhadap

Pseudomonas aeruginosa menunjukan efek indifferent.

Saran yaitu perlu dilakuakan penambahan seri konsentrasi antibakteri dan

optimasi panjang gelombang dalam pembacaan microplate-reader dengan metode

checkboard dan dapat melakukan uji kombinasi antibakteri dengan metode lain,

seperti metode E test.


16

DAFTAR PUSTAKA

Agarwal, T., Singh, R., Shukla, A.D., Waris, I., and Gujrati, A., 2012. Comparative

Analysis of Antibacterial Activity of Four Piper betel Varieties, 3 (2), 698–

705.

Aiyegoro, O.A. and Okoh, A.I., 2009. Use of Bioactive Plant Products in

Combination with Standard Antibiotics : Implications in Antimicrobial

Chemotherapy, 3 (13), 1147–1152.

Badan Pengawas Obat dan Makanan RI, 2010. Acuan Sediaan Bahan Herbal.

Basri, D.F., Xian, L.W., Abdul Shukor, N.I., and Latip, J., 2014. Bacteriostatic

Antimicrobial Combination: Antagonistic Interaction Between Epsilon-

Viniferin and Vancomycin Against Methicillin-Resistant Staphylococcus

aureus. BioMed Research International, 2014.

Blesson, J., Saji, C. V, Nivya, R.M., and Kumar, R., 2015. Synergistic Antibacterial

Activity of Natural Plant Extracts and Antibiotics Against Methicillin

Resistant Staphylococcus aureus ( MRSA ), 4 (3), 741–763.

Chanudom, L., Bhoopong, P., Khwanchuea, R., and Tangpong, J., 2014. Original

Research Article Antioxidant and Antimicrobial Activities of Aqueous &

Ethanol Crude Extracts of 13 Thai Traditional Plants, 3 (1), 549–558.

Depkes RI,1986, Sediaan Ganelik, Departemen Republik Indonesia, Jakarta, hal.6.

Direktorat Jendral POM, 1995, Farmakope Indonesia, Edisi IV, Jakarta,

Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1036.

Ducel, G., Fabry, J., and Nicolle, L., 2002. Prevention Of Hospital-Acquired

Infections. World Health Organization, 1–64.

Eliopoulos, G.M. and Eliopoulos, C.T., 1988. Antibiotic combinations: Should they

be tested. Clinical Microbiology Reviews, 1 (2), 139–156.

Foo, L.W., Salleh, E., and Mamat, S.N.H., 2015. Extraction and Qualitative

Analysis of Piper Betle Leaves for Antimicrobial Activities, 2 (2), 1–8.

Gibbs, J., 2001. Selecting the Detection System - Colorimetric , Fluorescent ,

Luminescent Methods. Corning Life Sciences, (5), 1–14.

Gunanti, F., Witasari, H.A., Edityaningrum, C.A., and Murrukmihadi, M., 2016.

Penetapan Parameter Standarisasi Non Spesifik Ekstrak Etanol Daun

Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi L.), 210–214.

Handa, S.S., Khanuja, S.P.S., Longo, G., and Rakesh, D.D., 2008. Extraction


17

Technologies for Medicinal and Aromatic Plants. ICS UNIDO.

Kartikasari, D., Nurkhasanah, and Sujiwo, P., 2008. Karakterisasi Simplisia dan

Ekatrak Etanol Daun Bertoni ( Stevia rebaudiana ) Dari Tiga Tempat Tumbuh,

145–151.

Kumalasari, E. and Sulistyani, N., 2011. Aktivitas Antifungi Ekstrak Etanol Batang

Binahong (Anredera cordifolia(Tenore) Steen.) Terhadap Candida albicans

Serta Skrining Fitokimia. Pharmaciana, 1 (2), 51–62.

Louie, T.J., 1994. Clinical Practice Guidelines Ciprofloxacin : an Oral Quinolone

for The Treatment of Infections with Gram-Negative Pathogens, 150 (5).

Maulida, R. and Guntarti, A., 2015. Pengaruh Ukuran Partikel Beras Hitam ( Oryza

sativa L .) Terhadap rendemen Ekstrak dan Kandungan Total Antosianin.

Pharmaciana, 5, 9–16.

Nurmala, Andriani, and Liana, D., 2015. Resistensi dan Sensitivitas Bakteri

terhadap Antibiotik di RSU dr. Soedarso Pontianak Tahun 2011-2013, 3 (1).

Ocampo, P.S., Lázár, V., Papp, B., Arnoldini, M., Zur Wiesch, P.A., Busa-Fekete,

R., Fekete, G., Pál, C., Ackermann, M., and Bonhoeffer, S., 2014. Antagonism

between bacteriostatic and bactericidal antibiotics is prevalent. Antimicrobial

Agents and Chemotherapy, 58 (8), 4573–4582.

Pradhan, D., Suri, K.A., Pradhan, D.K., and Biswasroy, P., 2013. Golden Heart of

the Nature : Piper betle L ., 1 (6), 147–167.

Rita, W.S., 2010. Isolasi, Identifikasi, dan Uji Aktivitas Antibakteri Senyawa

Golongan Triterpenoid Pada Rimpang Temu Putih (Curcuma zedoaria (Berg)

Roscoe). Jurnal Kimia, 4 (1), 20–26.

Shah, R.S., Shah, R.R., Pawar, R.B., and Gayakar, P.P., 2015. UV-Visible

Spectroscopy- A Review. International Journal of Institutional pharmacy and

life sciences, 5 (October), 490–505.

Shuchi, A., Bhone, M.K., and Chu, S.L., 2016. Combination Antibiotic-

Phytochemical Effects on Resistance Adaptation in Staphylococcus aureus.

African Journal of Microbiology Research, 10 (46), 1973–1982.

Swamy, M.K., Akhtar, M.S., and Sinniah, U.R., 2016. Antimicrobial Properties of

Plant Essential Oils Against Human Pathogens and Their Mode of Action: An

Updated Review. Evidence-based Complementary and Alternative Medicine,

2016.

Taukoorah, U., Lall, N., and Mahomoodally, F., 2016. South African Journal of


18

Botany Piper betle L. ( betel quid ) Shows Bacteriostatic , Additive , and

Synergistic Antimicrobial Action When Combined With Conventional

Antibiotics. South African Journal of Botany, 105, 133–140.

The Clinical and Laboratory Standards Institute, 2016. M100S Performance

Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing. Clinical and Laboratory

Standards Institute, Wayne, PA.

Thiha, A. and Ibrahim, F., 2015. A Colorimetric Enzyme-Linked Immunosorbent

Assay (ELISA) Detection Platform for a Point-of-Care Dengue Detection

System on a Lab-on-Compact-Disc, 11431–11441.

Tiwari, P., Kumar, B., Kaur, M., Kaur, G., and Kaur, H., 2011. Phytochemical

Screening and Extraction - A Review. Internationale Pharmaceutica Sciencia,

1 (1), 98–106.

Upstone, S.L., 2000. Ultraviolet / Visible Light Absorption Spectrophotometry in

Clinical Chemistry, 1699–1714.

Vahdani, M., Azimi, L., Asghari, B., Bazmi, F., and Rastegar, L.A., 2012.

Phenotypic Screening of Extended-Spectrum ß-Lactamase and Metallo-ß-

Lactamase in Multidrug-Resistant Pseudomonas aeruginosa From Infected

Burns. Annals of Burns and Fire Disasters, 25 (2), 78–81.


19

LAMPIRAN

Lampiran 1. Daun Sirih

Lampiran 2. Surat Determinasi Tanaman (Daun Sirih Hijau)


20

Lampiran 3. Sertifikat Hasil Uji Pseudomonas aeruginosa


21

Lampiran 4. Bukti Pengukuran dengan Microplate reader


22

Lampiran 5. Hasil pengukuran dengan Microplate reader 12

0,6

24

0,6

27

0,6

20

0,0

46

0,0

44

11

0,7

36

0,6

82

0,7

09

0,1

82

0,1

25

0,7

94

0,8

11

10

1,3

76

0,7

40

0,7

01

0,7

49

0,1

63

0,1

41

1,0

75

1,2

07

9

1,9

07

0,9

81

0,9

22

0,9

48

0,0

90

0,0

95

0,7

53

0,7

77

8

0,9

54

0,5

44

0,5

41

0,5

21

0,2

02

0,1

78

0,8

33

0,9

23

7

1,4

22

0,7

55

0,7

20

0,7

56

0,1

37

0,1

82

1,0

89

1,2

14

6

1,7

68

1,0

30

0,9

16

0,9

57

0,0

97

0,1

01

0,7

32

0,8

58

5

0,9

36

0,5

51

0,5

54

0,5

51

0,1

47

0,1

52

0,8

35

0,9

00

4

1,3

76

0,7

88

0,7

50

0,7

96

0,1

43

0,1

60

1,1

81

1,1

80

3

1,8

09

1,0

76

0,9

63

0,9

97

0,0

98

0,0

94

0,6

70

0,9

35

2

0,9

42

0,5

97

0,5

94

0,5

95

0,0

69

0,0

63

0,0

58

1

0,0

65

0,0

80

0,0

78

0,0

77

0,0

71

0,0

65

0,0

58

A

B

C

D

E

F

G

H


23


sumuran

Shapiro test

Levene test

Kruskal- Wallis


24

Post- Hoc Dunn


checkboard

Shapiro test

Levene test


25

Kruskal- Wallis dan Post- Hoc Dunn


26

BIOGRAFI PENULIS

Penulis bernama lengkap Lintang Sari Hermadana,

lahir di Kulon Progo pada tanggal 21 Agustus 1995.

Penulis yang akrab dipanggil Lintang ini merupakan anak

kedua dari dua bersaudara pasangan Joko Tri Hatmono

dan Tutik Iskanti. Penulis menempuh pendidikan di TK

Bopkri Wates (2000 – 2002), SD Negeri Percobaan 4

(2002- 2008), SMP Negeri 1 Wates (2008 – 2011), SMA

Negeri 1 Wates (2011 – 2014), dan pada tahun 2014

melanjutkan pendidikan untuk memperoleh gelar sarjana

di Universitas Sanata Dharma.

Selama berkuliah di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, penulis

aktif mengikuti berbagai kegiatan kemahasiswaan, diantaranya yaitu panitia

Hubungan Masyarakat dalam panitia Pharmacy Badminton Tournamen (2015 dan

2016), panitia Kesekretariatan dalam panitia Seminar Nasional (2016), dan asisten

dosen Praktikum Biologi Sel dan Molekuler (2017).


Documents

UJI EFEK KOMBINASI ANTIBIOTIK CIPROFLOXACIN DENGAN … · 2018-05-18 · UJI EFEK KOMBINASI ANTIBIOTIK CIPROFLOXACIN DENGAN EKSTRAK ETANOL DAUN SIRIH (Piper betle L.) TERHADAP PERTUMBUHAN